本发明公开了一种马尾松菌根化幼苗育苗方法，该方法包括种子消毒与催芽、育苗基质消毒、菌种获取与菌液制备、种苗截根处理与菌液接种以及移栽管理五个步骤。本发明容易获得目的菌种的菌根化苗，且保证了其侵染率，而且本发明操作过程简单方便，接种效果十分理想，侵染率高达95％以上；切根过程简单，方便快捷，对幼苗伤害较小；本发明所采用的发芽盒与网隔可以循环使用，节约环保。
1.一种马尾松菌根化幼苗育苗方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）种子消毒与催芽：将水选后的种子用0.5%的高锰酸钾浸泡2h，捞出后置于烧杯中盖上薄膜密封静置30分钟，用无菌水冲洗3～4次；再将消毒后的种子置于初始温度为45℃的无菌水中，放入25℃人工气候箱中浸种24h，中途每隔6～8h换一次水，浸种后用湿纱布包裹种子置于温度为25℃的人工气候箱中催芽，待种子露白即可播种；
（2）育苗基质消毒：育苗基质经高压蒸汽灭菌锅在121℃的温度下灭菌2h后冷却，即可播种育苗；
（3）菌种获取与菌液制备：将外生菌根真菌从固体培养基中取出并接种于液体培养基中，于人工气候箱中培养15天后备用；
（4）种苗截根处理与菌液接种：将育苗基质装入发芽盒中至高度1cm处，放入网隔后继续添加育苗基质至离发芽盒边缘1cm处，浇透水后播种，覆基质以将种子盖住即可，不宜过厚，完成播种之后置于人工气候箱中，给予光照和湿度，并及时补充水分，待到种子出土后揭去盒盖；播种15天后将网隔连同基质与幼苗整体抬起，将露出网隔的根平行于底部切掉，同时在发芽盒中网隔底部切根面与育苗基质接触面倒入外生菌根真菌菌液，将网隔放入发芽盒中继续在人工气候箱中培养2周后进行移栽；
（5）移栽管理：将接种苗从发芽盒中拔出并点蘸菌液后移入到苗圃穴盘中即可，同时保持土壤水分湿度，给予光照，防止杂草滋生，防治病虫害侵害。
2.根据权利要求1所述的马尾松菌根化幼苗育苗方法，其特征在于：所述外生菌根真菌来源为马尾松林采集的子实体分离得到。
3.根据权利要求1所述的马尾松菌根化幼苗育苗方法，其特征在于：所述固体培养基是由酒石酸铵0.5g/L、磷酸二氢钾1.0g/L、硫酸镁0.5g/L、葡萄糖20g/L、维生素B1 0.1×10-
3g/L、琼脂20g/L、硼酸8.45mg/L、硫酸锰5mg/L、硫酸铜0.625mg/L、硫酸亚铁6mg/L、氯化锌
2.77mg/L以及钼酸铵0.27mg/L组合而成，其中液体培养基配方同固体培养基一致，但不添加琼脂。
一种马尾松菌根化幼苗育苗方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种马尾松菌根化幼苗育苗方法，属于菌根化幼苗育苗技术领域。
背景技术
[0002] 马尾松(Pinus massoniana Lamb.)是我国针叶树种中种植面积最大、分布最广、全树综合利用程度最高的乡土树种，也是南方最主要的工业用材树种之一，具有重要的经济和生态价值，属于典型的外生菌根树种。外生菌根能够促进植物对矿质营养的吸收，增强植物的抗逆性等，进而促进其生长。但在实际育苗工作在中，得到目标菌种的菌根化马尾松幼苗非常困难。
[0003] 外生菌根是外生菌根真菌与马尾松幼根形成的共生体，具有外延菌丝、菌套、哈蒂氏网等结构，可以促进马尾松对营养物质的吸收，增强其抗逆性。传统的菌根化苗木培育采用拌种、拌土、蘸根等方式进行菌根化苗木的培育，在实践过程中，形成了截根法培育马尾松菌根化幼苗技术。这种技术主要分三步进行，首先将马尾松种子播种于基质中，待马尾松幼苗生长15天后，将小苗依次移出截掉1-2厘米的幼根，最后将截根幼苗点蘸外生菌根真菌培养液后移入土壤空穴中即可。但这个过程繁琐耗时，苗木转移的过程对幼苗伤害较大，影响苗木的进一步发育。因此，有必要研究一种方便快捷的马尾松菌根化幼苗培育方法，从而提高育苗效率。
发明内容
[0004] 为了解决上述技术问题，本发明提供一种马尾松菌根化幼苗育苗方法，该方法使得马尾松菌根化苗育苗更为方便简单，解决了马尾松目标菌种菌根苗育苗过程中截根过程繁琐、菌根苗存活率低、侵染率低等问题。
[0005] 本发明的技术方案：一种马尾松菌根化幼苗育苗方法，包括以下步骤：
[0006] (1)种子消毒与催芽：将水选后的种子用0.5％的高锰酸钾浸泡2h，捞出后置于烧杯中盖上薄膜密封静置30分钟，用无菌水冲洗3～4次；再将消毒后的种子置于初始温度为45℃的无菌水中，放入25℃人工气候箱中浸种24h，中途每隔6～8h换一次水，浸种后用湿纱布包裹种子置于温度为25℃的人工气候箱中催芽，待种子露白即可播种；
[0007] (2)育苗基质消毒：育苗基质经高压蒸汽灭菌锅在121℃的温度下灭菌2h后冷却，即可播种育苗；
[0008] (3)菌种获取与菌液制备：将外生菌根真菌从固体培养基中取出并接种于液体培养基中，于人工气候箱中培养15天后备用；
[0009] (4)种苗截根处理与菌液接种：将育苗基质装入发芽盒中至高度1cm处，放入网隔后继续添加育苗基质至离发芽盒边缘1cm处，浇透水后播种，覆基质以将种子盖住即可，不宜过厚，完成播种之后置于人工气候箱中，给予合适的光照和湿度，并及时补充水分，待到种子出土后揭去盒盖；播种15天后将网隔连同基质与幼苗整体抬起，将露出网隔的根平行于底部切掉，同时在发芽盒中网隔底部切根面与育苗基质接触面倒入外生菌根真菌菌液，将网隔放入发芽盒中继续在人工气候箱中培养2周后进行移栽；
[0010] (5)移栽管理：将接种苗从发芽盒中拔出并点蘸菌液后移入到苗圃穴盘中即可，同时保持土壤水分湿度，给予合适的光照，防止杂草滋生，防治病虫害侵害。
[0011] 上述方法中，所述外生菌根真菌来源为马尾松林采集的子实体分离得到。
[0012] 上述方法中，所述固体培养基是由酒石酸铵0.5g/L、磷酸二氢钾1.0g/L、硫酸镁0.5g/L、葡萄糖20g/L、维生素B10.1×10-3g/L、琼脂20g/L、硼酸8.45mg/L、硫酸锰5mg/L、硫酸铜0.625mg/L、硫酸亚铁6mg/L、氯化锌2.77mg/L以及钼酸铵0.27mg/L组合而成，其中液体培养基配方同固体培养基一致，但不添加琼脂。
[0013] 由于采用上述技术方案，本发明的优点在于：
[0014] 其一，本发明容易获得目的菌种的菌根化苗，且保证了其侵染率。本发明操作过程简单方便，接种效果十分理想，侵染率高达95％以上；
[0015] 其二，切根过程简单，方便快捷，对幼苗伤害较小；
[0016] 其三，本发明所采用的发芽盒与网隔可以循环使用，节约环保。
附图说明
[0017] 图1是本发明中发芽盒的结构示意图；
[0018] 图2是本发明中网隔的结构示意图。
具体实施方式
[0019] 为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0020] 本发明的实施例：一种马尾松菌根化幼苗育苗方法，包括以下步骤：
[0021] (1)挑选质量较好的种子经水选后用5％的高锰酸钾消毒2h后捞出，置于烧杯中盖上薄膜密封静置30分钟，用无菌水冲洗3次后置于初始温度为45℃的无菌水中，然后再置于温度为25℃左右的人工气候箱中浸种24h，中途每6h换一次水，浸种后用湿纱布包裹种子置于温度为25℃的人工气候箱中催芽，待种子露白后播种。
[0022] (2)将育苗基质用高压蒸汽灭菌锅在121℃的温度下灭菌2h后冷却备用。本发明中发芽盒的结构示意图如图1及图2所示，它包括发芽盒1和盒盖2，所述的发芽盒1为一个上宽下窄的倒梯形盒体，在发芽盒1内放置有网隔3，网隔3的形状与发芽盒1相同，且体积小于发芽盒1。使用时，在发芽盒1中装入1cm厚度的育苗基质后，将网隔3放入发芽盒1中继续添加育苗基质至发芽盒1边缘1cm处，将基质浇透水后播种，每盒200～300粒种子。完成播种之后，盖上盒盖2，将发芽盒1置于人工气候箱中，给予合适的光照和湿度，并及时补充水分，待到种子出土后揭去盒盖2。
[0023] (3)将从马尾松林下采集分离得到的外生菌根真菌活化、扩繁。首先将外生菌根真菌接种于Pachlewski固体培养基上，于人工气候箱中培养20天后备用。所述的固体培养基是由酒石酸铵0.5g/L、磷酸二氢钾1.0g/L、硫酸镁0.5g/L、葡萄糖20g/L、维生素B10.1×10-3
g/L、琼脂20g/L、硼酸8.45mg/L、硫酸锰5mg/L、硫酸铜0.625mg/L、硫酸亚铁6mg/L、氯化锌
2.77mg/L以及钼酸铵0.27mg/L组成。其中液体培养基配方同固体培养基一致，但不添加琼脂。菌液制备过程：取250ml三角瓶装入150ml液体培养基，用高压蒸汽灭菌锅在121℃的温度下灭菌30分钟后冷却，从固体培养基上取菌块接种于液体培养基中，整个接种过程在超净工作台完成。将三角瓶置于人工气候箱中培养20～25天备用，温度25℃左右，湿度适应即可。
[0024] (4)待播种15天后将网隔3连同育苗基质与幼苗整体抬起，将露出网隔3的马尾松幼苗的幼根平行于网隔3底部切掉。
[0025] (5)在网隔3底部切根面与发芽盒中育苗基质接触面倒入100ml外生菌根真菌菌液，把含有基质与幼苗的网隔3整体放入发芽盒中继续在人工气候箱中培养2周后进行移栽。移栽时小心将幼苗拔出，点蘸同种菌液后移入穴盘中即可。
[0026] (6)管理过程主要保持土壤水分湿度，防止杂草滋生，及时防治病虫害的侵害，完成整个过程即可得到目的菌种的菌根化幼苗，整个过程在3月初进行。
