酪氨酸激酶抑制剂在制备治疗癌症药物中的用途

摘要

一种酪氨酸激酶抑制剂在制备治疗癌症的药物中的用途。

权利要求

1.式A所示化合物或其可药用盐在制备治疗EGFR突变的癌症的药物中的用途，其中所述EGFR突变为第20号外显子的插入突变，

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的癌症选自肺癌、乳腺癌和胃肠道癌症、肾癌、肝癌。

3.根据权利要求2所述的用途，其中所述的肺癌是非小细胞肺癌。

4.根据权利要求2所述的用途，其中所述的肺癌是肺腺癌。

5.根据权利要求2所述的用途，其中所述的肺癌是晚期肺癌。

6.根据权利要求5所述的用途，其中所述的晚期肺癌是复发难治性肺癌。

7.根据权利要求1所述的用途，其中所述的癌症是经过化疗、放疗或靶向治疗后仍然进展或复发进展的癌症。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述的化疗是使用选自烷化剂、铂络合剂、代谢拮抗剂、植物生物碱、激素抗癌剂、蛋白酶体抑制剂、芳香化酶抑制剂、免疫调节剂中的一种或多种。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述的化疗是使用选自卡铂、顺铂、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、长春碱类、吉西他滨、喜树碱类、抗肿瘤抗生素类、内分泌抑制剂、培美曲塞或多西他赛中的一种或多种进行化疗。

10.根据权利要求7所述的用途，其中所述的靶向治疗是使用选自EGFR抑制剂、PARP抑制剂、CDK抑制剂、VEGFR抑制剂中的一种或多种治疗。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述的EGFR抑制剂选自吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼和阿法替尼中的一种或几种。

12.根据权利要求10所述的用途，其中所述的VEGFR抑制剂选自舒尼替尼、阿帕替尼、法米替尼中的一种或几种。

13.根据权利要求1所述的用途，其中所述化合物A的可药用盐为马来酸盐。

14.根据权利要求13所述的用途，其中所述化合物A的可药用盐为二马来酸盐。

15.根据权利要求1所述的用途，其中所述化合物A或其可药用盐以化合物A计，其每日用量为1mg/kg～20mg/kg。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述化合物A或其可药用盐以化合物A计，其每日用量为2mg/kg～10mg/kg。

17.根据权利要求15所述的用途，其中所述化合物A或其可药用盐以化合物A计，其每日用量为4～8mg/kg。

18.根据权利要求1所述的用途，其中所述化合物A或其可药用盐以化合物A计，其每日用量为100mg～1000mg。

19.根据权利要求18所述的用途，其中所述化合物A或其可药用盐以化合物A计，其每日用量为240mg～560mg。

20.根据权利要求18所述的用途，其中所述化合物A或其可药用盐以化合物A计，其每日用量为320mg～480mg。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的用途，其中所述化合物A或其可药用盐被制备成组合物，所述组合物还含有药学上可接受的载体。

说明书

酪氨酸激酶抑制剂在制备治疗癌症药物中的用途

技术领域

[0001] 一种EGFR/HER2受体酪氨酸激酶抑制剂在制备治疗EGFR突变癌症的药物中的用途。

背景技术

[0002] 在世界范围内，无论男性还是女性，肺癌均已成为癌症死亡的主要原因。根据《2015年中国肿瘤登记年报》的统计表明，在中国肺癌的发病率和死亡率都占据了首位。肺癌的发病率和死亡率均随年龄增长而上升，一般40岁以后肺癌的发病率明显上升，到75岁左右达到高峰，之后有所下降(石元凯，孙燕.临床肿瘤内科手册.北京：人民卫生出版社，2015：315-341)。在肺癌中，非小细胞肺癌(NSCLC)大约占所有肺癌患者的85％(Siegel R，Ma J，Zou Z，et al.Cancer statistics.CA Cancer J Clin，2014，64(1)：9-29)。发达国家中腺癌是非小细胞肺癌中最常见的病理类型，约占40％。大多数NSCLC就诊时就处于局部晚期或远处转移，无法进行手术切除。

[0003] 转移性NSCLC的一线治疗根据病理类型及基因改变情况而定。对EGFR基因突变阳性的患者建议进行EGFR-TKI治疗，ALK阳性的患者建议给予克唑替尼治疗(石元凯，孙燕.临床肿瘤内科手册.北京：人民卫生出版社，2015：315-341)。EGFR基因敏感突变包括Exon19Exon19 Del，L858R和T790M，针对这些突变的TKI药物为厄洛替尼、吉非替尼、埃克替尼、阿法替尼和osimertinib(AZD9291)。上述特定基因突变表达阴性的非鳞癌患者建议培美曲塞或其他含铂两药联合方案化疗，在化疗基础上可联合血管内皮抑素(YH-16)或西妥昔单抗(Cetuximab)。对4-6个周期一线治疗后达到疾病控制(完全缓解、部分缓解或疾病稳定)的患者，可选择继续维持治疗(使用在一线治疗中给予的至少一种药物)或换药维持治疗(使用在一线治疗中未给予的其它药物)。目前循证医学证据支持的药物有培美曲塞(非鳞癌)、吉西他滨、贝伐珠单抗和EGFR-TKI(厄洛替尼)维持治疗。二线治疗可选用多西紫杉醇、培美曲塞和EGFR-TKI。而三线治疗目前并没有明确的推荐治疗方案，大量的临床试验正在探索其他的有效治疗方法(石元凯，孙燕.临床肿瘤内科手册[M].北京：人民卫生出版社，2015：315-341)。除以上提及的靶点外，肺癌的研究还发现了诸多基因异常的改变，包括MET和FGFR1的扩增，EGFR第20号外显子插入性突变(Exon 20 ins)，PIK3CA、AKT、KRAS、NRAS、BRAF、MEK1、AKT1、FGFR2、DDR2和HER2突变，以及RET和ROS1重排等(Mazières J，Peters S，Lepage B，et al.Lung cancer that harbors an HER2 mutation：Epidemiologic characteristics and therapeutic perspectives.J ClinOncol，2013，31(16)：1997-
2003)。

[0004] 人表皮因子受体1(EGFR，HER1)基因属于HER酪氨酸受体家族的一员。EGFR是一种糖蛋白的跨膜受体，具有酪氨酸激酶活性，与配体结合被激活后，EGFR由单体转化为二聚体。此二聚体可以激活EGFR胞内段的自身磷酸化位点，包括Y992、Y1045、Y1068、Y1148和Y1173等激活位点，并引导下游的磷酸化，包括MAPK、Akt和JNK通路、诱导细胞增殖、分化和细胞存活。NSCLC患者中EGFR突变率在亚洲达到35％，在美国是10％(Lynch et al.2004；Paez et al.2004；Pao et al.2004)。在这EGFR突变的患者中48％为Exon 19 Del(Mitsudomi and Yatabe 2010)，43％为L858R(Mitsudomi and Yatabe 2010)，4-9.2％为Exon 20 ins(第20号外显子的插入性突变)(Arcila et al.2013；Mitsudomi and Yatabe 
2010；Oxnard et al.2013)，＜5％的为T790M(Inukai et al.2006)。其中在厄洛替尼和吉非替尼获得性耐药的患者中约50％的患者为T790M的EGFR突变(Kobayashi et al.2005；
Pao et al.2005)。

[0005] 目前对于EGFRExon 20 ins尚没有特异性的靶向药物。临床前研究表明这些突变对吉非替尼、厄洛替尼、来那替尼和阿法替尼都耐药(Yasuda H 2012 Lancet Oncol.)。在对3项阿法替尼的II、III期临床研究的回顾性分析中发现，600例接受阿法替尼治疗的非小细胞肺癌患者中，75例(12％)患者存在exon 19 Del和L858R以外的非常见突变，其中23例患者存在第20号外显子的插入性突变，IRC评估的exon 20 ins患者的ORR为8.7(95％CI：1.1％-28％)；中位PFS为2.7月(95％CI：1.8-4.2月)；中位OS为9.2月(95％CI：4.1-14.2月)(Yang et al.2015 Lancet Oncol.)。Naidoo等发现，1882例IV期肺腺癌患者中，46(2％)例患者为Exon 20 ins，其中11例接受了erlotinib治疗，3例(27％)为部分缓解(PR)，中位TTP为3个月(Naidoo 2015 Cancer)。综上所述，Exon 20 ins的NSCLC患者从常用EGFR TKI治疗的获益十分有限。临床前数据显示Ariad在研的药物AP32788能有效的抑制部分EGFRExon 
20 ins蛋白的酶活性和部分该类突变细胞的增殖(AACR 2016， Gonzalvez，ARIAD Pharmaceuticals，Inc.)，但临床试验还在进行当中，尚未有公布的临床试验数据。

[0006] CN102471312B公开了如下式A所示的化合物(化学名(E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]氨基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯酰胺)，并公开了其具有很强的EGFR和HER2的抑制作用，并预期其可能用于治疗EGFR和HER2过度表达的癌症，

[0007]

[0008] CN102933574B公开了式A化合物的一系列可药用盐。CN103974949B公开了式A化合物的二马来酸盐的晶型。

[0009] 然而上述文献均没有公开式A化合物对于治疗EGFR突变包括对L858R，Exon19 Del，T790M，以及Exon20 ins的癌症的作用。

[0010] CN103987700A公开了一类酪氨酸激酶抑制剂对部分EGFR突变酶的抑制作用，但是不包括Exon20 ins突变的酶。

发明内容

[0011] 本发明惊奇地发现，化合物A或其可药用盐，对于治疗EGFR突变的癌症有着惊人的效果，从而完成了本发明。

[0012]

[0013] 在本发明优选的实施方案中，所述的癌症是肺癌、乳腺癌或胃肠道癌症、肾癌、肝癌。优选所述的肺癌是非小细胞肺癌，更进一步地优选EGFR突变的非小细胞肺癌，所述EGFR突变的非小细胞肺癌包括腺癌、鳞状癌、大细胞癌，特别是EGFR突变的晚期非小细胞肺腺癌患者。优选所述的胃肠道癌症为胃癌、结直肠癌。优选所述的乳腺癌为HER2阳性突变乳腺癌。

[0014] 在本发明中，所述EGFR突变的肿瘤或癌症指的是在这些肿瘤或癌症患者中可检测出EGFR的癌症驱动突变(driver mutation)，包括但不限于T790M，Exon19 Del，L858R，还有Exon 20 ins，优选的，本发明中所述的EGFR突变为Exon 20 ins包括但不限于A763_Y764insFQEA、D770_N771insSVD、V769_D770insASV、H773_V774insNPH、H773_V774insH、H773_V774insPH、P772_H773insNP、D770_N771insNPG、A763_Y764insFHEA等等。其中T790M指的是由于基因中碱基的错义突变造成了790号氨基酸由T变成了M，Exon19 Del指的是由于第19号外显子内部分碱基的缺失造成了非移码性部分氨基酸缺失，L858R指的是由于碱基的错义突变造成了858号氨基酸由L变成了R。A763_Y764insFQEA指的是在第20号外显子中插入了12个碱基造成763号氨基酸A和764号氨基酸Y中插入了4个氨基酸FQEA，D770_N771insSVD指的是在第20号外显子中插入了9个碱基造成760号氨基酸D和771号氨基酸N中插入了3个氨基酸SVD，V769_D770insASV指的是在第20号外显子中插入了9个碱基造成769号氨基酸V和770号氨基酸D中插入了3个氨基酸ASV，H773_V774insNPH指的是在第20号外显子中插入了9个碱基造成773号氨基酸H和774号氨基酸V中插入了3个氨基酸NPH，H773_V774insH指的是在第20号外显子中插入了3个碱基造成773号氨基酸H和774号氨基酸V中插入了1个氨基酸H，H773_V774insPH指的是在第20号外显子中插入了6个碱基造成773号氨基酸H和774号氨基酸V中插入了2个氨基酸PH，P772_H773insNP指的是在第20号外显子中插入了6个碱基造成772号氨基酸P和773号氨基酸H中插入了2个氨基酸NP，D770_N771insNPG指的是在第20号外显子中插入了9个碱基造成770号氨基酸D和771号氨基酸N中插入了3个氨基酸NPG，A763_Y764insFHEA指的是在第20号外显子中插入了12个碱基造成763号氨基酸A和764号氨基酸Y中插入了4个氨基酸FHEA。(氨基酸序列号参照P00533EGFR_HUMAN)。

[0015] 在本发明中，所述EGFR突变不但包括上述EGFR的单突变型，还包括T790M、Exon19 Del、L858R、Exon 20 ins自由组合的复合突变型，包括但不限于T790M+Exon19 Del、T790M+L858R、T790M+Exon 20 ins、Exon19 Del+L858R、Exon19 Del+Exon 20 ins、L858R+Exon 20 ins。在本发明优选的实施方案中，所述的癌症是经过化疗、放疗、靶向治疗或肿瘤免疫治疗后仍然进展的癌症。即患有该癌症的患者在经过化疗、放疗、靶向治疗或肿瘤免疫治疗后治疗无效或复发进展，如疾病得不到控制，仍然继续进展，肿瘤缓解或稳定后复发进展。其中所述的化疗可以是使用各种常规的化疗药物治疗，包括但不限于烷化剂(例如环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、尼莫司丁、雷莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺、盐酸氮芥、二溴甘露醇等)、铂络合剂(例如顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂等)、代谢拮抗剂(例如甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、替加氟、吉西他滨、卡培他滨、培美曲塞、蒽环类抗生素、丝裂霉素、博莱霉素类、放线菌素类等等)、植物生物碱如长春碱类、喜树碱类、紫杉醇类、三尖杉酯碱类(例如长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、多西他赛、紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇、紫杉醇脂质体、伊立替康、长春瑞滨、米托蒽醌、长春氟宁、拓扑替康等)、激素抗癌剂(例如亮丙瑞林、戈舍瑞林、度他雄胺、氟维司群、地塞米松、他莫昔芬等)、蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米、来那度胺等)、芳香化酶抑制剂(例如依西美坦、来曲唑、阿那曲唑等)、优选是使用选自卡铂、顺铂、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、长春碱类、吉西他滨、喜树碱类、抗肿瘤抗生素类、内分泌抑制剂、培美曲塞或多西他赛中的一种或多种进行化疗。所述的靶向治疗可以是使用选自EGFR抑制剂、ALK抑制剂、PARP抑制剂、CDK抑制剂、MEK抑制剂、VEGF抗体和VEGFR抑制剂中的一种或多种治疗。这些靶向药物是本领域熟知的，例如EGFR抑制剂可以选自吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、西妥昔单抗、曲妥珠单抗中的一种或几种；ALK抑制剂可以选自克唑替尼、色瑞替尼、阿西替尼、Brigatinib；VEGF抗体选自贝伐珠单抗；VEGFR抑制剂选自舒尼替尼、阿帕替尼、法米替尼中的一种或几种。肿瘤免疫治疗选自nivolumab、pembrolizumab、atezolizumab和SHR-1210中的一种或几种。

[0016] 在本发明中，化合物A在实际使用时，优选其可药用盐的形式，特别是马来酸盐或二马来酸盐。

[0017] 在本发明中，化合物A或其可药用盐的每日用量范围可以是1mg/kg～20mg/kg，优选2mg/kg～10mg/kg、10.1～14mg/kg、14.1-18mg/kg、18.1-20mg/kg更优选4～8mg/kg。对于成年人类，优选以化合物A计，剂量范围是100mg～1000mg，优选240mg～560mg，更优选320mg～480mg。其中，对于亚洲人，每日用量范围还可在240mg～400mg之间，特别是400mg。

[0018] 化合物A或其可药用盐也可以与药学上可接受的载体一起制成本领域熟知的组合物形式，如片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂等。本发明还涉及使用含有化合物A的药物组合物用于EGFR突变的癌症的用途。

[0019] 本发明还提供了一种前述的EGFR突变的癌症的治疗方法，包括对EGFR突变的癌症的患者给药化合物A或其可药用盐。

具体实施方式

[0020] 以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。

[0021] 实施例1：化合物A和星形孢菌素对体外EGFR重组蛋白(包括第20外显子的插入突变)酶活性的影响。

[0022] 1受试药物

[0023] 药物名称：化合物A的二马来酸盐(批号SHR 120201-002-06)、对照药物星形孢菌素(MedChem MC-2104)。配制方法：均用DMSO配制。

[0024] 2重组蛋白

[0025] EGFR基因索引号是NM_0052288。EGFR第20号外显子插入突变蛋白A763_Y764insFHEA(G1392-2，购自SignalChem)和D770_N771insNPG(G1368-2，购自SignalChem)都是EGFR第695号氨基酸到C末端的多肽。野生型EGFR蛋白(Cat#PV3872，Lot#39481M，购自Invitrogen)则是EGFR第668号氨基酸到C末端的多肽。这些多肽都是由杆状病毒在Sf9昆虫细胞里表达的，而且N末端被GST标记。

[0026] 3试验方法

[0027] 反应体系为20mM Hepes(pH7.5)，10mM MgCl2，1mM EGTA，0.02％Brij35，0.02mg/ml BSA，0.1mM Na3VO4，2mM DTT，1％DMSO，10μM ATP。其中BSA是反应底物。反应酶终浓度分别为：EGFR WT 4nM，A763_Y764insFHEA 30nM，D770_N771insNPG 15nM。向反应体系中加入10μM-0.5nM的待测化合物(化合物A或对照物星形孢菌素)，再加入33P-ATP 0.01μCi/μl(Perkin Elmer)来启动磷酸化反应，以测定EGFR的酶活性。统计方法为以浓度的对数为横坐标，相应浓度抑制率的概率单位为纵坐标，用Prism4软件(GraphPad)计算IC50值。

[0028] 4试验结果

[0029] 实验结果表明，化合物A对重组人野生型EGFR和第20号外显子插入性突变的酶活性都有较强的抑制作用，且随着化合物A的浓度的不断增加，EGFR全酶活性逐渐降低，呈现浓度依赖性关系。试验结果表明化合物A对重组人野生型EGFR和第20号外显子插入性突变的酶活性都有较强的抑制作用，而星形孢菌素效果较差，具体结果如表1所示：

[0030] 表1：化合物A、星形孢菌素对体外EGFR重组蛋白(包括第20外显子的插入突变)酶活性IC50总结

[0031]

[0032] 实施例2：化合物A对体外EGFR重组蛋白(包括T790M，Exon19 Del，和L858R)酶活性的影响

[0033] 1受试药物

[0034] 配制方法：均用DMSO配制。

[0035]

[0036] 2重组蛋白

[0037] EGFR野生型(Cat#PV3872)，EGFR T790M(Cat#PV4803)，EGFR L858R(Cat#PV4128)，和EGFR T790M+L858R(Cat#PV4879)重组蛋白都购自Invitrogen；EGFR Exon 19 Del(d746-750)(Cat#08-527)和EGFR Exon 19 Del+T790M(Cat#08-528)购自carna biosciences。这些重组蛋白都是氨基酸695到C末端的多肽。

[0038] 3试验方法

[0039] 使用Z′-LYTETM Kinase Assay Kit-Tyrosine 4 Peptide(Invitrogen，Catalog No.PV3193)试剂盒进行IC50检测。反应体系中，DMSO的终浓度为2％，化合物反应终浓度范围为10000nM-0.06nM。底物终浓度为2μM。反应酶量和对应ATP量终浓度分别为：EGFR WT：0.58ng/μL和ATP 10μM；EGFR T790M：1.5ng/μL和ATP 10μM；EGFR T790M+L858R：0.125ng/μL和ATP25μM；EGFR L858R：0.75ng/μL和ATP 50μM.；EGFR Exon 19 Del：0.75ng/μL和ATP 40μM；EGFR Exon 19 Del+T790M：2ng/μL和ATP 10μM。按照试剂盒的操作步骤进行反应，在NOVOSTAR多功能酶标仪上测定荧光值。统计方法为根据荧光值，运用GraphPad Prism 5软件，通过抑制率对化合物的对数浓度拟合曲线得到IC50值。

[0040] 4试验结果

[0041] 试验结果表明化合物A和阳性对照药HKI-272对EGFR野生型及突变型(T790M，L858R和Exon 19 Del单突变型及复合突变型)肺腺癌细胞有相似的抑制效果。具体结果如表2所示：

[0042] 表2：化合物A对体外EGFR重组蛋白(包括T790M，L858R和Exon 19Del单突变型和复合突变型)酶活性的抑制作用

[0043]