Apabetalone的制备方法

摘要

本发明涉及Apabetalone的制备方法，具体公开了Apabetalone的合成方法，其包括如下步骤：1)制备第一中间体2‑溴‑4,6‑二甲氧基苯甲酰胺；2)制备第二中间体4‑{2‑[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}‑3,5‑二甲基苯甲醛；3)将第一中间体和第二中间体在溴化亚铜、碳酸铯、L‑脯氨酸以及氨水的条件下密封进行反应，得到Apabetalone。本发明的制备方法简单，产率高。

权利要求

1.Apabetalone的合成方法，其包括如下步骤：

1-1)3,5-二甲氧基溴苯，DMF，氮气保护于冰浴中，缓慢滴加POCl3，室温搅拌0.5h，加热至100℃继续搅拌3.5h，将反应液倒入冰水中，静置，过滤得化合物2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛；

1-2)在2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛中加入NaClO2和NaH2PO4，再加入tBuOH:H2O＝5:1的溶液以及2-甲基-2-丁烯，室温搅拌1h，加入2M的盐酸溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，萃取液用饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩得化合物2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸；

1-3)2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸，EDC，HOBt，NMM在THF中室温反应，再通NH3反应，加入蒸馏水，用DCM萃取，收集有机层，无水Na2SO4干燥，柱层析，石油醚/乙酸乙酯洗脱，得化合物2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺；

2-1)将4-羟基-3,5-二甲基苯甲醛、乙醇、无水碳酸钾和2-氯乙醇回流反应24h；反应液冷却至室温，过滤，滤液减压旋干，用乙酸乙酯稀释后，分别用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥；柱层析，石油醚/乙酸乙酯洗脱，得到4-(2-羟基乙氧基)-3,5-二甲基苯甲醛；

2-2)将4-(2-羟基乙氧基)-3,5-二甲基苯甲醛、DMF、咪唑和二甲基叔丁基氯硅烷，30℃下搅拌，反应完全，24h后往反应液中加入乙酸乙酯和蒸馏水，分液，分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机层；蒸馏水和饱和食盐水洗有机层，无水硫酸钠干燥；减压浓缩，柱层析，石油醚/乙酸乙酯洗脱，得4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛；

3)取2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺，溴化亚铜，碳酸铯，L-脯氨酸于厚壁耐压管中，加入DMSO，4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛，26％氨水，密封耐压管；

100℃下密封搅拌12h，再敞口搅拌12h。加饱和氯化铵溶液淬灭，再加乙酸乙酯和蒸馏水，分液，水层用乙酸乙酯萃取，有机层用蒸馏水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥；二氯甲烷/甲醇柱层析洗脱，得Apabetalone。

2.根据权利要求1所述的Apabetalone的合成方法，其中，步骤1-3)中柱层析，石油醚/乙酸乙酯以v/v为3:1的比例洗脱；步骤2-1)柱层析，石油醚/乙酸乙酯以v/v为3:1的比例洗脱；步骤2-2)柱层析，石油醚/乙酸乙酯以v/v为10:1的比例洗脱；步骤3)柱层析，二氯甲烷/甲醇以v/v,40:1的比例洗脱。

说明书

Apabetalone的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及医药领域，具体涉及Apabetalone的制备方法。

背景技术

[0002] Apabetalone(RVX-208)，化学名：2-[4-(2-羟乙氧基)-3,5-二甲基苯基]-5,7-二甲氧基喹唑啉–4(3H)-酮，由Resverlogix公司开发，主要用来治疗动脉粥样硬化等心血管疾病[1,2]，目前正在进行III期临床研究[3]，有非常好的上市前景，该药还进入了阿尔茨海默症治疗的II期临床研究[4]。Apabetalone是一种选择性作用于BD2溴结构域的BET bromodomain抑制剂[5]，对该药的深入研究有助于阐明BET bromodomain的BD1和BD2溴结构域在生理学上所起的作用。Apabetalone，作为载脂蛋白(APO)A-I基因表达的激动剂，在体内外增加(APO)A-I和HDL-C[1]。本申请发明人还发现Apabetalone有HIV潜伏激活作用[6]，对HIV治愈性研究有极大的意义。

[0003] 目前文献报道的Apabetalone的合成方法[5,7,8,9,10,11]，均采用中间体2-氨基-4,6-二甲氧基苯甲酰胺(A-4)进行合成，收率低，如下所示的反应流程。

[0004]

[0005] 该路线以3,5-二甲氧基苯胺(A-1)为原料经成盐、环化、水解、成酰胺、最后成喹唑啉酮环并脱保护，反应条件较为苛刻，如使用草酰氯、高温、易燃易爆的双氧水以及强碱氢氧化钠等，总收率仅为4.8％。文献合成2-氨基-4,6-二甲氧基苯甲酰胺(A-4)共3步，总收率22.6％，收率较低。

[0006] [参考文献]

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[0009] [3]Nicholls  SJ,et al.Selective BET  Protein Inhibition with Apabetalone and Cardiovascular Eve-nts:A Pooled Analysis of Trials in Patients with Coronary Artery Disease[J].Am J Cardiova-sc Drugs,2017.[0010] [4]McNeill E.RVX-208,a stimulator of apolipoprotein AI gene expression for the treatment of cardiovascular diseases[J].Curr Opin Investig Drugs,2010,11(3):357–364.

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[0012] [6]LI L,ZHANG XX,REN RX,et al.Application of RVX-208used as HIV-1latent infection re-versal agent:CN,20161567750[P].2016-12-07.

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[0015] [9]Henrik C.Hansen,et al.Compounds for the prevention and treatment of cardiovascular dise-ases:WO,2008092231[P].2008-08-07.

[0016] [10]Henrik C.Hansen,et al.Methods of preparing quinazolinone derivatives:WO,2009158404[P].2009-12-30.

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[0018] [12]Rachelle Quach,et al.Total Synthesis of the Resorcyclic Acid Lactone Spiroketal Citreovi-ranol[J].J.Org.Chem.2016,81(18):8343-8350.[0019] [13]Tsutomu Yokomatsu,Kenji Suemune,et al.Highly regioselective silylation ofα,β-dihydr-oxyphosphonates:An application to stereoselective synthesis ofα-amino-β-hy droxyphos-phonic acid derivatives[J].Synlett.1995,1995(8):847-849.

发明内容

[0020] 为解决上述问题，本发明文设计了一种新的制备Apabetalone的方法，以1-溴-3,5-二甲氧基苯(C-1)原料经酰化、氧化、成酰胺3步反应合成关键中间体2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺(C-4)，其3步合成总收率为32％。再与另外一个2步合成的中间体4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛(B-3)反应制备Apabetalone，收率达到48％，如下所示的反应流程。

[0021]

[0022] 本发明一个方面提供了Apabetalone的合成方法，其包括如下步骤：

[0023] 1)制备第一中间体2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺；

[0024] 2)制备第二中间体4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛；

[0025] 3)将第一中间体和第二中间体在溴化亚铜、碳酸铯、L-脯氨酸以及氨水的条件下密封进行反应，得到Apabetalone。

[0026] 在本发明的技术方案中，第一中间体的制备方法包括以下步骤：

[0027] 1-1)3,5-二甲氧基溴苯在惰性气体保护下加入POCl3，室温反应后加热至100℃继续反应至完全，将反应液倒入冰水中，过滤得到1 2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛；

[0028] 1-2)2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛加入NaClO2、NaH2PO4，再加入tBuOH:H2O混合溶液以及2-甲基-2-丁烯，室温反应至完全，以稀酸溶液中止反应，获得2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸；

[0029] 1-3)以缩合剂催化2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸，并在碱性条件下与NH3进行反应，获得第一中间体。

[0030] 其中，步骤1-3)中的缩合剂选自EDCI、HOBt、HOAT、DCC，碱性条件是通过加入NMM、DIEA或吡啶获得。

[0031] 在本发明的技术方案中，第二中间体的制备方法包括以下步骤：

[0032] 2-1)4-羟基-3,5-二甲基苯甲醛和2-氯乙醇在无水碳酸钾在有机溶剂中回流反应至完全获得4-(2-羟基乙氧基)-3,5-二甲基苯甲醛；

[0033] 2-2)4-(2-羟基乙氧基)-3,5-二甲基苯甲醛、二甲基叔丁基氯硅烷和咪唑在有机溶剂中进行反应，得到第二中间体4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛。

[0034] 在本发明的技术方案中，包括如下步骤：

[0035] 1-1)3,5-二甲氧基溴苯，DMF，氮气保护于冰浴中，缓慢滴加POCl3，室温搅拌0.5h，加热至100℃继续搅拌3.5h，将反应液倒入冰水中，静置，过滤得化合物2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛；

[0036] 1-2)在2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛中加入NaClO2和NaH2PO4，再加入tBuOH:H2O＝5:1的溶液以及2-甲基-2-丁烯，室温搅拌1h，加入2M的盐酸溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，萃取液用饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩得化合物2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸；

[0037] 1-3)2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸，EDC，HOBt，NMM在THF中室温反应，再通NH3反应，加入蒸馏水，用DCM萃取，收集有机层，无水Na2SO4干燥，柱层析，石油醚/乙酸乙酯(v/v,3:1)洗脱，得化合物2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺；

[0038] 2-1)将4-羟基-3,5-二甲基苯甲醛、乙醇、无水碳酸钾和2-氯乙醇回流反应24h；反应液冷却至室温，过滤，滤液减压旋干，用乙酸乙酯稀释后，分别用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥；柱层析，石油醚/乙酸乙酯(v/v,3:1)洗脱，得到4-(2-羟基乙氧基)-3,5-二甲基苯甲醛；

[0039] 2-2)将4-(2-羟基乙氧基)-3,5-二甲基苯甲醛、DMF、咪唑和二甲基叔丁基氯硅烷，30℃下搅拌，反应完全，24h后往反应液中加入乙酸乙酯和蒸馏水，分液，分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机层；蒸馏水和饱和食盐水洗有机层，无水硫酸钠干燥；减压浓缩，柱层析，石油醚/乙酸乙酯(v/v,10:1)洗脱，得4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛；

[0040] 3)取2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺，溴化亚铜，碳酸铯，L-脯氨酸于厚壁耐压管中，加入DMSO，4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛，26％氨水，密封耐压管；100℃下密封搅拌12h，再敞口搅拌12h。加饱和氯化铵溶液淬灭，再加乙酸乙酯和蒸馏水，分液，水层用乙酸乙酯萃取，有机层用蒸馏水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥；二氯甲烷/甲醇(v/v,40:1)柱层析洗脱，得Apabetalone。

[0041] 本发明另一个方面提供了一种制备Apabetalone中间体2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺的方法，其包括如下步骤：

[0042] 1-1)3,5-二甲氧基溴苯在惰性气体保护下加入POCl3，室温反应后加热至100℃继续反应至完全，将反应液倒入冰水中，过滤得到1 2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛；

[0043] 1-2)2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛加入NaClO2、NaH2PO4，再加入tBuOH:H2O混合溶液以及2-甲基-2-丁烯，室温反应至完全，以稀酸溶液中止反应，获得2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸；

[0044] 1-3)以缩合剂催化2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸，并在碱性条件下与NH3进行反应，获得第一中间体。

[0045] 本发明再一个方面提供了一种制备Apabetalone中间体4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛的方法，其包括如下步骤：

[0046] 2-1)4-羟基-3,5-二甲基苯甲醛和2-氯乙醇在无水碳酸钾在有机溶剂中回流反应至完全获得4-(2-羟基乙氧基)-3,5-二甲基苯甲醛；

[0047] 2-2)4-(2-羟基乙氧基)-3,5-二甲基苯甲醛、二甲基叔丁基氯硅烷和咪唑在有机溶剂中进行反应，得到第二中间体4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛。

具体实施方式

[0048] 仪器与试剂

[0049] Bruker 400M核磁共振仪(德国布鲁克公司)；EYELAN-1100型旋转蒸发仪(日本东京理化公司)；循环水式真空泵SHZ–D(III)(巩义市予华仪器有限责任公司)；ZQ4000液相色谱-质谱用仪(美国WATERS)。

[0050] 薄层层析(TLC)板采用硅胶GF 254(青岛海洋化工生产)制备薄层层析板；柱层析采用200-300目硅胶(青岛海洋化工厂)；1-溴-3,5-二甲氧基苯(萨恩化学技术有限公司)；3,5-二甲基-4-羟基苯甲醛(萨恩化学技术有限公司)；2-氯乙醇(上海艾览化工有限公司)；
三氯氧磷(萨恩化学技术有限公司)；其他试剂为本实验室保存的产品以及市售化学纯或分析纯产品。

[0051] 实施例1 2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛(C-2)的制备

[0052] 50ml圆底烧瓶中加入3,5-二甲氧基溴苯(1’)(5.0g,23.0mmol),DMF(11ml),氮气保护于冰浴中，缓慢滴加POCl3(6.4ml,20.8mmol)，室温搅拌0.5h，加热至100℃继续搅拌1
3.5h，将反应液倒入60ml冰水中，静置，过滤得化合物C-2 3.73g，收率66％。H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):10.30(s,1H,CHO),6.77(s,1H,ArH),6.43(s,1H,ArH),3.89(s,3H,OCH3),3.87(s,3H,OCH3)。

[0053] 实施例2 2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸(C-3)的制备

[0054] 100ml圆底烧瓶中加入2-溴-4,6-二甲氧基苯甲醛(C-2)(3.0g,12.2mmol)，NaClO2(4.7g,49.0mmol)，NaH2PO4(2.2g,18.4mmol)，再加入tBuOH:H2O(5:1)溶液48ml，2-甲基-2-丁烯(7.8ml，73mmol)，室温搅拌1h，加入2M的盐酸溶液11ml淬灭，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，萃取液用饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩得化合物C-3 2.48g，收率78％。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):6.73(d,1H,ArH),6.44(d,1H,ArH),3.85(s,3H,OCH3),3.82(s,3H,OCH3)。

[0055] 实施例3 2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺(C-4)的制备

[0056] 在200ml双颈瓶中加入2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酸(C-3)(3.00g，11.5mmol),EDC(3.30g，17.25mmol),HOBt(2.30g，17.25mmol)，NMM(40μl，0.36mmol),THF75ml，室温搅拌4h，再通NH3 1h，停止反应，加入30ml蒸馏水，用DCM(30ml×3)萃取，收集有机层，无水Na2SO4干燥，柱层析，石油醚/乙酸乙酯(v/v,3:1)洗脱，得化合物C-4 1.85g，收率62％。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):6.71(d,1H,ArH)6.43(d,1H,ArH),6.12(s,1H,1/2×CONH2),5.80(s,1H,1/2×CONH2),3.83(s,3H,OCH3),3.82(s,3H,OCH3)。

[0057] 实施例4 4-(2-羟基乙氧基)-3,5-二甲基苯甲醛(B-2)的制备

[0058] 在50ml单口圆底烧瓶中加入1.05g(7mmol)原料B-1 4-羟基-3,5-二甲基苯甲醛，14ml乙醇，3.87g无水碳酸钾(28mmol)和2.8ml 2-氯乙醇(3.40g，42mmol)，回流反应24h。反应液冷却至室温，过滤，滤液减压旋干，用100ml乙酸乙酯稀释后，分别用水(20ml)和饱和食盐水(20ml)洗，无水硫酸钠干燥。柱层析，石油醚/乙酸乙酯(v/v,3:1)洗脱，得1.25g化合物B-2，收率94％。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.84(s,1H,CHO),7.53(s,2H,ArH),3.94(m,
4H,OCH2CH2OH),2.33(s,6H,2×CH3)。

[0059] 实施例5 4-{2-[(叔丁基二甲基硅)氧]乙氧基}-3,5-二甲基苯甲醛(B-3)的制备[0060] 在25ml圆底烧瓶中加入中间体B-2(1.20g,6.20mmol)，DMF 4ml，咪唑(1.06g,15.6mmol)和二甲基叔丁基氯硅烷(1.12g,7.5mmol)，30℃下搅拌，TLC监测反应，24h后往反应液中加入30ml乙酸乙酯和20ml蒸馏水，分液，分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取(20ml×
3)，合并有机层。蒸馏水(20ml×2)和饱和食盐水(20ml)洗有机层，无水硫酸钠干燥。减压浓
1
缩，柱层析，石油醚/乙酸乙酯(v/v,10:1)洗脱，得1.87g化合物B-3，收率98％。H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.82(s,1H,CHO),7.50(s,2H,ArH),3.93(t,2H,OCH2CH2OH),3.87(t,2H,OCH2CH2OH),2.31(s,6H,2×CH3),0.89(s,9H,C(CH3)3),0.08(s,6H,Si(CH3)2)。

[0061] 实施例6 2-[4-(2-羟乙氧基)-3,5-二甲基苯基]-5,7-二甲氧基喹唑啉-4(3H)-酮(Apabetalone)的制备

[0062] 取2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺(C-4)(388.5mg,1.50mmol)，溴化亚铜(21.5mg,0.15mmol)，碳酸铯(977.5mg,3.00mmol)，L-脯氨酸(34.5mg,0.30mmol)于厚壁耐压管中，加入DMSO 5ml，中间体B-3(930mg,3.00mmol)，1.90ml 26％氨水，密封耐压管。100℃下密封搅拌12h，再敞口搅拌12h。加6ml饱和氯化铵溶液淬灭，再加50ml乙酸乙酯和50ml蒸馏水，分液，水层用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，有机层用蒸馏水(30ml×2)和饱和食盐水(30ml)洗，无
1
水硫酸钠干燥。柱层析,二氯甲烷/甲醇(v/v,40:1)洗脱，得267mg Apabetalone，收率48％。H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.81(s,1H,NH),7.89(s,2H,ArH),6.73(d,1H,ArH),6.51(d,1H,ArH),4.89(t,1H,OH),3.88(s,3H,OCH3),3.83(d,5H,OCH3,OCH2CH2OH),3.73(m,2H,OCH2CH2OH),2.30(s,6H,2×CH3)；13C-NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.64,161.38,
160.13,158.86,153.55,152.95,131.17,128.63,127.63,105.07,101.57,97.96,74.41,
60.84,56.35,56.02,16.50。ESI-Mass for C20H22N2O5:m/z(M-H)+370.02。

[0063] 本申请报道了Apabetalone合成的新方法，以化合物(C-1)为原料，经酰化、氧化、成酰胺经三步反应制备关键中间体2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺(C-4)，再与(B-3)为原料[5]成喹唑啉酮环合成Apabetalone，总收率为13.8％，而文献方法 的总收率只有4.8％。

[0064] 中间体(C-4)的合成总收率为32％，文献方法[5,7,8,9,10,11]制备其所使用的中间体(A-4)总收率为22.6％；本文还改进了化合物(B-3)的合成方法，收率由文献[5]的69％提高到了92％。本文报道的Apabetalone合成的新方法，采用的化合物(C-4)比文献方法使用的化合物(A-4)制备收率高，反应条件更温和，操作简便。在成喹唑啉酮环制备Apabetalone时，本文方法收率为48％，文献方法[5,7,8,9,10,11]的收率低于40％。

[0065] 综上所述，本文报道了以2-溴-4,6-二甲氧基苯甲酰胺(C-4)和(B-3)为原料成喹唑啉酮环合成Apabetalone的新方法，此方法反应条件相对温和，操作简便，收率更高。