三维高速宽视场层析成像方法及装置转让专利
申请号 : CN201810002484.1
文献号 : CN108303421B
文献日 : 2020-02-11
发明人 : 戴琼海 , 庄超玮 , 范静涛
申请人 : 清华大学
摘要 :
权利要求 :
1.一种三维高速宽视场层析成像方法,其特征在于,包括以下步骤:
光束产生步骤,用于产生光束;
多焦面生成步骤,对所述光束进行色散,并将色散后的光束进行分光以分为多束光,以及调整所述多束光中每束光的聚焦深度以实现对样品不同深度平面的同时照明;
拓展景深探测步骤,对所述样品所激发的光进行会聚以形成像面,并在像方焦平面或共轭面对所述像面进行相位调制以对不同深度的物面进行成像。
2.根据权利要求1所述的三维高速宽视场层析成像方法,其特征在于,所述光束产生步骤,包括:对脉冲激光光源发出的光进行准直和扩散,以产生所述光束。
3.根据权利要求1所述的三维高速宽视场层析成像方法,其特征在于,所述在像方焦平面或共轭面对所述像面进行相位调制时,施加的相位为 其中,u,v为空间光调制器上的横截坐标,α为增益系数。
4.一种三维高速宽视场层析成像装置,其特征在于,包括:
光束产生装置,用于产生光束;
多焦面生成装置,对所述光束进行色散,并将色散后的光束进行分光以分为多束光,以及调整所述多束光中每束光的聚焦深度以实现对样品不同深度平面的同时照明;
拓展景深探测装置,对所述样品所激发的光进行会聚以形成像面,并在像方焦平面或共轭面对所述像面进行相位调制以对不同深度的物面进行成像。
5.根据权利要求4所述的三维高速宽视场层析成像装置,其特征在于,所述多焦面生成装置包括:光栅(201)、第一偏振分束器(202)、第一会聚透镜(203)、第一半玻片(204)、第一反射镜(205)、第二会聚透镜(206)、第二半玻片(207)、第二反射镜(208)、第二偏振分束器(209)和第一物镜(210),其中,所述光束经过光栅(201)色散后进入第一偏振分束器(202),经过第一偏振分束器(202)形成反射光路和透射光路,其中,反射光路的光经过第一会聚透镜(203)进行会聚,经过第一半玻片(204)和第一反射镜(205),进入第二偏振分束器(209),透射光路的光经过第二会聚透镜(206)进行会聚,经过第二半玻片(207)和第二反射镜(208),进入第二偏振分束器209,反射光路和透射光路的光通过第二偏振分束器(209)合束后进入第一物镜(210),通过第一物镜(210)聚焦会聚在样本(211)。
6.根据权利要求4所述的三维高速宽视场层析成像装置,其特征在于,所述拓展景深探测装置包括:第二物镜(302)、二向色镜(303)、镜筒透镜(304)、第一透镜(305)、空间光调制器(306)、第二透镜(307)和相机(308),其中,样本(301)受激产生非线性光信号,所述光信号首先通过第二物镜(302)收集,经过二向色镜(303)反射后,通过镜筒透镜(304)进行聚焦成像,为实现拓展景深探测,聚焦面后加入由第一透镜(305)和第二透镜(307)组成的4f系统,空间光调制器(306)放置在第一透镜(305)后的一倍焦距处,相机(308)放置在第二透镜(307)后的一倍焦距处以实现探测成像。
7.根据权利要求6所述的三维高速宽视场层析成像装置,其特征在于,所述空间光调制器(306)施加的相位为 其中,u,v为空间光调制器上的横截坐标,α为增益系数。
8.根据权利要求4所述的三维高速宽视场层析成像装置,其特征在于,所述光束产生装置包括:脉冲激光光源(601)、电光调制器(602)、准直扩束器(603)和第三反射镜(604),其中,脉冲激光光源(601)发出的光经过电光调制器(602)对光强进行调节后入射准直扩束器(603)进行准直、扩束,并由第三反射镜(604)反射至多焦面生成装置。
说明书 :
三维高速宽视场层析成像方法及装置
技术领域
背景技术
像技术中,普通宽场单光子荧光成像光漂白严重、背景荧光强、信噪比低、不具备层析能力;
光片显微成像通过将激发与探测置于垂直的两个方向,降低了光漂白,在透明样本中实现
了层析成像,但其无法应用于具有强散射特性的生物样本;共聚焦点扫描成像通过引入共
焦探测在一定深度范围内有效地抑制了背景荧光,提高了穿透深度,但是限于其扫描元件
的机械惯性,时间分辨率较低;此外,多光子点扫描成像系统通过采用基于非线性光学效应
的长波长激发进一步提高了穿透深度,但是其时间分辨率同样无法满足生物医学研究的实
际需求。
将展宽的光在聚焦面上重新会聚,在聚焦面上实现能量会聚,从而基于非线性光学效应实
现宽视场层析激发。由此,时空聚焦技术实现了宽视场同时激发并保留了层析成像能力,提
高了时间分辨率,即时空聚焦技术具有轴向分辨率高、穿透深度深、背景荧光弱、信噪比强
等优势。
像速度,但是其限于机械惯性对轴向扫描速度的限制,三维高速宽视场层析成像速度仍不
高。
发明内容
维高速同时探测的三维高速宽视场层析成像方法。
并将色散后的光束进行分光以分为多束光,以及调整所述多束光中每束光的聚焦深度以实
现对样品不同深度平面的同时照明;拓展景深探测步骤,对所述样品所激发的光进行会聚
以形成像面,并在像方焦平面或共轭面对所述像面进行相位调制以对不同深度的物面进行
成像。
照明和对不同深度的物品进行清晰成像。该方法能够在保证空间分辨率的前提下,同时激
发物体不同深度的宽视场物面,并实现三维高速同时探测。
行分光以分为多束光,以及调整所述多束光中每束光的聚焦深度以实现对样品不同深度平
面的同时照明;拓展景深探测装置,对所述样品所激发的光进行会聚以形成像面,并在像方
焦平面或共轭面对所述像面进行相位调制以对不同深度的物面进行成像。
照明和对不同深度的物品进行清晰成像以达到在保证空间分辨率的前提下,同时激发物体
不同深度的宽视场物面,并实现三维高速同时探测的目的。
镜208、第二偏振分束器209和第一物镜210,其中,所述光束经过光栅201色散后进入第一偏
振分束器202,经过第一偏振分束器202形成反射光路和透射光路,其中,反射光路的光经过
第一会聚透镜203进行会聚,经过第一半玻片204和第一反射镜205,进入第二偏振分束器
209,透射光路的光经过第二会聚透镜206进行会聚,经过第二半玻片207和第二反射镜208,
进入第二偏振分束器209,反射光路和透射光路的光通过第二偏振分束器209合束后进入第
一物镜210,通过第一物镜210聚焦会聚在样本211。
入由第一透镜305和第二透镜307组成的4f系统,空间光调制器306放置在第一透镜305后的
一倍焦距处,相机308放置在第二透镜307后的一倍焦距处以实现探测成像。
进行调节后入射准直扩束器603进行准直、扩束,并由第三反射镜604反射至多焦面生成装
置。
附图说明
具体实施方式
图描述的实施例是示例性的,旨在用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。
面的同时照明。进一步地,在像方焦平面或共轭面对像面进行相位调制时,例如:施加的相
位为 其中,u,v为SLM上的横截坐标,α为增益系数。
景深,实现对不同深度的物面实现清晰成像。
对其会聚程度进行调制,调制后的每路光束经合束后透过物镜,对样品不同深度平面进行
照明,样本中所激发出的光通过物镜收集后,经过相位调制,被光电探测器接收,对不同深
度的物面实现清晰成像。该方法具有在保证空间分辨率的前提下,同时激发物体不同深度
的宽视场物面,并实现三维高速同时探测的优点。
成像装置10,包括:光束产生装置101、多焦面生成装置102和拓展景深探测装置103。
品不同深度平面的同时照明;拓展景深探测装置103用于对样品所激发的光进行会聚以形
成像面,并在像方焦平面或共轭面对像面进行相位调制以对不同深度的物面进行成像。
器602对光强进行调节后入射准直扩束器603进行准直、扩束,并由第三反射镜604反射至多
焦面生成装置102。对光源进行调制、准直、扩束,并反射到多焦面生成装置102。
示,多焦面生成装置102可由光栅、偏振分束器、透镜、半波片和物镜等构成。多焦面生成装
置102的光路,光源发出的光通过色散器件后,再经过分光器件分成多束光。每路光经过不
同焦距的透镜组进行会聚或准直,最后合束入射至物镜。由于不同光路在物镜入瞳面的聚
焦程度不同,因此经物镜聚焦后聚焦深度不同,形成多焦面。
镜208、第二偏振分束器209和第一物镜210。
半玻片204和第一反射镜205,进入第二偏振分束器209,透射光路的光经过第二会聚透镜
206进行会聚,经过第二半玻片207和第二反射镜208,进入第二偏振分束器209,反射光路和
透射光路的光通过第二偏振分束器209合束后进入第一物镜210,通过第一物镜210聚焦会
聚在样本211。以将光源发出的光分散成多束,并根据不同焦距进行会聚和准直,最后合束
入射物镜,进而产生多焦面。
深探测装置103可以由物镜、镜筒透镜、透镜组、光相位调制器件和光电探测器等构成。拓展
景深探测装置103的光路在物体发射的光被物镜收集,通过透镜会聚形成像面。在像面后加
入中继光路,并在物镜入瞳面的共轭面放置光学相位调制器件进行相位调制,在物面的共
轭面放置光电探测器进行探测成像。
304、第一透镜305、空间光调制器306、第二透镜307和相机308。
第一透镜305和第二透镜307组成的4f系统,空间光调制器306放置在第一透镜305后的一倍
焦距处,相机308放置在第二透镜307后的一倍焦距处以实现探测成像。该拓展景深探测装
置能够收集物体发射的光,会聚光线形成像面,进而对像面进行相位调制,并在物面的共轭
面放置相机进行探测成像,达到拓展景深的作用。
束,经过多焦面产生装置后聚焦在样品301上。样本301受激产生的信号光在探测端的光路
如上段,最后被308sCMOS(即:相机308)采集成像。光源经过调制、多焦面生成、拓展景深和
探测成像,完成三维高速宽视场层析成像。
透镜对其会聚程度进行调制,调制后的每路光束经合束后透过物镜,对样品不同深度平面
进行照明,样本中所激发出的光通过物镜收集后,经过相位调制,被光电探测器接收,对不
同深度的物面实现清晰成像。该发明具有在保证空间分辨率的前提下,同时激发物体不同
深度的宽视场物面,并实现三维高速同时探测的优点。
隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中,“多个”的含义是至少两个,例如两个,三
个等,除非另有明确具体的限定。
部的连通或两个元件的相互作用关系,除非另有明确的限定。对于本领域的普通技术人员
而言,可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
第二特征“之上”、“上方”和“上面”可是第一特征在第二特征正上方或斜上方,或仅仅表示
第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”可以是第
一特征在第二特征正下方或斜下方,或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不
必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任
一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技
术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结
合和组合。
实施例进行变化、修改、替换和变型。