一种蛭肽蛋白乳膏剂及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种蛭肽蛋白乳膏剂及其制备方法和应用，以蛭肽蛋白为活性成分，按重量百分比计，由如下成分制成：蛭肽蛋白2%～5%；复合乳化剂3～10%；润肤剂2～8%；油溶性成分0.5‑2%；增稠剂0.1～1%；保湿剂5～15%；香精0.3～0.5%；防腐剂0.05～1%；生育酚乙酸酯0.01～1%；水余量。本发明制备得到的蛭肽蛋白乳膏剂清爽不油腻，外观光滑、均匀细腻，粘稠度适中，易于涂布，稳定性好且安全性较高，不仅使用方便，而且更易被患者接受，该乳膏可以治疗大部分类型的寻常型痤疮及痤疮后的红斑和色素沉着，应用范围较广。

权利要求

1.一种蛭肽蛋白乳膏剂，其特征在于，以蛭肽蛋白为活性成分，按重量百分比计，由如下成分制成：蛭肽蛋白          2%～5%；

复合乳化剂        3～10%；

润肤剂            2～8%；

油溶性成分        0.5-2%；

增稠剂            0.1～1%；

保湿剂            5～15%；

香精              0.3～0.5%；

防腐剂            0.05～1%；

生育酚乙酸酯      0.01～1%；

水                余量;所述的蛭肽蛋白是从菲牛蛭中提取得到的蛭肽蛋白，其为水蛭素和一些杂质多肽的混合物；

所述复合乳化剂为鲸蜡硬脂醇醚-6橄榄油酸酯Olivem 800和鲸蜡醇棕榈酸酯/山梨坦棕榈酸酯/山梨坦橄榄油酸酯Oliwax LC按质量比为1-3：2-5的复配物;所述润肤剂为碳酸二辛酯或辛基十二醇。

2.根据权利要求1所述的蛭肽蛋白乳膏剂，其特征在于，以蛭肽蛋白为活性成分，按重量百分比计，由如下成分制成：蛭肽蛋白           3%；

复合乳化剂         6 %；

润肤剂             4%；

油溶性成分         1%；

增稠剂             0.25%；

保湿剂             10%；

香精               0.4%；

防腐剂             0.1%；

生育酚乙酸酯       0.1%；

水                 余量。

3.根据权利要求1或2所述的蛭肽蛋白乳膏剂，其特征在于，所述复合乳化剂为鲸蜡硬脂醇醚-6橄榄油酸酯Olivem 800和鲸蜡醇棕榈酸酯/山梨坦棕榈酸酯/山梨坦橄榄油酸酯Oliwax LC按质量比为2.5：3.5的复配物。

4.根据权利要求1或2所述的蛭肽蛋白乳膏剂，其特征在于，所述油溶性成分为杏仁油、葵花籽油、橄榄油或硬脂酸中的一种或几种的混合。

5.根据权利要求1或2所述的蛭肽蛋白乳膏剂，其特征在于，所述增稠剂为高分子材料PNC400。

6.根据权利要求1或2所述的蛭肽蛋白乳膏剂，其特征在于，所述保湿剂为甘油或丙二醇中的一种或两种的混合；所述防腐剂为丁二醇：水：碘丙炔醇丁基氨甲酯：DMDM乙内酰脲按质量比=4.5:23:2.5:70的复合防腐剂。

7.权利要求1-6任一项所述的蛭肽蛋白乳膏剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将增稠剂和保湿剂加入到水中，以2500-3500rpm转速离心3-10min，除去气泡，作为水相；

（2）将复合乳化剂、润肤剂和油溶性成分加热至75-85℃使其熔化，作为油相；

（3）将油相加入到水相中进行乳化，得到乳化液；

（4）在30-35℃下，将生育酚乙酸酯、香精和防腐剂加入到步骤（3）的乳化液中；

（5）最后加入蛭肽蛋白，边加边搅拌至冷却，即得。

8.权利要求1～6任一项所述的蛭肽蛋白乳膏剂在制备治疗痤疮的药物或药用化妆品中的应用。

说明书

一种蛭肽蛋白乳膏剂及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种蛭肽蛋白乳膏剂及其制备方法和在制备治疗痤疮的药物或药用化妆品中的应用。

背景技术

[0002] 随着生活环境变化、生活水平提高，人们对于各种皮肤问题的关注日益凸显。痤疮又称“青春痘”、“肺风粉刺”、“暗疮”。其常发于面部、背部等，是一种慢性皮肤性疾病，不止常见于青少年，在青年中发生的比例也在逐渐上升。其不仅影响美观，且对人的心理和生理都有重要的影响。痤疮有不同的形式，其中寻常型痤疮是最常见的一种，约99％的痤疮为寻常型痤疮，故以下内容讨论的均是寻常型痤疮。有研究认为，抗菌药、维A酸等不能作为单纯的治疗药物，有超过半数的患者不能得到很好的治疗。同时有专家认为，维A酸类、过氧化苯甲酰等药物不适合敏感性皮肤，有轻度刺激性，外用抗生素类易产生耐药性，且大多数药物的疗程都较长。除此之外还有红斑、皮肤干燥、光敏性等副作用，严重的还有致畸性，眩晕，致狼疮等。

[0003] 目前中医在痤疮方面的治疗，主要是经方口服治疗，其他外治法应用不多。经查阅文献，王伟总结痤疮治疗经验，认为多数顽固性痤疮患者属血瘀证，并夹杂火、寒、痰等其他病因，使痤疮治疗病程漫长，采用活血化瘀方加减治疗使治疗效果显著。活血药有改善血流动力学，改善血液流变学，抗血栓等药理作用，血流加快有利于药物吸收和油脂排出。

[0004] 中药水蛭始载于《神农本草经》，来源于[6]水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudo nipponica Whitman或柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥全体。中医理论认为水蛭有破血逐瘀的功效，经过现代的化学和药理研究，发现其中有强抗凝活性物质水蛭素。由于提纯水蛭素难度较大，故实验所用的药物并非提纯的水蛭素，还有一些杂质多肽，故称为蛭肽蛋白。现有将重组水蛭素制备成各种不同的剂型，有多种给药方式，主要有口服、注射、经皮给药等。但是目前的应用比较局限于心脑血管等血液疾病的治疗，尚未见有关采用蛭肽蛋白制成乳膏的文献报道，也未见将蛭肽蛋白制成乳膏用于治疗痤疮的研究报道。

发明内容

[0005] 本发明的首要目的在于提供一种稳定性好且安全性高、治疗痤疮效果显著的蛭肽蛋白乳膏剂。

[0006] 本发明的另一目的在于提供上述蛭肽蛋白乳膏剂的制备方法。

[0007] 本发明通过如下技术方案实现：

[0008] 一种蛭肽蛋白乳膏剂，以蛭肽蛋白为活性成分，按重量百分比计，由如下成分制成：

[0009]

[0010] 现代医学认为痤疮主要是由于雄性激素分泌过多、皮脂腺导管角化异常、油脂增加、细菌感染以及免疫、遗传、心理因素等引起。可见痤疮好发于油性皮肤，故乳膏需油腻感低，质地应该轻薄，粘稠度不应过大，综合上述特点，作为本发明进一步优选的技术方案，所述的蛭肽蛋白乳膏剂，以蛭肽蛋白为活性成分，按重量百分比计，由如下成分制成：

[0011]

[0012] 本发明所述的蛭肽蛋白是从菲牛蛭中提取得到的蛭肽蛋白，其为水蛭素和一些杂质多肽的混合物，抗凝活性强，可通过常规方法提取得到，也可通过市购获得。

[0013] 所述复合乳化剂为鲸蜡硬脂醇醚-6橄榄油酸酯Olivem 800和鲸蜡醇棕榈酸酯/山梨坦棕榈酸酯/山梨坦橄榄油酸酯Oliwax LC按质量比为1-3：2-5的复配物，优选的，所述复合乳化剂为鲸蜡硬脂醇醚-6橄榄油酸酯Olivem 800和鲸蜡醇棕榈酸酯/山梨坦棕榈酸酯/山梨坦橄榄油酸酯Oliwax LC按质量比为2.5：3.5的复配物，采用该复合乳化剂，乳化效果好，安全有效，可用性更高。

[0014] 所述润肤剂为碳酸二辛酯、辛基十二醇、鲸蜡硬脂醇或二甲基聚硅氧烷中的一种或几种的混合，优选为油腻感较低的碳酸二辛酯或辛基十二醇。碳酸二辛酯具有极佳的皮肤相容性，具有乳化剂和润滑剂的作用。辛基十二醇具有透皮促进作用，可促进透皮吸收，对于透皮性能不好的药物，以辛基十二醇为辅料的乳膏可以提高透皮速度，对皮肤和粘膜的刺激性很低。

[0015] 所述油溶性成分为杏仁油、葵花籽油、橄榄油或硬脂酸中的一种或几种的混合。

[0016] 所述增稠剂为高分子材料PNC400，PNC400为卡波姆衍生物，不需要加碱中和，且溶胀快，使用方便，因其触变性，使乳膏稳定并保持使用感觉良好。

[0017] 所述保湿剂为甘油或丙二醇中的一种或两种的混合。

[0018] 所述防腐剂为GPL(丁二醇：水：碘丙炔醇丁基氨甲酯：DMDM乙内酰脲按质量比＝4.5:23:2.5:70的复合防腐剂)，该防腐剂为水溶性，可以与多肽配伍。

[0019] 本发明因主药蛭肽蛋白是小分子多肽，为亲水性物质，且痤疮好发于油性皮肤，故选择将药蛭肽蛋白制备成乳膏，应用于治疗痤疮，既保持良好的使用感觉，又保证有效的透皮吸收。

[0020] 本发明以蛭肽蛋白为活性成分，选择天然物质的衍生物Olivem 800和Oliwax LC的复配物作为复合乳化剂，以及油腻感较低的碳酸二辛酯或辛基十二醇作为润肤剂。同时乳膏中采用了高分子材料PNC400作为增稠剂，水相中加入甘油或丙二醇作为保湿剂。加入香精主要是掩盖主药本身的气味，以获得良好的使用感。防腐剂选用水溶性的GPL，可以与亲水性的多肽配伍。生育酚乙酸酯可以抗氧化，增加处方中油脂和药物的保存时间。

[0021] 本发明通过剂型和辅料的筛选，制备得到的蛭肽蛋白乳膏剂清爽不油腻，外观光滑、均匀细腻，粘稠度适中，易于涂布，稳定性好且安全性较高，不仅使用方便，而且更易被患者接受。

[0022] 本发明还提供了上述的蛭肽蛋白乳膏剂的制备方法，包括如下步骤：

[0023] (1)将增稠剂和保湿剂加入到水中，以2500-3500rpm转速离心3-10min，除去气泡，作为水相；

[0024] (2)将复合乳化剂、润肤剂和油溶性成分加热至75-85℃使其熔化，作为油相；

[0025] (3)将油相加入到水相中进行乳化，得到乳化液；

[0026] (4)在30-35℃下，将生育酚乙酸酯、香精和防腐剂加入到步骤(3)的乳化液中；

[0027] (5)最后加入蛭肽蛋白，边加边搅拌至冷却，即得。

[0028] 本发明因采用了高分子材料PNC400作为增稠剂，高分子材料分散在水相中会产生气泡，不利于后期的乳化，且试验中发现气泡较多的水相所制备的乳膏成品不稳定，因此，步骤(1)中对水相采用以2500-3500rpm离心3-10min，发现可几乎除去气泡，制备所得的乳膏较稳定。

[0029] 本发明制备工艺简单，乳化较快，成本较低。

[0030] 本发明还提供了上述蛭肽蛋白乳膏剂在制备治疗痤疮的药物或药用化妆品中的应用，通过考察其刺激性，认为该乳膏没有刺激性，安全性较高，该乳膏可以治疗大部分类型的寻常型痤疮及痤疮后的红斑和色素沉着，应用范围较广。

附图说明

[0031] 图1为线性关系考察结果图。

具体实施方式

[0032] 下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。

[0033] 本发明所采用的试药如下：

[0034] 蛭肽蛋白：广东科康医疗投资集团；

[0035] 标准品：(牛)纤维蛋白原(批号：140626-201611)，凝血酶(批号：140605-201526)，三羟甲基氨基甲烷(批号：100643-201502)购于中国食品药品检定研究院。

[0036] 试验动物：健康、成年SD大鼠，体重200-220g，12只雌雄各半。安徽医科大学试验动物中心提供(生产许可证号：2011-002)。

[0037] 实施例1-3：蛭肽蛋白乳膏剂的制备

[0038] 按表1配方，将增稠剂和保湿剂加入到水中，以3000rpm转速离心5min，除去气泡，作为水相；将复合乳化剂、润肤剂和油溶性成分加热至80℃使其熔化，作为油相；将油相加入到水相中进行乳化，得到乳化液；在30-35℃下，将生育酚乙酸酯、香精和防腐剂加入到的乳化液中；最后加入蛭肽蛋白，边加边搅拌至冷却，即得蛭肽蛋白乳膏剂，试验结果如表2所示。

[0039] 表1实施例1-3的蛭肽蛋白乳膏剂

[0040]

[0041] 表2实施例1-3的试验结果

[0042]

[0043] 实施例4：质量检查

[0044] 按照相关规定，检查蛭肽蛋白乳膏剂的稳定性、耐寒耐热性以及酸碱度，考察该乳膏剂是否符合规定。由于该乳膏中所含蛭肽蛋白是混合物，通过凝血酶滴定法测定其中每克所含药物的活性单位，即测定其中的药效成分含量，给合理用药量提供依据。

[0045] 2.1稳定性检查

[0046] 将实施例1-3制备得到的蛭肽蛋白乳膏10g放置于离心管中，2500rpm离心30min，经观察无油水分层，体系均一，认为稳定性合格。

[0047] 2.2耐寒耐热检查

[0048] 将实施例1-3制备得到的蛭肽蛋白乳膏10g至于-15℃冰箱中冷藏24h，经观察无有水分层等变质现象。将10g实施例1-3制备得到的蛭肽蛋白乳膏至于55℃恒温放置6h，观察后发现无有水分层等变质现象，耐寒耐热性合格。

[0049] 2.3酸碱度检查

[0050] 取实施例1-3制备得到的蛭肽蛋白乳膏5.00g，定容至50.00mL，混合均匀。校准仪器后，将电极插入至溶液中稳定后读数，测得该乳膏的pH分别为6.59、6.48、6.32。参照《化妆品安全技术规范》，其中规定O/W型乳膏的pH不大于8.30，故该蛭肽蛋白乳膏酸碱度合格。

[0051] 2.4活性测定

[0052] 2.4.1供试品制备

[0053] 取实施例1制备得到的蛭肽蛋白乳膏2.50g，加入0.9％生理盐水充分搅均，定容至5mL，12000rpm离心10min，取下层液体。

[0054] 2.4.2阴性对照品制备

[0055] 取空白基质5.00g，加入0.9％生理盐水搅匀，定容至5mL，12000rpm离心10min，取下层液体。

[0056] 2.4.3滴定方法

[0057] 参考刘义梅等对凝血酶滴定影响因素的考察，本试验按照以下方法进行。精密量取待测液100μL，置于白瓷板上，滴加含0.5％(牛)纤维蛋白原的Tris-HCl缓冲液200μL，混匀，置水浴中(37±0.5)℃温浸5min，每次滴加40U/mL凝血酶5μL，每分钟滴加一次。

[0058] 2.4.4专属性试验

[0059] 精密量取阴性対照液100μL，按照3.4.3的方法试验。发现第一次滴加后轻轻搅拌后立即出现凝固，故认为空白基质对蛭肽蛋白抗凝活性的测定没有影响。

[0060] 2.4.5线性关系考察

[0061] 精密称取0.25mg、0.50mg、0.75mg、1.00mg、1.25mg蛭肽蛋白，分别用生理盐水定容至1mL。分别取上述溶液100μL，按照3.4.3的试验方法，记录总共滴加的凝血酶体积，计算蛭肽蛋白活性。每个浓度试验三次，计算平均值。以单位体积的抗凝血酶活性为纵坐标，以浓度为横坐标，线性关系如图1所示。

[0062] 2.4.6精密度试验

[0063] 取供试品溶液，按照2.4.3的实验方法滴定，重复滴定6次，计算RSD。实验结果如表3所示。

[0064] 表3精密度试验测定结果

[0065]

[0066] 2.4.7抗凝活性测定

[0067] 取上述供试品溶液，按照2.4.3重复3次滴定，取平均值，结果如表4所示。

[0068] 表4抗凝活性测定试验结果

[0069]

[0070] 结果表明，实施例1制备的蛭肽蛋白乳膏每克所含抗凝活性单位94.66U。

[0071] 实施例5：皮肤刺激性试验

[0072] 因为蛭肽蛋白祛痘乳膏直接接触脸部皮肤，刺激性等安全问题是患者使用时关注的重要问题，故通过对大鼠单次和多次涂药的观察结果，考察其刺激性，为临床前安全性评价提供依据。

[0073] 3.1试验方法

[0074] 3.1.1试验动物的处理和分组

[0075] 将12只SD大鼠随机分成两组，雌雄各半，编号A、B组。每组大鼠脱去脊柱两侧的毛，两边各得到约3cm×5cm大小暴露的皮肤，其中A组为急性刺激性试验组，B组为多次给药刺激性试验组。

[0076] 3.1.2急性刺激性试验

[0077] 其中A组大鼠处理完毕24h后，在左侧涂布约1.0g空白基质，在右侧涂布约1.0g实施例1制备得到的蛭肽蛋白乳膏作为对照，盖上两层纱布，再用胶布固定。给药24h后用无菌温水清洗，观察皮肤状况，按照4.1.4评定刺激性。

[0078] 3.1.3多次给药刺激性试验

[0079] B组大鼠处理完毕24h后，按照每天一次，每次给药约1.0g，连续给药7天，最后一次给药6h后，用无菌温水清洗，观察皮肤状况，按照3.1.4评定刺激性，皮肤刺激性标准如表5-6所示。

[0080] 3.1.4刺激性评定方法

[0081] 表5皮肤刺激性反应评分标准

[0082]

[0083] 公式：每组动物刺激性积分＝水肿、红斑刺激反应积分综合/实验动物数[0084] 按照上述公式计算积分数，再按照下表判断皮肤刺激性结果。

[0085] 表6皮肤刺激性标准

[0086]

[0087] 3.2实验结果，如表7所示。

[0088] 表7刺激性结果

[0089]

[0090]

[0091] 根据上述实验结果，参照3.1.4的刺激性标准，认为该乳膏没有刺激性，安全性较高。