一种制备L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法

摘要

本发明提供了一种高含量的L‑α‑甘油磷脂酰胆碱的制备方法，包含步骤如下：(1)卤代甘油与酯在酸的催化下反应生成卤代甘油双羟基保护物I；(2)磷酰基胆碱盐与卤代甘油双羟基保护物I反应生成L‑α‑甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II粗品；(3)将L‑α‑甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II与未反应的卤代甘油双羟基保护物I分离，得到纯化的L‑α‑甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II；(4)纯化的L‑α‑甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II水溶液在催化量酸催化下反应脱保护得到L‑α‑甘油磷脂酰胆碱水溶液，减压蒸除水分，用醇类溶剂结晶，得到L‑α‑甘油磷脂酰胆碱。本发明的技术方案相对于现有技术，纯度高，收率高，工艺适合于工业化生产。

权利要求

1.一种高含量的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）(R)-3-卤代甘油与保护剂在酸的催化下反应生成(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I（式I），所述保护剂选自原甲酸三甲酯或原甲酸三乙酯，所述酸为对甲苯磺酸、无水氯化氢、浓硫酸、无水草酸的任意一种，式I ,其中R为甲基或乙基，X为卤素；

（2）磷酰基胆碱盐与所述(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I在醇类溶剂中反应生成L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II（式II），回收醇类溶剂，加水溶解得到L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II的粗品水溶液，式II ；

（3）将所述L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II的粗品水溶液用水不溶的有机溶剂萃取未反应的(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I，弃去有机相，得到纯化的L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II；

（4）将所述纯化的L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II在催化量酸催化下反应脱保护得到L-α-甘油磷脂酰胆碱水溶液。

2.根据权利要求1所述的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述(R)-3-卤代甘油为(R)-3-氯代甘油或(R)-3-溴代甘油。

3.根据权利要求1所述的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，以摩尔量计，所述保护剂投料量大于等于(R)-3-卤代甘油的1.2倍。

4.根据权利要求1所述的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，以摩尔量计，所述酸用量为反应物的1-10%。

5.根据权利要求1所述的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：所述(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I中的R=CH3或C2H5，X=Cl或Br；所述L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II中的R=CH3或C2H5。

6.根据权利要求1所述的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述磷酰基胆碱盐为磷酰基胆碱单钠盐和/或磷酰基胆碱单钾盐。

7.根据权利要求1所述的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，以摩尔量计，(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I的投料量是磷酰基胆碱盐的1.2至3.0倍。

8.根据权利要求1所述的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述萃取溶剂为醚类溶剂甲基叔丁基醚，或酯类溶剂乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯或乙酸正丙酯。

9.根据权利要求1所述L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，所述酸选自稀盐酸、稀硫酸，将溶液pH调节到1-3。

10.根据权利要求1所述L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，脱保护后，将所述L-α-甘油磷脂酰胆碱水溶液通过离子交换树脂脱除盐酸和残余的无机盐。

说明书

一种制备L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法

技术领域：

[0001] 本发明涉及医药化工技术领域，具体涉及一种L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法。背景技术：

[0002] L-α-甘油磷脂酰胆碱(L-alpha-Glycerphosphatidylcholine,简称GPC)是一种具有改善脑部功能的活性物质，对于预防和辅助治疗老年性痴呆有一定的效果。

[0003] 已知的获取GPC的技术手段主要由两种：一种为从天然产物中提取，例如从蛋黄中提取蛋黄卵磷脂，从大豆中提起大豆卵磷脂。进一步通过化学法或酶法水解分离提纯得到GPC(例如US5250719，US5315023，US6274362，EP217765等)。

[0004] 第二种方法是化学合成获得。

[0005] 从天然产物中获取由于原料来源、产地不同存在差异变数，分离杂质的工艺复杂，工业化成本较高。近年来合成法的不同方法报道较多，合成法相比较于天然提取法具有工艺相对简单、杂质控制好，杂质较少。

[0006] 例如：欧洲专利EP0486100报道，采用双羟基保护的异丙叉甘油，与乙二醇双酯单磷酰氯反应，形成磷酸三酯，再与三甲胺在加压下反应得到亚异丙基甘油胆碱磷酸酯，最后在稀盐酸中水解脱保护得到GPC粗品，总收率50％，反应方程式描述如下：

[0007]

[0008] 日本专利JP2007/269657报道采用了上述类似的方法。

[0009] 欧洲专利EP0502357报道的是将甘油的双羟基乙酰化保护，再与上述类似的路线进行制备得到GPC。

[0010]

[0011]

[0012] WO2007/145476中报道手性的缩水甘油与磷酯酰胆碱缩合，在经过树脂纯化得到GPC。此工艺简化，但缩水甘油活性强，自身易发生聚合反应，也会与生成的产物的羟基进一步缩合，所以杂质较多。

[0013]

[0014] 中国专利CN101544667A在上述基础上，对缩水甘油的羟基进行保护，使得生成的产物不会进一步与缩水甘油反应变成杂质，有一定的效果。

[0015]

[0016] 韩国专利KR2009/128631采用缩水甘油与磷脂酰胆碱在氢氧化钠水溶液中反应，再用乙酸乙酯洗涤水层，浓缩水后加乙醇析晶得到GPC产品。同样存在缩水甘油引起的多个杂质的形成影响。

[0017]

[0018] 中国专利CN101967160A采用磷酰胆碱无机盐与卤代甘油反应，生成粗的GPC和无机盐卤化物，过滤掉大量无机盐，粗产物含有少量无机盐，未反应的原料和杂质，由于杂质水溶性很好，丙酮溶解度较小，需要用大量丙酮萃取洗涤，实际上还需要树脂纯化才能得到GPC纯品。

[0019]

[0020] 中国专利CN103665028A公开了一种L-α-甘磷酸胆碱的制备方法，以(2S)-3-卤代-1,2-环氧丙烷与磷酰基胆碱盐为原料，在溶剂中经酯化、水解反应后得到L-α-甘磷酸胆碱粗品，再经硅胶柱层析、离子交换树脂纯化得到L-α-甘磷酸胆碱纯品。但是该方法制备L-α-甘磷酸胆碱反应时间较长，且得率不高。
发明内容：

[0021] 本发明的目的就是提供一种容易工业化完成、收率高且容易纯化得到高纯度的GPC合成新方法。

[0022] 本发明通过以下技术方案实现：

[0023] 将L-α-甘油磷脂酰胆碱(L-α-GPC)的双羟基保护物II(式II)在催化量酸催化下反应脱保护得到L-α-甘油磷脂酰胆碱，

[0024] 式II 其中R为烃基。

[0025] 具体的，L-α-甘油磷脂酰胆碱合成方法包括如下步骤：

[0026] (1)卤代甘油与保护剂在酸的催化下反应生成(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I(式I)，式I 其中R为烃基，X为卤素；

[0027] (2)磷酰基胆碱盐与(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I反应生成L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II(式II)粗品；

[0028] (3)将L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II与未反应的(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I分离，得到纯化的L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II；

[0029] (4)纯化的L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II水溶液在催化量酸催化下反应脱保护得到L-α-甘油磷脂酰胆碱水溶液，减压蒸除水分，用醇类溶剂结晶，得到L-α-甘油磷脂酰胆碱。

[0030] 步骤(1)中，所述卤代甘油为(R)-3-氯代甘油或(R)-3-溴代甘油。

[0031] 步骤(1)中，所述的保护剂选自原甲酸三烷基酯、原甲酸三乙酯、乙烯基醚、丙烯基醚、2-甲氧基丙烯或2-乙氧基丙烯的一种或几种。

[0032] 步骤(1)中，以摩尔量计，所述保护剂投料量大于等于卤代甘油的1.2倍。

[0033] 步骤(1)中，酸选自对甲苯磺酸、无水氯化氢、浓硫酸、无水草酸，以摩尔量计，用量为反应物的1-10％。

[0034] 步骤(1)中，反应温度为10-110℃，优选为40-80℃。

[0035] 步骤(1)中，反应在负压情况下进行。

[0036] 步骤(1)中，反应时间控制在1-15h，优选为5-10h。

[0037] 步骤(1)中，反应结束后，减压回收多余的保护剂。

[0038] (R)-3-卤代甘油双羟基保护物I中的R＝CH3或C2H5，X＝Cl或Br；L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II中的R＝CH3或C2H5。

[0039] 步骤(2)中，所述磷酰基胆碱盐为磷酰基胆碱单钠盐和/或磷酰基胆碱单钾盐。

[0040] 所述步骤(2)为磷酰基胆碱盐与(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I在醇类溶剂中反应生成L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II，回收醇类溶剂，加水溶解得到L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II的粗品水溶液，其中，以摩尔量计，(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I的投料量是磷酰基胆碱盐的1.2至3.0倍，优选为1.5倍。

[0041] 步骤(2)中，所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇。

[0042] 步骤(2)中，反应温度为50-90℃，优选为65-85℃。

[0043] 优选的，步骤(2)中，反应时间1min-5h，优选为0.5-2h。

[0044] 所述步骤(3)为L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II的粗品水溶液用水不溶的有机溶剂萃取未反应的(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I，弃去有机相，得到纯化的L-α-甘油磷脂酰胆碱的双羟基保护物II。

[0045] 步骤(3)中，萃取溶剂为醚类溶剂如甲基叔丁基醚，或酯类溶剂如乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸正丙酯。

[0046] 步骤(4)中，所述酸选自稀盐酸、稀硫酸，将溶液pH调节到1-3。

[0047] 步骤(4)中，脱保护反应温度为10-40℃，优选为20-30℃。

[0048] 步骤(4)中，脱保护后，将L-α-甘油磷脂酰胆碱水溶液通过离子交换树脂脱除盐酸和残余的无机盐。

[0049] 步骤(4)中，所述醇类溶剂为异丁醇。

[0050] 优选的，步骤(4)中，反应时间1min-5h，优选为0.5-2h。

[0051] 按本方法制备的产物纯度大于99.8％，以磷酰胆碱盐计算，反应总收率超过88％。

[0052] 所述(R)-3-卤代甘油、磷酰基胆碱单钾(钠)盐均可以从市场采购得到。

[0053] GPC的合成有两个难点需要克服，其一是无机盐的控制，要求无机盐残留0.01％以下，可以通过树脂交换脱除无机盐。第二个难点是杂质的去除。第二点是最核心的技术，上述多数介绍的方法均是围绕去除杂质的原理进行路线设计的。本发明通过将卤代甘油的两个羟基保护，使得保护后的中间体极性变小，在水中的溶解度明显变小，在一般有机溶剂中的溶解度大大增强，从而与产物的极性差异变得很大，使得反应完成后，只需要简单的将产物溶解于水中，用有机溶剂例如对环境友好的溶剂酯类溶剂进行萃取分层，即实现了产物的纯化。而且通过增加中间体I的投料比例，使另一起始原料磷酰基胆碱单钾(钠)盐反应完全，此原料反应完全不但使其反应收率大大提高，而且不会残留在产品中形成杂质。通过上述方案最后能够得到含量大于99.8％，摩尔收率88％以上的效果，达到了本专利发明的目的。

[0054] 具体反应方程式如下：

[0055]

[0056] R＝CH3、C2H5；X＝Cl,Br(I)

[0057]

[0058] R＝CH3、C2H5；M＝Na、K

[0059]

[0060] 本发明中，(R)-3-卤代甘油具体为(R)-3-氯代甘油或(R)-3-溴代甘油，这两种原料均可以较便宜地从市场上购买得到。保护剂最好是原甲酸三甲酯或原甲酸三乙酯。也可以选用乙烯基醚、丙烯基醚、2-甲氧基丙烯或2-乙氧基丙烯，保护后得到的为缩醛或缩酮类化合物，本发明主要描述原甲酸三甲酯或原甲酸三乙酯做为保护剂的技术方案。

[0061] 原甲酸三甲酯或乙酯与3-卤代甘油反应时，由于两种反应物均为液体，反应时不用溶剂，原甲酸三甲酯或乙酯过量1.2倍当量以上均可，即使原甲酸三甲酯或乙酯大大超过反应所需的量，对于反应速度还有促进作用，缩短反应的时间，反应加料顺序没有任何要求，但需要催化量的酸进行催化才能加快反应，酸的用量一般为反应物的1-10％当量即可，为常用的无机酸，可以是对甲苯磺酸、无水氯化氢、浓硫酸、无水草酸等。反应温度在40-80℃。温度低于这一范围，反应时间需要较长。反应最好是在一定负压情况下进行，反应过程中生成的甲醇或乙醇通过减压蒸出，有利于反应的完全转化，可以减少原甲酸三甲酯或乙酯的使用量。反应一般在5-10小时即转化完全。反应完毕再减压回收多余的原料原甲酸三甲酯或乙酯，得到的产物即可直接用于下一步反应。

[0062] 本发明的另一个原料为磷酰胆碱单钾盐和磷酰胆碱单钠盐。由于钾盐与氯代物的反应活性高于钠盐，本发明中优选磷酰胆碱单钾盐为另一个合成片段。

[0063] 第二步酯化反应所使用的溶剂为醇类溶剂，包括甲醇、乙醇、异丙醇。反应温度65-85℃。(R)-3-卤代甘油双羟基保护物I的投料量是磷酰胆碱单钾(钠)盐的1.2至3.0当量，优选1：1.5当量。通过检测使磷酰胆碱单钾(钠)盐反应完全。反应完毕，减压回收反应溶剂，进行纯化，纯化方法为简单的两相萃取。即：直接加水和萃取溶剂，萃取溶剂可以是醚类溶剂例如甲基叔丁基醚，酯类溶剂例如乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸正丙酯等。萃取未反应的原料及分解产生的杂质甘油双羟基保护物。弃去有机相，水相即为纯化得到的II。

[0064] 第二步反应产物萃取纯化完毕，加入催化量稀酸例如稀盐酸、稀硫酸等无机酸，稀酸加入量是将水溶液调节至1-3。脱保护反应温度为室温。反应完毕，得到的GPC的水溶液通过离子交换树脂脱除盐酸和残余的无机盐，产物蒸出水分，加入异丁醇醇析晶得到白色粉末状固体，减压干燥溶剂得到纯度大于99.8％的GPC产物。以磷酰胆碱单钾(钠)盐计算，反应总收率超过88％。

[0065] 本发明的有益效果：(1)采用本发明方法制备L-α-甘油磷脂酰胆碱其工艺简单，易于工业化生产；(2)采用本发明方法制备的L-α-甘油磷脂酰胆碱相比于现有技术，其纯度高，反应总收率高。

具体实施方式

[0066] 这里将详细地对示例性实施例进行说明。以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本发明相一致的所有实施方式。相反，它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本发明的一些方面相一致的装置和方法的例子。

[0067] 在本发明使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本发明。在本发明和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“所述”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。还应当理解，本文中使用的术语“和/或”是指并包含一个或多个相关联的列出项目的任何或所有可能组合。

[0068] 应当理解，尽管在本发明可能采用术语第一、第二、第三等来描述各种信息，但这些信息不应限于这些术语。这些术语仅用来将同一类型的信息彼此区分开。例如，在不脱离本发明范围的情况下，第一信息也可以被称为第二信息，类似地，第二信息也可以被称为第一信息。取决于语境，如在此所使用的词语“如果”可以被解释成为“在……时”或“当……时”或“响应于确定”。

[0069] 以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

[0070] 对比例1

[0071] 采用EP0502357的制备方法制备L-α-甘油磷脂酰胆碱。

[0072] 对比例2

[0073] CN103665028A的制备方法制备L-α-甘油磷脂酰胆碱。

[0074] 实施例1

[0075] (R)-2-甲氧基-4-氯甲基-1,3-二氧代环戊烷的制备。

[0076] 于500mL玻璃瓶中，称取(R)-3-氯代甘油115.5g(1.0摩尔)，原甲酸三甲酯138.0g(1.3摩尔),对甲苯磺酸19.0g,混合后，搅拌，加热至70-90℃反应，反应过程中从蒸馏头蒸出低沸点物料，主要为甲醇和少量甲酸甲酯。GC检测反应进程，约6小时反应完全。反应完毕，冷却至室温，加入甲醇钠中和至pH＝6-7。先加热减压回收低沸点溶剂，然后在-0.096Mpa收集102-105℃馏分，得到143.4g产物，收率91％。

[0077] 实施例2

[0078] (R)-2-乙氧基-4-氯甲基-1,3-二氧代环戊烷的制备。

[0079] 于500mL玻璃瓶中，称取(R)-3-氯代甘油115.5g(1.0摩尔)，原甲酸三乙酯192.5g(1.3摩尔),对甲苯磺酸19.0g,混合后，搅拌，加热至70-90℃反应，反应过程中从蒸馏头蒸出低沸点物料，主要为乙醇和少量甲酸乙酯。GC检测反应进程，约8小时反应完全。反应完毕，冷却至室温，加入乙醇钠中和至pH＝6-7。先加热减压回收低沸点溶剂，然后在-0.096Mpa收集114-116℃馏分，得到154.5g产物，收率90％。

[0080] 实施例3

[0081] (R)-2-甲氧基-4-溴甲基-1,3-二氧代环戊烷的制备。

[0082] 于500mL玻璃瓶中，称取(R)-3-溴代甘油199.0g(1.0摩尔)，原甲酸三甲酯138.0g(1.3摩尔),对甲苯磺酸19.0g,混合后，搅拌，加热至70-90℃反应，反应过程中从蒸馏头蒸出低沸点物料，主要为甲醇和少量甲酸甲酯。GC检测反应进程，约6小时反应完全。反应完毕，冷却至室温，加入甲醇钠中和至pH＝6-7。先加热减压回收低沸点溶剂，然后在100pa左右收集68-73℃馏分，得到177.8g产物，收率88％。

[0083] 实施例4

[0084] (R)-2-乙氧基-4-溴甲基-1,3-二氧代环戊烷的制备。

[0085] 于500mL玻璃瓶中，称取(R)-3-溴代甘油199.0g(1.0摩尔)，原甲酸三乙酯192.5g(1.3摩尔),对甲苯磺酸19.0g,混合后，搅拌，加热至70-90℃反应，反应过程中从蒸馏头蒸出低沸点物料，主要为乙醇和少量甲酸乙酯。GC检测反应进程，约8小时反应完全。反应完毕，冷却至室温，加入乙醇钠中和至pH＝6-7。先加热减压回收低沸点溶剂，然后在100pa左右收集118-121℃馏分，得到161.5g产物，收率87％。

[0086] 实施例5L-α-GPC的制备

[0087] 在500mL四口瓶中，加入磷酰胆碱单钾盐44.2g(0.2mol)，(R)-2-甲氧基-4-氯甲基-1,3-二氧代环戊烷45.7g(0.3mol)，无水乙醇250mL，回流反应20小时以上，HPLC检测原料磷酰胆碱单钾盐小于0.5％以下，停止加热回流，减压回收溶剂乙醇至干，剩余物加入饮用水150mL和乙酸乙酯100mL，搅拌10分钟后，静置分层，弃去有机层，水层再用乙酸乙酯100mL萃取2次，弃去有机层。往萃取后的水层中滴加盐酸，使pH为1-2，室温下搅拌反应5小时以上，脱保护完全后，用离子交换树脂脱除残余的无机盐，含有GPC的水溶液减压蒸出水分，往剩余物中加入异丁醇200mL，冷却搅拌析晶，过滤，干燥，得到白色粉末状GPC固体
45.2g，收率88％。

[0088] 实施例6L-α-GPC的制备

[0089] 在500mL四口瓶中，加入磷酰胆碱单钾盐44.2g(0.2mol)，(R)-2-甲氧基-4-溴甲基-1,3-二氧代环戊烷47.3g(0.24mol)，无水乙醇250mL，回流反应10小时以上，HPLC检测原料磷酰胆碱单钾盐小于0.5％以下，停止加热回流，减压回收溶剂乙醇至干，剩余物加入饮用水150mL和乙酸异丙酯100mL，搅拌10分钟后，静置分层，弃去有机层，水层再用乙酸异丙酯100mL萃取2次，弃去有机层。往萃取后的水层中滴加盐酸，使pH为1-2，室温下搅拌反应5小时以上，脱保护完全后，用离子交换树脂脱除残余的无机盐，含有GPC的水溶液减压蒸出水分，往剩余物中加入异丁醇200mL，冷却搅拌析晶，过滤，干燥，得到白色粉末状GPC固体46.7g，收率91％.

[0090] 实施例7L-α-GPC的制备

[0091] 在500mL四口瓶中，加入磷酰胆碱单钠盐41.0g(0.2mol)，(R)-2-甲氧基-4-氯甲基-1,3-二氧代环戊烷45.7g(0.3mol)，无水乙醇250mL，回流反应36小时以上，HPLC检测原料磷酰胆碱单钠盐小于0.5％以下，停止加热回流，减压回收溶剂乙醇至干，剩余物加入饮用水150mL和乙酸乙酯100mL，搅拌10分钟后，静置分层，弃去有机层，水层再用乙酸乙酯100mL萃取2次，弃去有机层。往萃取后的水层中滴加盐酸，使pH为1-2，室温下搅拌反应5小时以上，脱保护完全后，用离子交换树脂脱除残余的无机盐，含有GPC的水溶液减压蒸出水分，往剩余物中加入异丁醇200mL，冷却搅拌析晶，过滤，干燥，得到白色粉末状GPC固体
45.0g，收率87.6％.

[0092] 实施例8L-α-GPC的制备

[0093] 在500mL四口瓶中，加入磷酰胆碱单钠盐41.0g(0.2mol)，(R)-2-甲氧基-4-溴甲基-1,3-二氧代环戊烷47.3g(0.24mol)，无水乙醇250mL，回流反应20小时以上，HPLC检测原料磷酰胆碱单钠盐小于0.5％以下，停止加热回流，减压回收溶剂乙醇至干，剩余物加入饮用水150mL和乙酸异丁酯100mL，，搅拌10分钟后，静置分层，弃去有机层，水层再用乙酸异丁酯100mL萃取2次，弃去有机层。往萃取后的水层中滴加盐酸，使pH为1-2，室温下搅拌反应5小时以上，脱保护完全后，用离子交换树脂脱除残余的无机盐，含有GPC的水溶液减压蒸出水分，往剩余物中加入异丁醇200mL，冷却搅拌析晶，过滤，干燥，得到白色粉末状GPC固体45.3g，收率88.4％。

[0094] 实施例9L-α-GPC的制备

[0095] 在500mL四口瓶中，加入磷酰胆碱单钾盐44.2g(0.2mol)，(R)-2-乙氧基-4-氯甲基-1,3-二氧代环戊烷50.0g(0.3mol)，无水乙醇250mL，回流反应20小时以上，HPLC检测原料磷酰胆碱单钾盐小于0.5％以下，停止加热回流，减压回收溶剂乙醇至干，剩余物加入饮用水150mL和乙酸异丙酯酯100mL，，搅拌10分钟后，静置分层，弃去有机层，水层再用乙酸异丙酯100mL萃取2次，弃去有机层。往萃取后的水层中滴加盐酸，使pH为1-2，室温下搅拌反应5小时以上，脱保护完全后，用离子交换树脂脱除残余的无机盐，含有GPC的水溶液减压蒸出水分，往剩余物中加入异丁醇200mL，冷却搅拌析晶，过滤，干燥，得到白色粉末状GPC固体
45.3g，收率88.2％。

[0096] 实施例10L-α-GPC的制备

[0097] 在500mL四口瓶中，加入磷酰胆碱单钾盐44.2g(0.2mol)，(R)-2-乙氧基-4-溴甲基-1,3-二氧代环戊烷50.7g(0.24mol)，无水乙醇250mL，回流反应10小时以上，HPLC检测原料磷酰胆碱单钾盐小于0.5％以下，停止加热回流，减压回收溶剂乙醇至干，剩余物加入饮用水150mL和乙酸异丙酯100mL，，搅拌10分钟后，静置分层，弃去有机层，水层再用乙酸异丙酯100mL萃取2次，弃去有机层。往萃取后的水层中滴加盐酸，使pH为1-2，室温下搅拌反应5小时以上，脱保护完全后，用离子交换树脂脱除残余的无机盐，含有GPC的水溶液减压蒸出水分，往剩余物中加入异丁醇200mL，冷却搅拌析晶，过滤，干燥，得到白色粉末状GPC固体46.2g，收率90％.

[0098] 实施例11L-α-GPC的制备

[0099] 在500mL四口瓶中，加入磷酰胆碱单钠盐41.0g(0.2mol)，(R)-2-乙氧基-4-氯甲基-1,3-二氧代环戊烷50.0g(0.3mol)，无水乙醇250mL，回流反应36小时以上，HPLC检测原料磷酰胆碱单钠盐小于0.5％以下，停止加热回流，减压回收溶剂乙醇至干，剩余物加入饮用水150mL和乙酸异丁酯酯100mL，，搅拌10分钟后，静置分层，弃去有机层，水层再用乙酸异丁酯100mL萃取2次，弃去有机层。往萃取后的水层中滴加盐酸，使pH为1-2，室温下搅拌反应5小时以上，脱保护完全后，用离子交换树脂脱除残余的无机盐，含有GPC的水溶液减压蒸出水分，往剩余物中加入异丁醇200mL，冷却搅拌析晶，过滤，干燥，得到白色粉末状GPC固体
45.0g，收率87.6％.

[0100] 实施例12L-α-GPC的制备

[0101] 在500mL四口瓶中，加入磷酰胆碱单钠盐41.0g(0.2mol)，(R)-2-乙氧基-4-溴甲基-1,3-二氧代环戊烷63.3g(0.3mol)，无水乙醇250mL，回流反应20小时以上，HPLC检测原料磷酰胆碱单钠盐小于0.5％以下，停止加热回流，减压回收溶剂乙醇至干，剩余物加入饮用水150mL和乙酸异丁酯100mL，，搅拌10分钟后，静置分层，弃去有机层，水层再用乙酸异丁酯100mL萃取2次，弃去有机层。往萃取后的水层中滴加盐酸，使pH为1-2，室温下搅拌反应5小时以上，脱保护完全后，用离子交换树脂脱除残余的无机盐，含有GPC的水溶液减压蒸出水分，往剩余物中加入异丁醇200mL，冷却搅拌析晶，过滤，干燥，得到白色粉末状GPC固体45.5g，收率88.8％。

[0102] 对实施例5-12及对比例1、2的产物进行纯度的检测及收率的计算，结果如表1所示。根据表1的结果，本发明方法制备的L-α-GPC，不论是纯度，还是收率，均要高于现有技术的制备方法(对比例1、对比例2)，且数据具有统计学意义(P＜0.01)。

[0103] 表1实施例5-12中GPC纯度及收率

[0104]

[0105] 应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。