海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法及其装置

摘要

本发明公开了一种海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法，采用物理隔离的方式形成无菌孵化环境，利用营养液辅助离体卵的孵化，通过不停摆动卵块模拟亲本对受精卵的保护，该方法不仅具有较高的孵化率，而且孵化后的幼蟹更健康、强壮。本发明还公开了一种用于实现上述方法的装置。

权利要求

1.一种海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法，其特征是步骤如下：

步骤1.前期准备：选取健壮的抱卵亲蟹，进行体表消毒，连卵块带附肢剪下，低温冷藏备用；准备密闭的孵化仓，作无菌处理，孵化仓内配灭菌海水，盐度为25 28‰，pH值为7.8~ ~

8.2；

步骤2.孵化：通过镜检确认卵块的发育状况，将相同/相近发育阶段的卵块放入孵化仓内，卵块悬空放置、不要沉底，且不停摆动；每隔3d换水一次以排放废弃物，持续通入无菌空气并排气，适时添加磷酸缓冲液以平衡pH值；每日升温1℃、至20℃后稳定保持；维持上述过程，直至孵化出蚤状幼体；

步骤3.转苗：蚤状幼体孵化后3 10h内，利用趋光性吸引蚤状幼体至孵化仓上部，2 3h~ ~后关闭孵化仓上部光源；打开在转苗通道中由暗至亮的光源，吸引蚤状幼体至育苗池，待转苗完成80%左右时，关闭转苗通道中光源；打开孵化仓仓底的排污口，排去仓内活力不好的蚤状幼体、死卵以及卵壳。

2.根据权利要求1所述的海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法，其特征在于：所述灭菌海水中添加有蛋氨酸、维生素A、叶酸、脂肪酸复合物、葡萄糖酸钙及葡萄糖中的一种或多种，还添加有磷酸缓冲液。

3.根据权利要求2所述的海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法，其特征在于：所述脂肪酸复合物为15:0、18:3n3、20:1n7、14:1n7四种脂肪酸的复合物。

4.一种海水蟹离体卵的人工孵化与转苗装置，其特征在于：包括孵化仓（1）、转苗通道（2）、育苗池（3）及供气装置（4），所述孵化仓（1）配有温控装置和pH计；

所述孵化仓（1）分为下方的孵化区与上方的转苗区；所述孵化区中设置有若干用于放置卵块的托盘（101），所述托盘（101）可沿竖直方向小幅缓速上下摆动、或绕安装轴心小幅缓速旋转摆动，所述孵化区底部设进气口（102）与排污口（103）；所述转苗区上方设补水口（104）、排气口（105）以及引诱灯（106）；

所述转苗通道（2）连通转苗区与育苗池（3），所述转苗通道（2）的进口设置于转苗区下部、并配有阀门（21），所述转苗通道（2）的中部设有暗光源（22），所述转苗通道（2）在育苗池（3）处的出口设有亮光源（23）；

所述供气装置（4）包括依次连通直至进气口（12）的气源（41）、药水灭菌仓（42）及水洗仓（43）。

5.根据权利要求4所述的海水蟹离体卵的人工孵化与转苗装置，其特征在于：所述托盘（101）的下方设有进气挡板（107）。

6.根据权利要求4所述的海水蟹离体卵的人工孵化与转苗装置，其特征在于：所述托盘（101 ）为带孔网板。

说明书

海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法及其装置

技术领域

[0001] 本发明涉及水产养殖技术领域，具体涉及到一种海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法及其装置。

背景技术

[0002] 海水蟹人工育苗过程中，将有很大一部分亲蟹在抱卵期间死亡，这会影响抱卵亲蟹正常排放幼体，从而影响亲蟹正常排放幼体，造成不小的经济损失，因此充分利用死亡的抱卵亲蟹的卵，进行人工离体孵化，具有十分重要的意义。研究表明，尽管抱卵亲蟹与蟹卵无生理联系，但抱卵亲蟹对蟹卵仍起到保护作用，使之能免受真菌的侵袭。当抱卵亲蟹死亡后，离体卵块很快就会发霉腐败，因此如何防止真菌对离体卵的侵袭，是利用海水蟹离体卵育苗的关键问题。

[0003] 关于海水蟹离体卵人工孵化的研究，目前仅停留在论证其可行性的阶段，而生产中对离体卵的有效利用更是空白。研究中，在海水蟹离体卵的人工孵化中使用药物是防治真菌的一种有效方法，但长期使用药物会使蟹幼体体质弱，影响养成期的存活率，另外还会使真菌具有抗药性，从而引发更加严重的病害。鉴于此，申请人旨在研发一种健康、安全、高效的海水蟹离体卵人工孵化方法。

发明内容

[0004] 为了提高水蟹离体卵人工孵化的孵化率，并使幼体更健壮，本发明提供了一种海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法、及其装置。

[0005] 本发明采用的技术方案如下：

[0006] 一种海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法，步骤如下：

[0007] 步骤1.前期准备：选取健壮的抱卵亲蟹，进行体表消毒，连卵块带附肢剪下，低温冷藏备用；准备密闭的孵化仓，作无菌处理，孵化仓内配灭菌海水，盐度为25 28‰，pH值为~7.8 8.2；
~

[0008] 步骤2.孵化：通过镜检确认卵块的发育状况，将相同/相近发育阶段的卵块放入孵化仓内，卵块悬空放置、不要沉底，且不停摆动；每隔3d换水一次以排放废弃物，持续通入无菌空气并排气，适时添加磷酸缓冲液以平衡pH值；每日升温1℃、至20℃后稳定保持；维持上述过程，直至孵化出蚤状幼体；

[0009] 步骤3.转苗：蚤状幼体孵化后3 10h内，利用趋光性吸引蚤状幼体至孵化仓上部，2~3h后关闭孵化仓上部光源；打开在转苗通道中由暗至亮的光源，吸引蚤状幼体至育苗池，~
待转苗完成80%左右时，关闭转苗通道中光源；打开孵化仓仓底的排污口，排去仓内活力不好的蚤状幼体、死卵以及卵壳等废弃物。

[0010] 所述灭菌海水中添加有蛋氨酸、维生素A、叶酸、脂肪酸复合物、葡萄糖酸钙及葡萄糖中的一种或多种，还添加有磷酸缓冲液。

[0011] 所述脂肪酸复合物为15:0、18:3n3、20:1n7、14:1n7四种脂肪酸的复合物。

[0012] 一种海水蟹离体卵的人工孵化与转苗装置：包括孵化仓、转苗通道、育苗池及供气装置，所述孵化仓配有温控装置和pH计；所述孵化仓分为下方的孵化区与上方的转苗区；所述孵化区中设置有若干用于放置卵块的托盘，所述托盘可沿竖直方向小幅缓速上下摆动、或绕安装轴心小幅缓速旋转摆动，所述孵化区底部设进气口与排污口；所述转苗区上方设补水口、排气口以及引诱灯；所述转苗通道连通转苗区与育苗池，所述转苗通道的进口设置转苗区下部、并配有阀门，所述转苗通道的中部设有暗光源，所述转苗通道在育苗池处的出口设有亮光源；所述供气装置包括依次连通直至进气口的气源、药水灭菌仓及水洗仓。

[0013] 所述托盘的下方设有进气挡板。

[0014] 所述托盘为带孔网板。

[0015] 本发明的有益效果是：本发明采用物理隔离的方式形成无菌孵化环境，利用营养液辅助离体卵的孵化，通过不停摆动卵块模拟亲本对受精卵的保护，上述方法不仅具有较高的孵化率，而且孵化后的幼蟹更健康、强壮。

附图说明

[0016] 图1是本发明实施例的结构示意图。

[0017] 图2是本发明实施例中孵化仓的结构示意图。

[0018] 图3是本发明实施例中孵化仓的另一种结构示意图。

[0019] 孵化仓1、转苗通道2、育苗池3、供气装置4、托盘101、进气口102、排污口103、补水口104、排气口105、引诱灯106、进气挡板107、换热管108、温度口109、pH值口110、上方视镜111、带镜人孔112、阀门21、暗光源22、亮光源23、气源41、药水灭菌仓42、水洗仓43。

具体实施方式

[0020] 下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。

[0021] 一、实施例中海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法。

[0022] 步骤1.前期准备：选取健壮的抱卵亲蟹，采用200x10-6的福尔马林进行体表初步消毒；连卵块带附肢剪下，先用1g/m3的呋喃西林浸浴10～15 min，然后用10g/m3的孔雀石绿浸浴30 45min，再用无菌海水冲刷，卵块完成二次消毒后在4 8℃条件下低温冷藏备用，冷藏~ ~周期限制在15d内；选择相对密闭的容器作为孵化仓，作无菌处理，孵化仓内配灭菌海水，盐度为25 28‰，pH值为7.8 8.2。另外，卵块也可由刚死亡（8h之内）的抱卵亲蟹上获取。
~ ~

[0023] 步骤2.孵化：通过镜检确认卵块上少量受精卵的发育状况，由于同一卵块上的受精卵的孵化周期基本一致，因此能够确认卵块整体的发育状况，将相同/相近发育阶段的卵块放入孵化仓内，可使得幼体的发育状态、个体大小基本一致。卵块悬空放置、不要沉底，且不停摆动，用以模拟亲本对蟹卵的保护作用。每隔3d换水一次以排放废弃物，持续通入无菌空气并排气，适时添加磷酸缓冲液以平衡pH值；每日升温1℃、至20℃后稳定保持；维持上述过程，直至孵化出蚤状幼体；

[0024] 虽然受精卵在孵化过程中基本上无需外部营养，但由于受精卵长期浸泡在灭菌海水中，因此在灭菌海水中添加适当的营养液可促进其孵化。通常，灭菌海水中可添加蛋氨酸、维生素A、叶酸、脂肪酸复合物、葡萄糖酸钙及葡萄糖中的一种或多种，还需适当添加磷酸缓冲液。其中：

[0025] （1）蛋氨酸可提高机体对蛋白的利用率进而提高其孵化体重。

[0026] （2）维生素A可通过在卵泡成熟时促进减数分裂的恢复及改变卵泡激素环境从而影响胚胎发。

[0027] （3）叶酸在细胞分裂中有三个重要作用，一是作为体内生化反应中一碳单位转移酶系的辅酶，起着一碳单位传递体的作用，二是参与嘌呤和胸腺嘧啶的合成，进一步合成DNA和RNA，三是参与氨基酸代谢，在甘氨酸与丝氨酸、组氨酸和谷氨酸、同型半胱氨酸与蛋氨酸之间的相互转化过程中充当一碳单位的载体。

[0028] （4）试验中，15:0、18:3n3、20:1n7、14:1n7 四种脂肪酸在蟹卵巢发育为胚胎后，含量发生显著变化，因此其在发育过程中有着重要的生理作用。

[0029] （5）钙是甲壳动物外骨骼的重要组成成分，也是神经冲动、营养物质吸收、肌肉收缩等众多生理活动的必需物质，葡萄糖酸钙即是为了补从钙质。

[0030] （6）葡萄糖是细胞最直接的能量物质。

[0031] （7）海产甲壳类受精卵最佳孵化pH=8.0，蟹卵孵化过程中呼吸作用产生CO2，蛋白质代谢产生NH3，这些气体溶于水会使其pH值迅速下降，因此需要适时补充磷酸缓冲液以平衡pH值。

[0032] 经过试验得出，按照蛋氨酸：5g/L，维生素A：1g/L，叶酸：1g/L，脂肪酸复合物（15:0、18:3n3、20:1n7、14:1n7）：2g/L，葡萄糖酸钙：0.5g/L，葡萄糖：8g/L的比例添加到灭菌海水，配制成营养液对离体卵孵化的促进作用最明显。

[0033] 步骤3.转苗：蚤状幼体孵化后3 10h内，利用趋光性吸引蚤状幼体至孵化仓上部，2~3h后关闭孵化仓上部光源；打开在转苗通道中由暗至亮的光源，吸引蚤状幼体至育苗池，~
待转苗完成80%左右时（剩余20%视为劣苗），关闭转苗通道中光源；打开孵化仓仓底的排污口，排去仓内活力不好的蚤状幼体、死卵以及卵壳等废弃物。利用趋光性进行转苗除了操作方便外，还对幼体进行筛选，淘汰不够健康、强壮的幼体。

[0034] 综合来说，本实施例采用物理隔离的方式形成无菌孵化环境，代替传统的药物灭菌，使得蟹卵的孵化率高，孵化后的幼体更健康；利用营养液辅助离体卵的孵化，幼蟹更强壮；而不停摆动卵块还能一定程度模拟亲本对受精卵的保护，进一步提高孵化率；利用趋光性进行转苗，不仅不会对幼体造成损伤，而且还对幼体进行筛选，淘汰活力不足的幼体，保证幼体的质量。

[0035] 二、实施例中海水蟹离体卵的人工孵化与转苗装置。

[0036] 附图1、图2、图3中所示，是一种用于实现上述海水蟹离体卵的人工孵化与转苗方法的装置：

[0037] 包括孵化仓1、转苗通道2、育苗池3及供气装置4，孵化仓1配有温控装置和pH计；孵化仓1分为下方的孵化区与上方的转苗区；孵化区中设置有若干用于放置卵块的托盘101，托盘101可沿竖直方向小幅缓速上下摆动、或绕安装轴心小幅缓速旋转摆动，孵化区底部设进气口102与排污口103；转苗区上方设补水口104、排气口105以及引诱灯106；转苗通道2连通转苗区与育苗池3，转苗通道2的进口设置转苗区下部、并配有阀门21，转苗通道2的中部设有暗光源22，转苗通道2在育苗池3处的出口设有亮光源23；供气装置4包括依次连通直至进气口102的气源41、药水灭菌仓42及水洗仓43。

[0038] 实施例中的孵化仓1为相对密闭的容器，其正面设有带镜人孔112，便于放置卵块或进行其他操作，上方视镜111与带镜人孔112还作为检视窗口，便于时刻观察孵化仓内情况。温控装置采用温控仪与换热管108相结合的方式，温控仪通过温度口109接入，控制换热管108进行动作，换热管108与电热等温控方式相比反应比较缓慢，但其波动小，性能稳定，不易出现故障，适于在海水蟹孵化中实用。pH计通过pH值口110接入，可采用手动或自动的方式从补水口104补充磷酸缓冲液以平衡pH值。

[0039] 实施例中的托盘101的小幅缓速摆动可通过多种方式实现，附图2、附图3各自提供了一种。此处的小幅缓速摆动，以卵块在无束缚状态下不会从托盘101上脱落为宜。此外，托盘101为带孔网板，以避免卵块与托盘101接触部位的受精卵供氧不足。

[0040] 实施例中供气装置4的气源41采用普通增氧机，药水灭菌仓42容放福尔马林，水洗仓43内为无菌水。供气装置4生成的无菌空气经进气口102进入孵化仓1，托盘101的下方设有进气挡板107，使得气体沿孵化仓1内壁向上，最后由排气口105排除。此结构能防止气流或水流直吹卵块，避免受精卵受损。

[0041] 三、具体实施装置及结果。

[0042] 孵化仓1选用Φ900x1800x3mm、有效容积为1200L的SUS304不锈钢罐，孵化仓1中卵块数量为8 15个，托盘101的摆动由伺服带动，其摆动频率控制在每分钟10 15次；孵化仓1~ ~内的换热管108采用Φ32 的SUS304不锈钢管，其总换热面积为2.5㎡左右，对应配备有恒温水箱，更进一步，可以将孵化仓1整体放置在恒温间。

[0043] 气源41为50W小型增氧机、且设置在户外，药水灭菌仓42、水洗仓43均为Φ350x500x2mm、有效容积为50L的SUS304不锈钢罐。

[0044] 孵化仓1顶部的引诱灯106光照强度为3000 4000 Lux，转苗通道2上暗光源22的光~照强度为1500 2000 Lux、亮光源23的光照强度为6000 8000 Lux。
~ ~

[0045] 结合第一部分中内容，采用上述装置对梭子蟹离体卵进行人工孵化试验，其最终孵化率为86% 92%，略高于自然孵化率，剔除20%左右劣苗，最终成苗率在69% 74%之间。考虑~ ~亲蟹死亡的因素，离体卵人工孵化与自然孵化相比，优势明显，具有很大的经济价值。

[0046] 显然，本发明的上述实施例仅仅是为了说明本发明所作的举例，而并非对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷例。而这些属于本发明的实质精神所引申出的显而易见的变化或变动仍属于本发明的保护范围。