一种pH与还原双重敏感性的纳米囊泡及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种pH与还原双重敏感性的纳米囊泡及其制备方法和应用，属于高分子化学和生物医药工程技术领域。所述纳米囊泡包含一种pH与还原双重敏感性的两亲性聚合物，该聚合物由亲水段聚乙二醇段和疏水段聚（天冬氨酰(二正丁基乙二胺‑co‑巯基乙胺)‑苯丙氨酸）段构成，所述亲水段和疏水段的比例为1：11；所述纳米囊泡还包含亲水性抗肿瘤药物和疏水性抗肿瘤药物。本发明提供的纳米囊泡能够同时负载亲水性和疏水性药物，实现肿瘤部位的药物靶点释放、高效协同治疗，能在体内长期应用。

权利要求

1.一种pH与还原双重敏感性的两亲性聚合物，其特征在于，所述聚合物由亲水段聚乙二醇段和疏水段聚（天冬氨酰(二正丁基乙二胺-co-巯基乙胺)-苯丙氨酸）段构成；所述亲水段和疏水段的比例为1：11。

2. 根据权利要求1所述的两亲性聚合物，其特征在于，所述聚乙二醇段的数均分子量为1500～3000 kDa，聚（天冬氨酰(二正丁基乙二胺-co-巯基乙胺)-苯丙氨酸）段数均分子量为21000～23000 kDa；聚天冬氨酰段的聚合度为40～140，聚苯丙氨酸段的聚合度为10～

100。

3.权利要求1或2所述的两亲性聚合物的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

S1.分别以β-天冬氨酸苄酯和苯丙氨酸为原料，缓慢加入三光气，加热回流制备得到苄氧羰基天冬氨酸酸酐和苯丙氨酸酸酐；

S2.以氨基聚乙二醇作为引发剂，引发S1的苄氧羰基天冬氨酸酸酐和苯丙氨酸酸酐开环聚合得到聚乙二醇-聚（天冬氨酸苄酯-苯丙氨酸）；

S3.以S2的聚乙二醇-聚（天冬氨酸苄酯-苯丙氨酸）为原料，依次与二正丁基乙二胺和巯基乙胺进行氨解反应，得到聚乙二醇-聚（天冬氨酰(二正丁基乙二胺-co-巯基乙胺)-苯丙氨酸）。

4.权利要求1或2所述的两亲性聚合物在制备pH与还原双重敏感性的纳米囊泡中的应用。

5. 一种pH与还原双重敏感性的纳米囊泡，其特征在于，所述纳米囊泡由权利要求1或2所述的两亲性聚合物在水中自组装形成，其水力学直径为50～200 nm。

6.权利要求1或2所述两亲性聚合物在制备负载亲、疏水性抗肿瘤药物的pH与还原双重敏感性纳米囊泡中的应用。

7.一种负载亲、疏水性抗肿瘤药物的pH与还原双重敏感纳米囊泡，其特征在于，所述纳米囊泡由权利要求1或2所述的两亲性聚合物在水中自组装形成；所述亲水性抗肿瘤药物负载于纳米囊泡的亲水空腔中，疏水性抗肿瘤药物负载于纳米囊泡的疏水性膜上。

8.权利要求7所述负载亲、疏水性抗肿瘤药物的pH与还原双重敏感纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1或2所述的两亲性聚合物和疏水性抗肿瘤药物溶解于不溶于水的挥发性有机溶剂中，将亲水性抗肿瘤药物溶解于水中；两者混合，经超声破碎分散成乳液；再将乳液经超声破碎分散于水中，形成水-油-水双乳液；再将双乳液通过旋转蒸发除去挥发性有机溶剂，经透析、超滤浓缩后即得。

9.根据权利要求7所述的纳米囊泡，其特征在于，所述亲水性抗肿瘤药物为盐酸阿霉素、三氧化二砷中的任一种；所述疏水性抗肿瘤药物为紫杉醇、长春新碱、羟基喜树碱、甲氨蝶呤、吉非替尼、阿法替尼、索拉菲尼、厄洛替尼中的任一种。

10.权利要求5和7所述的纳米囊泡在制备肿瘤治疗药物中的应用。

说明书

一种pH与还原双重敏感性的纳米囊泡及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及高分子化学和生物医药工程技术领域，具体地，涉及一种pH与还原双重敏感性的纳米囊泡及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 聚合物囊泡，是一种由两亲性聚合物通过一定方式自组装形成的具有含水空腔的特殊自组装体，具有高稳定性、可调的膜性质以及可同时包封亲水性和疏水性成分的能力。正是由于这些性质，使聚合物囊泡在药物递送、基因治疗和组织工程中有着广泛的应用前景。虽然聚合物囊泡具有的这些性质使其处于药物递送应用的最前沿，但是为了获得更好的治疗效果，开发靶点快速释放药物的聚合物囊泡很有必要。

[0003] 在肿瘤细胞中，通常同时具有降低的间质pH和升高的细胞内谷胱甘肽水平，这就使得pH和还原可以同时作为设计药物定点释放的触发因素，实现抗肿瘤药物在肿瘤细胞内释放。运用该设计理念，现有技术中研究人员通过设计，开发了一系列pH和还原双敏感性纳米颗粒，其制备过程一般为：先制备一种同时具有可质子化基团和巯基载体，并在较高pH即酸敏基团脱质子化疏水的条件下，在水性环境中组装成纳米颗粒，同时通过分子内、分子间二硫键的交联增加纳米颗粒的体内稳定性，通过肿瘤组织或肿瘤细胞内酸性环境及肿瘤细胞还原环境触发药物的释放，可提高病灶部位药物浓度并降低副作用。

[0004] 然而，小分子化疗易使肿瘤细胞产生耐药性，使得化疗失败。目前较为行之有效的方法是通过多种药物的联合传输达到有效治疗的目的，纳米胶束虽表现出很好的应用前景，但受限于不能包载亲水性药物，大大减少了其抗肿瘤药物联合输送的选择配对。而现有技术中报道的基于聚乙二醇-聚丙烯酸-聚(甲基丙烯酸2-(二甲基氨基)乙酯）三嵌段共聚物硫醇衍生物的氧化还原双敏感囊泡，则由于聚合物主链为碳碳链，无法在人体内降解，长期体内应用受限。因此，可降解的敏感性纳米囊泡传输体系在小分子化疗药物应用与肿瘤治疗的传输中具有独特的优势。但是，目前现有技术中尚未有关于既能同时负载亲、疏水性药物，又能实现药物定点释放以及在人体内易于降解的纳米囊泡的报道。

发明内容

[0005] 本发明为了克服现有技术的上述不足，提供一种pH与还原双重敏感性的两亲性聚合物。

[0006] 本发明的另一目的在于提供上述两亲性聚合物的制备方法。

[0007] 本发明的另一目的在于提供上述两亲性聚合物在制备pH与还原双重敏感性的纳米囊泡中的应用。

[0008] 本发明的另一目的在于提供一种pH与还原双重敏感性的纳米囊泡。

[0009] 本发明的另一目的在于提供上述两亲性聚合物在制备负载亲、疏水性抗肿瘤药物的pH与还原双重敏感性纳米囊泡中的应用。

[0010] 本发明的另一目的在于提供一种负载亲、疏水性抗肿瘤药物的pH与还原双重敏感纳米囊泡。

[0011] 本发明的另一目的在于提供上述负载亲、疏水性抗肿瘤药物的pH与还原双重敏感纳米囊泡的制备方法。

[0012] 本发明的另一目的在于提供上述纳米囊泡在制备肿瘤治疗药物中的应用。

[0013] 为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

[0014] 一种pH与还原双重敏感性的两亲性聚合物，由亲水段聚乙二醇段和疏水段聚（天冬氨酰(二正丁基乙二胺-co-巯基乙胺)-苯丙氨酸）段构成；所述亲水段和疏水段的比例为1：11。

[0015] 本发明为了实现亲、疏水性药物的共传送和药物的定点释放，选取聚乙二醇为亲水段；选取聚天冬氨酰（二正丁基乙二胺）为酸敏段，该嵌段在中性条件下是疏水的，在肿瘤细胞溶酶体酸性条件下发生叔胺质子化转化为亲水性聚合物，使得囊泡具有酸敏感性；选取聚天冬氨酰（巯基乙胺）为还原敏感段，其所带的巯基能在氧化作用下产生双硫键交联结构，稳定囊泡结构，而且这种交联结构又能响应肿瘤细胞的还原环境（如肿瘤细胞高表达的谷胱甘肽）而解交联，使得囊泡具有还原敏感性；选取聚苯丙氨酸来提高载体疏水性，使其能够形成囊泡结构。

[0016] 所述聚乙二醇段的数均分子量为1500～3000 kDa，聚（天冬氨酰(二正丁基乙二胺-co-巯基乙胺)-苯丙氨酸）段数均分子量为21000～23000 kDa；聚天冬氨酰段的聚合度为40～140，聚苯丙氨酸段的聚合度为10～100。

[0017] 优选地，所述两亲性聚合物的制备方法，具体包括如下步骤：

[0018] S1.分别以β-天冬氨酸苄脂和苯丙氨酸为原料，缓慢加入三光气，加热回流制备得到苄氧羰基天冬氨酸酸酐和苯丙氨酸酸酐；

[0019] S2.以氨基聚乙二醇作为引发剂，引发S1的苄氧羰基天冬氨酸酸酐和苯丙氨酸酸酐开环聚合得到聚乙二醇-聚（天冬氨酸苄酯-苯丙氨酸）；

[0020] S3.以S2的聚乙二醇-聚（天冬氨酸苄酯-苯丙氨酸）为原料，依次与二正丁基乙二胺和巯基乙胺进行氨解反应，得到聚乙二醇-聚（天冬氨酰(二正丁基乙二胺-co-巯基乙胺)-苯丙氨酸）。

[0021] 优选地，S3所述的聚乙二醇-聚（天冬氨酸(二正丁基乙二胺-co-巯基乙胺)-苯丙氨酸）中，二正丁基乙二胺氨解的比例为70%～95%，相应的巯基乙胺氨解的比例为5%～30%。

[0022] 如上所述的两亲性聚合物在制备pH与还原双重敏感性的纳米囊泡中的应用。

[0023] 一种pH与还原双重敏感性的纳米囊泡，由上述两亲性聚合物在水中自组装形成，其水力学直径为50～200 nm。

[0024] 本发明还请求保护上述两亲性聚合物在制备负载亲、疏水性抗肿瘤药物的pH与还原双重敏感性纳米囊泡中的应用。

[0025] 一种负载亲、疏水性抗肿瘤药物的pH与还原双重敏感纳米囊泡，所述亲水性抗肿瘤药物负载于纳米囊泡的亲水空腔中，疏水性抗肿瘤药物负载于纳米囊泡的疏水性膜上。

[0026] 所述纳米囊泡由上述可降解的两亲性聚合物通过双乳化法自组装形成，可同时负载亲、疏水性小分子化疗药物，通过多药的靶标定点释放发挥协同抗肿瘤作用。

[0027] 所述纳米囊泡的制备方法包括以下步骤：将上述的两亲性聚合物和疏水性抗肿瘤药物溶解于不溶于水的挥发性有机溶剂中，将亲水性抗肿瘤药物溶解于水中；两者混合，经超声破碎分散成乳液；再将乳液经超声破碎分散于水中，形成水-油-水双乳液；再将双乳液通过旋转蒸发除去不溶于水的挥发性有机溶剂，经透析、超滤浓缩后即得。

[0028] 优选地，所述不溶于水的挥发性有机溶剂为氯仿。

[0029] 优选地，所述亲水性抗肿瘤药物为盐酸阿霉素、三氧化二砷中的任一种；所述疏水性抗肿瘤药物为紫杉醇、长春新碱、羟基喜树碱、甲氨蝶呤、吉非替尼、阿法替尼、索拉菲尼、厄洛替尼中的任一种。

[0030] 本发明还请求保护上述纳米囊泡在制备肿瘤治疗药物中的应用。

[0031] 一种肿瘤治疗药物，所述药物含有负载亲、疏水性抗肿瘤药物的pH与还原双重敏感纳米囊泡。

[0032] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0033] （1）本发明所提供的两亲性聚合物，通过结构设计同时引入酸敏感和还原敏感基团，使其自组装后能形成一种pH与还原双重敏感性的纳米囊泡，该囊泡特殊的亲水空腔结构可负载亲水性抗肿瘤药物，同时疏水性抗肿瘤药物可负载于纳米囊泡的疏水性膜上，为纳米囊泡同时搭载亲、疏水性药物提供了选择的可能；同时能实现肿瘤部位的药物定点释放，展现了良好的协同治疗效果。

[0034] （2）本发明所提供的两亲性聚合物，以可生物降解的聚氨基酸材料为主链，使得纳米材料能在体内长期应用。

[0035] （3）本发明所提供的制备方法（一步引发及氨解）简单易行，易于大量可控合成，适合产业化推广应用。

附图说明

[0036] 图1为实施例2中载药双敏感纳米囊泡的制备示意图。

[0037] 图2为实施例2中载药双敏感纳米囊泡的粒径分布图。

[0038] 图3为实施例2中载药双敏感纳米囊泡的透射电镜图。

[0039] 图4为应用例1中载药双敏感纳米囊泡的药物体外释放曲线。

[0040] 图5为应用例2中纳米囊泡的动物体内治疗效果情况。

具体实施方式

[0041] 下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

[0042] 实施例1

[0043] 一种pH与还原双重敏感性的两亲性聚合物的制备方法，包括以下步骤：

[0044] 1、苄氧羰基天冬氨酸酸酐（BLA-NCA）的合成，反应机理及反应过程如下：

[0045]

[0046] 将10.0 g β-天门冬氨酸苄酯（BLA）和150 mL乙酸乙酯加入三口瓶中；加热回流，再将溶有6.0 g三光气（NCA）的50 mL乙酸乙酯溶液缓慢滴加至三口瓶中；继续回流，直至溶清；反应完成后将反应瓶放入冰箱冷冻降温；接着用4℃饱和碳酸氢钠洗涤三次，4℃饱和食盐水洗涤一次；将上层有机相转移至单口瓶中，加入无水硫酸镁干燥；过滤，将滤液旋蒸浓缩至50 mL；往单口瓶中加入200 mL石油醚，冷冻加速析出；恢复室温，过滤得到粗品；粗品用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到8.0 g白色针状晶体，即得到苄氧羰基天冬氨酸酸酐，产率为72%。

[0047] 2、苯丙氨酸酸酐（Phe-NCA）的合成，反应机理及反应过程如下：

[0048]

[0049] 苯丙氨酸酸酐（Phe-NCA）的合成方法与苄氧羰基天冬氨酸酸酐类似：依次加入10 g苯丙氨酸和150 mL乙酸乙酯；加入三口瓶中；加热回流，再将溶有6.0 g三光气的50 mL乙酸乙酯溶液缓慢滴加至三口瓶中；继续回流，直至溶清；反应完成后将反应瓶放入冰箱冷冻降温；接着用4℃饱和碳酸氢钠洗涤三次，4℃饱和食盐水洗涤一次；将上层有机相转移至单口瓶中，加入无水硫酸镁干燥；过滤，将滤液旋蒸浓缩至50 mL；往单口瓶中加入200 mL石油醚，冷冻加速析出；恢复室温，过滤得到粗品；粗品用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到8.0 g白色片状晶体，即得到苯丙氨酸酸酐，产率为70%。

[0050] 3、聚乙二醇-聚（天冬氨酸苄酯-苯丙氨酸）（mPEG-P(BLA-Phe)）的合成，反应机理及反应过程如下：

[0051]

[0052] 在50 mL的反应瓶中加入0.3514 g氨基mPEG 2000，加热抽真空除水；在氮气保护下加入4 mL DMF将氨基mPEG溶解；再加入3.50 g苯丙氨酸酸酐和0.60 g苄氧羰基天冬氨酸酸酐；溶清后加入20 mL三氯甲烷，在35℃条件下反应48 h；将反应液缓慢加入大量无水乙醇中沉淀；离心，依次用无水乙醇洗涤三次，无水乙醚洗涤三次；真空干燥，得到白色固体2.8 g，经1H NMR计算BLA和Phe的总重复单元数为116，BLA聚合度为97，Phe聚合度为19。

[0053] 4、聚乙二醇-聚（天冬氨酰(二正丁基乙二胺-co-巯基乙胺)-苯丙氨酸）[mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe）]的合成，反应机理及过程如下：

[0054]

[0055] 在50 mL的反应瓶中，加入2 g mPEG-P(BLA-Phe)；装置持续通入氮气，加入25 mL的无水DMSO将聚合物溶解；再加入0.880 mL N,N-二正丁基乙二胺（DBA），在35℃磁力搅拌氨解反应24 h；再加入0.2 g巯基乙胺（MEA），反应48 h。反应完成后反应溶液用无水甲醇透析5次；旋蒸除去甲醇，加入20 mL氯仿溶解；将上述溶液在无水乙醚沉淀；离心、洗涤、干燥得到1.8 g淡黄色的产品，即得到两亲性聚合物mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe），经1H NMR计算DBA氨解比例为80%，MEA氨解比例20%。

[0056] 实施例2

[0057] 一种负载亲、疏水性抗肿瘤药物的纳米囊泡（简称D-G-PDMP囊泡），由以下方法制备得到（如图1所示）：

[0058] 称取20 mg实施例1所得mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe）、1 mg疏水性抗肿瘤药物吉非替尼（Gefitinib），用3 mL氯仿溶解；称取1.6 mg亲水性抗肿瘤药物盐酸阿霉素（DOX），溶于0.4 mL纯化水中；两者混合，用超声破碎仪分散成均匀乳液；将乳液缓慢加入30 mL纯化水中，同时用超声破碎仪分散；通过旋蒸除去氯仿，往溶液通入氧气30 min，再用14 KDa的透析袋在pH 7.4的PBS中透析；用100 KDa超滤管超滤浓缩；最后用450 nm的滤头过滤，即得到负载吉非替尼/盐酸阿霉素的纳米囊泡，吉非替尼/盐酸阿霉素载药率分别为1.36%和3.75%。

[0059] 所得负载吉非替尼/盐酸阿霉素的纳米囊泡的表征如下：

[0060] 取所得纳米囊泡溶液，用动态光散射法测定其水力学直径，结果如图2所示：动态光散射测得该囊泡的粒径为120 ± 3.8 nm。用透射电子显微镜观察其形貌结构，结果如图3所示：纳米粒子呈中间有凹陷的典型囊泡结构。

[0061] 应用例1

[0062] 实施例2所得负载吉非替尼/盐酸阿霉素的纳米囊泡的药物体外释放实验：

[0063] 取等量的实施例2所得纳米囊泡溶液，分为4组，装入透析袋，分别置于pH 7.4、pH 5.0、pH 7.4+ GSH (5 mM)和pH 5.0+ GSH (5 mM)缓冲溶液中，置于37℃培养摇床透析；在特定时间点取样，并用HPLC测定药物的浓度，最终通过累加计算、作图得到DOX和Gefitinib的体外释放曲线（图4）。从图可以看出：pH7.4的条件下，药物释放很慢，未加还原剂组，DOX和吉非替尼在24小时内基本没有释放；加入还原剂后，DOX和吉非替尼释放量依然较少，24小时内只释放10%左右。在pH5.0组，药物释放明显加快，但不加还原剂组DOX和吉非替尼在
24小时内只释放了40%左右；而加入还原剂后，DOX和吉非替尼释放明显加快，DOX在8h左右就释放了80%，而吉非替尼释放更快，4h就释放了80%，这展示了载体在pH5.0加还原剂的条件下速释的特征。实验结果表明双敏囊泡有良好的pH/还原双响应行为，能够实现药物的定点释放。

[0064] 应用例2

[0065] 分别采用实施例2所得纳米囊泡和以下3种纳米囊泡进行体内治疗实验测定，对比各自的治疗效果：

[0066] 一、3种囊泡的制备

[0067] 1、一种空白的纳米囊泡（简称PDMP囊泡），由以下方法制备得到：称取20 mg实施例1所得mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe），用3 mL氯仿溶解；缓慢加入0.4 mL纯化水，用超声破碎仪分散成均匀乳液；将乳液缓慢加入30 mL纯化水中，同时用超声破碎仪分散；通过旋蒸除去氯仿，往溶液通入氧气30 min，再用14 KDa的透析袋在pH 7.4的PBS中透析；用100 KDa超滤管超滤浓缩；最后用450 nm的滤头过滤，即得到空白的纳米囊泡。

[0068] 2、一种负载疏水性抗肿瘤药物吉非替尼的纳米囊泡（简称G-PDMP囊泡），由以下方法制备得到：称取20 mg实施例1所得mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe）、1 mg疏水性抗肿瘤药物吉非替尼（Gefitinib），用3 mL氯仿溶解；缓慢加入0.4 mL纯化水，用超声破碎仪分散成均匀乳液；将乳液缓慢加入30 mL纯化水中，同时用超声破碎仪分散；通过旋蒸除去氯仿，往溶液通入氧气30 min，再用14 KDa的透析袋在pH 7.4的PBS中透析；用100 KDa超滤管超滤浓缩；最后用450 nm的滤头过滤，即得到负载吉非替尼的纳米囊泡，吉非替尼载药率为1.42%。

[0069] 3、一种负载亲水性抗肿瘤药物盐酸阿霉素的纳米囊泡（简称D-PDMP囊泡），由以下方法制备得到：称取20 mg实施例1所得mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe），用3 mL氯仿溶解；称取1.6 mg亲水性抗肿瘤药物盐酸阿霉素，溶于0.4 mL纯化水中；两者混合，用超声破碎仪分散成均匀乳液；将乳液缓慢加入30 mL纯化水中，同时用超声破碎仪分散；通过旋蒸除去氯仿，往溶液通入氧气30 min，再用14 KDa的透析袋在pH 7.4的PBS中透析；用100 KDa超滤管超滤浓缩；最后用450 nm的滤头过滤，即得到负载盐酸阿霉素的纳米囊泡，盐酸阿霉素载药率为3.52%。

[0070] 二、实施例2所得纳米囊泡和以上3种纳米囊泡的体内治疗实验

[0071] 取30只雄性Nu/Nu裸鼠（4～6周）构建裸鼠皮下移植瘤模型。收集N2a细胞悬液（1×106个细胞/只）于裸鼠后腿上部皮下注射成瘤，待荷瘤裸鼠的肿瘤体积达50 mm3时，将裸鼠随机分为5组，每组6只，进行实验，分别为PBS组、PDMP囊泡组、G-PDMP囊泡组、D-PDMP囊泡组、D-G-PDMP囊泡组。给药治疗前测定各实验组荷瘤裸鼠体重和肿瘤体积，将开始治疗时间设为第1天，分别取200 μL囊泡溶液和等体积PBS经尾静脉注射到荷瘤裸鼠体内。隔一天给药治疗并检测各实验组裸鼠肿瘤大小，肿瘤大小用游标卡尺测量。治疗结果如图5所示，结果表明：D-G-PDMP囊泡组（即同时负载吉非替尼和盐酸阿霉素）表现了良好的协同治疗效果。

[0072] 实施例3

[0073] 一种负载亲、疏水性抗肿瘤药物的纳米囊泡，由以下方法制备得到：

[0074] 1、（BLA-NCA）与（Phe-NCA）的合成：与实施例1相同。

[0075] 2、（mPEG-P(BLA-Phe)）的合成：在50 mL的反应瓶中加入0.3272 g氨基mPEG 2000，充入氮气；升温至70℃，抽真空4 h除水；充入氮气，降至室温；在氮气保护下加入4 mL DMF将氨基mPEG溶解；再加入1.00 g苯丙氨酸酸酐和2.61 g苄氧羰基天冬氨酸酸酐；溶清后加入20 mL三氯甲烷，在35℃条件下反应48 h；将反应液缓慢加入大量无水乙醇中沉淀；离心，依次用无水乙醇洗涤三次，无水乙醚洗涤三次；真空干燥，得到白色固体3.05 g；经1H NMR计算BLA 和Phe的总重复单元数为112，BLA聚合度为74，Phe聚合度为38。

[0076] 3、[mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe）]的合成：取步骤2所得2.0 g mPEG-P(BLA-Phe)加入25 mL的无水DMSO将聚合物溶解；再加入0.660 mL DBA，在35℃磁力搅拌氨解反应24 h；再加入0.2 g MEA，反应48 h。反应完成后反应溶液用无水甲醇透析；旋蒸除去甲醇，加入20 mL氯仿溶解；将上述溶液在无水乙醚沉淀；离心、洗涤、干燥得到1.8 g淡黄色的产品，即得到两亲性聚合物mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe）。经1H NMR计算DBA氨解比例为
80%，MEA氨解比例20%。

[0077] 4、D-G-PDMP囊泡的制备：与实施例2中步骤相同，所得纳米囊泡的平均粒径为130 ± 2.0 nm，吉非替尼/盐酸阿霉素载药率分别为1.47%和3.63%。

[0078] 实施例4

[0079] 一种负载亲、疏水性抗肿瘤药物的纳米囊泡，由以下方法制备得到：

[0080] 1、（BLA-NCA）与（Phe-NCA）的合成：与实施例1相同。

[0081] 2、（mPEG-P(BLA-Phe)）的合成：与实施例1相同。

[0082] 3、[mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe）]的合成：在50 mL的反应瓶中，加入步骤2所得2 g mPEG-P(BLA-Phe)；装置持续通入氮气，加入25 mL的无水DMSO将聚合物溶解；再加入
0.660 mL DBA，在35℃磁力搅拌氨解反应24 h；再加入0.4 g MEA，反应48 h。反应完成后反应溶液用无水甲醇透析5次；旋蒸除去甲醇，加入20 mL氯仿溶解；将上述溶液在无水乙醚沉淀；离心、洗涤、干燥得到1.8 g淡黄色的产品，即得到两亲性聚合物mPEG-P（Asp(DBA-co-MEA)-Phe）。经1H NMR计算DBA氨解比例为80%，MEA氨解比例20%。

[0083] 4、D-G-PDMP囊泡的制备：与实施例2中步骤相同，所得纳米囊泡的平均粒径为125 ± 5.4 nm，吉非替尼/盐酸阿霉素载药率分别为1.63%和3.83%。