一种高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法

摘要

本发明公开一种高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，具体为：将卡拉胶大分子通过特定功率的微波处理、超声辅助，快速达到卡拉胶分子片段的定量降解，大部分分子量在500‑3000道尔顿，较传统卡拉胶降解时间大大缩短。再通过硫酸酯化反应，达到高硫酸酯化卡拉胶多糖，通过添加氯化钡和亚硒酸，微波和超声波辅助促进硒化反应，较传统工艺时间大大缩短，能够达到快速、高效硒化的效果，最终制得高硒含量、低分子量硒化卡拉胶，提高了其生物利用度和机体对硒的吸收效率。

权利要求

1.一种高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，包括下列步骤：(1)卡拉胶降解；

(2)小分子卡拉胶片段精制；

(3)硫酸酯化反应；

(4)硒化反应；

(5)除去硫酸钡；

(6)中和酸性溶液；

(7)纳滤膜过滤；

(8)喷雾精制；其特征在于具体步骤为：

(1)卡拉胶降解：卡拉胶配成5％的溶胶，在搅拌下加入硝酸、硫酸、盐酸中的两种混合酸溶液，保持温度，微波继续处理，使溶液分子共振达到活跃状态，继续使用超声破碎仪进行共振降解，调节pH至中性；

(2)小分子卡拉胶片段精制：通过两次纳滤得到分子量在500-3000道尔顿的小分子卡拉胶溶液，干燥制得小分子卡拉胶片段；

(3)硫酸酯化反应：按照氯磺酸-吡啶法配制酯化剂，将(2)制得的小分子卡拉胶，分批次加入酯化剂，进行硫酸酯化反应，反应结束加入乙醇溶液，醇沉，卡拉胶硫酸酯多糖在底部形成絮状沉淀；

(4)硒化反应：抽取上层清液，使卡拉胶硫酸酯多糖浓缩，溶液加热，加入亚硒酸或其盐和钡盐并搅拌，微波辅助反应，反应结束；

(5)除去硫酸钡：加入稍过量无水硫酸钠，将上述反应液离心，除去生成的硫酸钡；

(6)中和酸性溶液：用碱调节pH至3-9，搅拌促进反应进行；

(7)纳滤膜过滤：使用500道尔顿的纳滤膜进行纳滤浓缩；

(8)喷雾精制：将步骤(7)中的浓缩滤液进行喷雾干燥制成高硒含量小分子固体产品；

其中，所述步骤(1)中的微波的功率为800-1200w，处理时间为5-30min；

所述步骤(1)中的超声破碎仪的处理功率为140-160w，处理时间为10-120分钟。

2.如权利要求1所述的高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的卡拉胶降解的温度为70-90℃。

3.如权利要求1所述的高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的酸为硫酸、盐酸、硝酸溶液中的两种，H+的浓度范围控制在0.1-10mol/L。

4.如权利要求1所述的高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)具体为：首先使用3000道尔顿的纳滤膜进行纳滤，去除分子量大于3000的分子片段，将滤液继续过500道尔顿，滤除分子量低于500的小分子碎片和无机盐。

5.如权利要求1所述的高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中乙醇醇沉的浓度是60％-80％。

6.如权利要求1所述的高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的反应温度为60-80℃；微波处理的功率为800-1200w，处理时间为30-120分钟。

7.如权利要求1所述的高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(8)中的小分子硒化卡拉胶的分子量大于500道尔顿，小于3000道尔顿。

说明书

一种高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种分子量低、高硒含量硒化卡拉胶的制备方法，具体涉及一种以卡拉胶为原料，经过一系列处理得到高硒含量小分子硒化卡拉胶的方法。

背景技术

[0002] 硒是人和动物所必需的微量元素，被誉为“生命的火种”、“抗癌之王”、“心脏的守护神”，它是人体内一些抗氧化酶和硒-P蛋白的重要组成部分，在人体生命活动中起着重要的作用，人们通过补硒可以达到提高机体免疫力、抗病能力及延缓衰老的目的。由于人体内硒不存在长期贮藏硒的器官，机体所需的硒应该不断从饮食中得到足够量的硒，硒浓度的平衡对许多器官、组织的生理功能有着重要的保护作用和促进作用。

[0003] 人类硒缺乏会导致癌症、糖尿病、心脑血管疾病，已取得世界各国医学界的共识，并且确定了每4年召开一次有关硒的国际研讨会。研究发现，缺硒者心肌中各种成分的硒含量极低，致使心脏功能发生障碍。国外最新研究表明，低硒食物喂养的动物，心脏抗病能力减弱，容易诱发心肌类疾病。而且还认为，缺硒是冠心病的诱因。国外的资料还报道。食物中含硒越低，癌症的发生和残疾率越高。

[0004] 硒化卡拉胶最早由中国科学院生态环境中心唐家骏教授于1988年提出中国发明专利申请，并于1992年获得授权(专利号：ZL88103347.2)。1992年硒化卡拉胶通过了卫生部、化工部、轻工部、国家质量监督局等部门的联合终审，列入《GB14880食品营养强化剂使用卫生标准》。2000年，国家海洋局第一研究所李光友和缪锦来，对原有硒化卡拉胶工艺进行改进，申请发明专利《硒化多糖化合物及其制备方法》，专利号：CN00111262.7。硒化卡拉胶先后经北京医科大学、上海医科大学、中国科学院、山东省中医药研究所等单位进行急毒性试验和毒理学试验，未观察到任何毒副性反应。山东中医药研究所对海藻硒多糖做过小鼠急毒性试验，结论是：半致死量(LD50)测不出，最大耐受量(MIC)>16g/kg，根据毒性物质的分级标准，属于无毒物质。

[0005] 硒化卡拉胶是一种有机硒，毒性远低于无机硒，可溶性好，易吸收，已经作为食品添加剂应用到食品行业中，但目前国内合成的食品级硒化卡拉胶都是大分子硒多糖，分子量在20000左右，不利于人体吸收，硒含量较低，生物活性较低。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种高硒、低分子量硒化卡拉胶的制备方法，本方法制得的硒化卡拉胶分子量在500-3000道尔顿之间，分子量更低。硒含量为10～160mg/g，平均硒含量为100mg/g以上，硒含量更高，该方法较传统的方法制得硒化卡拉胶的分子量低、活性更高，易于被机体吸收。生产过程较传统方法快速、简单，目的性更强。

[0007] 为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：将卡拉胶大分子通过特定功率的微波处理、超声辅助，快速达到卡拉胶分子片段的定量降解，大部分分子量在500-3000道尔顿，较传统卡拉胶降解时间大大缩短。再通过硫酸酯化反应，达到高硫酸酯化卡拉胶多糖，通过添加氯化钡和亚硒酸，微波和超声波辅助促进硒化反应，较传统工艺时间大大缩短，能够达到快速、高效硒化的效果，最终制得高硒含量、低分子量硒化卡拉胶，提高了其生物利用度和机体对硒的吸收效率。

[0008] 一种高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于它包括下列步骤：

[0009] (1)卡拉胶降解：卡拉胶配成5％的溶胶，在搅拌下加入硝酸、硫酸、盐酸中的两种混合酸溶液，保持温度，微波继续处理，使溶液分子共振达到活跃状态，继续使用超声破碎仪进行共振降解，调节pH至中性。

[0010] (2)小分子卡拉胶片段精制：通过两次纳滤得到分子量在500-3000道尔顿的小分子卡拉胶溶液，干燥制得小分子卡拉胶片段；

[0011] (3)硫酸酯化反应：按照氯磺酸-吡啶法配制酯化剂，将(2)制得的小分子卡拉胶，分批次加入酯化剂，进行硫酸酯化反应，反应结束加入乙醇溶液，醇沉，卡拉胶硫酸酯多糖在底部形成絮状沉淀。

[0012] (4)硒化反应：抽取上层清液，使卡拉胶硫酸酯多糖浓缩，溶液加热，加入亚硒酸或其盐和钡盐并搅拌，微波辅助反应，反应结束；

[0013] (5)除去硫酸钡：加入稍过量无水硫酸钠，将上述反应液离心，除去生成的硫酸钡；

[0014] (6)中和酸性溶液：用碱调节pH至3-9，搅拌促进反应进行；

[0015] (7)纳滤膜过滤：使用500道尔顿的纳滤膜进行纳滤浓缩；

[0016] (8)喷雾精制：将步骤(7)中的浓缩滤液进行喷雾干燥制成高硒含量小分子固体产品。

[0017] 上述高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的卡拉胶降解的温度为70-90℃。

[0018] 上述高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的酸为硫酸、盐酸、硝酸溶液中的两种，H+的浓度范围控制在0.1-10mol/L。

[0019] 上述高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的微波的功率为800-1200w，处理时间为5-30min。

[0020] 上述高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的超声破碎仪的处理功率为140-160w，处理时间为10-120分钟。

[0021] 上述高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)具体为：首先使用3000道尔顿的纳滤膜进行纳滤，去除分子量大于3000的分子片段，将滤液继续过
500道尔顿，滤除分子量低于500的小分子碎片和无机盐。

[0022] 上述高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中乙醇醇沉的浓度是60％-80％。

[0023] 上述高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的反应温度为60-80℃。

[0024] 上述高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的微波处理的功率为800-1200w，处理时间为30-120分钟。

[0025] 上述高硒含量小分子硒化卡拉胶的制备方法，其特征在于：所述步骤(8)中的小分子硒化卡拉胶的分子量大于500道尔顿，小于3000道尔顿。

[0026] 本发明高硒含量小分子硒化卡拉胶具有以下优点：

[0027] (1)本发明的高硒含量小分子硒化卡拉胶的原料卡拉胶从海藻中提取，容易得到，经过微波，超声波辅助，降解的时间较传统方法大大缩短，且分子量大多集中在500-3000道尔顿。

[0028] (2)本发明的高硒含量小分子硒化卡拉胶硒化过程较传统方法时间缩短。

[0029] (3)本发明的高硒含量小分子硒化卡拉胶分子量在500-3000之间，分子量低，生物活性高，易于被机体吸收利用，较传统大分子硒化卡拉胶，生物利用度更高。

[0030] (4)本发明的高硒含量小分子硒化卡拉胶硒含量为25～160mg/g，平均硒含量为10mg/g以上，硒含量较高，该方法较传统的方法制得硒化卡拉胶(硒含量3％以下)，硒含量大大提高。

[0031] (5)本发明的高硒含量小分子硒化卡拉胶可应用于食品营养补充，添加于保健食品、功能性食品、药品等

[0032] (6)本发明的高硒含量小分子硒化卡拉胶也可应用于作物喷施，生产富硒水果、富硒蔬菜等富硒农产品，分子量小，植物更易吸收，转化率高。

附图说明

[0033] 图1为本发明的流程图。

[0034] 图2为高硒含量小分子硒化卡拉胶与卡拉胶的紫外光谱图

[0035] 图3为高硒含量小分子硒化卡拉胶与卡拉胶的红外光谱图

具体实施方式

[0036] 为了使本发明实现的技术手段易于理解，下面结合附图并通过具体实施例，进一步详细阐述本发明。

[0037] 实施例1：

[0038] 卡拉胶降解：50g卡拉胶于70℃下配成5％的溶胶，在搅拌下加入硝酸、盐酸混合酸溶液，H+浓度0.8mol/L，保持温度，1000w微波继续处理10分钟，使溶液分子共振达到活跃状态，使用超声破碎仪进行共振，降解30分钟，调节pH至中性，

[0039] 小分子卡拉胶片段精制：使用截留分子量3000道尔顿纳滤膜进行纳滤，去除分子量大于3000的分子片段，保留滤液，将滤液过500道尔顿纳滤膜纳滤，滤除分子量低于500的小分子碎片和无机盐，得到分子量在500-3000道尔顿的小分子卡拉胶溶液，烘干得到小分子卡拉胶片段40g；

[0040] 硫酸酯化反应：按照氯磺酸-吡啶法配制酯化剂，将制得的小分子卡拉胶，分批次加入酯化剂，进行硫酸酯化反应，反应结束加入80％的乙醇溶液，醇沉，卡拉胶硫酸酯多糖在底部形成絮状沉淀。

[0041] 抽取上层清液，得到浓缩的卡拉胶硫酸酯多糖溶液，加热至60℃，加入亚硒酸2.6g、氯化钡4.2g，微波辅助反应50分钟；

[0042] 除去硫酸钡：加入稍过量无水硫酸钠2.9g，将上述反应液离心，除去生成的硫酸钡沉淀；

[0043] 中和酸性溶液：用氢氧化钠溶液调节pH至6，搅拌促进反应进行；

[0044] 纳滤膜过滤：使用500道尔顿的纳滤膜进行纳滤浓缩，除去无机盐；

[0045] 喷雾精制：将上述获得的浓缩滤液进行喷雾干燥制成固态产品硒化卡拉胶42g，硒含量39.5mg/g。并对产品进行了检测，如图2、3所示。

[0046] 如图2中所示，高硒含量小分子硒化卡拉胶和卡拉胶的紫外光谱.可以看出，本技术制得的硒化卡拉胶，与卡拉胶紫外光谱进行对照，在281nm处有明显的吸收峰。281nm峰正是多糖片段引入了亚硒酸根，由此紫外光谱可以看出亚硝酸根与多糖片段结合，形成硒化多糖。

[0047] 如图3中所示，硫酸酯化多糖和硒化卡拉胶的红外光谱谱图。硫酸酯多糖在-1 -11272.07cm 处有吸收峰，该峰是S＝O伸缩振动的特征峰。硒化卡拉胶在1264.36cm 处有吸收峰，这是由于存在Se＝O振动的特征峰。因此，多糖片段中的硫酸根被亚硒酸根取代，导致特征峰不同，特征峰位置变化导致。同时，硒化卡拉胶在704.93cm和772.44cm处出现两个亚硒酸根的特征吸收峰。因此，由红外光谱可以证实亚硒酸根与卡拉胶多糖片段进行结合。

[0048] 此过程中同时验证了微波功率和超声功率的优化参数，具体如表1所示：

[0049] 表1功率大小对分子量的影响

[0050]

[0051]

[0052] 卡拉胶降解中，微波功率小500w时，分子量在500-3000道尔顿之间的卡拉胶收率为60.5％，大分子片段较多。功率1000w时，收率为81.2％，功率1500w时，收率降为43.7％，功率过高，会导致卡拉胶分子片段较多低于500道尔顿。超声功率对收率的的影响趋势与微波相同，在功率150w时达到最高值83.3％。

[0053] 实施例2：

[0054] 卡拉胶降解：6g卡拉胶于80℃下配成5％的溶胶，在搅拌下加入硝酸、硫酸混合酸溶液，H+浓度2mol/L，保持温度，1200w微波继续处理20分钟，使溶液分子共振达到活跃状态，使用超声破碎仪进行共振，降解60分钟，调节pH至中性，

[0055] 小分子卡拉胶片段精制：使用截留分子量3000道尔顿纳滤膜进行纳滤，去除分子量大于3000的分子片段，保留滤液，将滤液过500道尔顿纳滤膜纳滤，滤除分子量低于500的小分子碎片和无机盐，得到分子量在500-3000道尔顿的小分子卡拉胶溶液，冷冻干燥得到小分子卡拉胶片段6.7g；

[0056] 硫酸酯化反应：按照氯磺酸-吡啶法配制酯化剂，将制得的小分子卡拉胶，分批次加入酯化剂，进行硫酸酯化反应，反应结束加入80％的乙醇溶液，醇沉，卡拉胶硫酸酯多糖在底部形成絮状沉淀。

[0057] 抽取上层清液，得到浓缩的卡拉胶硫酸酯多糖溶液，加热至80℃，加入亚硒酸0.94g、氯化钡1.51g，微波辅助反应100分钟；

[0058] 除去硫酸钡：加入稍过量无水硫酸钠1.03g，将上述反应液离心，除去生成的硫酸钡沉淀；

[0059] 中和酸性溶液：用氢氧化钠溶液调节pH至6，搅拌促进反应进行；

[0060] 纳滤膜过滤：使用500道尔顿的纳滤膜进行纳滤浓缩，除去无机盐；

[0061] 喷雾精制：将步骤7中的浓缩滤液进行喷雾干燥制成固态产品硒化卡拉胶6.57g，硒含量103mg/g。

[0062] 实施例3：

[0063] 卡拉胶降解：80g卡拉胶于90℃下配成5％的溶胶，在搅拌下加入硝酸、硫酸混合酸溶液，H+浓度1.5mol/L，保持温度，1200w微波继续处理30分钟，使溶液分子共振达到活跃状态，使用超声破碎仪进行共振，降解120分钟，调节pH至中性，

[0064] 小分子卡拉胶片段精制：使用截留分子量3000道尔顿纳滤膜进行纳滤，去除分子量大于3000的分子片段，保留滤液，将滤液过500道尔顿纳滤膜纳滤，滤除分子量低于500的小分子碎片和无机盐，得到分子量在500-3000道尔顿的小分子卡拉胶溶液，冷冻干燥得到小分子卡拉胶片段83.4g；

[0065] 硫酸酯化反应：按照氯磺酸-吡啶法配制酯化剂，将制得的小分子卡拉胶，分批次加入酯化剂，进行硫酸酯化反应，反应结束加入80％的乙醇溶液，醇沉，卡拉胶硫酸酯多糖在底部形成絮状沉淀。

[0066] 抽取上层清液，得到浓缩的卡拉胶硫酸酯多糖溶液，加热至85℃，加入亚硒酸19.6g、氯化钡31.6g，微波辅助反应120分钟；

[0067] 除去硫酸钡：加入稍过量无水硫酸钠21.6g，将上述反应液离心，除去生成的硫酸钡沉淀；

[0068] 中和酸性溶液：用氢氧化钠溶液调节pH至6，搅拌促进反应进行；

[0069] 纳滤膜过滤：使用500道尔顿的纳滤膜进行纳滤浓缩，除去无机盐；

[0070] 喷雾精制：将步骤7中的浓缩滤液进行喷雾干燥制成固态产品硒化卡拉胶81.2g，硒含量153mg/g。

[0071] 对比实施例4：

[0072] 采用实施例1-3的方法制备获得相应的高硒含量小分子硒化卡拉胶，与传统的硒化卡拉胶的制备方法和产品指标相比，具体如表2、3所示。

[0073] 表2卡拉胶分解时间对比

[0074]分解方法 分解时间
酸解 6h
酶解 12h
酸解(微波、超声辅助) ＜120min

[0075] 如表2所示，常规方法酸解卡拉胶，至少需要6h；酶解的方法进行降解，需要的时间要在12h以上；本技术，在800-1200w的微波处理后，在140-160w的超声破碎辅助下，进行卡拉胶降解，120min之内就可以达到，并且降解的卡拉胶片段分子量在500-3000道尔顿之间。

[0076] 表3与传统技术硒化反应环节时间对比

[0077]方法 硒化时间
唐家骏(专利号：88103347) 5-10h
缪锦来(申请号：00111262.7) 12-24h
本技术(微波辅助硒化反应) 30-120min

[0078] 如表3所示，在硒化反应阶段，本技术较以往技术硒化反应时间明显缩短。

[0079] 表4与传统硒化卡拉胶产品比对

[0080]硒-卡产品 平均硒含量 平均分子量(道尔顿)
唐家骏(专利号：88103347) ＜10mg/g 10000-20000
缪锦来(申请号：00111262.7) ＜50mg/g 3500-8000
本技术(微波辅助硒化反应) ＞100mg/g 500-3000

[0081] 由表4所示，与传统硒化卡拉胶对比可以发现，本技术得到的硒化卡拉胶终产品平均分子量低，平均硒含量较高。

[0082] 表5生物可利用性对比

[0083]硒-卡产品 平均血硒含量(ppm) 平均肝脏硒含量(ppm)
正常饮食组 0.43 0.741
添加1号硒-卡 0.58 1.306
添加2号硒-卡 0.75 1.513
本技术产品 0.94 1.732

[0084] 注：1号硒-卡是由唐家骏专利工艺制得的硒化卡拉胶，2号硒-卡是由缪锦来专利方法制得。

[0085] 由表5可以看出，相较于传统工艺生产制得的硒化卡拉胶，进行相同剂量(以硒计)的饲喂试验，血硒浓度和肝脏中平均硒浓度均比饲喂前工艺硒化卡拉胶含量高，本技术硒化卡拉胶生物可利用性有明显提高。

[0086] 实施例5硒化卡拉胶生物安全性实验

[0087] 利用实施例1-3中所示的方法制备获得高硒含量小分子硒化卡拉胶进行生物安全性实验，具体为：

[0088] 动物功能实验结果

[0089] 1.检验依据：依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)的规定进行动物功能试验和试验结果评价。

[0090] 2.实验动物和饲养条件

[0091] 实验用ICR种小鼠、Wistar大鼠由苏州昭衍新药研究中心有限公司提供。实验动物饲料由江苏协同医药生物工程有限公司提供，执行标准GB14924.3-2010《实验动物配合饲料营养成分》。饮用水为灭菌城市饮用水，符合中华人民共和国国家标准《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2006)的规定。饲养环境：温度范围22～24℃，相对湿度范围40～70％。实验动物实验前在动物房环境中适应4天。

[0092] 3.数据处理

[0093] 实验数据以平均值±标准差表示，方差分析和统计学检验采用孙瑞元等：DAS统计软件中多组均数分析，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用T检验法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，若方差不齐则改用秩和检验进行统计。

[0094] 4.实验内容及结论

[0095] 4.1本产品对小鼠的经口急性毒性试验

[0096] 试验方法：参见：中华人民共和国国家标准，GB 15193.3-2014，急性经口毒性试验[0097] 结论:小鼠的经口急性毒性试验中，选用清洁级ICR小鼠60只，随机分为6组,每组l0只，雌雄各半，按改良寇氏法进行试验，观察小鼠高硒小分子硒化卡拉胶急性中毒症状，并测定本产品经口给药对小鼠的LD50。试验结果表明，本产品对小鼠的经口LD50为1020.31mg/kgb.w.，其LD5095％可信限为931.72～1182.45mg/kg b.w.。

[0098] 4.2本产品对大鼠的经口急性毒性试验

[0099] 试验方法：参见：中华人民共和国国家标准，GB 15193.3-2014，急性经口毒性试验[0100] 结论:大鼠的经口急性毒性试验中，选用清洁级Wistar大鼠60只，随机分每组l0只，分为6组，雌雄各半，按改良寇氏法进行试验，观察大鼠硒化卡拉胶(海藻硒多糖)急性中毒症状，并测定硒化片拉胶(海藻硒多糖)经口给药对大鼠的LD50。试验结果表明，硒化卡拉胶(海藻硒多糖)对大鼠的经口LD50为1721.30mg/kg b.w.，其LD5095％可信限为1507.62～1967.34mg/kg b.w.。

[0101] 4.3本产品的细菌回复突变试验

[0102] 试验方法：参见：中华人民共和国国家标准，GB 15193.4-2014,细菌回复突变试验[0103] 结论:细菌回复突变试验中，高硒含量小分子硒化卡拉胶每皿剂量在0.5mg～0.005mg范围内，有或无代谢活化系统(S9)时，5种鼠伤寒沙门氏菌试验株的每皿平均回变菌落数均在溶剂对照的两倍以内，末见剂量-反应关系，两次试验结果一致。综上所述，在本试验条件下，未发现本产品对鼠伤寒沙门氏菌的致突变性。

[0104] 4.4本产品哺乳动物红细胞微核试验

[0105] 试验方法：参见：中华人民共和国国家标准，GB 15193.5-2014,哺乳动物红细胞微核试验

[0106] 结论:哺乳动物红细胞微核试验中，高硒含量小分子硒化卡拉胶三个剂量组(475,237,l18mg/kg b.w.)雌、雄小鼠骨髓含微核嗜多染红细胞(PCE)率与阴性(溶剂)对照组比较，无显著性差异(P>0.05)，高硒含量小分子硒化卡拉胶同一剂量组内雌雄小鼠之问微核率无明显性别差异，环磷酰胺阳性对照组小鼠骨髓含微核嗜多染红细胞率与高硒含量硒化卡拉胶三个剂量组、阴性对照组比较，差异显著(P<0.01)。综上所述，本试验条件下，未发现本产品具有致突变作用。

[0107] 4.5本产品的小鼠精子畸形试验

[0108] 试验方法：参见：中华人民共和国国家标准，GB 15193.7-2003，小鼠精子畸形试验[0109] 结论:小鼠精子畸形试验中，高硒含量小分子硒化卡拉胶三个剂量组(475,237,l18mg/kgb.w.)的精子畸形率与阴性对照组比较，无显著性差异(P>0.05),环磷酰胺阳性对照组的精子畸形率与硒化卡拉胶(海藻硒多糖)三个剂量组、阴性对照组比较，差异显著(P<0.01)。综上所述，在本试验条件下，未发现高硒含量小分子硒化卡拉胶具有生殖遗传毒性。

[0110] 4.6本产品的致畸试验

[0111] 试验方法：参见：中华人民共和国国家标准，GB15193.14-2O15，致畸试验[0112] 结论:大鼠致畸试验中，高硒含量小分子硒化卡拉胶三个剂量组(100,25,6.25mg/kg)孕鼠体重增长正常；各剂量组平均活胎数、吸收胎数及死胎数与阴性对照比较，均无显著差异(P>0.05)；各剂量组活胎平均体重、身长和尾长与阴性对照组比较，差异均无显著意义。硒化卡拉胶(海藻硒多糖)各剂量组的外观畸形发生率与阴性均无显著差异(P>0.05)；胎鼠的骨骼检查未发现异常发育，检查亦未见异常或畸形。综上所述，在本试验条件下，未发现高硒含量小分子硒化卡拉胶对大鼠具有母体毒性、胚胎毒性和致畸作用。

[0113] 4.7本产品的90天喂养试验

[0114] 试验方法：参见：中华人民共和国国家标准，GB/T23179-2008，饲料毒理学评价-亚急性毒性试验

[0115] 结论:大鼠的90天喂养试验中，高硒含量小分子硒化卡拉胶以三个剂量(90，45，22、5mg/kg b.w.)连续给药90d，各剂量组大鼠生长发育良好，体重增加、脏器系数、血常规和血液生化指标等各项指标与对照组之间均无统计学差异，且均在正常范围之内。综上所述，在本试验条件下，未发现高硒含量小分子硒化卡拉胶对大鼠的生长发育产生影响，长期重复应用无亚慢性毒性。

[0116] 最后，还需要注意的是，以上所列举的仅是本发明的若干具体实施例。本领域的普通技术人员都会理解，在本发明的保护范围内，对于上述实施例进行修改，添加和替换都是可能的，其都没有超出本发明的保护范围。