检测盐酸西替利嗪样品中有关物质的方法

摘要

本发明提出了检测盐酸西替利嗪样品中有关物质的方法，该检测方法包括：利用高效液相色谱法对盐酸西替利嗪样品进行检测，其中，高效液相色谱法的流动相含有：流动相A，流动相A为含有0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，且流动相A的pH值为3.8；以及流动相B，流动相B为乙腈。本发明所提出的盐酸西替利嗪样品中有关物质的检测方法，能够简单、快速地检测出盐酸西替利嗪样品中的有关物质，且各峰间能够被有效地分离，该检测方法操作简单、分析时间较短。

权利要求

1.一种检测盐酸西替利嗪样品中有关物质的方法，其特征在于：所述有关物质包括Cetirizine Glycero Ester、Cetirizine ethanol、Cetirizine Oxide、4-CBH和4-Chlorophenone，所述方法利用高效液相色谱法对所述盐酸西替利嗪样品进行检测，其中，所述高效液相色谱法的流动相含有：流动相A，所述流动相A为含有0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，且所述流动相A的pH值为3.8；以及流动相B，所述流动相B为乙腈；

色谱柱：采用C18色谱柱；

所述高效液相色谱法采用下列条件进行梯度洗脱：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用下列条件：色谱柱：Waters Sunfire C18 4.6x250mm 5微米；

柱温：40摄氏度；

流速：1.0mL/min；

进样量：10微升；或

检测波长：232nm。

3.一种检测盐酸西替利嗪样品中有关物质的方法，其特征在于：所述方法利用高效液相色谱法对所述盐酸西替利嗪样品进行检测，其中，所述高效液相色谱法的流动相含有：流动相A，所述流动相A为含有0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，且所述流动相A的pH值为3.8；以及流动相B，所述流动相B为乙腈；

所述高效液相色谱法采用下列条件进行梯度洗脱：所述有关物质包括Cetirizine Glycero Ester、Cetirizine Ethanol、Cetirizine Oxide、4-CBH和4-Chlorophenone；

所述高效液相色谱法采用下列条件：

色谱柱：Waters Sunfire C18 4.6x250mm 5微米；

柱温：40摄氏度；

流速：1.0mL/min；

进样量：10微升；或

检测波长：232nm；

在检测方法中，将一定量的磷酸二氢钠溶解在水中，并调节pH值至3.8，形成含有

0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，作为流动相A，用乙腈作为流动相B，再将所述流动相A和所述流动相B按照67:33的体积比进行混合，得到稀释溶液；

称取20mg盐酸西替利嗪对照品，移至100mL容量瓶中，加所述稀释溶液进行稀释，摇匀，得到盐酸西替利嗪浓度为200微克/毫升的对照品储备溶液；

取所述对照品储备溶液2mL，移至100mL容量瓶中，加所述稀释溶液进行稀释到，得到盐酸西替利嗪浓度为4微克/毫升的对照品溶液；

取10粒盐酸西替利嗪胶囊，取胶囊中的内容物称量，计算其平均装样量，取相当于50mg盐酸西替利嗪的内容物，移至25ml容量瓶中，加稀释溶液进行稀释，得到盐酸西替利嗪浓度为2mg/mL的样品溶液浓度。

说明书

检测盐酸西替利嗪样品中有关物质的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及医药领域领域，具体的，本发明涉及检测盐酸西替利嗪样品中有关物质的方法。

背景技术

[0002] 盐酸西替利嗪，是一种强效的H1受体拮抗剂，可口服进入体内，能够迅速与靶细胞膜上的组胺H1受体结合，并阻断组胺激活靶细胞。其化学名称为(±)-2-[2-[4-[(4-氯苯基)苯甲基]-1-哌嗪基]乙氧基]乙酸二盐酸盐，分子量为461.82，具体结构式如下所示：

[0003]

[0004] 目前，对盐酸西替利嗪样品中有关物质的检测手段仍有待改进。

发明内容

[0005] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

[0006] 本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

[0007] 本发明人在研究过程中发现，盐酸西替利嗪软胶囊中能够确定的有关物质有5种，分别为Cetirizine Glycero Ester、Cetirizine Ethanol、Cetirizine Oxide、4-CBH和4-Chloro-phenone，尚未见任何有关文献报道该药品有关物质的检测方法。并且，美国药典(英文缩写为USP)所提供的原料药(英文缩写为API)有关物质检测方法，其运行时间比较长，达到120min以上，且杂质分离度难达到分离度大于1.5的要求，给有关物质检测带来相当大的难度。

[0008] 本发明的发明人经过深入研究发现，通过调整高效液相色谱法在梯度洗脱模式下的流动相比例，就能够同时检测出盐酸西替利嗪软胶囊中已知的5种和其他的有关物质，且各峰间能够被有效地分离，并且检测时间缩短了一半。

[0009] 有鉴于此，本发明的一个目的在于提出一种能够简单、快速地检测出盐酸西替利嗪软胶囊中有关物质的方法。

[0010] 在本发明的第一方面，本发明提出一种检测盐酸西替利嗪样品中有关物质的方法。

[0011] 根据本发明的实施例，所述方法利用高效液相色谱法对所述盐酸西替利嗪样品进行检测，其中，所述高效液相色谱法的流动相含有：流动相A，所述流动相A为含有0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，且所述流动相A的pH值为3.8；以及流动相B，所述流动相B为乙腈；并且，所述高效液相色谱法采用下列条件进行梯度洗脱：

[0012]

[0013] 发明人意外地发现，采用本发明实施例的检测方法，能够简单、快速地检测出盐酸西替利嗪样品中的有关物质，且各峰间能够被有效地分离，该检测方法操作简单、分析时间较短。

[0014] 另外，根据本发明上述实施例的检测方法，还可以具有如下附加的技术特征：

[0015] 根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法采用下列条件进行梯度洗脱：

[0016]

[0017] 由此，采用本发明实施例的检测方法，通过进一步调整高效液相色谱法中梯度洗脱模式中流动相的比例，能够更快速地检测出盐酸西替利嗪样品中的有关物质，且各峰间能够进一步被有效地分离，该检测方法操作简单、分析时间更短。

[0018] 根据本发明的实施例，所述有关物质包括选自Cetirizine Glycero Ester、Cetirizine ethanol、Cetirizine Oxide、4-CBH和4-Chlorophenone的至少之一。

[0019] 领域技术人员可以理解的是，有关物质主要是指在生产盐酸非索非那定样品的过程中带入的起始原料、中间体、聚合体或副产物，以及贮藏过程中的降解产物等。而任何影响药物纯度的物质统称为杂质，药品中的杂质按其理化性质一般分为有机杂质、无机杂质及残留溶剂。有机杂质包括工艺中引入的杂质和降解产物等，可能是已知的或未知的，由于这类杂质的化学结构一般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又称之为有关物质。本发明的实施例中，盐酸西替利嗪样品中5种已知的有相关物质组成比较复杂，且与主产物在化学结构上类似，所以，盐酸西替利嗪样品的高效液相色谱图中各个峰较难被有效地分离开。

[0020] 由此，采用本发明实施例的检测方法，能够简单、快速地检测出盐酸西替利嗪样品中的5种已知的有关物质，且各峰间都能够被有效地分离，并且该检测方法操作简单、分析时间较短。

[0021] 根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法采用下列条件：色谱柱采用C18色谱柱，优选Waters Sunfire C18 4.6x250mm 5微米，柱温为40摄氏度，流速为1.0mL/min，进样量采用10微升，或检测波长为232nm。由此，采用本发明实施例的检测方法，通过选择特定的高效液相色谱仪检测条件，能够更进一步简单、快速地检测出盐酸西替利嗪样品中的有关物质，且各峰间都能够进一步被有效地分离，并且该检测方法操作更简单、分析时间更短。

[0022] 在本发明的第二方面，本发明提出一种检测盐酸西替利嗪样品中有关物质的方法。

[0023] 根据本发明的实施例，所述方法利用高效液相色谱法对所述盐酸西替利嗪样品进行检测，其中，所述高效液相色谱法的流动相含有：流动相A，所述流动相A为含有0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，且所述流动相A的pH值为3.8；以及流动相B，所述流动相B为乙腈；并且，所述高效液相色谱法采用下列条件进行梯度洗脱：

[0024]

[0025]

[0026] 所述有关物质包括选自Cetirizine Glycero Ester、Cetirizine Ethanol、Cetirizine Oxide、4-CBH和4-Chlorophenone的至少之一；

[0027] 所述高效液相色谱法采用下列条件：色谱柱采用C18色谱柱，优选Waters Sunfire C184.6x250mm 5微米，柱温为40摄氏度，流速为1.0mL/min，进样量采用10微升，或检测波长为232nm；

[0028] 在所述检测方法中，在所述检测方法中，将一定量的磷酸二氢钠溶解在水中，并调节pH值至3.8，形成含有0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，作为流动相A，用乙腈作为流动相B，再将所述流动相A和所述流动相B按照67:33的体积比进行混合，得到稀释溶液；

[0029] 称取20mg盐酸西替利嗪对照品，移至100mL容量瓶中，加所述稀释溶液进行稀释，摇匀，得到盐酸西替利嗪浓度为200微克/毫升的对照品储备溶液；

[0030] 取所述对照品储备溶液2mL，移至100mL容量瓶中，加所述稀释溶液进行稀释到，得到盐酸西替利嗪浓度为4微克/毫升的对照品溶液；

[0031] 取10粒盐酸西替利嗪胶囊，取胶囊中的内容物称量，计算其平均装样量，取相当于50mg盐酸西替利嗪的内容物，移至25ml容量瓶中，加稀溶液进行稀释，得到盐酸西替利嗪浓度为4mg/mL的样品溶液浓度。

[0032] 发明人意外地发现，采用本发明实施例的检测方法，能够简单、快速地检测出盐酸西替利嗪样品中的多种有关物质，且各峰间能够有效地被分离，该检测方法操作简单、分析时间较短。

[0033] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

[0034] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

[0035] 图1是根据本发明一个实施例的稀释溶液的色谱图；

[0036] 图2是根据本发明另一个实施例的对照品溶液的色谱图；

[0037] 图3是根据本发明另一个实施例的样品溶液的色谱图；

[0038] 图4是根据本发明另一个实施例的定位溶液的色谱图；

[0039] 图5是根据本发明另一个实施例的酸破坏后样品溶液的色谱图；

[0040] 图6是根据本发明另一个实施例的碱破坏后样品溶液的色谱图；

[0041] 图7是根据本发明另一个实施例的氧化破坏后样品溶液的色谱图；

[0042] 图8是根据本发明另一个实施例的高温破坏后样品溶液的色谱图；

[0043] 图9是根据本发明另一个实施例的光照破坏后样品溶液的色谱图；

[0044] 图10是根据本发明另一个实施例的精密度-重复性的线形关系图。

具体实施方式

[0045] 下面详细描述本发明的实施例，本技术领域人员会理解，下面实施例旨在用于解释本发明，而不应视为对本发明的限制。除非特别说明，在下面实施例中没有明确描述具体技术或条件的，本领域技术人员可以按照本领域内的常用的技术或条件或按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过市购到的常规产品。

[0046] 一般方法

[0047] 除非明确说明，在下列实施例中采用下述仪器和检测条件进行色谱分析：

[0048] 高效液相色谱仪型号：Waters e2695-2489；

[0049] 色谱条件：色谱柱为Waters Sunfire C18 4.6x250mm 5微米，检测波长为232nm，柱温为40摄氏度，流速为1.0mL/min，进样量为10微升，流动相为含有0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液和乙腈的混合物，并采用下列条件进行梯度洗脱模式：

[0050]

[0051] 试剂：盐酸西替利嗪对照品(购自USP)，盐酸西替利嗪胶囊(购自Lot130001663)，磷酸二氢钠(购自国药)，乙腈(购自Fisher HPLC)，定位溶液(购自根据购买的USP杂质对照自己配制)，Placebo溶液(自配)，盐酸(购自国药)，氢氧化钠(购自国药)，双氧水(购自国药)；

[0052] 稀释溶液：将一定量的磷酸二氢钠溶解在水中，并调节pH值至3.8，形成含有0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，作为流动相A；用乙腈作为流动相B；再将流动相A和流动相B按照67:33的体积比进行混合，得到稀释溶液；

[0053] 配置对照品储备溶液：称取20mg盐酸西替利嗪对照品，移至100mL容量瓶中，加稀释溶液进行稀释，摇匀，得到盐酸西替利嗪浓度为200微克/毫升的对照品储备溶液；

[0054] 配置对照品溶液：取对照品储备溶液2mL，移至100mL容量瓶中，加稀释溶液进行稀释到，得到盐酸西替利嗪浓度为4微克/毫升的对照品溶液；

[0055] 配置样品溶液：选取10粒盐酸西替利嗪胶囊，取胶囊中的内容物称量，计算其平均装样量，取相当于50mg盐酸西替利嗪的内容物，移至25ml容量瓶中，加稀溶液进行稀释，得到盐酸西替利嗪浓度为4mg/mL的样品溶液浓度。

[0056] 实施例1

[0057] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的配置方法和测试条件，取10微升的稀释溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。

[0058] 该实施例检测得到的稀释溶液的色谱图，如图1所示。由图1可看出，稀释溶液只在停留时间大于40min后出现2个明显的溶剂峰，而稀释剂在主峰和各杂质峰的保留时间处均没有吸收峰，图谱上只是梯度峰，因此没有干扰。

[0059] 实施例2

[0060] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的配置方法和测试条件，取10微升的对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。以此来考察，稀释溶液的成分是否会对盐酸西替利嗪的峰位置产生干扰。

[0061] 该实施例检测得到的盐酸西替利嗪对照品溶液的色谱图，如图2所示。由图2可看出，盐酸西替利嗪的峰位置出现在停留时间为13.1min附近，而稀释溶液的2个溶剂峰不会对盐酸西替利嗪主峰产生干扰。

[0062] 实施例3

[0063] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的配置方法和测试条件，取10微升的样品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。

[0064] 该实施例检测得到的盐酸西替利嗪样品溶液的色谱图，如图3所示。由图3可看出，除去停留时间为13.0min附近的盐酸西替利嗪主峰外，还分别检测出3种已知的有关物质，即停留时间为10.7min附近的Cetirizine Glycero Ester、停留时间为11.3min附近的Cetirizine ethanol和停留时间为38.7min附近的4-Chlorophenone；以及2种未知的有关物质，即停留时间分别为9.0min附近和32.1min附近。

[0065] 实施例4

[0066] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的测试条件，取10微升的定位溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。区别在于，在该实施例中采用的定位溶液为Placebo溶液，其配制方法为，分别称取5mg Cetirizine HCl、Cetirizine Glycero Ester、Cetirizine ethanol、Cetirizine Oxide、4-CBH和4-Chlorophenone置100ml容量瓶中，加稀释溶液溶解稀释，摇匀，精密再量取2ml置25ml容量瓶中，用稀释剂稀释、摇匀。

[0067] 该实施例检测得到的定位溶液的色谱图，如图4所示。由图4可看出，主峰Cetirizine HCl与其他杂质都能达到基线分离，分离度良好。

[0068] 实施例5

[0069] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的测试条件，取10微升的酸破坏处理后的样品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。区别在于，在该实施例中采用的酸破坏处理具体为，取盐酸西替利嗪样品10mg，加入2mol/L的盐酸1mL，在65℃条件下反应6小时，放冷至室温；再加入2mol/L氢氧化钠1mL中和至近中性，用稀释溶液溶解并稀释，摇匀，即可获得酸破坏处理后的样品溶液。

[0070] 该实施例检测得到的酸破坏处理后的样品溶液的色谱图，如图5所示。由图5可看出，主峰Cetirizine HCl与其他杂质都能达到基线分离，分离度良好。

[0071] 实施例6

[0072] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的测试条件，取10微升的碱破坏处理后的样品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。区别在于，在该实施例中采用的碱破坏处理具体为，取盐酸西替利嗪样品10mg，加入2mol/L的氢氧化钠1mL，在65℃条件下反应1.5小时，放冷至室温；再加入2mol/L盐酸1mL中和至近中性，用稀释溶液溶解并稀释，摇匀，即可获得碱破坏处理后的样品溶液。

[0073] 该实施例检测得到的碱破坏处理后的样品溶液的色谱图，如图6所示。由图6可看出，主峰Cetirizine HCl与其他杂质都能达到基线分离，分离度良好。

[0074] 实施例7

[0075] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的测试条件，取10微升的氧化破坏后的样品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。区别在于，在该实施例中采用的氧化破坏处理具体为，取盐盐酸西替利嗪样品10mg，加入3％的双氧水1mL，在65℃条件下反应1.5小时，放冷至室温；再加入2mol/L盐酸1ml中和至近中性，用稀释溶液溶解并稀释，摇匀，即可获得氧化破坏处理后的样品溶液。

[0076] 该实施例检测得到的氧化破坏处理后的样品溶液的色谱图，如图7所示。由图7可看出，主峰Cetirizine HCl与其他杂质都能达到基线分离，分离度良好。

[0077] 实施例8

[0078] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的测试条件，取10微升的高温破坏处理后的样品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。区别在于，在该实施例中采用的高温破坏处理具体为，取盐酸西替利嗪样品10mg，在105℃条件下反应6小时，放冷至室温；再用稀释溶液溶解并稀释，摇匀，即可获得高温破坏处理后的样品溶液。

[0079] 该实施例检测得到的高温破坏处理后的样品溶液的色谱图，如图8所示。由图8可看出，主峰Cetirizine HCl与其他杂质都能达到基线分离，分离度良好。

[0080] 实施例9

[0081] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的测试条件，取10微升的光照破坏处理后的样品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。区别在于，在该实施例中采用的光照破坏处理具体为，取盐酸西替利嗪样品10mg，室温条件下光照处理15天；再加用稀释溶液溶解并稀释，摇匀，即可获得光照破坏处理后的样品溶液。

[0082] 该实施例检测得到的光照破坏处理后的样品溶液的色谱图，如图9所示。由图9可看出，主峰Cetirizine HCl与其他杂质都能达到基线分离，分离度良好。

[0083] 实施例10

[0084] 在该实施例中，分别取10微升的一系列样品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。贮备溶液配制：分别称取5mg Cetirizine HCl、Cetirizine Glycero Ester、Cetirizine ethanol、Cetirizine Oxide、4-CBH和4-Chlorophenone置100mL容量瓶中，加稀释溶液溶解稀释、摇匀。

[0085] 贮备溶液体积(mL) 稀释体积(mL) 浓度(微克/mL)1 25 2.0
3 50 3.0
2 25 4.0
3 25 6.0
6 25 12.0

[0086] 该实施例检测得到的一系列色谱图，其中盐酸西替利嗪主峰和4种已知的有关物质峰的峰面积与各自浓度的关系图，如图10所示。由图10可看出，盐酸西替利嗪和4种已知的有关物质在2微克/毫升至12微克/毫升的浓度范围内线性度高，相关系数均达到0.999以上，表明该方法准确。

[0087] 总结

[0088] 综合实施例1～10和可得出，本发明所提出的检测盐酸西替利嗪样品中有关物质的方法，能够简单、快速地检测出盐酸西替利嗪样品中的有关物质，且各峰间能够被有效地分离，该检测方法操作简单、分析时间较短。并且，稀释溶液和空白胶囊内容物在西替利嗪和已知有关物质峰位置无干扰；经过一系列专属性考察试验，盐酸西替利嗪样品对酸、碱、氧化、高温或者光照稳定，未产生干扰峰；而且，经过精密度-稳定性试验的验证，在2～12微克/毫升的浓度范围内检测结果的线性度高。

[0089] 在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

[0090] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。