美迪紫檀素、其衍生物及制造方法

摘要

本发明提供一种美迪紫檀素化合物及其制造方法。本发明化合物具式(I)结构。式(I)中的各变化及其制造方法详述于发明说明。本发明更提供一种治疗器官功能障碍的方法。

权利要求

1.一种化合物，如式(I)所示，

其中R选自 PO3Na2及

2.一种用于制备治疗器官功能障碍的药物的用途，其特征是，所述药物包含如权利要求1所述化合物及药学上可接受的盐类及载体。

3.如权利要求2所述的用途，其特征是，所述化合物的浓度为0.1-10μg/mL。

4.如权利要求2所述的用途，其特征是，所述药物的剂量为30-90mg/kg。

5.如权利要求2所述的用途，其特征是，所述化合物为红血球生成素的诱导物；其中所述红血球生成素的诱导物可以刺激红血球前驱细胞的增生及分化、增加个体中红血球、白血球及血小板的数量。

6.如权利要求2所述的用途，其特征是，所述器官包括心脏或肾脏。

7.如权利要求6所述的用途，其特征是，所述肾脏的功能障碍为肾衰竭。

8.如权利要求6所述的用途，其特征是，所述肾脏可以使用所述药物增加血液中红血球的携氧量或增加白血球数目。

9.如权利要求6所述的用途，其特征是，所述药物能促进所述肾脏的肾皮质细胞再生。

10.如权利要求6所述的用途，其特征是，所述心脏的功能障碍为心肌病变。

11.如权利要求2所述的用途，其特征是，所述药物能减少心肌细胞的萎缩、肥大、凋亡或纤维化。

12.如权利要求2所述的用途，其特征是，所述药物能增加个体常氧下的耐力性能。

说明书

美迪紫檀素、其衍生物及制造方法

【技术领域】

[0001] 本发明是有关于美迪紫檀素(medicarpin)及其衍生物，及其制制备方法且特别有关于美迪紫檀素及其衍生物对于治疗与抑制器官功能障碍的影响。【现有技术】

[0002] 局部缺血会导致缺氧、细胞损伤和相关器官的功能障碍，如心力衰竭、中风、慢性阻塞性肺病、缺血性视网膜病变、肝损伤和急性肾功能衰竭等。线粒体功能障碍是器官缺血损伤的关键因素；在缺氧时，线粒体氧化磷酸化迅速停止，停止生成ATP的代谢。

[0003] 对于缺氧和贫血期间组织氧合作用产生变化时，必须具有红血球生成素(erythropoietin,EPO)来调控红血球的量。已经在各种组织和缺血诱导损伤的实验模型中证实EPO的保护作用，并可归因于其对非造血代谢的适应力、抑制细胞凋亡和刺激血管生成的作用。目前，已证实EPO可透过PPAR共活化剂1-α(PGC-1α)活化粒线体，来刺激心脏粒线体增生，其为心脏活动的主要调控者。临床上，EPO可恢复、改善心脏功能，并藉由EPO矫正贫血的保护作用，来增加患者的运动耐力和生活质量(Bergmann et al.,2011)。这些结果证明EPO的保护效果可能取决于对细胞内能量的调节作用。

[0004] 血红素(Haemoglobin,Hb)是红血球中主要运送氧气的蛋白质。血红素的主要形式为Hb-α，由两个α-和β-多肽链组成的四聚体，各带有一个血红素基团。目前，令人意外地发现许多非造血细胞会表现Hb，且其可促进组织氧传递或增加细胞氧合作用，因此可提供缺氧/缺血受损的内在保护机制。

[0005] 临床上,重组人类红血球生成素(recombination human erythropoietin,rHuEPO)治疗慢性心脏衰竭可逆转心脏重塑(reverse cardiac remodeling)、改善心脏功能、发挥抗发炎、抗纤维化、抗细胞凋亡的作用，以及改善贫血症状和增加运动能力降低病患住院治疗的比例，但是使用rHuEPO进行治疗使用的剂量需求大，且易造成血栓及中风的风险。已经有实验证明，在贫血及慢性肾脏病患使用darbepoetin alfa会造成血栓和中风(Trial to Reduce Cardiovascular Events With Aranesp Therapy,TREAT,NCT00093015)且没有明显的治疗效果。此外，依据REVEAL trial已发表的研究结果，利用epoetin-alfa进行治疗，并不会减少梗塞的区域反而在老年的病患中会增加梗塞的区域，而且对死亡及血栓、中风等心血管的副作用机率增加。

[0006] 综合上述，临床上应避免使用rHuEPO来促进表现血红蛋白，特别是在心血管疾病的高危险群以及需要以高剂量的rHuEPO来进行治疗的患者。与rHuEPO相比，小分子药物可以简单通过心肌组织到达心肌细胞。因此目前需要开发一种小分子化合物且剂量需求量低并可以促进内生性EPO的产生的药物。

[0007] 黄芪(syn.Astragalus membranaceus)是蒙古黄耆(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.Mongholicus(Bge.)Hsiao or Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge)的干燥根部，为家蚕豆科植物。黄芪是中药中使用最广泛的药材之一，具利尿、降低血压和增强能量的效果。

[0008] 在先前的研究中，黄芪已知富含多糖、葡糖苷酸、氨基酸、胆碱、类黄酮和叶酸等。然而，以目前技术所获得的黄芪提取物是混合物。因此，业界亟需开发一种新颖的制备方法以获得纯且具小分子特性的物质。
【发明内容】

[0009] 有鉴于此，本发明提供美迪紫檀素、其衍生物、制备美迪紫檀素及其衍生物的方法、以及一种使用美迪紫檀素及其衍生物增进细胞活性与增加器官功能的方法。

[0010] 本发明提供一化合物，如式(I)所示。

[0011]

[0012] 其中R为-H、-CH3、 PO3Na2或

[0013] 本发明更包括提供医药组成物，包括本发明的化合物及一药学上可接受的盐类及载体。

[0014] 本发明另提供一种制备本发明化合物的方法，包括第1及2图所述的步骤。

[0015] 本发明更提供一本发明的医药组合物的制造方法，其步骤为：

[0016] (1)通过叔丁基二甲基硅基(t-butyldimethylsilyl,TBS)和芐基保护酚，取得化合物1和2；其中所述化合物1为 其中所述化合物2为

[0017] (2)化合物2进行威悌反应(Wittig reaction)，取得化合物3；其中该化合物3为[0018] (3)水解并进一步氧化取得化合物5；其中该化合物5为

[0019] (4)引入辅助基团以取得化合物6；其中该化合物6为

[0020] (5)进行偶联反应以取得化合物7；其中化合物7为

[0021] (6)用MOMCl(氯甲基甲醚，Methoxymethyl chloride Methyl chloromethyl ether，chloromethyl methyl ether)保护羟基；

[0022] (7)将NaBH4的中间体还原成化合物9；其中该化合物9为

[0023] (8) 通过分子内 光延反应取 得化合物1 1；其中该 化合物11 为

[0024] (9)将樟脑磺酸(Camphorsulfonic acid,CSA)溶于二氯甲烷中以取得(+)-Medicarpin(美迪紫檀素)，其中所述(+)-Medicarpin为

[0025] 本发明另提供一种用于制备治疗器官功能障碍的药物的用途，其中该药物包含本发明的化合物及药学上可接受的盐类及载体。其中所述药物在皮下、静脉、脊髓、或肌肉给予。其中本发明的化合物的浓度为0.1～10μg。本发明的药物剂量为30-90mg/kg。

[0026] 本发明另提供一种用于制备治疗器官功能障碍的药物的用途，其中所述器官包括心脏或肾脏。本发明的化合物为红血球生成素的诱导物，且可以刺激红血球前驱细胞的增生及分化、可增加个体中红血球、白血球及血小板的数量、可改善心脏缺血。

[0027] 本发明另提供一种用于制备治疗器官功能障碍的药物的用途，其中肾脏为由化疗药物所引起的急性肾衰竭。使用本发明的药物可以增加血液中红血球的携氧量或增加白血球数目。本发明的药物可以促进该肾脏的肾皮质细胞再生。

[0028] 本发明另提供一种用于制备治疗器官功能障碍的药物的用途，其中心脏功能障碍为由化疗药物所引起的心肌病变，本发明的药物减少心肌细胞的萎缩、肥大、凋亡或纤维化。较佳的其心肌细胞为心室组织细胞。本发明的药物增加个体中常氧下的耐力性能。

[0029] 为达到上述及其它目的，以下对本发明一或多个具体实施例进行说明。本发明的其它特征或优点以实施例及请求项详细描述。

[0030] 【图式简单说明】

[0031] 图1显示美迪紫檀素((+)-medicarpin)的合成方法。

[0032] 图2显示美迪紫檀素衍生物及其制备方法。

[0033] 图3A-3B显示由小鼠骨髓所分化的红血球前驱细胞的定量分析。美迪紫檀素及其衍生物在低浓度下(0.1至10μg/mL)可促进红血球前驱细胞的分化，其中YXM-M3(衍生化合物3)及YXM-M5(衍生化合物5)具有较高的EPO刺激活性。

[0034] 图4为显示美迪紫檀素在顺铂诱导肾损伤小鼠模型中的分析程序。

[0035] 图5A-5D显示红血球(图5A)、血红素(图5B)、白血球(图5C)及血小板(图5D)在外围血液中的数目。

[0036] 图6显示美迪紫檀素可加速顺铂诱导肾损伤小鼠的肾功能恢复。

[0037] 图7A-7C显示美迪紫檀素促进肝脏(图7A)及肾脏(图7B)中EPO的表现，以及肝脏(图7C)中血红素的表现。

[0038] 图8为苏木精曙红染色的肾皮质切片显微照片。照片显示美迪紫檀素对顺铂诱导肾损伤小鼠肾皮质的再生作用。

[0039] 图9显示研究美迪紫檀素对阿霉素诱导肾损伤小鼠治疗效果的流程。

[0040] 图10A-10B显示美迪紫檀素对阿霉素诱导肾损伤小鼠心脏功能的效果。在实验组中可改善小鼠S-T延长间期(90mg/kg/day美迪紫檀素)，如图10A所示。在以美迪紫檀素治疗3周后，心率回复(图10B)。

[0041] 图11A-11D显示以心电图观察第3周美迪紫檀素对阿霉素诱导肾损伤小鼠心脏功能的效果。经美迪紫檀素治疗的小鼠(30及90mg/kg)具有较佳的短缩分率(图11A)及搏出分率(图11B)。

[0042] 图12A-12D显示阿霉素诱导肾损伤小鼠在正常氧或低氧(8％O2)条件下进行跑步测试，美迪紫檀素对疲劳时及跑步距离的影响。不论在正常氧或低氧(8％O2)条件下在，给予美迪紫檀素3周后可增进运动耐力(图12A-12D)，且效果具剂量依赖性。

[0043] 图13A-13C显示美迪紫檀素对阿霉素诱导肾损伤小鼠的心脏重量及肾功能的影响。以心电图观察发现经美迪紫檀素治疗后小鼠左心室壁厚度增加，此结果反映出心脏重量的恢复(图13A)，而非心室肥大(图13B)。美迪紫檀素对肾功能没有影响(图13C)。

[0044] 图14A-14B显示美迪紫檀素对阿霉素诱导肾损伤小鼠PGC1及EPO表现的影响。在肾脏(图14B)及心脏(图14A)中EPO的表现恢复且增加。

[0045] 图15A-15B为显微照片，其显示未处理组和美迪紫檀素治疗组的心脏组织的组织学分析。小鼠心脏左心室苏木精和伊红(H&E)染色切片在40X(图15A)及400X(图15B)的影像。

[0046] 图16为一显微照片，其显示阿霉素诱导肾损伤小鼠在美迪紫檀素治疗后第40天，小鼠的左心室切片以梅生三色染色(Masson’s trichrome)。

[0047] 【实施方式】

[0048] 在本发明一范畴中，本发明提供一化合物，如式(I)所示。

[0049]

[0050] 其中R为-H、-CH3、 PO3Na2或

[0051] 本发明的化合物为美迪紫檀素及其衍生物。

[0052] 在一实施例中，美迪紫檀素及其衍生物可由黄芪萃取或化学合成，较佳为化学合成。

[0053] 在另一实施例中，美迪紫檀素及其衍生物可以下述步骤(a)至(l)进行合成，如图1所示。

[0054] 在步骤(a)中，合成4-芐氧基-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-苯甲醛(化合物1)。将4-芐氧基-2-羟基苯甲醛、咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷(tert-Butyldimethylsilyl chloride，TBSCl)于二甲基甲酰胺(Dimethylformamide,DMF)中混合并搅拌。接着，加入甲醇(Methanol,MeOH)，并搅拌。加入水，使用乙醚萃取所获得的混合物。将有机层混合，以水及盐水清洗、干燥及纯化，可获得4-芐氧基-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-苯甲醛(化合物
1)。

[0055] 在步骤(b)中，合成2-芐氧基-4-甲氧基苯甲醛(化合物2)。将碳酸钾(Potassium carbonate,K2CO3)及溴化苄(Benzyl bromide,BnBr)加至溶于乙腈的4-甲氧基-2-羟基苯甲醛中。将混合物冷却并移除溶剂。将水加至残留物中，以乙醚(Ether,Et2O)萃取、以盐水清洗，并干燥。进行结晶以获得2-芐氧基-4-甲氧基苯甲醛(化合物2)。

[0056] 在步骤(c)中，合成甲基乙烯基醚(化合物3)。将t-BuOK加至溶于无水四氢呋喃(Tetrahydrofuran,THF)中的(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻((Methoxymethyl)triphenylphosphonium chloride)溶液中。滴加溶于无水THF中的化合物2后，搅拌混合物并静置。加入氯化铵(Ammonium chloride,NH4Cl)使其终止反应。使用乙酸乙酯(Ethyl acetate,EtOAc)进行萃取，并以盐水清洗有机层，干燥以获得甲基乙烯基醚(化合物3)。

[0057] 在步骤(d)中，合成2-芐氧基-4-甲氧基苯乙醛(化合物4)。将盐酸(Hydrochloric acid,HCl)加至溶于THF的化合物3溶液中。将混合物冷冻并静置。加入碳酸氢钠(sodium hydrogen carbonate,NaHCO3)。使用Et2O进行萃取，并以盐水清洗有机层。将溶剂移除，并纯化残留物以获得2-芐氧基-4-甲氧基苯乙醛(化合物4)。

[0058] 在步骤(e)中，合成2-芐氧基-4-甲氧基苯基乙酸(化合物5)。将磷酸二氢钠(Sodium dihydrogen phosphate,NaH2PO4)溶液加至化合物4、2-甲基-2-丁烯及亚氯酸钠(Sodium chlorite,NaClO2)中。搅拌混合物。将有机溶剂移除，萃取水层，干燥及纯化，以获得2-芐氧基-4-甲氧基苯基乙酸(化合物5)。

[0059] 在步骤(f)中，合成酰亚胺(imide)(化合物6)。将草酰氯和DMF添加至化合物5溶液中，进行搅拌。将残留物溶解于无水THF中，获得酰氯溶液。在其它的烧瓶中，将n-BuLi加至溶于无水THF的(R)-4-芐基-2-恶唑烷酮。将酰氯溶液滴加至反应混合物中，并进行搅拌。加入饱和NH4Cl水溶液，进行萃取、洗涤、干燥，使用EtOAc和己烷研磨，获得酰亚胺(化合物6)。

[0060] 在步骤(g)中，合成醇类(alcohol)(化合物7)。将N,N-二异丙基乙基胺(N,N-Diisopropylethylamin,DIPEA)(3.70ml,21mmol)及三氟甲磺酸二丁硼(Dibutylboranylium trifluoromethanesulfonate,Bu2BOTf)加至溶于无水二氯甲烷(Dichloromethane,CH2Cl2)的化合物6溶液中。将溶于CH2Cl2的化合物1加热至室温，进行搅拌，并加入pH 7缓冲液进行淬熄，接着缓慢地添加MeOH/35％H2O2。将有机溶剂移除，使用醚类萃取。清洗有机层，并干燥以获得醇类(化合物7)。

[0061] 在步骤(h)中，合成甲氧基甲基(methoxymethyl)保护醇类(MOM protected alcohol,MOM)(化合物8)。将氯甲基甲醚(Chloromethyl methyl ether,MOMCl)滴至溶于无水CH2Cl2的化合物7及DIPEA(N，N-二异丙基乙胺，N,N-Diisopropylethylamine，4.34ml)中。薄层色层分析(Thin Layer Chromatography,TLC)表示此反应不完全，且加入额外的MOMCl(2.00ml)及DIPEA进行搅拌。加入水并搅拌混合物，萃取及清洗，以获得MOM保护醇类(化合物8)。

[0062] 在步骤(i)中，合成MOM保护醇类(化合物9)。将硼氢化锂(Lithium borohydride,LiBH4)加至溶于无水Et2O的化合物8中，并进行搅拌。以NaOH淬熄反应，并进行搅拌。使用Et2O进行萃取、清洗及干燥以获得MOM保护醇类(化合物9)。

[0063] 在步骤(j)中，合成二醇(diol)(化合物10)。将四正丁基氟化铵(Tetra-n-butylammonium fluoride,TBAF)加至溶于THF的化合物9溶液。加入水，并使用EtOAc进行萃取。将有机层合并，清洗并干燥以获得二醇(化合物10)。

[0064] 在步骤(k)中，合成醚类(either)(化合物11)。将偶氮二甲酸二乙酯(Diethyl diazenedicarboxylate,DEAD)加至醚类(化合物10)及三苯基膦(Triphenylphosphine,PPh3)中。将混合物移至到硅胶上，并进行纯化以获得醚类(化合物11)。

[0065] 在步骤(l)中，合成美迪紫檀素(medicarpin)(化合物12)。将醚类(化合物11)及溶于EtOAc/MeOH的10％Pd/C(钯碳,Palladium on carbon)溶液氢化。以硅藻土过滤催化剂，且将溶剂移除以获得白色泡沬，将白色泡沬溶于无水CH2Cl2中。加入樟脑磺酸(CSA，Camphorsulfonic acid)并搅拌混合物。加入NaHCO3，萃取混合物，干燥以获得美迪紫檀素。

[0066] 本发明更提供美迪紫檀素衍生物，包括衍生化合物1、2、3、4及5(YXM-M1、2、3、4、5)，如图2所示。衍生化合物1至5的合成如下所述。

[0067] 在条件(a)下：将碘甲烷(Iodomethane,CH3I)加至溶于丙酮的美迪紫檀素及碳酸钾的溶液中。将此混合物搅拌隔夜，移至硅胶上并分离，以获得衍生化合物1。

[0068] 在条件(b)下：将酰氯加至溶于二氯甲烷(Dichloromethane,CH2Cl2)的美迪紫檀素及三乙醇胺(2,2',2"-Nitrilotriethanol,TEA)溶液中。搅拌混合物，纯化以获得衍生化合物2、3及5。

[0069] 在条件(c)下：将四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl4)加至溶于乙腈(Ethanenitrile,CH3CN)的美迪紫檀素溶液中。搅拌混合物，并加入TEA及4-二甲氨基吡啶(4-Dimethylaminopyridine,DMAP)。5分钟后，加入二芐基，将混合物加热至室温，并进行搅拌。加入磷酸二氢钾，并使用EtOAc进行萃取。以急速层析法(flashchromatography)获得磷酸酯，接着将其溶于MeOH。加入钯碳(Palladium on carbon,Pd/C)，并将混合物在反应室压力下进行氢化。过滤去除催化剂，浓缩滤液。加入MeOH及甲醇钠(Sodium methoxide,NaOMe)，并搅拌混合物隔夜。

[0070] 在真空下除去溶剂，过滤固体，用少量冷水、冷MeOH和醚类清洗，获得衍生化合物4。

[0071] 在本发明另一范畴中，本发明更提供一医药组成物，包括式I所示化合物及一药学上可接受的盐类及载体。式I化合物包括，但不限于美迪紫檀素(化合物12)及其衍生物(衍生化合物1-5)。

[0072] 药学上可接受的载体可包括溶剂、分散剂、涂层、抗菌、抗真菌剂、渗和吸收延迟剂等其类似物。医药组成物中的载体必须是“可接受”的，其可与活性成分兼容(较佳可稳定活性成分)，且不会对治疗个体产生不利的影响。可使用一或多个增溶剂作为药学上的赋形剂，以递送活性成分美迪紫檀素。载体可包括胶体氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、月桂基硫酸钠及D&C黄色10号(2-(2-Quinolyl)-1,3-indandione disulfonic acid disodium salt,D&C Yellow#10)。

[0073] 本发明中适当的盐类包括无机阳离子，例如，碱金属盐类，如钠、钾或胺盐，碱土金族盐类，如镁、钙盐，含二价或四价阳离子的盐类，如锌、铝或锆盐。此外，也可是有机盐类，如二环己胺盐类、甲基-D-葡糖胺，胺基酸盐类，如精胺酸、离胺酸、组织胺酸、麸胺酸酰胺。另一方面，含氮盐基可为低烷基卤化物，如甲基、乙基、丙基、氯丁烷、溴化物及碘化物，二烃硫酸盐，如二甲基、二乙基、二丙基及二戊硫化物，长链卤化物，如癸基、十二烷基、十四烷基、十八烷基氯化物、溴化物及碘化物，气喘卤化物(asthma halides)，如苯甲基、苯乙基溴化物或其他类似物。形成盐类的试剂，包括低分子量的烷基胺，例如，甲基胺、乙基胺或三乙基胺。也可使用水或油溶性试剂或分散剂。

[0074] 为进行本发明治疗方法，可将具有一或多个美迪紫檀素及/或其衍生物的组成物以肠外、口服、经鼻、经直肠、局部或口腔的方式给予至一个体(如，哺乳动物)。本发明所述的“肠外”是指皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、脊内、脑内或颅内注射，以及其它适合的的注入技术。

[0075] 在本发明另一范畴中，本发明提供一种本发明医药组成物的用途，其系用于制备治疗肾脏和心脏功能障碍的药物。

[0076] 肾脏和心脏功能障碍包括，但不限于，缺血性心脏病、心肌症和心脏衰竭。

[0077] 尽管可理解，本发明对于所有哺乳动物具有效果，但本发明的个体较佳为人类患者。本发明的哺乳动物可为任何哺乳动物，特别是指需要治疗肾脏和心脏功能障碍的农业和家庭饲养的哺乳动物。

[0078] 美迪紫檀素或其衍生物可促进骨髓的EPO活性，并刺激红血球前驱细胞的增生与分化。美迪紫檀素或其衍生物可恢复红血球、白血球与血小板的数目以及血红素的量。美迪紫檀素或其衍生物为心脏、肾脏及肝脏内源性EPO表现的诱导者，且可治疗及预防心脏功能障碍包括缺血性心脏病、心肌症和心脏衰竭。【实施例】

[0079] 实施例1:美迪紫檀素((+)-MEDICARPIN)的合成

[0080] 参照图1，美迪紫檀素的合成方法如步骤(a)-(l)所示。

[0081] 步骤(a)4-芐氧基-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-苯甲醛(化合物1， )

[0082] 将4-芐氧基-2-羟基苯甲醛(11.40g，50mmol)、咪唑(3.74g,55mmol)及TBSCl(tert-Butyldimethylsilyl chloride，叔丁基二甲基氯硅烷，8.39g,54mmol)混合于DMF(100ml)中，于室温搅拌3小时。加入MeOH，并搅拌30分钟。加入水，将最终混合物以醚萃取。合并有机层，以H2O及盐水清洗，使用MgSO4干燥，以急速层析法(flash chromatography)纯化，获得化合物1 为无色油状物。光谱数据与文献一致。

[0083] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.28(S,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.40-7.33(m,5H),6.68(dd,J＝8.8Hz,2.0Hz,1H),6.37(d,J＝2.4Hz,1H),5.10(s,2H),0.99(s,9H),0.22(s,
6H)；ESI MS m/z343.20(M+H)+。

[0084] 步骤(b).2-芐氧基-4-甲氧基苯甲醛(化合物2， )

[0085] 将K2CO3(16.56g,120mmol)及BnBr(溴化苄，13.07ml,110mmol)加至溶于乙腈(200ml)的4-甲氧基-2-羟基苯甲醛(15.2g,100mmol)溶液(15.2g,100mmol)中，将所得的溶液回流隔夜。将混合物冷却，并在真空下移除溶剂。将H2O(100ml)加至残留物中，以Et2O、盐水萃取，并以MgSO4干燥。于MeOH中再结晶，获得化合物2( 22.50g,93％)，为白色固体。

[0086] 步骤(c).甲基乙烯基醚(Methyl vinyl ether)(化合物3， )

[0087] 在0℃、氩气环境下，将t-BuOK(15.66g,139.5mmol)加至溶于30ml无水THF的(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(47.82g,139.5mmol)中。30分钟后，将溶于100ml无水THF的化合物2(22.50g,93mmol)滴加，超过30分钟，并搅拌混合物30分钟后静置。加入NH4Cl以淬熄反应。使用EtOAc(乙酸乙酯)进行萃取，以盐水清洗有机层，并以MgSO4进行干燥。使用急速层析法，以EtOAc与正己烷获得甲基乙烯基醚(化合物3， )(25.06g,93％)，为
无色油状。

[0088] 步骤(d).2-芐氧基-4-甲氧基苯乙醛

[0089] (2-Benzyloxyl-4-methoxyphenylacetaldehyde)(化合物4， )

[0090] 将3N HCl(15ml)加至溶于200ml THF的化合物3(13.52g,50mmol)溶液中，并回流1小时。将混合物冷却至室温后静置。加入NaHCO3(100ml)。使用Et2O进行萃取，以盐水清洗有机层，并以MgSO4进行干燥。在真空下移除溶剂，并以急速层析法纯化残留物，获得化合物4(11.05g,86％)，为淡黄色油状。

[0091] 步骤(e).2-芐氧基-4-甲氧基苯基乙酸

[0092] (2-Benzyloxyl-4-methoxyphenylacetic acid)(化合物5， )

[0093] 在0℃下，将溶于40ml H2O的NaH2PO4(6.21g,51.74mmol)加至溶于t-BuOH/THF(1:1,200ml)的化合物4(11.05g,43.11mmol)、2-甲基-2-丁烯(18.14g,258.66mmol)及NaClO2(tech.80％,5.85g,51.74mmol)。30分钟后，移除冰浴，并搅拌混合物3小时。在真空下移除有机溶剂，以CH2Cl2萃取水层，并以MgSO4进行干燥。于EtOAc/正己烷中进行再结晶，经纯化并获得化合物5(， 9.50g,81％)，为白色固体。

[0094] 步骤(f).酰亚胺(Imide)(化合物6， )

[0095] 将草酰氯(7ml)和DMF(催化剂)加至溶于无水CH2Cl2(100ml)的化合物5溶液(10.64g,39.07mmol)中，接着于室温下搅拌1小时，并蒸发。将残留物溶于无水THF中以获得酰氯溶液。在其它的烧瓶中，于-78℃下，将n-BuLi(2.5M,16.4ml,41mmol)加至溶于无水THF(160ml)的(R)-4-芐基-2-恶唑烷酮(7.09g,40mmol)中，加热至0℃，并搅拌30分钟后，再冷却至-78℃。将酰氯溶液滴加至反应混合物，于相同的温度下搅拌1小时，将温度提升至室温后并再搅拌2小时。加入饱和的NH4Cl水溶液，以EtOAc萃取混合物，以盐水清洗，以MgSO4干燥，并捣碎于EtOAc及已烷中，获得化合物6( 13.30g,79％)，为淡黄色固体。

[0096] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.40-7.21(m,8H),7.13-7.09(m,3H),6.55(d,J＝2Hz,1H),6.51(dd,J＝8Hz,2Hz,1H),5.03(s,2H),4.54-4.48(m,1H),4.22(d,J＝2.8Hz,2H),
4.05(dd,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),3.97(d,J＝7.6Hz,1H),3.79(s,3H),3.20(dd,J＝9.2Hz,+
3.2Hz,1H),2.47(dd,J＝13.6Hz,10Hz,1H)；ESI MS m/z 432.20(M+H) 。

[0097] 步骤(g).醇类(Alcohol)(化合物7， )

[0098] 将DIPEA(3.70ml,21mmol)与Bu2BOTf(1M in CH2Cl2,20ml)于-78℃添加至溶于无水CH2Cl2(100ml)的化合物6(7.56g,17.52mmol)中，并加热至0℃，搅拌1小时。于-78℃下，滴加溶于CH2Cl2的化合物1(6.60g,19.27mmol)，并搅拌所获得的混合物1小时。将反应物加热至室温，搅拌隔夜，加入pH 7的缓冲液(25ml)进行淬熄，接着冰浴并缓慢地加入MeOH/35％H2O2(v:v＝2:1,50ml)，再于室温下搅拌1小时。在真空环境下移除有机溶剂，并使用醚类进行萃取。以饱和NaHCO3清洗有机层，以MgSO4干燥。利用急速层析法获得化合物7(10.31g,76％)，为白色固体。

[0099] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.40-7.24(m,15H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),6.77(d,J＝8.0Hz,1H),6.46-6.39(m,2H),6.33(s,1H),6.14(s,1H),5.61(d,J＝4.8Hz,2H),4.93(s,
2H),4.83(d,J＝12Hz,1H),4.65-4.60(m,1H),4.56(d,J＝12.4Hz,1H),3.99(m,2H),3.73(s,3H),3.28(dd,J＝13.2Hz,3.6Hz,1H),2.45(dd,J＝13.2Hz,10Hz,1H),0.95(s,9H),0.13(s,6H)；ESI MS m/z 774.40(M+H)+。

[0100] 步骤(h) .MOM保护醇类(MOM  protected  alcohol)(化合物8，)

[0101] 于0℃下，将MOMCl(氯甲基甲醚，2.00ml)滴加至溶于无水CH2Cl2(50ml)的化合物7(5.96g,7.70mmol)及DIPEA(4.34ml)中，并加热至室温隔夜。TLC表示反应不完全，且加入额外的MOMCl(2.00ml)与DIPEA(4.34ml)，并搅拌隔夜。加入H2O，搅拌混合物10分钟，以CH2Cl2萃取，并用盐水清洗。利用急速层析法获得化合物8( 5.23g,83％)，为黄色油状。

[0102] 步骤(i)MOM保护醇类(MOM protected alcohol)(化合物9， )

[0103] 将LiBH4(4M in THF,2.00ml)于室温下添加至溶于Et2O(50ml及0.1ml H2O)的化合物8(5.23g,6.40mmol)中，搅拌1小时。以1N NaOH(30ml)淬熄反应，并再搅拌1小时。利用急速层析法获得化合物9( 2.51g,61％)，为无色油状。

[0104] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.41-7.28(m,11H),7.01(d,J＝8.4Hz,1H),6.52-6.48(m,2H),6.39(d,J＝2.0Hz,1H),6.33(d,J＝2.4Hz,1H),5.42(d,J＝6.4Hz,1H),4.97(s,2H),4.93(d,J＝12Hz,1H),4.81(d,J＝12Hz,1H),4.40(dd,J＝10.4Hz,6.4Hz,2H),3.79(m,
2H),3.74(s,3H),3.72(m,1H),3.13(s,3H),1.00(s,9H),0.18-0.16(s,6H)；ESI MS m/z 
645.35(M+H)+。

[0105] 步骤(j)二醇(Diol)(化合物10， )

[0106] 将TBAF(四丁基氟化铵，1M in THF,5ml)加至溶于THF(20)的化合物9(2.51g,3.89mmol)溶液中。1小时后，加入水，并使用EtOAc进行萃取。合并有机层，以盐水清洗，以MgSO4干燥。利用急速层析法获得化合物10( 1.99g,96％)，为无色油
状。

[0107] 步骤(k).醚类(化合物11， )

[0108] 将DEAD(Diethyl azodicarboxylate，偶氮二甲酸二甲酯，溶于40wt％甲苯，2.10ml，4.60mmol)添加至溶于30ml无水THF的化合物10(1.99g,3.73mmol)与PPh3(1.18g,
4.50mmol)溶液中，30分钟后，TLC代表反应完全。将混合物置于硅胶，并利用急速层析法纯化获得化合物11( 1.83g,96％)，为白色固体。

[0109] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.46-7.31(m,10H),7.14(d,J＝8.4Hz,1H),7.05(d,J＝8.0Hz,1H),6.57(dd,J＝8.8Hz,2.8Hz,1H),6.50(dd,J＝9.6Hz,2.4Hz,2H),6.32(dd,J＝
8.8Hz,2.4Hz,1H),5.08(s,2H),5.01(s,2H),4.69(m,2H),4.63(d,J＝7.2Hz,1H),4.51(dd,J＝10.4Hz,3.2Hz,1H),4.45(dd,J＝11.2Hz,2.8Hz,1H),3.72(s,3H),3.61(dd,J＝6.0Hz,
2.8Hz,1H),3.30(s,3H)；ESI MS m/z 513.25(M+H)+。

[0110] 步骤(l).美迪紫檀素(化合物12， )

[0111] 将溶于EtOAc/MeOH(1:3,30ml)的化合物11(1.83g,3.57mmol)与10％Pd/C(400mg)于反应室压力下氢化隔夜。以硅藻土过滤催化剂，并在真空下移除溶剂以获得白色泡沫，将其溶于无水CH2Cl2(30ml)。加入樟脑磺酸(20mg)，并于室温下搅拌混合物30分钟。加入饱和NaHCO3，使用CH2Cl2萃取混合物，并以MgSO4进行干燥。利用急速层析法获得化合物12美迪紫檀素( 533mg,55％)，为白色固体。

[0112] [α]23D＝216.0°(c 0.20,CHCl3)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.39(d,J＝8.8Hz,1H),7.13(d,J＝8.8Hz,1H),6.55(dd,J＝8.0Hz,J＝2.4Hz,1H),6.46-6.44(m,2H),6.41(d,J＝2.4Hz,1H),5.50(d,J＝6.8Hz,1H),4.93(s,1H),4.24(dd,J＝11.2Hz,4.8Hz,1H),3.76(s,3H),3.62(t,J＝10.8Hz,1H),3.55-3.50(m,1H)；ESI MS m/z 271.10(M+H)+。

[0113] 实施例2.美迪紫檀素衍生物的合成

[0114] 美迪紫檀素衍生物及其合成方法如图2所示。

[0115] a.衍生化合物1(YXM-M1)的合成方法

[0116] 将CH3I(12μl,0.20mmol)加至溶于丙酮(5ml)的美迪紫檀素(27mg,0.10mmol)及K2CO3(28mg,0.20mmol)溶液中。将混合物加热至室温，置于硅胶上，并以急速层析法分离获得衍生化合物1(YXM-M1，24mg,84％)，为白色固体。

[0117] b.衍生化合物2-3及5(YXM-M2-3、5)的合成方法

[0118] 在室温下，将酰氯加至溶于CH2Cl2(5ml)的美迪紫檀素(27mg,0.10mmol)与三乙醇胺(2,2',2"-Nitrilotriethanol,TEA)(21μl,0.15mmol)溶液中。将混合物搅拌1-2小时，以TLC观察，并使用急速层析法获得衍生化合物2、3及5，为白色固体(产率:>90％)。

[0119] c.衍生化合物4(YXM-M4)的合成方法

[0120] 在-20℃下，将CCl4(0.17ml,1.76mmol)加至溶于CH3CN(5ml)的美迪紫檀素(54mg,0.20mmol)溶液中。将混合物搅拌10分钟，并加入TEA(56μl,0.40mmol)与DMAP(4-二甲氨基吡啶，4-dimethylaminopyridine，2.5mg,0.02mmol)。5分钟后，加入亚磷酸二芐酯(83μl,
0.30mmol)，将混合物加热至室温，并搅拌1小时。加入KH2PO4(10ml,0.5N)，并使用EtOAc进行萃取。使用急速层析法获得呈无色泡沫状的磷酸酯(87mg,82％,0.164mmol)，并溶于MeOH中。加入Pd/C(20mg)，并在气球压力下将混合物氢化隔夜。过滤去除催化剂，并浓缩滤液。加入MeOH(5ml)与NaOMe(77μl,0.328mmol)，搅拌混合物隔夜。在真空下将溶剂移除，过滤固体杂质，以少量的冷水、冰MeOH及醚类清洗，获得衍生化合物4(YXM-M4)，为米白色固体(34mg,
43％，超过3个步骤)。

[0121] 实施例3.美迪紫檀素对红血球前驱细胞的影响

[0122] a.骨髓细胞的分离

[0123] 将6周龄SPF等级的C57BL/6J公鼠后腿骨取下，将肌肉血管组织剥除后，股骨以5mL、23G的注射针筒将α-MEM培养液注入股骨内，将骨髓细胞冲堤出来，以53号尼龙网筛过滤后得到的细胞液以1450rpm(Kubota 5010)离心5分钟，再以含有10％FBS及2mM麸酰胺酸(glutamine)的α-MEM培养液调整细胞浓度。

[0124] b.骨髓内前驱细胞的聚落形成试验

[0125] 接种8.4×104/mL骨髓细胞至24孔培养盘，以诱导红血球前驱细胞分化的培养条件(α-MEM、15％的FBS、1％的牛血清白蛋白(BSA)、0.8％的甲基纤维素、0.1mM的β-巯基乙醇、2U/mL的rHuEPO(recombinant human erythropoietin，重组人红细胞生成素)及10ng/mL的IL-3)进行培养。在含有5％CO2的37℃培养箱中培育9天后便可观察到早期红血球前驱细胞BFU-E的聚落形成，在显微镜下计数超过50个细胞所构成的聚落数目

[0126] c.血红素比色法

[0127] 接种6×105/mL骨髓细胞至96孔(well)培养盘，培养条件为α-MEM、1％BSA、7.5μMβ-巯基乙醇、1.4mM L-麸胺酸、5μM FeCl3及25mU/well rHuEPO，在37℃，5％CO2的环境下培育24小时后，加入美迪紫檀素及其衍生物1-5(YXM-M1至YXM-M5)培育96小时。将U型96孔培养盘在25℃下离心1200rpm(Kubota6800)5分钟，吸掉上清液后，细胞以50μL裂解缓冲液(0.01％NP-40)混合均匀10分钟后，再加入150μL含有约500μM的DAF(2,7-二氨基芴,Sigma-Aldrich)溶液以及6μL 30％的H2O2进行作用，室温下反应5分钟后侦测O.D.610nm的吸光值。以学生t检定分析各数据。结果显示低浓度(0.1-10μg/ml)美迪紫檀素可有效促使红血球前驱细胞的分化(如图3A-1，3A-2)。美迪紫檀素的衍生物YXM-M1(衍生化合物1)、YXM-M2(衍生化合物2)、YXM-M3(衍生化合物3)、YXM-M4(衍生化合物4)及YXM-M5(衍生化合物5)同样展现在低浓度促进红血球前驱细胞的分化、而在高浓度(100μg/ml)抑制红血球前驱细胞的分化。进一步分析美迪紫檀素及其衍生物对红血球前驱细胞的促活化能力(EC1.5)，如图3B所示。结果显示美迪紫檀素的衍生物中除了YXM-M1外，其余都比美迪紫檀素本身的活化能力来得高，尤以YXM-M3和YXM-M5的促活化能力最好。此结果证实了以美迪紫檀素为主的紫檀烷(pterocarpans)结构分子具有促进骨髓细胞EPO的活性，增加红血球前驱细胞的增生及分化效果。

[0128] 实施例4.美迪紫檀素的动物试验

[0129] a.美迪紫檀素对顺铂诱导肾损伤小鼠的影响

[0130] 利用8-10周龄的C57BL/6J公鼠分别在第1、5、10天以腹腔注射顺铂(CDDP，cisplatin，Sigma-Aldrich)，剂量分别为7、6、7mg/kg；另正常的对照组别(6只)则注射生理食盐水。在第12天采集血液进行红血球数量及血中尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)分析。选取BUN值为100mg/100mL的小鼠进行试验。平均70％经注射的小鼠成功被诱导为肾功能损坏小鼠，未被诱导的小鼠则被排除进行美迪紫檀素试验。将BUN值介于80-300mg/dL的小鼠进行随机重新分组：分为无服药的控制组(CDDP/Ctrl,6只)及给予10、30、90mg/kg/day美迪紫檀素的实验组(CDDP+Med 10、CDDP+Med 30、CDDP+Med 90)，每组6只，美迪紫檀素均匀混合于饲料中经口服给予，第12天采集血液，利用分析Sysmex Kx-21血液分析仪(Sysmex America Inc.,Mundelein,IL,USA)计数红血球数目，以及利用市售套组(DiaSys Diagnostic System GmbH,Frankfurt,Germany)分析血清中BUN的含量。实验及给药流程如图4所示。很明显地在第12天可观察到有注射顺铂小鼠呈现贫血及肾功能异常的情形，如图5A、6所示，且第19天红血球数量持续下降。而在开始喂食美迪紫檀素2周后红血球数量逐渐恢复，尤以30、90mg/kg的剂量在第33天后(吃药三周)有显著改善效果，加速改善红血球数量的效果持续至第四周后，红血球数量仍缓慢增加，而没有喂食美迪紫檀素的CDDP/Ctrl组则依然有红血球数量低下的症状。此外，低剂量(10mg/kg)也有些微恢复的效果，但作用不明显。随着中高剂量的美迪紫檀素促进红血球数量的恢复，血液中的血红素(HGB)也逐渐上升，代表着功能性红血球(携氧)的增加(图5B)。顺铂也造成白血球数量下降，在开始喂食美迪紫檀素2周后白血球逐渐恢复，尤以30、90mg/kg的剂量在第33天后(第3周)有显著改善效果，加速改善白血球数量的效果持续至第四周(图5C)。由此可知，美迪紫檀素具有恢复改善红血球及白血球的效果，显示其对造血干细胞的作用。同样也发现到CDDP会造成血小板(PLT)数量下降，而美迪紫檀素对血小板的效果随着控制组的恢复，治疗组及控制组之间并无明显差异(图5D)。

[0131] 肾功能方面，没有喂食美迪紫檀素的控制组则仍然维持肾功能异常的情况，低剂量(10mg/kg)美迪紫檀素则对肾功能无改善效用。而以美迪紫檀素喂食三周(第33天)后有效改善顺铂诱导肾损伤小鼠的肾功能，30、90mg/kg的剂量则有较明显地的效果(图6)。

[0132] 小鼠在服用美迪紫檀素1个月后牺牲，其肝脏EPO的表现量明显恢复并增加(图7A)，而肾脏的EPO表现量在中高剂量组也有增加(图7B)，更加确认美迪紫檀素能透过活化EPO的产生来改善受损的肾脏功能，也可同时透过增加肝脏HGF的表达(图7C)来促进肾脏细胞的再生和修复(图8)。

[0133] b.美迪紫檀素对阿霉素诱导肾损伤小鼠的影响

[0134] 6-8周龄SPF等级的C57BL/6J母鼠以腹腔注射三剂阿霉素-HCl(Sigma-Aldrich)，剂量各为5、5、8mg/kg；另正常的对照组别(6只)则注射生理食盐水。注射1周后，以心电图指标S-T期的增加来判定心脏受到伤害，随即将这些S-T期增加的小鼠进行随机重新分组：分为无服药的控制组(Dox,9只)及服用10、30、90mg/kg/day美迪紫檀素的实验组别(Dox+Med)，每组7只，美迪紫檀素混合于饲料中口服给予。喂食后每周分析小鼠跑步耐力，以及利用心电图及心脏超音波分析心脏功能。接着将小鼠牺牲，取其心肌组织以分析基因与蛋白质表达量并进行组织病理切片检察。每只小鼠采集约100～200μL血液，血液样品在室温下静置2小时后以2000g离心20分钟，吸取上层透明的血清进行血液生化分析。

[0135] c.心电图与心脏超音波

[0136] 实验小鼠以吸入性异氟醚(0.75～1.5％)气体麻醉，利用脱毛膏 将胸部的毛去除，将四肢皮下埋设3个电极探头以第一导程(Lead I)的方式进行心电图测量，电极探头连接放大器(Grass CP511AC,Astro-Med)及电生理讯号数字转换器(SCB-68,National Instruments)，以100mV电压及1Hz的低通和1kHz的高通滤波范围纪录讯号，再利用 软件(National Instruments Corp.,Austin,TX,USA)处理与分析讯号数
据。心脏超音波于高雄医学大学动物中心进行，采用 2100心脏超音波仪
(VisualSonics Inc.)，探头频率设定于7-15MHz，以垂直胸壁且采胸骨左缘纵轴切面(Left parasternal long axis view)扫描，取得M型(M-mode)超音波心图，每只小鼠扫描3次。

[0137] 在喂食美迪紫檀素1周后，由心电图的分析发现Dox组仍有心肌损伤的情形(S-T期增长)，而90mg/kg剂量组则有明显的改善效果(图10A)。至给药第3周依然维持有效，并且给予美迪紫檀素组其心率都恢复正常(图10B)。同样地，在心脏超音波的分析也发现，在注射阿霉素后2周，控制组(Dox组)确实产生心脏功能降低的病症，包含心肌短缩分率(FS)的减少以及心肌搏出分率(EF)的减少，但是以美迪紫檀素喂食30、90mg/kg的美迪紫檀素3周后，FS和EF的增加，显示美迪紫檀素能使心脏功能恢(图11A-11D及表1)。由心脏超音波的分析可看出左室后壁厚度(LVPWs)在服用中高剂量的美迪紫檀素后有增加，其反映出心脏重量的恢复(图13A)，而非心室肥大(图13B)。另血液生化分析结果显示肾功能未受影响(图13C)。

[0138] 表1、第3周美迪紫檀素对阿霉素诱导肾损伤小鼠的影响

[0139]

[0140] **p<0.01,p<0.05vs.Dox/Ctrl组(n＝4-6)

[0141] IVS:心室间隔直径；舒张(IVSd)，收缩(IVSs)

[0142] LVID:左心室内径；舒张(LVIDd)，收缩(LVIDs)

[0143] LVPW:左心室后壁；舒张(LVPWd)，收缩(LVPWs)

[0144] FS:短缩分率＝(LVIDd-LVIDs)x100％/LVIDd

[0145] EF:射出率＝(LVIVd-LVIVs)x100％/LVIVd

[0146] LVIV:左心室容量

[0147] d.小鼠跑步耐力分析

[0148] 在分组治疗前，8-10周龄的C57B1/6J雄性小鼠以跑步机(跑道长568mm,宽49mm)训练，每天连续3次训练，每次训练10分钟，训练3天。训练后，将合格的小鼠随机分为美迪紫檀素治疗组(每组10、30或90mg/kg/天，每组5只)，治疗7天。在测试当天，每只小鼠于正常氧或低氧(8％O2)环境下，在跑步机上进行3次试验。随着时间测量小鼠的耐力，直到小鼠遭受35次/分钟的电击(电击系统在跑步机的末端)。最大试验时间为60分钟，每次试验休息30分钟(表2)

[0149] 表2、在正常氧或低氧(8％O2)条件下以跑步机测量每只小鼠的耐力

[0150]

[0151] 让小鼠分别于正常氧和低氧的环境下测试其运动耐力，结果心肌病变的Dox组明显有比健康的小鼠呈现较差的运动耐力，而喂食美迪紫檀素3周的组别能恢复其运动耐力，且具有剂量依赖性(图12A-12D)。

[0152] e.生化测定和组织学分析

[0153] EPO在肾脏(图14B)和心脏(图14A)的表现回复且增加。结果显示美迪紫檀素可藉由诱导EPO表现，改善心脏衰竭，并明显增强细胞修复，刺激线粒体功能(PGC-1α)增加心脏收缩。

[0154] 参照图15A-15B及图16，组织化学检查发现阿霉素诱导小鼠的心肌壁肌肉不规则、心肌坏死、细胞质空泡化和心肌损伤。美迪紫檀素治疗可显著地减轻阿霉素诱导的心脏功能障碍。此外，经中-高剂量的美迪紫檀素治疗，可改善阿霉素所导致的心肌细胞萎缩或肥大、细胞凋亡的细胞质空泡、肌原纤维损失、心肌纤维化及其它影响。

[0155] f.统计

[0156] 所有实验数据统计皆以平均值±标准误差(mean±SEM)来表示。以T检定(Student's t-test)来检测细胞实验之各药物处理组间的差异；以单因子变量分析(One-Way Analysis of Variance,One-Way ANOVA)加上Tukey's post hoc分析进行动物实验的各药物处理组间的统计差异分析。检定结果以p值小于0.05表示实验结果具有统计上的显著差异。

[0157] 发明所揭露的所有特征应可以任何结合方式实现。本发明所揭露的每一特征应可以相同、均等或相似目的的取代物所取代。因此，除非有明确的指定，否则所揭露的每一个特征仅仅只是均等物或相似特征的一个种类的一实施例。