一种对羟基苯丙氨酸检测试纸条及制备方法和应用

摘要

本发明属于检测试剂技术领域，具体涉及一种对羟基苯丙氨酸检测试纸条及制备方法。其包括滤纸和负载所述滤纸上的酪氨酸酶和4‑氨基安替比林。所述制备方法为配置缓冲液，将需要负载在滤纸上的组分溶解在所述缓冲液中，将该混合溶液通过浸泡或喷涂方施加在所述滤纸上，然后将其烘干即可。所述试纸条可以用于尿液中对羟基苯丙氨酸的试剂盒的制备。本发明提供的技术方案采用酪氨酸酶检测对羟基苯丙氨酸的含量，并成功将其改进为可以产品的尿液检测试剂条，检测试剂组分环境友好，其中不再含有汞镍等重金属离子，使用后也不会造成环境污染，另外，试纸条，便于储存运输，也便于使用，没有废液产生。

权利要求

1.一种对羟基苯丙氨酸检测试纸条，其特征在于，包括滤纸和负载所述滤纸上的酪氨酸酶、4-氨基安替比林、亮绿染料、蔗糖、白蛋白和Triton X-100，上述组分溶解在配置的缓冲液中，所述缓冲液为磷酸盐水溶液，pH值为5.0～7.8，混合溶液通过浸泡或喷涂施加在所述滤纸上，其中所述混合溶液中酪氨酸酶的浓度为50～2000U/mL，所述4-氨基安替比林的浓度为1.2g-1.5mg/mL，所述蔗糖的浓度为0.02-0.1g/mL，所述白蛋白的浓度为0.005-

0.05g/mL，所述Triton X-100的浓度为0.005-0.02g/mL。

2.权利要求1所述对羟基苯丙氨酸检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：配置缓冲液，将需要负载在滤纸上的组分溶解在所述缓冲液中，将该混合溶液通过浸泡或喷涂施加在所述滤纸上，然后将其烘干即可。

3.根据权利要求2所述对羟基苯丙氨酸检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐为一水合磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠。

4.一种尿液中对羟基苯丙氨酸的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述对羟基苯丙氨酸检测试纸条和标准比色卡。

说明书

一种对羟基苯丙氨酸检测试纸条及制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明属于检测试剂技术领域，具体涉及一种对羟基苯丙氨酸检测试纸条及制备方法和应用。

背景技术

[0002] 肿瘤的早期诊断和早期治疗是提高肿瘤治愈率的关键。现临床常用的确诊手段有胸透、B超、CT、核磁共振等，常常是伴随着穿刺、抽血等加重病人痛苦甚至有可能发生交叉感染的手段，而且价格昂贵，更重要的是通过这些手段能检测出的肿瘤一般都处于中晚期，给病人带来极大的痛苦和经济负担。所以研究一种操作简单快捷、成本低、灵敏度高、重复性好的的检测方法势在必行。

[0003] 癌细胞的核苷酸代谢异常会生成一种单羟酚类代谢物，其中对羟基苯丙氨酸含量远高于正常人，而这种物质能够通过尿液排放。检测对羟基苯丙氨酸的含量，可以推断人体是否患有癌症，能够及早的发现肿瘤，挽救生命，无需额外的开支，免去病人的恐惧和痛苦。

[0004] 目前对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂都是采用汞离子、亚汞离子显色，比如中国专利CN103323452A、CN104535565A、CN106706614A和CN107490689A中的技术方案均是基于这一原理。该方法有以下不足：1)试剂采用氨基酸和金属离子配位原理，尿液中的尿酸等在高浓度情况下产生极大干扰，造成假阴性结果；2)检测方法中都含有汞离子，汞的毒性不仅使制备过程存在一定安全隐患，另外，检测废液中汞镍等重金属离子也会对环境产生危害，因此生产和回收都需特殊的处理，增加使用成本；3)硫酸硝酸等强酸的使用在制备过程和使用过程也同样存在很多安全问题；4)目前检测试剂盒均是采用安瓿瓶液体包装，然后与尿液混合检测，这种包装体积大、运输不便、废弃物较多并且使用时也不太方便。

发明内容

[0005] 本发明提供了一种对羟基苯丙氨酸检测试纸条及制备方法和应用，用以解决目前对羟基苯丙氨酸检测试剂中均含汞、强酸及液体检测试剂带来的一系列问题。

[0006] 为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：所述对羟基苯丙氨酸检测试纸条，其包括滤纸和负载所述滤纸上的酪氨酸酶。

[0007] 可选地，所述滤纸上还负载有4-氨基安替比林。

[0008] 酪氨酸酶，也叫多酚氧化酶、儿茶酚氧化酶等，能够将无色的多酚类物质氧化为有颜色的茶红素、茶黄素等物质。但茶红素茶黄素颜色较浅，颜色梯度不明显，如果作为尿液检索试剂则灵敏度不足，而4-氨基安替比林则可以加深显色效果，从而使酪氨酸酶作为对羟基苯丙氨酸成为可能。

[0009] 目前的对羟基苯丙氨酸检测试剂是通过与汞、亚汞离子结合形成有色沉淀来实现的，因此目前的对羟基苯丙氨酸检测试剂无法将其制成携带方便，安全简便的检测试纸条。

[0010] 可选地，所述滤纸为沃特曼牌、新华、科百特滤纸。

[0011] 可选地，所述滤纸上还负载了亮绿染料。亮绿的加入使得该试纸条的颜色变化更明显，更有利于肉眼判读。

[0012] 可选地，所述滤纸上还负载了蔗糖、白蛋白和Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)。酪氨酸酶作为显色剂还存在一个贮存稳定性的问题，适量的蔗糖、白蛋白和Triton X-100，则可以延长酪氨酸的保质期，解决了其产品化的问题。

[0013] 本发明还提供了上述对羟基苯丙氨酸检测试纸条的制备方法，其包括如下步骤：配置缓冲液，将需要负载在滤纸上的组分溶解在所述缓冲液中，将该混合溶液通过浸泡或喷涂方施加在所述滤纸上，然后将其烘干即可。

[0014] 可选地，所述缓冲液为磷酸盐水溶液，pH值为5.0～7.8。

[0015] 可选地，所述磷酸盐为一水合磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠。

[0016] 可选地，所述混合溶液中一水合磷酸二氢钠的浓度为15-25mg/mL，十二水合磷酸氢二钠的浓度为18-30mg/mL。

[0017] 可选地，所述混合溶液中酪氨酸酶的浓度为50～2000U/mL，所述4-氨基安替比林的浓度为1.2g-1.5mg/mL。

[0018] 可选地，所述混合溶液中蔗糖的浓度为0.02-0.1g/mL，白蛋白的浓度为0.005-0.05g/mL，Triton X-100的浓度为0.005-0.02g/mL。

[0019] 本发明还提供了一种尿液中对羟基苯丙氨酸的试剂盒，其包括对羟基苯丙氨酸检测试纸条和标准比色卡。

[0020] 标准比色卡的确定采用标准浓度测试样品预先确定即可。

[0021] 本发明提供的技术方案采用酪氨酸酶检测对羟基苯丙氨酸的含量，并成功将其改进为可以产品的尿液检测试剂条，检测试剂组分环境友好，其中不再含有汞镍等重金属离子，使用后也不会造成环境污染，另外，试纸条，便于储存运输，也便于使用，没有废液产生。

具体实施方式

[0022] 为了便于理解，下面结合实施例阐述所述对羟基苯丙氨酸检测试纸条，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

[0023] 所有原材料均为分析纯级别的普通化学制剂，制备过程也都在常温、常压下进行。

[0024] 实施例1

[0025] 1)称取一水合磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)：1.89g和十二水合磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)：2.26g混合加水定容至100mL，获得磷酸盐缓冲液，其pH＝6.5；

[0026] 2)称取100KU酪氨酸酶干粉，加入其中；

[0027] 3)然后加入0.12g 4-氨基安替比林；

[0028] 4)然后加入1.2g牛血清白蛋白、2.4g蔗糖和1.3g Triton X-100，获得混合溶液，所述混合溶液中一水合磷酸二氢钠的浓度为18.9mg/mL，十二水合磷酸氢二钠的浓度为22.6mg/mL，酪氨酸酶的浓度为1000U/mL，4-氨基安替比林的浓度为1.2mg/mL，蔗糖浓度为
0.024g/mL、白蛋白的浓度为0.012g/mL和Triton X-100的浓度为0.013g/mL；

[0029] 5)将沃特曼滤纸充分浸入所述混合溶液中，取出后将其置于烘箱中于70℃烘干15分钟；裁切成小块粘贴在塑料基板上。

[0030] 实施例2

[0031] 1)称取一水合磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)：1.89g和十二水合磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)：2.26g混合加水定容至100mL，获得磷酸盐缓冲液，其pH＝6.5；

[0032] 2)称取70KU酪氨酸酶干粉，加入其中；

[0033] 3)然后加入0.15g 4-氨基安替比林；

[0034] 4)然后加入200μl的亮绿水溶液(浓度为0.1％)：

[0035] 5)然后加入1.2g牛血清白蛋白、2.9g蔗糖和1.1g Triton X-100，获得混合溶液，所述混合溶液中一水合磷酸二氢钠的浓度为18.9mg/mL，十二水合磷酸氢二钠的浓度为22.6mg/mL，酪氨酸酶的浓度为700U/mL，4-氨基安替比林的浓度为1.5mg/mL，蔗糖浓度为
0.029g/mL、白蛋白的浓度为0.012g/mL和Triton X-100的浓度为0.011g/mL；

[0036] 6)将上述混合溶液喷涂在新华滤纸上，取出后将其置于烘箱中于70℃烘干15分钟；裁切成小块粘贴在塑料基板上。

[0037] 实施例3效果验证试验

[0038] 3.1变色实验

[0039] 将按照实施例1或2制备好的对羟基苯丙氨酸试纸条浸入测试样品中取出，或将待测样品滴加到试纸条上，变色结果如表1所示。

[0040] 测试样品为浓度为0mg/L，120mg/L,240mg/L,480mg/L的对羟基苯丙氨酸标准溶液。

[0041] 表1

[0042]

[0043] 通过表1可以发现，将含有对羟基苯丙氨酸的测试样品滴加在本发明提供的试纸条上时，试纸条变色，含量越高，变色程度越高，添加了亮绿的试纸条，各浓度色彩变化更为丰富，区别性更强。

[0044] 标准比色卡的制备方法

[0045] 将按照实施例制备好的对羟基苯丙氨酸试纸分别浸于多个标准溶液中，比如上述四个浓度，根据各试纸5分钟后的显色情况制备比色卡，四个标准色代表不同浓度的对羟基苯丙氨酸浓度。

[0046] 后续样品检测与标准比色卡比较，如果样品测试颜色与标准比色卡颜色一致则所对应的浓度即为待测液的浓度，如果在两个色阶之间，则对羟基苯丙氨酸浓度为两者之间。

[0047] 3.2稳定性实验

[0048] 对比例1与实施例1的区别在于，没有加入牛血清白蛋白、蔗糖和Triton X-100。

[0049] 将实施例1、2和对比例1的试纸条在50℃烘箱中保存一周，然后分别进行测试，对比例1在低浓度时不能明显显色，实施例1和2在能够正常显色。

[0050] 3.3抗干扰实验

[0051] 配置250mg/L的对羟基苯丙氨酸水溶液溶液，其中含有尿酸600μmol/L,分别采用本专利中实施例1和2以及专利CN104535565A中的试剂测试，其中实施例1和2能够正常显色，专利CN104535565A的试剂不能显色。

[0052] 最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制。尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换，而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。