一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂及其制备方法

摘要

本发明提供一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂及其制备方法。本发明的口腔喷剂包括原料：芹菜素，乳糖醇，金合欢醇，赤藓糖醇，表没食子儿茶素没食子酸酯，蜂胶提取物，薄荷醇，甘草查尔酮A，乙醇，无菌水。本发明的口腔喷剂具有明显的抗菌作用，尤其对龋齿的主要致病菌变异链球菌具有良好的抗菌效果，可抑制变异链球菌等的生长，并且对变异链球菌等形成的生物膜有良好的去除能力，因此能够有效的辅助龋齿治疗及预防龋齿；同时利于上皮细胞再生从而利于溃疡伤口愈合，具有明显的抗菌、消炎、促溃疡愈合作用。

权利要求

1.一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，其特征在于，包括如下百分比的原料制成：各组分之和为百分之百。

2.根据权利要求1所述的用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，其特征在于，包括如下百分比的原料制成：各组分之和为百分之百。

3.根据权利要求1所述的用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，其特征在于，所述乙醇为体积浓度≧95.0％的食用酒精。

4.根据权利要求1所述的用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，其特征在于，所述表没食子儿茶素没食子酸酯、乳糖醇、赤藓糖醇、左旋薄荷醇、TT-金合欢醇、芹菜素、甘草查尔酮A均为纯度≥98％的食品或者药品级，所述蜂胶提取物中蜂胶黄酮的质量含量≥40％，蜂胶提取物为食品或者药品级。

5.如权利要求1-4任一项所述的用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂的制备方法，包括步骤：(1)将乳糖醇、赤藓糖醇、表没食子儿茶素没食子酸酯溶于无菌水中，混合均匀得溶液A；

(2)将芹菜素、TT-金合欢醇、蜂胶提取物、甘草查尔酮A、左旋薄荷醇溶于乙醇中，混合均匀得溶液B；

(3)将溶液A和溶液B混合均匀，经过滤除菌，灌装于喷瓶中即得。

说明书

一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂及其制备方法，属于医药技术领域。技术背景

[0002] 龋齿俗称虫牙、蛀牙，是一种细菌性疾病，可以引发牙髓炎和根尖周炎，甚至能引起牙槽骨和颌骨炎症；如龋齿治疗不及时，病变继续发展，将形成龋齿洞，逐渐发展至牙冠完全破坏消失，最终导致牙齿丧失。龋齿发病率高，分布广泛，是口腔主要常见疾病之一，世界卫生组织已将其与肿瘤和心血管疾病并列为人类三大重点防治疾病。

[0003] 细菌是龋病发生的必要条件，龋齿的主要致病菌目前被认为是变异链球菌，因此对变异链球菌的抑制和清除在龋齿的预防和治疗过程中也是重要的一步；龋病的发生也是一个较长的过程，在龋病发生过程中及时除去致病因素可以使龋齿终止进展，防止龋齿向更为严重的方向发展或继发牙髓炎、根尖周炎等，因此在龋齿的治疗及预防过程中需要对致龋的变异链球菌及时清除杀菌。

[0004] 目前临床龋齿的治疗主要为去净龋坏组织充填治疗，缺少对龋齿致病细菌的治疗策略，并且在预防龋齿阶段的药品也较少。中国专利文献CN105106040A公开了一种口腔护齿喷剂，其配方由天然植物精油、表面活性剂、薄荷脑、乙醇、甜菊糖、薄荷香精、食用色素、柠檬酸钠、氟化钠及去离子水组成。该发明提供的口腔护齿喷剂可预防牙龈炎、减少牙齿菌斑、消除口腔异味，预防儿童虫牙龋齿等，但该发明对龋齿预防治疗的针对性较差，防龋功效作用较弱，天然活性物质较少,抗菌、消炎、促进伤口愈合功效欠佳；且氟化钠有毒副作用。

[0005] 因此，急需一种可以有效抑制变异链球菌的可长期使用且无毒副作用的医疗用品，来增加对龋齿的防治效果。

发明内容

[0006] 针对现有技术的不足，本发明提供一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂。本发明得到的口腔喷剂具有明显的抗菌作用，尤其对龋齿的主要致病菌变异链球菌具有良好的抗菌效果，可抑制变异链球菌等的生长，并且对变异链球菌等形成的生物膜有良好的去除能力，因此能够有效的辅助龋齿治疗及预防龋齿；同时利于上皮细胞再生从而利于溃疡伤口愈合，具有明显的抗菌、消炎、促溃疡愈合作用。

[0007] 本发明还提供一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂的制备方法。

[0008] 本发明的技术方案如下：

[0009] 一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，包括如下百分比的原料制成：

[0010]

[0011]

[0012] 各组分之和为百分之百。

[0013] 根据本发明优选的，所述用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，包括如下百分比的原料制成：

[0014]

[0015] 各组分之和为百分之百。

[0016] 根据本发明优选的，所述用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，包括如下百分比的原料制成：

[0017]

[0018] 各组分之和为百分之百。

[0019] 根据本发明优选的，所述TT-金合欢醇，即反式-反式金合欢醇。

[0020] 根据本发明优选的，所述薄荷醇为左旋薄荷醇。

[0021] 根据本发明优选的，所述乙醇为体积浓度≧95.0％的食用酒精。

[0022] 根据本发明，所述蜂胶提取物为蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂(树胶)，混入其上腭腺、蜡腺的分泌物加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物，其成分复杂，主要成分为黄酮类化合物、萜类化合物、有机酸类、芳香性醛类及多种氨基酸酶、维生素、矿物质等。常用做营养补充剂、食品和饮料添加剂。

[0023] 根据本发明优选的，所述表没食子儿茶素没食子酸酯、乳糖醇、赤藓糖醇、薄荷醇、TT-金合欢醇、芹菜素、甘草查尔酮A均为纯度≥98％的食品或者药品级，所述蜂胶提取物中蜂胶黄酮的质量含量≥40％，蜂胶提取物为食品或者药品级。

[0024] 上述用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂的制备方法，包括步骤：

[0025] (1)将乳糖醇、赤藓糖醇、表没食子儿茶素没食子酸酯溶于无菌水中，混合均匀得溶液A；

[0026] (2)将芹菜素、TT-金合欢醇、蜂胶提取物、甘草查尔酮A、薄荷醇溶于乙醇中，混合均匀得溶液B；

[0027] (3)将溶液A和溶液B混合均匀，经过滤除菌，灌装于喷瓶中即得。

[0028] 根据本发明，步骤(3)中所述喷瓶可市购获得。

[0029] 本发明中芹菜素(Apigenin)为天然植物提取物，具有天然抗菌活性，同时具有抗肿瘤、病毒，保护心脑血管等生物活性作用；本发明芹菜素优选为食品或药品级，可市购获得。

[0030] 本发明中EGCG为天然植物提取物，是天然活性杀菌物质，可抑制变异链球菌生长，减轻变异链球菌和粘放线菌对口腔获得性膜的粘附，同时具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗动脉硬化、抗血栓形成、抗炎以及抗肿瘤作用。本发明EGCG优选为纯度大于等于98％的食品或者药品级，可市购获得。

[0031] 本发明中蜂胶提取物对细菌、真菌、病毒等口腔病源有显著疗效，并对口腔正常细胞无不良毒副作用；可抑制变异链球菌等病原菌的糖代谢系统；并且有利于上皮细胞再生，从而利于溃疡伤口愈合；本发明蜂胶提取物优选为高纯度食品或药品级，可市购获得。

[0032] 本发明中TT-金合欢醇可抑制变异链球菌等致病菌的多糖的代谢合成和其生物膜的形成，从而有利于龋齿的防治；本发明TT-金合欢醇优选为纯度大于等于98％的食品或药品级，可市购获得。

[0033] 本发明中赤藓糖醇可抑制变异链球菌，粘放线菌等龋齿致病菌，并且对其形成的生物膜有良好的去除能力，且不参与糖代谢的同时有爽口纯正的甜味；本发明赤藓糖醇优选为高纯度食品或药品级，可市购获得。

[0034] 本发明中甘草查尔酮A为天然植物提取物，为天然活性杀菌物质，有明显的抗菌、消炎、促溃疡愈合作用，兼可作为香料；本发明甘草查尔酮A优选为食品或药品级，可市购获得。

[0035] 本发明中乳糖醇为香料，同时具有辅助抗变异链球菌的功能，不参与细菌糖代谢，同时不引起龋齿；本发明乳糖醇优选为高纯度食品或药品级，可市购获得。

[0036] 本发明中薄荷醇优选为左旋薄荷醇，为天然植物提取物，具有清凉止痛，辅助抗炎，清新口感的作用；本发明薄荷醇优选为高纯度食品或药品级，可市购获得。

[0037] 有益效果：

[0038] 1、本发明的目的是为了增加临床及日常生活中对龋齿的防治方式及提高治疗和防治效果，并且增加龋齿防治的便捷性；帮助龋齿易感人群在龋齿较轻微时防止龋齿向更为严重的方向继发疾病，预防龋齿破坏范围的增加，减少牙体、牙髓治疗或修复治疗后龋齿的发生；同时对口腔黏膜炎症有一定消炎作用，并能够促进溃疡愈合；减少家族倾向龋齿发生的机率。

[0039] 2、本发明中表没食子儿茶素没食子酸酯、蜂胶提取物、TT-金合欢醇、芹菜素作为主要成分，协同赤藓糖醇、甘草查尔酮A等，使本发明制备的口腔喷剂具有优异的抗菌作用，可抑制变异链球菌、粘放线菌等龋齿致病菌的生长，抑制病原菌的糖代谢，能够有效去除变异链球菌和粘放线菌等致病菌形成的生物膜，并有效抑制上述致病菌生物膜的形成，从而有利于龋齿的防治；本发明的口腔喷剂有利于上皮细胞再生，从而利于溃疡伤口愈合；本发明口腔喷剂所用原料绿色安全，对人体无不良毒副作用；本发明各种原料组分的相互协同作用，才达到了本发明的优良效果。

具体实施方式

[0040] 下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。

[0041] 同时下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

[0042] 下述中，芹菜素，医药级，纯度98％，陕西森弗天然制品有限公司有售；乳糖醇，食品级，纯度99％，河南旗诺食品配料有限公司有售；TT-金合欢醇，药品级，99.5％，金宇化工公司有售；赤藓糖醇，食品级，纯度99％，陕西森弗天然制品有限公司有售；表没食子儿茶素没食子酸酯，食品级，纯度98％，陕西森弗天然制品有限公司有售；蜂胶提取物，食品级，蜂胶黄酮质量含量为40％，陕西森弗天然制品有限公司有售；左旋薄荷醇，食品级，纯度99％，深圳鼎诚植物香料公司有售；甘草查尔酮A，药品级，纯度98％，康宝泰精细化工有限公司有售；乙醇均为体积浓度为95％食用酒精，食品级，中和盛泰公司有售。

[0043] 实施例1

[0044] 一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，包括如下百分比的原料制成：

[0045]

[0046] 各组分之和为百分之百。

[0047] 上述用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂的制备方法，包括步骤：

[0048] (1)分别称取2g乳糖醇、1g赤藓糖醇、2g EGCG溶于500g无菌水中配成溶液，混匀，得溶液A；

[0049] (2)分别称取1g芹菜素、2g TT-金合欢醇、3g蜂胶提取物、1g甘草查尔酮A、3g左旋薄荷醇溶于50g体积浓度为95％的食用酒精，混匀得溶液B；

[0050] (3)将溶液A和溶液B混合均匀，加入无菌水至1000g，经过滤除菌，灌装于喷瓶中即得。

[0051] 实施例2

[0052] 一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，包括如下百分比的原料制成：

[0053]

[0054] 各组分之和为百分之百。

[0055] 上述用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂的制备方法，包括步骤：

[0056] (1)分别称取1g乳糖醇、0.5g赤藓糖醇、1g EGCG溶于500g无菌水中配成溶液，混匀，得溶液A；

[0057] (2)分别称取0.5g芹菜素、1g TT-金合欢醇、2g蜂胶提取物、0.5g甘草查尔酮A、2g左旋薄荷醇溶于20g体积浓度为95％的食用酒精，混匀得溶液B；

[0058] (3)将溶液A和溶液B混合均匀，加入无菌水至1000g，经过滤除菌，灌装于喷瓶中即得。

[0059] 实施例3

[0060] 一种用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂，包括如下百分比的原料制成：

[0061]

[0062]

[0063] 各组分之和为百分之百。

[0064] 上述用于辅助龋齿治疗及预防龋齿的口腔喷剂的制备方法，包括步骤：

[0065] (1)分别称取3g乳糖醇、2g赤藓糖醇、3g EGCG溶于500mL无菌水中配成溶液，混匀，得溶液A；

[0066] (2)分别称取2g芹菜素、3g TT-金合欢醇、4g蜂胶提取物、2g甘草查尔酮A、4g左旋薄荷醇溶于80g体积浓度为95％的食用酒精，混匀得溶液B；

[0067] (3)将溶液A和溶液B混合均匀，加入无菌水至1000g，经过滤除菌，灌装于喷瓶中即得。

[0068] 对比例1

[0069] 一种口腔喷剂，原料组成如实施例1所述，所不同的是：组分中无芹菜素，其它与实施例1一致。

[0070] 上述口腔喷剂的制备方法与实施例1一致。

[0071] 对比例2

[0072] 一种口腔喷剂，原料组成如实施例1所述，所不同的是：组分中无TT-金合欢醇，其它与实施例1一致。

[0073] 上述口腔喷剂的制备方法与实施例1一致。

[0074] 对比例3

[0075] 一种口腔喷剂，原料组成如实施例1所述，所不同的是：组分中无赤藓糖醇，其它与实施例1一致。

[0076] 上述口腔喷剂的制备方法与实施例1一致。

[0077] 对比例4

[0078] 一种口腔喷剂，原料组成如实施例1所述，所不同的是：组分中无表没食子儿茶素没食子酸酯，其它与实施例1一致。

[0079] 上述口腔喷剂的制备方法与实施例1一致。

[0080] 对比例5

[0081] 一种口腔喷剂，原料组成如实施例1所述，所不同的是：组分中无蜂胶提取物，其它与实施例1一致。

[0082] 上述口腔喷剂的制备方法与实施例1一致。

[0083] 对比例6

[0084] 一种口腔喷剂，原料组成如实施例1所述，所不同的是：组分中无甘草查尔酮A，其它与实施例1一致。

[0085] 上述口腔喷剂的制备方法与实施例1一致。

[0086] 试验例1

[0087] 对变异链球菌最小抑菌浓度MIC和最小杀菌浓度MBC的测定

[0088] 1、待测样品的制备

[0089] 将实施例1和对比例1-6制备的口腔喷剂分别与无菌水混合配制不同浓度的喷雾剂溶液(8000、4000、2000、1000、500、250、125、62.5、32.15、15.625、7.8、3.9μg/mL)，作为待测样品；待测样品浓度的计算方法为：口腔喷剂的密度*口腔喷剂的体积/(口腔喷剂和无菌水的总体积)，不同口腔喷剂密度均约为1mg/mL。

[0090] 同时分别配制不同浓度(8000、4000、2000、1000、500、250、125、62.5、32.15、15.625、7.8、3.9μg/mL)的芹菜素乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为10％)、EGCG的水溶液、赤藓糖醇的水溶液、蜂胶提取物的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为
10％)、TT-金合欢醇的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为10％)，作为待测样品。

[0091] 2、试验方法

[0092] 将上述待测样品分别加入灭菌的96孔细胞培养板中；将变异链球菌悬浊液浓度调至0.5麦氏比浊，用BHI肉汤稀释1000倍后，向上述每孔中加入100μL，密封后于37℃培养18-24h后进行观察；以孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC；继续培养48h后观察细菌生长情况，涂平板观察，无菌生长孔所含药物最低浓度为MBC。测试结果如下表所示：

[0093] 表1最小抑菌浓度MIC和最小杀菌浓度MBC测试数据

[0094]样品 MIC(μg/mL) MBC(μg/mL)
芹菜素 500 1000
EGCG 500 500
蜂胶提取物 1000 1000
赤藓糖醇 2000 2000
TT金合欢醇 1000 1000
对比例1 250 250
对比例2 62.5 125
对比例3 15.625 32.15
对比例4 125 125
对比例5 125 62.5
对比例6 62.5 62.5
实施例1 3.9 3.9

[0095] 结论：本发明制备的口腔喷剂较对比例以及单一组分对变异链球菌具有更好的杀菌灭菌效果，说明各原料之间发挥协同作用以达到优异的抗菌性能。

[0096] 试验例2

[0097] 对生物膜形成的影响

[0098] 1、待测样品的制备

[0099] 将实施例1和对比例1-6制备的口腔喷剂和无菌水混合分别配制浓度为试验例1所得最小杀菌浓度的喷雾剂溶液，作为待测样品；

[0100] 同时分别配制浓度2mg/mL(足以达到最小杀菌浓度)的芹菜素乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为10％)、EGCG的水溶液、赤藓糖醇的水溶液、蜂胶提取物的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为10％)、TT-金合欢醇的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为10％)，作为待测样品。

[0101] 2、试验方法

[0102] 将培养24h后的变异链球菌用BHI肉汤稀释至655nm吸光度为0.2；取灭菌的96孔细胞培养板，向板孔中分别加入待测样品和100μL上述菌液，37℃培养48h后，吸除培养液和悬浮细菌，孔中只留下生物膜，并用无菌蒸馏水冲洗生物膜3次，然后向上述孔中分别加入浓度为0.4wt％的结晶紫对生物膜染色15min；无菌水冲洗4次除去未结合的结晶紫，37℃干燥2h；向上述每孔中加入100μL体积浓度为95％的乙醇，摇板10min将生物膜中的色素释放至乙醇中，测试乙醇的吸光度；设置对照组，对照组的孔中只加入水，吸光度作为100％。测试结果如下表所示：

[0103] 表2不同样品对生物膜形成的影响

[0104]样品 变异链球菌生物膜形成率
芹菜素 80％
EGCG 50％
蜂胶提取物 55％
赤藓糖醇 50％
TT金合欢醇 30％
对比例1 8％
对比例2 25％
对比例3 20％
对比例4 20％
对比例5 22％
对比例6 15％
实验例1 ＜1％

[0105] 结论：各单独组分以及对比例中的口腔喷剂虽然在一定程度下也能抑制变异链球菌形成生物膜，但是明显不如本发明实施例1制备的口腔喷剂对变异链球菌生物膜形成的抑制效果明显，说明本发明各原料之间发挥协同作用才能有效抑制变异链球菌生物膜的形成。

[0106] 试验例3

[0107] 对致病菌生物膜去除的能力

[0108] 1、待测样品的制备

[0109] 将实施例1和对比例1-6制备的口腔喷剂和无菌水混合分别配制浓度为试验例1所得最小杀菌浓度的喷雾剂溶液，作为待测样品；

[0110] 同时分别配制浓度为2mg/mL(足以达到最小杀菌浓度)的芹菜素乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为10％)、EGCG的水溶液、赤藓糖醇的水溶液、蜂胶提取物的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为10％)、TT-金合欢醇的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为10％)，作为待测样品。

[0111] 2、试验方法

[0112] 将培养24h后的变异链球菌用BHI肉汤稀释至655nm吸光度为0.2，并取100μL分别加入96孔细胞培养板的孔中，37℃培养48h至生物膜形成；上述孔中分别加入待测样品，37℃厌氧培养20min后，吸除培养液和悬浮细菌，孔中只留下生物膜，用无菌水冲洗三次，孔中的生物膜用浓度为0.4wt％的结晶紫染色15min，再用无菌水冲洗4次，干燥；然后向每孔加入100μL体积浓度为95％乙醇，摇板10min将生物膜中的色素释放至乙醇中，测试乙醇的吸光度；设置对照组，对照组的孔中只加入水，吸光度作为100％。测试结果如下表所示：

[0113] 表3不同样品对生物膜去除能力的测试数据

[0114]样品 变异链球菌生物膜留存率
芹菜素 85％
EGCG 55％
蜂胶提取物 35％
赤藓糖醇 20％
TT金合欢醇 30％
对比例1 8％
对比例2 12％
对比例3 18％
对比例4 8％
对比例5 15％
对比例6 10％
实施例1 ＜1％

[0115] 结论：各组分以及对比例的口腔喷剂虽然也能去除已形成的变异链球菌生物膜，但效果明显不如本发明制备的口腔喷剂，说明本发明各原料组分发挥协同作用从而对已形成的变异链球菌生物膜具有的优异的去除能力。