TH-302制剂、制备方法及其用途

摘要

本发明涉及TH‑302的微球制剂、其制备方法及其用途。用降解产物为乳酸或羟基乙酸的载体材料聚乳酸或聚乳酸/羟基乙酸共聚物包载TH‑302或其药用盐制备成栓塞微球，一方面可以利用微球的物理屏障阻塞肿瘤组织的血液供应，另一方面可以在载体材料降解产生的酸的作用下缓慢释放出TH302的活性产物，进一步增强抗肿瘤作用。

权利要求

1.一种TH-302制剂，其包括活性药物和载体材料；活性药物被载体材料包覆形成为栓塞微球；

其中，活性药物为TH-302或TH-302的药用盐；所述载体材料为降解产物为乳酸或羟基乙酸的材料，所述载体材料为聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、或两者的混合物，其中，所述聚乳酸为酯封端或羧基端的聚乳酸，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物为酯封端或羧基端的聚乳酸-羟基乙酸共聚物；所述酯封端或羧基端的聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸/羟基乙酸质量百分比为75:25；所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物分子量为9800道尔顿，所述栓塞微球的粒径在75μm-300μm内，所述栓塞微球的制备方法为：第一步，将活性药物与载体材料加入到有机溶剂中，使药物和载体材料完全溶解并混合均匀；

第二步，将完全溶解于有机溶剂中并混合均匀的药物和载体材料在250-500rpm的搅拌条件下注入到含第一浓度乳化剂的水相中，在4℃的条件下继续搅拌形成乳液；

第三步，将所述乳液转移至含第二浓度乳化剂的水相中，低速搅拌4-5h，挥发掉有机溶剂后，4000-9000rpm离心、洗涤，得到TH-302的栓塞微球制剂；

第四步，对得到的TH-302的栓塞微球制剂进行冻干，得到栓塞微球冻干粉；

所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、苯甲醇以及其中两种以上的混合物；

所述乳化剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯、明胶、西黄芪胶以及其中两种以上的混合物；

第一浓度乳化剂和第二浓度乳化剂均是乳化剂在水中的比重占0.2％-10％，所述第二浓度低于第一浓度。

2.权利要求1所述的TH-302制剂的用途，其单独地或与其他放化疗药物联用，用于治疗肝癌的药物的制备。

说明书

TH-302制剂、制备方法及其用途

技术领域

[0001] 本发明涉及用于治疗肝癌的药物制剂，尤其涉及一种治疗晚期不能手术治疗的肝癌患者的TH-301制剂、制备方法以及用途。

背景技术

[0002] 肝癌(Hepatocellular carcinoma HCC)是世界范围内的恶性肿瘤之一，肝癌起病隐匿、进展迅速、生存期短，严重危害人类健康。每一年有50万以上的病人出现，是全球第三位癌症相关的的死亡原因。欧洲的发病率3.6/10万～10.6/10万，全球的发病率16.0/10万人。目前肝癌患者主要治疗方法为外科手术，但也仅限于早期肝癌效果好，对于大部分肝癌患者，被确诊时已是中晚期，已无手术机会。

[0003] 肿瘤组织中血管分布不同于正常组织，杂乱无序，导致其微环境散布着低氧区和常氧区。在常氧区，肿瘤细胞生成迅速，且对传统化疗极为敏感，而低氧区肿瘤细胞则处于休眠状态，对标准化疗和放疗具有抵抗性，成为肿瘤治疗的主要障碍。

[0004] TH-302为二硝基咪唑类的前药，是由Threshold制药公司研究人员设计合成的具高细胞毒性的选择性低氧激活型DNA烷化剂。可在肿瘤低氧区或遇酸活化而转化为具烷化剂活性的二溴异磷酰胺氮芥，但在常氧或正常pH条件下几乎无活性。

[0005] 目前，国内外有关TH-302的报道为口服剂型的报道，公开号为：US20140072624A1，此外尚无其他关于TH-302剂型的报道。口服用药属于全身用药，仅仅是一部分药物到达癌细胞，因此其毒副作用很大。

发明内容

[0006] 鉴于上述问题，本发明旨在提出一种TH-302制剂，其能够以较低计量被施用，使得药物对被施用者的毒副作用减小。

[0007] 本发明的TH-302制剂，其包括活性药物和载体材料；活性药物被载体材料包覆形成为微球；

[0008] 其中，活性药物为TH-302或TH-302的药用盐；载体材料为降解产物为乳酸或羟基乙酸的材料。

[0009] 优选地，所述载体材料为聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、或两者的混合物。

[0010] 优选地，所述聚乳酸为酯封端或羧基端的聚乳酸；所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物为酯封端或羧基端的聚乳酸-羟基乙酸共聚物。

[0011] 优选地，所述酯封端或羧基端的聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸/羟基乙酸百分比为75:25。

[0012] 优选地，所述微球的粒径在75μm-300μm内。

[0013] 对于上述的TH-302制剂，本发明还提出其制备方法，包括：

[0014] 第一步，将活性药物与载体材料加入到有机溶剂中，使药物和载体材料完全溶解并混合均匀；

[0015] 第二步，将完全溶解于有机溶剂中并混合均匀的药物和载体材料注入到含第一浓度乳化剂的水相中形成乳液；

[0016] 第三步，将所述乳液转移至含第二浓度的乳化剂的水相中，低速搅拌，挥发掉有机溶剂后进行离心、洗涤，得到TH-302的微球制剂。

[0017] 优选地，还包括：第四步，对得到的TH-302的微球制剂进行冻干，得到微球冻干粉。

[0018] 优选地，所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、苯甲醇以及其中的两种或两种以上的混合物；

[0019] 所述乳化剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯、明胶、西黄芪胶以及其中的两种或两种以上的混合物。

[0020] 优选地，第一浓度、第二浓度的乳化剂指乳化剂在水中的比重占0.2％-10％，更优选地，第二浓度低于第一浓度。

[0021] 本发明还提出TH-302制剂的用途，其单独地或与其他放化疗药物联用，用于治疗肝癌。

[0022] 本发明基于TH-302的特点，将其用降解产物为乳酸或羟基乙酸的载体材料聚乳酸或聚乳酸/羟基乙酸共聚物包载制备成栓塞微球，一方面可以利用微球的物理屏障阻塞肿瘤组织的血液供应，另一方面可以在载体材料降解产生的酸的作用下缓慢释放出TH302的活性产物，进一步增强抗肿瘤作用。

附图说明

[0023] 图1为本发明的TH-302制剂形成为不同的粒径的微球时体外释放曲线。

具体实施方式

[0024] 本发明将TH-302以缓释栓塞微球的形式提供，其包括TH-302，PLGA或PLA。提供了以PLGA/PLA为基质材料，制备表面光滑圆整，颗粒规则无粘连，粒径在75μm-100μm、100μm-200μm、200μm-300μm三个范围内(表1)、载药量和包封率较高(表2)、缓释半个月(图1)的TH-
302肝动脉栓塞微球及其制备方法。

[0025] 本发明还涉及TH-302肝动脉栓塞微球的制备方法，它采用单乳化-溶剂挥发法制备，将活性药物和生物可降解的药用高分子材料溶于一种或一种以上的有机溶剂中形成油相，所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、苯甲醇或一种以上的混合有机溶剂。另外配制连续水相，将非离子型表面活性剂溶于水中，它们在水中的重量百分比为2％-5％。所述的非离子型表面活性剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯、明胶和西黄芪胶。单乳化-溶剂挥发法制备微球的步骤为：高分子辅料及活性药物TH-302加入到二氯甲烷或混合溶剂中，待完全溶解后并混合均匀后，用注射计将上述混合溶液在250-500rpm搅拌条件下注入到适宜浓度的水相中，在4℃的条件下继续搅拌成乳液后，将上述乳液转移至较低浓度的水相中，低速搅拌4-5h，挥发有机溶剂；然后，4000-9000rpm离心，洗涤，收集微球，进行真空冷冻干燥即得微球冻干粉。

[0026] 本发明微球载体材料选自PLGA，其分子量为9800道尔顿，PLGA中LA：GA质量百分比为75：25。本发明微球载体材料或选自PLA。本发明微球载体材料还可以是PLGA和PLA的混合物。

[0027] 本发明采用普通的电磁力搅拌器或机械搅拌其器，其搅拌速度为250rpm-500rpm。水相中非离子乳化剂多占的重量百分比为2％-5％。

[0028] 采用本发明方法制备的微球表面光滑圆整，颗粒规则无粘连，粒径分布在75μm-100μm、100μm-200μm、200μm-300μm三个范围内(表1)。包封率较高(表2)，缓释期为半个月(图1)的微球。

[0029] 下面，结合附图，对本发明的TH-302制剂，及其制备方法和用途进行详细说明。

[0030] 本发明的TH-302制剂，其形成为栓塞微球。

[0031] 栓塞微球载体可分为天然、合成、半合成的高分子材料。天然高分子材料主要有：明胶、海藻酸盐、壳聚糖、蛋白类；半合成的天然高分子材料有：纤维素衍生物；合成的高分子材料有：聚乳酸(PLA)和聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)。合成高分子材料因其生物相容性好，在生物体内可降解，稳定性较好，是一种理想的微球载体。其中聚乳酸羟基乙酸共聚物，其在体内的降解产物为人体正常情况下产生的代谢产物，被广泛的应用于微球制剂中。

[0032] 实例1酯封端PLGA对微球包封率的影响

[0033] 称取0.6g酯封端PLGA溶于有机溶剂中制成油相，有机溶剂为二氯甲烷或二氯甲烷与甲醇的混合物。精密称取一定量的TH-302活性药物溶于上述油相中，超声混合均匀后，得含药有机相。称取适量PVA于一定体积的蒸馏水中，于微波炉中反复加热溶解PVA后补足失重后，既得浓度为3％的水相溶液。将上述油相，用注射泵以一定速度注入到15ml、3％的PVA溶液中，350rpm搅拌7min后，将上述乳液转移250ml、2％的PVA溶液中，250rpm，4℃，搅拌4-5h，挥发有机溶剂、离心、洗涤、干燥，即得酯封端的PLGA微球，并进行微球包封率测定，结果如表1所示。

[0034] 实例2羧基端PLGA对微球包封率的影响

[0035] 称取0.6g羧基端PLGA溶于有机溶剂中制成油相，有机溶剂为二氯甲烷或二氯甲烷与甲醇的混合物。精密称取一定量的TH-302活性药物溶于上述油相中，超声混合均匀后，得含药有机相。称取适量PVA于一定体积的蒸馏水中，于微波炉中反复加热溶解PVA后补足失重后，既得浓度为3％的水相溶液。将上述油相，用注射泵以一定速度注入到15ml、3％的PVA溶液中，350rpm搅拌7min后，将上述乳液转移250ml、2％的PVA溶液中，250rpm，4℃，搅拌4-5h，挥发有机溶剂、离心、洗涤、干燥，即得羧基端的PLGA微球，并进行微球包封率测定，结果如表1所示。

[0036] 实例3羟基端PLGA对微球包封率的影响

[0037] 称取0.6g羟基端PLGA溶于有机溶剂中制成油相，有机溶剂为二氯甲烷或二氯甲烷与甲醇的混合物。精密称取一定量的TH-302活性药物溶于上述油相中，超声混合均匀后，得含药有机相。称取适量PVA于一定体积的蒸馏水中，于微波炉中反复加热溶解PVA后补足失重后，既得浓度为3％的水相溶液。将上述油相，用注射泵以一定速度注入到15ml、3％的PVA溶液中，350rpm搅拌7min后，将上述乳液转移250ml、2％的PVA溶液中，250rpm，4℃，搅拌4-5h，挥发有机溶剂、离心、洗涤、干燥，即得羟基端的PLGA微球，并进行微球包封率测定，结果如表1所示。

[0038] 表1不同封端的PLGA载体材料对微球包封率的影响

[0039]

[0040] 实例4酯封端PLA对微球包封率的影响

[0041] 称取0.6g酯封端PLA溶于有机溶剂中制成油相，有机溶剂为二氯甲烷或二氯甲烷与甲醇的混合物。精密称取一定量的TH-302活性药物溶于上述油相中，超声混合均匀后，得含药有机相。称取适量PVA于一定体积的蒸馏水中，于微波炉中反复加热溶解PVA后补足失重后，既得浓度为3％的水相溶液。将上述油相，用注射泵以一定速度注入到15ml、3％的PVA溶液中，350rpm搅拌7min后，将上述乳液转移250ml、2％的PVA溶液中，250rpm，4℃，搅拌4-5h，挥发有机溶剂、离心、洗涤、干燥，即得酯封端的PLA微球，并进行微球包封率测定，结果如表2所示。

[0042] 实例5羧基端PLA对微球包封率的影响

[0043] 称取0.6g羧基端PLA溶于有机溶剂中制成油相，有机溶剂为二氯甲烷或二氯甲烷与甲醇的混合物。精密称取一定量的TH-302活性药物溶于上述油相中，超声混合均匀后，得含药有机相。称取适量PVA于一定体积的蒸馏水中，于微波炉中反复加热溶解PVA后补足失重后，既得浓度为3％的水相溶液。将上述油相，用注射泵以一定速度注入到15ml、3％的PVA溶液中，350rpm搅拌7min后，将上述乳液转移250ml、2％的PVA溶液中，250rpm，4℃，搅拌4-5h，挥发有机溶剂、离心、洗涤、干燥，即得羧基端的PLA微球，并进行微球包封率测定，结果如表2所示。

[0044] 实例6羟基端PLA对微球包封率的影响

[0045] 称取0.6g羟基端PLA溶于有机溶剂中制成油相，有机溶剂为二氯甲烷与甲醇的混合物。精密称取一定量的TH-302活性药物溶于上述油相中，超声混合均匀后，得含药有机相。称取适量PVA于一定体积的蒸馏水中，于微波炉中反复加热溶解PVA后补足失重后，既得浓度为3％的水相溶液。将上述油相，用注射泵以一定速度注入到15ml、3％的PVA溶液中，350rpm搅拌7min后，将上述乳液转移250ml、2％的PVA溶液中，250rpm，4℃，搅拌4-5h，挥发有机溶剂、离心、洗涤、干燥，即得羟基端的PLA微球，并进行微球包封率测定，结果如表2所示。

[0046] 表2不同封端的PLA载体材料对微球包封率的影响

[0047]

[0048] 实例7不同粒径的TH-302-PLGA肝动脉栓塞微球的制备

[0049] 称取酯封端PLGA 0.6g(分子量为9800LA:GA为75:25)溶于有机溶剂中制成油相，有机溶剂为二氯甲烷和甲醇的混合物。精密称取处方量的TH-302活性药物溶于上述油相中，超声混合均匀后，得含药有机相。称取适量PVA于一定体积的蒸馏水中，于微波炉中反复加热溶解PVA后补足失重，既得浓度为5％的PVA水相溶液。将上述油相用注射泵以一定速度注入到15mlPVA水相溶液中，350rpm搅拌7min后，将上述乳液转移250ml、2％的PVA溶液中，250rpm，4℃，搅拌4-5h，挥发有机溶剂、离心、洗涤、干燥，用Malvern粒径测定仪测定微球的粒径。

[0050] 实例8不同粒径的TH-302-PLGA肝动脉栓塞微球的制备

[0051] 称取酯封端PLGA 0.6g(分子量为9800LA:GA为75:25)溶于有机溶剂中制成油相，有机溶剂为二氯甲烷和甲醇的混合物。精密称取处方量的TH-302活性药物溶于上述油相中，超声混合均匀后，得含药有机相。称取适量PVA于一定体积的蒸馏水中，于微波炉中反复加热溶解PVA后补足失重，既得浓度为5％的PVA水相溶液。将上述油相，用注射泵以一定速度注入到15mlPVA水相溶液中，350rpm搅拌5min后，将上述乳液转移250ml，2％的PVA溶液中，250rpm，4℃，搅拌4-5h，挥发有机溶剂、离心、洗涤、干燥，用Malvern粒径测定仪测定微球的粒径。

[0052] 实例9不同粒径的TH-302-PLGA肝动脉栓塞微球的制备

[0053] 称取酯封端PLGA 0.6g(分子量为9800LA:GA为75:25)溶于有机溶剂中制成油相，有机溶剂为二氯甲烷和甲醇的混合物。精密称取处方量的TH-302活性药物溶于上述油相中，超声混合均匀后，得含药有机相。称取适量PVA于一定体积的蒸馏水中，于微波炉中反复加热溶解PVA后补足失重，即得浓度为5％的PVA水相溶液。将上述油相，用注射泵以一定速度注入到15mlPVA水相溶液中，250rpm搅拌5min后，将上述乳液转移250ml，2％的PVA溶液中，250rpm，4℃，搅拌4-5h，挥发有机溶剂、离心、洗涤、干燥，用Malvern粒径测定仪测定微球的粒径。

[0054] 表3不同粒径的TH-302-PLGA肝动脉栓塞微球

[0055]

[0056] TH-302-PLGA肝动脉栓塞微球粒径测定方法

[0057] 本实验采用Malvern粒径测定仪测定微球的粒径。称取一定量制备好的微球至700mL含有5％助悬剂羧甲基纤维素钠的蒸馏水中，配制浓度为5％的微球混悬液，至Malvern粒径测定仪测定微球粒径。主要通过跨距和D50两个参数来评价微球粒径效果。实例7、8、9的粒径测定结果如表3所示。

[0058] TH-302-PLGA肝动脉栓塞微球体外释放方法

[0059] 采用培养法进行微球的体外释放考察，释放介质为加有表面活性剂pH为7.4的磷酸盐缓冲液。具体方法为：称取适量的微球，至250ml锥形瓶，加入100ml释放介质，放置到37℃、以100rpm频率振摇的水浴恒温摇床中，于不同的时间点取一定体积的样品，离心，取上清液，同时补充相同体积的空白释放介质，下层微球液倒入锥形瓶中继续释放，本实验所制备的微球能够缓释半个月(图1)。由释放曲线图可以看出粒径较小的实例7，其释放速度较实例8和9快，实例8和9的释放趋势相当。

[0060] 本发明的TH-302制剂可以作为动脉栓塞微球，借助造影剂通过导管介入的方式，栓塞肝癌患者肿瘤的供血动脉。第一方面阻断了肿瘤的血液供应，长时间使肿瘤处于一个“饥饿”的状态；第二方面使药物较长时间的停留在肿瘤部位，缓慢的释放药物且提高了药物血药浓度；第三方面对肿瘤微环境低氧区的细胞杀伤力较强，对机体正常组织副作用较小。

[0061] 通过将TH-302制作为微球，将药物直接导入肿瘤进行局部用药，以缓释形式延长药物的作用时间，在保证药物对肿瘤的治疗的同时，最大程度地减小药物对受试者的毒副作用。