一种病理标本的固定方法转让专利
申请号 : CN201810479749.7
文献号 : CN108760443B
文献日 : 2021-03-30
发明人 : 刘春灵 , 程琦 , 申现锋
申请人 : 漯河医学高等专科学校
摘要 :
权利要求 :
1.一种病理标本的固定方法,其特征在于:包含以下步骤:S1:将固定缸清洗干净后,用质量分数为6% 8%的石碳酸水清洗干净,常温下晾干;
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S2:配制固定液;
S3:将步骤S2得到的固定液加入步骤S1的固定缸中,并将所述固定缸放入恒温箱中,42
48℃恒温保存1.5 2h;
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S4:将病理标本放入所述固定液中固定1 1.5h后,取出即可;
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所述固定液的组成为:甘油45‑52ml,薄荷醇3 4.2g,异噻唑啉酮1.5 2g,氯化钠30~ ~ ~
35g,表面活性剂0.5 0.9g,添加剂8 10g,纯水补至1000ml;
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所述表面活性剂为聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯和脂肪酸失水山梨醇酯的混合物,重量比聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯:脂肪酸失水山梨醇酯为2 3:1;
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所述添加剂由以下重量份的组分制备:甲壳素2 5份、36%的盐酸10 15份、氢氧化钠3 5~ ~ ~
份、二甲基二硫代氨基甲酸钠5 8份和水20 25份。
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2.如权利要求1所述的一种病理标本的固定方法,其特征在于:所述固定液的组成为:甘油49ml,薄荷醇3.8g,异噻唑啉酮1.7g,氯化钠33g,表面活性剂0.7g,添加剂9g,纯水补至
1000ml。
3.如权利要求2所述的一种病理标本的固定方法,其特征在于:所述添加剂由以下步骤制备:称取甲壳素与36%的盐酸混合,置于搅拌机中进行第一次搅拌20 30min,然后加入氢~
氧化钠和水,进行第二次搅拌5 10min,最后加入二甲基二硫代氨基甲酸钠,进行第三次搅~
拌10 15min。
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4.如权利要求3所述的一种病理标本的固定方法,其特征在于:所述第一次搅拌的转速为200 300r/min,所述第二次搅拌的转速为500 600r/min,所述第三次搅拌的转速为200~ ~ ~
300r/min。
说明书 :
一种病理标本的固定方法
技术领域
背景技术
破坏、细胞变形就可能导致无法诊断。病理标本自离体后应该及时得到正确的固定,然后送
往病理科进行检查,而病理标本处理不当,不仅会带来临床诊断上的困难,甚至对患者的治
疗效果也会有影响。
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病床周转率逐渐增高的现象日趋凸显,病理诊断报告发放速度需随之加快,这就需要缩短
标本处理时间。因此,有些快速组织处理方法也逐渐被多家病理科应用到常规工作中。
临床和分子生物学分析提供了丰富的档案材料。但是用甲醛固定组织主要存在以下缺点:
①挥发性很强,且其挥发性随着环境温度的升高而加快,甲醛在目前我国有毒化学品控制
名单中位列第二,已经被确定为是致癌和致畸物,特别是工作在一线的医生及技术人员长
期暴露于甲醛严重超标的环境中,对身体健康造成严重的危害。②易引起组织内形成广泛
的蛋白质交联,影响免疫组织化学染色中抗原决定簇的暴露。③易导致 DNA 断裂,交联作
用阻碍核酸的提取并局限了DNA片段的PCR扩增产物的长度。而且随着时间的推移,这种交
联会越来严重,长期存储可在一定程度上影响高质量DNA和(或)RNA的提取效率。近年来,随
着分子生物学技术的不断发展及疾病相关基因研究的不断深入,分子病理学检测已成为病
理诊断的重要辅助手段。在形态学、免疫组织化学、相关遗传物质保存等方面优于甲醛的绿
色环保固定液成为研究热点。
织渗透、病理标本组织浸蜡。该发明采用先用固定液病理标本组织固定,再用自来水清洗干
净,能有效去除组织中的血污和不纯的固定液等杂质,保证了脱水机中的固定液的纯度;脱
水处理中采用梯度脱水,脱水完全,浸蜡之前采用二甲苯溶液梯度渗透,能有效进行浸蜡,
浸蜡均匀,便于后期切片的制作。但是,该方法采用的固定液的成分为甲醛、水、磷酸二氢
钠、磷酸氢二钠,含有甲醛成分,挥发性强,影响人员的健康,而且该发明用固定液固定标本
前未将固定缸清理,含有杂质或细菌,影响诊断结果。
40‑60份、表面活性剂40‑60份、增溶剂40‑60份。该无甲醛组织标本固定液采用无毒无害的
化学试剂,经细胞形态学实验、免疫组织化学实验、分子病理学实验及核酸提取实验证明,
无醛固定液具有较为全面的固定效果,完全可以替代甲醛应用于相关的病理学实验,以完
成对组织标本的固定作用。但是,该固定液中含有大量的乙醇,对标本有脱水收缩的作用,
长期使用容易使标本失水,固定后的标本形态会有很大改变,有时会对诊断结果造成影响。
发明内容
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4.2g,异噻唑啉酮1.5 2g,氯化钠30 35g,表面活性剂0.5 0.9g,添加剂8 10g,纯水补至
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1000ml。
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氢氧化钠3 5份、二甲基二硫代氨基甲酸钠5 8份和水20 25份。
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入二甲基二硫代氨基甲酸钠,进行第三次搅拌10 15min。
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600r/min,所述第三次搅拌的转速为200 300r/min。
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缸进行杀菌,消毒,同时石碳酸水还具备防腐效果,用石碳酸水浸染过,可以防止霉菌感染,
更加安全。本发明将加有固定液的固定缸放入恒温箱中,42 48℃恒温保存1.5 2h,将病理
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标本放入固定液中固定1 2h。本发明将病理标本在42 48℃恒温固定,恒温有利于加快固定
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液内部分子的运动,有利于增强固定液的渗入,固定更加充分,而且本发明不受外界气候的
影响,不会引起组织变硬变形,固定效果更好。采用本发明的固定方法,只需固定1 2h,采用
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传统的固定方式固定时间为4 15h,本发明明显缩短了固定时间,提高了工作效率。
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生长,从而导致微生物细胞的死亡,故对常见细菌、真菌、藻类等具有很强的抑制和杀灭作
用。杀生效率高,降解性好,具有不产生残留、操作安全、配伍性好、稳定性强、使用成本低等
特点。甘油具有防腐性、吸湿性,能够保持病理标本的柔软度,与杀菌成分混合,保持药效不
挥发,增强防腐性能和杀菌效果,同时也作为有机溶剂。氯化钠用于维持体系的稳定和平
衡,也具有具有杀菌消毒的作用。
生物膜蛋白质的强烈相互作用使之变性或失去功能,从而达到稳定消毒杀菌的效果,二者
混合后效果更佳,同时,表面活性剂协同恒温固定的方法,有助于提高染色效果。添加剂中
甲壳素具有防霉杀菌效果,溶于浓盐酸中,具有较强的吸附作用,与甘油复合作用,吸附在
标本表面,抑制病原菌萌发,使病原菌的酶钝化,阻止病原菌侵入植物细胞。氢氧化钠用于
中和酸碱度;二甲基二硫代氨基甲酸钠防止病菌人侵,起到保护作用,形成一层致密性保护
药膜,抑制病菌孢子的萌发和入侵,从而达到杀菌防腐的效果。
理和病理形态结构及生物化学和免疫化学成分。且本发明固定时间短,固定充分,为制作优
秀病理切片奠定坚实的基础,也是特殊染色、组织化学、免疫组织化学和组织原位分子杂交
等技术方法赖以成功的基础。
具体实施方式
部的实施例。基于所描述的本发明的实施例,本领域普通技术人员所获得的所有其他实施
例,都属于本发明保护的范围。
得预期的效果。
为例。
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中;
600r/min,最后加入二甲基二硫代氨基甲酸钠,进行第三次搅拌10min,转速为300r/min。
钠混合均匀,得到氯化钠溶液,然后依次加入甘油,薄荷醇,异噻唑啉酮,置于搅拌机中,在
水浴35 40℃条件下,搅拌5min,转速800r/min,然后加入表面活性剂和添加剂,纯水定容至
~
1000ml,调整转速为300r/min,搅拌45min即可。
例。
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液中;
山梨醇酯的混合物,实施例4和5的重量比聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯:脂肪酸失水山梨
醇酯为2:1,实施例6的重量比聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯:脂肪酸失水山梨醇酯为3:1。
骤制备:称取甲壳素与36%的盐酸混合,置于搅拌电机中进行第一次搅拌20min,转速为
300r/min,然后加入氢氧化钠和水,进行第二次搅拌5min,转速为600r/min,最后加入二甲
基二硫代氨基甲酸钠,进行第三次搅拌10min,转速为300r/min。
钠混合均匀,得到氯化钠溶液,然后依次加入甘油,薄荷醇,异噻唑啉酮,置于搅拌机中,在
水浴35 40℃条件下,搅拌8min,转速600r/min,然后加入表面活性剂和添加剂,纯水定容至
~
1000ml,调整转速为500r/min,搅拌30min即可。
例。
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液中;
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36%的盐酸混合,置于搅拌电机中进行第一次搅拌30min,转速为300r/min,然后加入氢氧化
钠和水,进行第二次搅拌10min,转速为500r/min,最后加入二甲基二硫代氨基甲酸钠,进行
第三次搅拌10min,转速为200r/min。
钠混合均匀,得到氯化钠溶液,然后依次加入甘油,薄荷醇,异噻唑啉酮,置于搅拌机中,在
水浴35 40℃条件下,搅拌6min,转速700r/min,然后加入表面活性剂和添加剂,纯水定容至
~
1000ml,调整转速为400r/min,搅拌40min即可。
液,然后依次加入甘油,薄荷醇,异噻唑啉酮,表面活性剂和添加剂,纯水定容至1000ml置于
搅拌机中,常温搅拌45min,转速400r/min即可。
形瓶中作为样品组,并按上述方法制备不加保存固定液的对照样品组,将十三组分别加入
70毫升的磷酸盐缓冲液(0.03moL/L)和5mL铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的
菌液,在25℃、200rpm/min条件下,振荡培养,分别于1小时取样,计算细菌数量变化。每批实
验重复4次,计算平均抑菌率。
在10以内,试验样品抑菌率与对照组样品抑菌率之差>26%,可判定该产品有抗菌作用。
件下贮存,6个月后重做抑菌实验,观察其抑菌效果,用游标卡尺测量抑菌环直径并记录,抑
菌圈直径>7mm,判定为有抑菌作用;抑菌环直径小于或等于7mm,判为无抑菌作用;每组实
验重复4次。
有一定的抑菌效果,但稳定性较差;对比例4未加入添加剂,抑菌和持久性抑菌效果均为最
差;对比例5未进行水浴加热,抑菌性能较差。
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的质地、手感和固定液的色质。其余每组的5份按照常规的方法进行相同的脱水、透明、浸
蜡、包埋、切片、染色,由病理专家对染色效果进行评分,病理专家不知道每组病理标本的固
定方法,每张切片按照整体形态、整体染色、细胞轮廓、细胞质染色细节、核染色细节、红细
胞的完整性等六个方面给出评分,见表5。
明显,固定液清晰透亮,无刺激性气味。而对比例1和对比例4,标本质地硬,对比例2、3、5固
定液均出现霉斑,混浊,对比例2标本略硬。本发明适宜长期保存,不发生明显的固缩或膨
胀;触感接近原始状态,无明显硬化或软化现象,固定保存效果好。
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水清洗固定缸,细胞轮廓和整体形态的分值下降最大,说明用石碳酸水清洗杀菌,有利于保
存细胞和整体的完整性。对比例2未采用恒温固定,整体染色和细胞质染色效果最差,对比
例3未添加表面活性剂,核染色和整体染色均下降明显,说明恒温固定和表面活性剂协同作
用有助于提高染色效果,缺少其中一个,对效果产生较大的影响。对比例4未加入添加剂,红
细胞的完整性评分最差,说明添加剂有利于保持红细胞的完整性。对比例5制备固定液过程
中,未进行水浴加热,整体综合性能均有降低。
的精神和范围,均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。