一种治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶及其用途

摘要

本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶及其制药用途。该皮下注射用原位凝胶有效成分为紫云英苷或紫云英苷与新木姜子碱的组合物。其中紫云英苷、新木姜子碱的重量份比为：紫云英苷63～69重量份、新木姜子碱19重量份。皮下注射用原位凝胶的辅料为大豆卵磷脂、中链甘油三酯和90%乙醇。本发明的治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶通过皮下注射后形成的凝胶药物储库发挥缓释作用，对雌激素依赖性乳腺癌具有较好的治疗作用，且能够降低口服或静脉注射等全身给药途径引起的毒副作用。

权利要求

1.一种治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶，其特征在于，所述皮下注射用原位凝胶由紫云英苷、新木姜子碱和皮下注射用原位凝胶制剂辅料制成；所述皮下注射用原位凝胶制剂辅料为大豆卵磷脂、中链甘油三酯和90%乙醇；所述皮下注射用原位凝胶中紫云英苷、新木姜子碱的重量份比为：紫云英苷63～69重量份、新木姜子碱19重量份；所述皮下注射用原位凝胶中大豆卵磷脂、中链甘油三酯和90%乙醇的重量份比为大豆卵磷脂70重量份、中链甘油三酯15重量份、90%乙醇15重量份。

2.根据权利要求1所述的治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶，其特征在于，所述皮下注射用原位凝胶中紫云英苷与大豆卵磷脂的重量份比为紫云英苷63～69重量份、大豆卵磷脂

200～230重量份。

3.根据权利要求1或2所述的治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶，其特征在于，所述皮下注射用原位凝胶中紫云英苷、新木姜子碱、大豆卵磷脂的重量份比为：紫云英苷67重量份、新木姜子碱19重量份、大豆卵磷脂210重量份。

4.权利要求1或2任一项所述治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶在制备乳腺癌治疗药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述乳腺癌为雌激素依赖性乳腺癌。

说明书

一种治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶及其用途

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶及其用途。

背景技术

[0002] 癌症是严重威胁人类生命的重大疾病。根据2016-2017年的流行病学统计结果，我国男性癌症发病前五位的癌症分别是非小细胞肺癌、胃癌/贲门癌、结直肠癌、食管癌、小细胞肺癌。女性癌症发病前五位的癌症分别是乳腺癌、结直肠癌、小细胞肺癌、宫颈癌、胃癌/贲门癌。换言之，乳腺癌是威胁女性生命健康的最主要的恶性肿瘤。

[0003] 乳腺癌主要由乳腺导管上皮出现恶性改变而产生。临床主要表现为乳腺肿痛、肿块、腋窝下淋巴结肿大等。其主要发病人群为40-50岁左右中年女性。2014年我国乳腺癌新发病例每年以3 %-4%的速度递增。我国每年乳腺癌新发病例数量和死亡病例数量分别占全世界的12.2%和 9.6%，是乳腺癌高发国家（郑莹，吴春晓，张敏璐. 乳腺癌在中国的流行状况和疾病特征.中国癌症杂志，2013，23（8）：561-569.）。

[0004] 目前乳腺癌的治疗主要以手术切除和辅助放化疗为主。手术切除是乳腺癌的主要治疗手段。但手术的选择依赖于乳腺癌发现的时间，往往需要辅助放化疗控制病情后方可选择手术治疗。用于治疗乳腺癌的化学治疗药物包括的环磷酰胺、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、蒽环类药物（如阿霉素、表阿霉素）、紫杉醇类药物（如紫杉醇、多西紫杉醇）、长春瑞滨、卡培他滨、铂类、烷化剂等等，其中蒽环类药物和紫杉醇类药物效果较好。近年来新发展起来的分子靶向治疗药物如曲妥珠单抗、贝伐单抗也显示出良好的应用前景（罗年安，屈亚琦，董瑞. 乳腺癌的治疗进展. 现代生物医学进展，2015,15（1）:160-166）。

[0005] 大约70%的乳腺癌呈激素依赖性，因此通过卵巢功能抑制、抗雌激素药物、孕激素、雄激素、芳香化酶抑制剂等调节内分泌也有助于乳腺癌的治疗（张厚云综述，赵凌云审校. 乳腺癌内分泌治疗研究进展. 中国普通外科杂志.2014,23（5）：680-684）。

[0006] 紫云英苷，英文名Astragalin，CAS号480-10-4，是一种存在于多种药用植物中的黄酮类天然活性成分，具有抗氧化活性。已有研究显示紫云英苷提高肺癌细胞对肿瘤坏死因子的敏感性（Chen M, Cai F, Zha D, Wang X, Zhang W, He Y, Huang Q, Zhuang H, Hua ZC. Astragalin-induced cell death is caspase-dependent and enhances the susceptibility of lung cancer cells to tumor necrosis factor by inhibiting the NF-кB pathway. Oncotarget. 2017，8(16):26941-26958.)。紫云英苷的结构式如下：

[0007]

[0008] 新木姜子碱，部分文献称为木姜子碱，英文名Laurolitsine，CAS号5890-18-6，是一种存在于多种药用植物中的异喹啉生物碱。已有研究显示其具有抗血小板凝聚（Teng CM, Hsueh CM, Chang YL, Ko FN, Lee SS, Liu KC. Antiplatelet effects of some aporphine and phenanthrene alkaloids in rabbits and man. J Pharm Pharmacol, 1997, 49(7):706-711.）及抗艾滋病毒等作用（Zhang CF, Nakamura N, Tewtrakul S, Hattori M, Sun QS, Wang ZT, Fujiwara T. Sesquiterpenes and alkaloids from Lindera chunii and their inhibitory activities against HIV-1 integrase. Chem Pharm Bull (Tokyo)，2002，50(9):1195-200.），但对人脊髓灰质炎病毒的研究显示其缺乏抗病毒作用（Boustie J, Stigliani JL, Montanha J, Amoros M, Payard M, Girre L. Antipoliovirus structure-activity relationships of some aporphine alkaloids. J Nat Prod. 1998 Apr;61(4):480-484.）。新木姜子碱的结构式如下：

[0009]

[0010] 目前关于天然来源的生物碱类物质的活性研究非常广泛，已有的研究证明大量源自天然植物的生物碱类物质具有抗肿瘤活性等（Habli Z, Toumieh G, Fatfat M, Rahal ON, Gali-Muhtasib H. Emerging Cytotoxic Alkaloids in the Battle against Cancer: Overview of Molecular Mechanisms. Molecules，2017，22(2)pii: E250.）。其中大量异喹啉生物碱被发现存在抗肿瘤活性，且其抗肿瘤活性与该类物质中的亚甲二氧基环有关（Chen J， Gao K， Liu T， Zhao H， Wang J， et al. Aporphine Alkaloids: A Kind of Alkaloids' Extract Source, Chemical Constitution and Pharmacological Actions in Different Botany. Asian Journal of Chemistry, 2013  , 25 (18) :10015-10027）。但上述活性成分的抗肿瘤作用多局限于体外细胞学研究，由于体内酶系统等的复杂性，体内代谢等影响，其体内生物学活性仍待进一步研究。大量生物碱的抗肿瘤活性研究未经过体内实验验证。部分生物碱类虽无抗肿瘤作用但对某些抗肿瘤药物具有协同效果，如六驳碱 (laurotetanine) )与秋水仙碱存在抗肿瘤协同作用，可提高后者的抗有丝分裂作用（中国专利文献CN201010293245.X，公开日期2011年5月4日）。目前关于天然生物碱类抗肿瘤协同药物的研究较少。

发明内容

[0011] 针对上述现有技术，本发明的目的之一是提供一种治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶。

[0012] 为实现上述的目的，本发明采用的技术方案为：

[0013] 一种治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶，含有紫云英苷和皮下注射用原位凝胶制剂辅料。

[0014] 优选的，所述治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶由紫云英苷、新木姜子碱和皮下注射用原位凝胶制剂辅料制成；所述皮下注射用原位凝胶制剂辅料为大豆卵磷脂、中链甘油三酯和90%乙醇。

[0015] 优选的，所述治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶中紫云英苷、新木姜子碱的重量份比为：紫云英苷63～69重量份、新木姜子碱19重量份；所述治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶中大豆卵磷脂、中链甘油三酯和90%乙醇的重量份比为大豆卵磷脂70重量份、中链甘油三酯15重量份、90%乙醇15重量份。

[0016] 优选的，所述治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶中紫云英苷与大豆卵磷脂的重量份比为紫云英苷63～69重量份、大豆卵磷脂200～230重量份。

[0017] 优选的，所述治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶中紫云英苷、新木姜子碱、大豆卵磷脂的重量份比为：紫云英苷67重量份、新木姜子碱19重量份、大豆卵磷脂210重量份。

[0018] 本发明的另一方面，还提供了上述治疗乳腺癌的皮下注射用原位凝胶在制备乳腺癌治疗药物中的用途。优选的，所述乳腺癌为雌激素依赖性乳腺癌。

[0019] 在本发明的皮下注射用原位凝胶组成成分公开的前提下，对于本领域技术人员而言，可通过多种方法进行凝胶制备，如首先将药物与90%乙醇混合均匀，然后与大豆卵磷脂、中链甘油三酯混合搅拌。也可将部分90%乙醇与大豆卵磷脂、中链甘油三酯混合搅拌制备成空白基质后，将剩余90%乙醇与药物混合均匀，然后加入基质中再次搅拌均匀。为提高药物分布均匀度和缓释效果，药物乙醇混合物与大豆卵磷脂、中链甘油三酯混合过程中应当保持较高的搅拌速度和较长的搅拌时间，如采用每分钟800转的转速搅拌1小时。凝胶剂制备后常温下为液态，注射入皮下后，变为凝胶状药物储库，便于药物缓慢释放。

[0020] 正如本领域技术人员通常理解的，在上述技术方案中，90%乙醇是指乙醇的体积分数为90%。大豆卵磷脂也称为大豆磷脂，CAS号为8030-76-0；中链甘油三酯也称为中链脂肪酸甘油三酯，CAS号为73398-61-5；大豆卵磷脂及中链甘油三酯均为药用辅料，收录于中国及美国、欧洲等国药典，且市场均有供应。

[0021] 紫云英苷英文名Astragalin，CAS号480-10-4；新木姜子碱英文名Laurolitsine，CAS号5890-18-6二者市场均有供应，其制备方法在文献中也已充分的报道。

[0022] 在初步的体内抗肿瘤药效学研究中，申请人发现紫云英苷对雌激素依赖性乳腺癌动物模型具有一定的抗肿瘤效果；新木姜子碱对雌激素依赖性乳腺癌动物模型无显著抗肿瘤效果，作为皮下注射用原位凝胶制剂，将紫云英苷、新木姜子碱联合皮下注射时，可实现缓释效果，且新木姜子碱对紫云英苷的抗肿瘤作用具有协同效果。在为期1个月的给药实验中，上述皮下注射用原位凝胶给药后未见明显给药部位刺激作用。

具体实施方式

[0023] 下面结合实施例对本发明作进一步的解释。应当理解的是，以下实施例仅用于解释本发明，而不是限制本发明的保护范围。

[0024] 实施例1  皮下注射用原位凝胶的制备

[0025] 紫云英苷                              69g

[0026] 大豆卵磷脂                            210g

[0027] 中链甘油三酯                          45 g

[0028] 90%乙醇                               45 g

[0029] 取处方量紫云英苷和90%乙醇混合搅拌均匀，加入处方量大豆卵磷脂、中链甘油三酯， 800转/分钟搅拌1小时，灭菌分装。

[0030] 实施例2  皮下注射用原位凝胶的制备

[0031] 紫云英苷                             67g

[0032] 大豆卵磷脂                           210g

[0033] 中链甘油三酯                         45 g

[0034] 90%乙醇                              45 g

[0035] 取处方量紫云英苷和90%乙醇混合搅拌均匀，加入处方量大豆卵磷脂、中链甘油三酯， 800转/分钟搅拌1小时，灭菌分装。

[0036] 实施例3  皮下注射用原位凝胶的制备

[0037] 紫云英苷                               69g

[0038] 新木姜子碱                             19 g

[0039] 大豆卵磷脂                             210g

[0040] 中链甘油三酯                           45 g

[0041] 90%乙醇                                45 g

[0042] 取处方量紫云英苷、新木姜子碱和90%乙醇混合搅拌均匀，加入处方量大豆卵磷脂、中链甘油三酯， 800转/分钟搅拌1小时，灭菌分装。

[0043] 实施例4  皮下注射用原位凝胶的制备

[0044] 紫云英苷                               67g

[0045] 新木姜子碱                             19 g

[0046] 大豆卵磷脂                             210g

[0047] 中链甘油三酯                           45 g

[0048] 90%乙醇                                45 g

[0049] 取处方量紫云英苷、新木姜子碱和90%乙醇混合搅拌均匀，加入处方量大豆卵磷脂、中链甘油三酯， 800转/分钟搅拌1小时，灭菌分装。

[0050] 实施例5  皮下注射用原位凝胶的制备

[0051] 紫云英苷                               65g

[0052] 新木姜子碱                             19 g

[0053] 大豆卵磷脂                             210g

[0054] 中链甘油三酯                           45 g

[0055] 90%乙醇                                45 g

[0056] 取处方量紫云英苷、新木姜子碱和90%乙醇混合搅拌均匀，加入处方量大豆卵磷脂、中链甘油三酯， 800转/分钟搅拌1小时，灭菌分装。

[0057] 实施例6  体内抗肿瘤药效学实验及初步安全性观察

[0058] 一、肿瘤细胞株及培养：

[0059] 雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞37℃下于CO2培养箱中培养传代，培养基采用RPMI 1640培养基。

[0060] 二、实验动物及饲养：SPF级雌性BALB/C小鼠，体重17g～20g，饲养于SPF实验室中，饲喂小鼠饲料和灭菌动物饮用水。

[0061] 三、实验药物及制备：为考察单组份及双组份凝胶的抗肿瘤差异，本实验以实施例2和实施例4的皮下注射用原位凝胶为实验药物；并设立新木姜子碱阳性对照和空白凝胶阴性对照。其中新木姜子碱阳性对照采用新木姜子碱19 g、大豆卵磷脂 210g、中链甘油三酯
45 g、90%乙醇45 g，将新木姜子碱与90%乙醇混合搅拌均匀，加入大豆卵磷脂、中链甘油三酯， 800转/分钟搅拌1小时制备。空白凝胶采用大豆卵磷脂210g、中链甘油三酯45 g、90%乙醇45 g混合，800转/分钟搅拌1小时制备。

[0062] 四、造模、分组及给药

[0063] 24只BALB/C小鼠，于右侧面皮肤皮下注射MCF-7细胞悬液，注射体积为200μL，细胞悬液中MCF-7细胞浓度为2×106个/mL。细胞接种后两周将小鼠随机分为4组，每组6只。分别于随机分组后第1（以分组当日为第1日）、5、9、13、17、21、25日从肿瘤边缘0.5cm附近皮下注射空白凝胶或载药凝胶。每只小鼠每次注射体积均为150μL。

[0064] 五、观察指标

[0065] 分别于随机分组后第29日处死各组小鼠，剖取肿瘤，生理盐水冲洗后称取瘤重，以瘤重为指标比较各组药物的抗肿瘤效果差异。组间比较P<0.05视为差异显著。

[0066] 取瘤后，解剖小鼠，取将心、肝、脾、肺、肾常规制备石蜡切片，HE染色，行病理观察。

[0067] 六、实验结果

[0068] 各组小鼠的瘤重数据见下表：

[0069]

[0070] 其中a：与空白凝胶组相比P<0.001；b与实施例2凝胶组相比P<0.001。

[0071] 瘤重数据显示，经过为期28日的治疗，新木姜子碱凝胶对荷瘤小鼠无抑瘤作用（与空白凝胶组相比P>0.05）；紫云英苷凝胶以及紫云英苷+新木姜子碱凝胶显著抑制了乳腺癌瘤体的生长（与空白凝胶组相比P<0.001）。其中紫云英苷+新木姜子碱凝胶组小鼠瘤重显著低于紫云英苷凝胶组（与实施例2凝胶组相比P<0.001）。

[0072] 对各组小鼠心、肝、脾、肺、肾病理切片进行镜检未发现显著病理改变。说明采用原位凝胶形式皮下注射给药时紫云英苷、新木姜子碱及联合使用时耐受性良好。