一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体及包含其的药物和试剂盒

摘要

本发明涉及一种特异性结合人PD‑L1的单克隆抗体，包含如下任一组CDR区：1)SEQ ID NO:1、2和3分别所示重链可变区CDR1、2和3序列，SEQ ID NO:4、6和7所示轻链可变区CDR1、2和3序列；2)SEQ ID NO:1、2和3分别所示重链可变区CDR1、2和3序列，SEQ ID NO:5、6和7所示轻链可变区CDR1、2和3序列；3)SEQ ID NO:1、2和3分别所示重链可变区CDR1、2和3序列，SEQ ID NO:4、6和8所示轻链可变区CDR1、2和3序列。所提供的PD‑L1抗体的与人PD‑L1具有高亲和性和特异性，同时显著抑制PD‑L1与受体PD1结合。

权利要求

1.一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述抗原结合部分为Fab片段或者F(ab’)2片段，其特征在于，包含如下任一组CDR区：第一组CDR区：SEQ ID NO:1所示重链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:2所示重链可变区CDR2的氨基酸序列，SEQ ID NO:3 所示重链可变区CDR3的氨基酸序列，SEQ ID NO:4所示轻链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:6所示轻链可变区CDR2的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:7所示轻链可变区CDR3的氨基酸序列；

第二组CDR区：SEQ ID NO:1所示重链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:2所示重链可变区CDR2的氨基酸序列，SEQ ID NO:3 所示重链可变区CDR3的氨基酸序列，SEQ ID NO:5所示轻链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:6所示轻链可变区CDR2的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:7所示轻链可变区CDR3的氨基酸序列；

第三组CDR区：SEQ ID NO:1所示重链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:2所示重链可变区CDR2的氨基酸序列，SEQ ID NO:3所示重链可变区CDR3的氨基酸序列，SEQ ID NO:4所示轻链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:6所示轻链可变区CDR2的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:8所示轻链可变区CDR3的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含氨基酸序列为SEQ ID NO:9的重链可变区和氨基酸序列为SEQ ID NO:10、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12任一序列的轻链可变区。

3.根据权利要求2所述一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含氨基酸序列为SEQ ID NO:9的重链可变区，氨基酸序列为SEQ ID NO：11的轻链可变区。

4.根据权利要求3所述一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合部分重链可变区和轻链可变区氨基酸序列与所述氨基酸序列SEQ ID NO:9和SEQ ID NO：11具有至少90％的整体序列同一性。

5.根据权利要求3所述一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述单克隆抗体重链氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示。

6.根据权利要求1-4任一项所述一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述单克隆抗体为IgG1、IgG2或IgG4同种型的全长抗体。

7.根据权利要求6所述一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述单克隆抗体为IgG1突变体，其FC上的糖基化位点N突变为A。

8.根据权利要求1-7任一项所述一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述单克隆抗体为单链抗体。

9.一种用于治疗或缓解癌症、感染性疾病的药物，其特征在于，所述用于治疗或缓解癌症、感染性疾病的药物包含权利要求1-8任一项的特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分。

10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1-8任一项所述的单克隆抗体或者其抗原结合部分。

说明书

一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体及包含其的药物和试

剂盒

技术领域

[0001] 本发明涉及一种单克隆抗体，尤其涉及一种人程序性死亡因子配体1的单克隆抗体及含有该抗体的药物组合物，属于基因工程抗体技术领域。

背景技术

[0002] 人程序性死亡因子配体1(PD-L1)，又称B7-H1，属于B7家族成员，广泛分布于外周组织和造血细胞。PD-L1全长cDNA 870 bp，编码一段含290个氨基酸的I型过膜蛋白。PD-L1包含IgV样、IgC样结构域、一段亲水跨膜结构域和一段胞内域（30aa）。程序性死亡因子1（programmed death-1, PD1）是PD-L1的主要受体，主要分布于T细胞，B细胞和NK细胞等免疫相关细胞，在自身免疫病、肿瘤、感染、器官移植、过敏、免疫特权等等的免疫应答过程中都扮演着重要角色。

[0003] PD-L1通过与其受体程序性死亡因子1（programmed death-1, PD1）相互作用抑制T细胞的激活或诱导成熟T细胞凋亡，使得免疫反应受到抑制。肿瘤发展过程中，癌细胞会通过上调PD-L1表达，诱导T细胞的凋亡，避免免疫系统对其的清除，从而导致疾病的进展。因此，PD1/PD-L1通路已成为抗肿瘤药物研究的重要靶点。目前，抑制PD1/PD-L1通路的抗体药物，已经在临床上获得巨大成功，其中，百时美施贵宝的Nivolumab，默沙东的MK-3475和罗氏的MPDL3280A先后上市。针对PD1/PD-L1通路的抗体药物，将成为肿瘤治疗市场中的最具潜力的领域。

[0004] 另外，研究表明PD1/PD-L1通路与一些感染性疾病相关。例如，在HIV病人中，PD1被发现在特异性识别HIV的CD8+T细胞高表达，病毒通过激活PD-L1／PD1信号，抑制CD8+T细胞的活性，从而使自身免疫功能大大受损。研究还表明，PD1/PD-L1通路与免疫性疾病相关，如肠粘膜炎，PD-L1的抑制可有效防止与结肠炎有关的萎缩病（Kanai等（2003），J Immunol 171:4156-63）.

[0005] 综上所述，靶向PD1/PD-L1通路的抗体药物，在治疗癌症,感染性疾病或自身免疫性疾病等领域具有巨大应用价值和广阔市场前景。

发明内容

[0006] 本发明所要解决的技术问题是提供一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，所提供的PD-L1抗体与人PD-L1具有高亲和性和特异性，同时显著抑制PD-L1与受体PD1结合，并且与同家族其它成员不结合，所述抗体可通过抑制PD1信号活化T细胞，刺激T细胞分泌IL2，并显著抑制肿瘤生长;一种含有该抗体或其抗原结合部分的药物组合物或试剂盒，以及在制备用于治疗癌症,感染性疾病或自身免疫性疾病药物的用途。

[0007] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，包含如下任一组CDR区：

[0008] 第一组CDR区：SEQ ID NO:1所示重链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:2所示重链可变区CDR2的氨基酸序列，SEQ ID NO:3 所示重链可变区CDR3的氨基酸序列，SEQ ID NO:4所示轻链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:6所示轻链可变区CDR2的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:7所示轻链可变区CDR3的氨基酸序列；

[0009] 第二组CDR区：SEQ ID NO:1所示重链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:2所示重链可变区CDR2的氨基酸序列，SEQ ID NO:3 所示重链可变区CDR3的氨基酸序列，SEQ ID NO:5所示轻链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:6所示轻链可变区CDR2的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:7所示轻链可变区CDR3的氨基酸序列；

[0010] 第三组CDR区：SEQ ID NO:1所示重链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:2所示重链可变区CDR2的氨基酸序列，SEQ ID NO:3所示重链可变区CDR3的氨基酸序列，SEQ ID NO:4所示轻链可变区CDR1的氨基酸序列，SEQ ID NO:6所示轻链可变区CDR2的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:8所示轻链可变区CDR3的氨基酸序列。

[0011] 本发明的有益效果是：本发明所提供的CDR区使得PD-L1抗体与人PD-L1具有高亲和性和特异性，同时显著抑制PD-L1与受体PD1结合，并且与同家族其它成员不结合，能够显著抑制肿瘤生长。

[0012] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

[0013] 进一步，所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含氨基酸序列为SEQ ID NO:9的重链可变区和氨基酸序列为SEQ ID NO:10、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12任一序列的轻链可变区。

[0014] 采用上述进一步方案的有益效果是本发明所提供可变区使得PD-L1抗体与人PD-L1具有高亲和性和特异性，同时显著抑制PD-L1与受体PD1结合，并且与同家族其它成员不结合，所述抗体可通过抑制PD1信号活化T细胞，刺激T细胞分泌IL2，并显著抑制肿瘤生长。

[0015] 进一步，所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含氨基酸序列为SEQ ID NO:9的重链可变区，氨基酸序列为SEQ ID NO：11的轻链可变区。

[0016] 采用上述进一步方案的有益效果是本发明所提供的可变区使PD-L1抗体与人PD-L1具有高亲和性和特异性，同时显著抑制PD-L1与受体PD1结合，并且与同家族其它成员不结合，所述抗体可通过抑制PD1信号活化T细胞，刺激T细胞分泌IL2，并显著抑制肿瘤生长。

[0017] 进一步，所述单克隆抗体或其抗原结合部分重链可变区和轻链可变区氨基酸序列与所述氨基酸序列SEQ ID NO:9和SEQ ID NO：11具有至少90％的整体序列同一性。

[0018] 采用上述进一步方案的有益效果是提供可供选择的抗体，与人PD-L1具有高亲和性和特异性，同时显著抑制PD-L1与受体PD1结合，并且与同家族其它成员不结合，所述抗体可通过抑制PD1信号活化T细胞，刺激T细胞分泌IL2，并显著抑制肿瘤生长。

[0019] 进一步，所述单克隆抗体或其抗原结合部分重链氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示。

[0020] 采用上述进一步方案的有益效果是本发明所提供的重链和轻链氨基酸序列使得PD-L1抗体与人PD-L1具有高亲和性和特异性，同时显著抑制PD-L1与受体PD1结合，并且与同家族其它成员不结合，所述抗体可通过抑制PD1信号活化T细胞，刺激T细胞分泌IL2，并显著抑制肿瘤生长。

[0021] 进一步，所述单克隆抗体为IgG1、IgG2或IgG4同种型的全长抗体。

[0022] 采用上述进一步方案的有益效果是免疫球蛋白更易扩散到血管外的间隙内，因而在结合补体、增强免疫细胞吞噬病原微生物和中和细菌毒素的能力方面，具有重要作用，能有效地抗感染。另一方面，免疫球蛋白在体内具有较长的半衰期和更好的稳定性。

[0023] 进一步，所述单克隆抗体为IgG1突变体，其FC上的糖基化位点N突变为A。

[0024] 采用上述进一步方案的有益效果是减少抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。

[0025] 进一步，所述单克隆抗体为抗体片段或单链抗体。

[0026] 采用上述进一步方案的有益效果是提供更多的抗体可选形式。

[0027] 一种用于治疗或缓解癌症、感染性疾病或自身免疫性疾病症状的药物，其特征在于，所述用于治疗或缓解癌症、感染性疾病或自身免疫性疾病症状的药物包含上述的特异性结合人PD-L1的单克隆抗体或其抗原结合部分。

[0028] 采用上述进一步方案的有益效果是将本发明中抗体或者其抗原结合部分应用到治疗或缓解癌症、感染性疾病或自身免疫性疾病症状，扩大了应用范围。

[0029] 一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含上述的单克隆抗体或者其抗原结合部分。

[0030] 采用上述进一步方案的有益效果是将本发明中抗体或者其抗原结合部分应用到试剂盒，有效检测和诊断相关疾病。

附图说明

[0031] 图1为实施例4中PD-L1抗体与PD-L1过表达细胞结合活性的检测结果示意图；

[0032] 图2为实施例5中PD-L1抗体抑制PD1与PD-L1过表达细胞结合活性的检测结果示意图；

[0033] 图3为实施例6的PD-L1抗体抑制PD1与PD-L1重组蛋白结合活性测定的检测结果示意图；

[0034] 图4为实施例7的PD-L1抗体HUL02与重组PD-L1蛋白结合活性的检测结果示意图；

[0035] 图5为实施例8的PD-L1抗体HUL02亲和力检测结果示意图；

[0036] 图6为实施例9为抗体的种间交叉反应和特异性检测结果示意图；

[0037] 图7为实施例10的PD-L1抗体刺激T淋巴细胞分泌IL-2的检测结果示意图；

[0038] 图8为实施例11的抗PD-L1抗体治疗体内肿瘤的药效结果示意图。

具体实施方式

[0039] 以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

[0040] 实施例1.杂交瘤筛选

[0041] 通过杂交瘤细胞技术制备鼠源单克隆抗体。有关实验方案参见文献（Ed Harlow,David Lane. Antibody:A laboratory manual. 1988）。

[0042] 重组PD-L1-His蛋白（义翘神州）与完全弗氏佐剂（Sigma）混合进行腹腔注射，对BALB/c小鼠进行首次免疫，此后，分别在第14d和第35d，用重组蛋白和不完全弗氏佐剂（Sigma）混合后腹腔注射对小鼠进行加强免疫，第56d用重组PD-L1-His (PBS稀释)对BALB/c小鼠静脉注射进行最终免疫，4天后取脾脏进行融合。

[0043] 将鼠脾细胞与SP2/0细胞（ATCC No.CRL-1581）按数量比4：1比例融合，在96孔板（Corning）中以HAT（GBICO）培养基培养，然后进行杂交瘤细胞筛选，所得细胞克隆进行鉴定筛选；

[0044] 鉴定筛选过程分三个步骤：

[0045] ①将重组PD-L1-His（义翘神州）固定化于96孔酶联免疫吸附板（Costar）上，加入克隆表达上清孵育1h后，用PBST洗涤3次，使用羊抗鼠IgG -HRP（Jackson Immuno）鉴定具有PD-L1结合活性细胞克隆上清, PBST洗涤3次,TMB显色，从而获得可与PD-L1直接结合的阳性克隆；

[0046] ②随后将步骤①中的阳性克隆转移入24孔板（Corning）培养，以获得更多的表达产物，将PD-L1稳定过表达CHO细胞株接种于96孔板（Corning）上过夜培养，用1%BSA（说明书中1%BSA均为质量浓度为1%的BSA）封闭加入阳性克隆表达上清共同孵育1h，再用PBS洗涤2次，使用EU标记的羊抗鼠IgG（Perkin Elmer）进行检测，从而鉴别出能够结合细胞表面PD-L1的阳性克隆；

[0047] ③将PD-L1稳定过表达细胞株接种于96孔板（Corning）上过夜培养，，次日用1%BSA封闭后加入抗体上清，再加入生物素重组PD1蛋白，用PBS洗涤2次，加入EU标记链亲和素（Perkin Elmer），读数鉴别出能够抑制结合的阳性克隆。

[0048] 将所筛选的阳性克隆的杂交瘤细胞裂解，提取RNA后逆转录得cDNA，以此cDNA为模板，采用PCR方法分别扩增出鼠IgG抗体的轻链和重链可变区核酸序列，对重链可变区、轻链可变区进行测序，其编码的重链可变区序列如SEQ ID NO.16所示、轻链可变区如SEQ ID NO.17所示，SEQ ID NO.16为EVQLQESGPSLVQPSQTLSLTCSVTGDSFTSGYWNWIRKFPDNKLQYMGYVSYTGSTYYIPSLKSRISITRDTSKNQYFLQLNSVTSEDTATYFCAGYRDWLHGYFDYWGQGTTLTVSS，SEQ ID NO.17为DIVMTQSQKFMSTSIGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQLKPGQSPKALIYSASYRFSGVPDRFTGSGSGTEFTLTITNVQSEDLTDYFCQQYNGYPLTFGAGTKLEVK。

[0049] 实施例2.人源化

[0050] 本实施例是将实施例1中获取的鼠源特异性结合PD-L1单克隆抗体进行人源化，具体按照以下步骤进行：

[0051] 分析鼠源抗体序列，与IMGT的人胚系（germ line）基因比对，最终确定IGKV1-17*01和IGKJ2*01分别为轻链的人源化构架序列，确定IGHV4-31*03和IGHJ6*01为重链人源化构架序列，通过CDR-grafting，将重链和轻链的CDR并置到构架序列，同时，对重链构架区上的关键位点进行回复突变设计，包括Q1E, G27D, I29F, W47Y, V71R, R94G，构建人源化抗体，称为HUL01，其重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，轻链可变区如SEQ ID NO.10所示，SEQ ID NO.9为EVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGDSFSSGYWNWIRQHPGKGLEYIGYVSYTGSTYYIPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGYRDWLHGYFDYWGQGTTVTVSS，SEQ ID NO:9包括SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的重链CDRs，SEQ ID NO:1为SGYWN，SEQ ID NO:2为YVSYTGSTYYIPSLKS，SEQ ID NO:3为YRDWLHGYFDY，SEQ ID NO.10为DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWYQQKPGKAPKRLIYSASYRFSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNGYPLTFGQGTKLEIK，SEQ ID NO:10包括SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的轻链CDRs，NO:4为KASQNVGTNVA,SEQ ID NO:6为SASYRFS，SEQ ID NO:7为QQYNGYPLT。

[0052] 实施例3.亲和力成熟

[0053] 本实施例是对实施例2中的HUL01抗体进行亲和力成熟筛选，基因合成HUL01抗体的scfv片段，DNA序列如SEQ ID NO.20所示，SEQ ID NO.20为GAGGTGCAACTGCAGGAGAGCGGCCCTGGCCTGGTGAAACCCTCCCAGACACTGTCCCTGACCTGCACCGTGTCCGGCGATTCCTTCAGCAGCGGCTACTGGAACTGGATCAGGCAGCATCCCGGAAAGGGACTGGAGTACATCGGCTACGTGTCCTACACCGGCAGCACCTACTACATCCCCTCCCTCAAGTCCCGGGTGACCATCTCCAGGGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACAGCTGCCGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCGGCTACAGGGACTGGCTGCACGGCTACTTCGACTACTGGGGCCAAGGAACCACCGTGACAGTGTCCTCCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGCGGTTCTGGCGGCGGAGGCAGCGACATTCAGATGACCCAGAGCCCTTCCTCCCTCTCCGCTTCCGTGGGAGACAGGGTCACCATCACCTGTAAGGCCTCCCAGAACGTGGGCACCAACGTGGCCTGGTATCAACAGAAGCCCGGCAAGGCTCCCAAGCGGCTGATTTACAGCGCCTCCTACCGGTTCTCCGGAGTGCCTTCCAGGTTCTCCGGCTCCGGTTCTGGAACCGAGTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAACGGCTACCCCCTGACCTTCGGCCAGGGAACCAAGCTGGAGATCAAG，氨基酸如SEQ ID NO.15所示，SEQ ID NO.15为EVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGDSFSSGYWNWIRQHPGKGLEYIGYVSYTGSTYYIPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGYRDWLHGYFDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWYQQKPGKAPKRLIYSASYRFSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNGYPLTFGQGTKLEIK，并将scfv连接到PCOMB3噬菌体质粒中，分析鼠源抗体CDR的DNA序列，确定可变区CDR中的突变热点，设计引物序列，将突变热点位点所在的引物位置设计为NNS，使之编码任意的氨基酸，以HUL01抗体scfv为模板，PCR扩增scfv抗体库，将scfv的抗体库，通过sfiI酶切位点，构建到PCOMB3噬菌体质粒中，构建抗体库，然后通过噬菌体展示进行高亲和力抗体筛选，具体步骤如下：

[0054] ①通过电转化，将含scfv的抗体库的噬菌体质粒转化到TG1中，经过37度，250rpm，1h的恢复后，将helper phage加入到菌液中，另加入Ampicillin，37度，250rpm，1h，2500rpm x5min离心去上清，用2x YT-AK吹悬菌泥，37度，250rpm过夜培养；②包被抗原：用包被缓冲液稀释PD-L1蛋白，混匀加入到免疫管中，4度包被过夜；③重组噬菌体收集：上述过夜培养菌液，2500rpm x5min离心，收集上清10ml，加入2ml PEG/NaCl，混匀放置冰上1h，10000g×
20 min离心，去上清，用PBS溶解噬菌体库；④封闭：免疫管用PBS洗两次，加入封闭液，室温
1h；另外，取等体积封闭液与噬菌体库混合，室温封闭10-15min；⑤孵育噬菌体库：免疫管用PBS洗2次，加入封闭好的噬菌体库，37度培养箱2-3h；⑥洗脱：取100TG1菌液（前一天接种）到10ml2x YT中，37度，250rpm培养到A600值0.4-0.5。用PBST洗涤免疫管8次，再用PBS洗2次,加入5ml对数期生长的菌液，37度,250rpm,1h；⑦稀释上述菌液10-1,10-2，分别取100ul涂平板。⑧下－轮筛选：取200 ul helper phage加入到5ml洗脱后的菌液中，同时加入5ul Ampicillin，37度，250rpm，1h，2500rpm x5min离心去上清，用10ML 2x YT-AK吹悬菌泥，37度，250rpm过夜培养，重复步骤①-⑦。

[0055] 经过三轮筛选，挑选单克隆抗体，通过噬菌体ELISA方法，检测phage活性，具体如下：

[0056] ①包被PD-L1蛋白，0.5ug/ml，4度过夜；②PBST洗两次，加入50ul phage上清和50ul 1%BSA，37℃，1h；③PBST洗三次，加入100ul 1:10000稀释的anti-M13- Ab-HRP（义翘神州），37℃，1h；④PBST洗三次，加入100ul预热的TMB, 室温10min；⑤加入50ul 1M H2SO4中止反应，OD450检测吸光值。

[0057] 挑选阳性单克隆抗体，通过噬菌体与PD-L1过表达细胞结合实验，检测单克隆抗体的细胞结合活性，具体如下：

[0058] ①用胰酶消化PD-L1过表达细胞，200gx5min，用1%BSA重悬细胞，室温，1h；②封闭phage: 50ul phage上清和50ul 1%BSA，室温，1h；③细胞铺板，100ul/孔，2500rpmx5min；④弃上清，用封闭好的phage重悬细胞，100ul/well，室温，1h；⑤细胞PBS洗两次，加入100ul 1:10000稀释的anti-M13- Ab-HRP，室温，1h；⑥细胞PBST洗两次，加入100ul预热的TMB, 室温，10min；⑦加入50ul 1M H2SO4中止反应，OD450检测吸光值。

[0059] 共挑选五个细胞结合克隆，分别是clone1,clone2,clone3,clone 4,clone5，进行测序，共鉴定出3株序列不同的单克隆抗体，其中clone1,clone2,clone3的序列与HUL01一样，来自clone4的抗体命名为HUL02，clone5的抗体命名为HUL03。其中，HUL02的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，轻链可变区如SEQ ID NO.11所示，SEQ ID NO.11为DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVMDNVAWYQQKPGKAPKRLIYSASYRFSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNGYPLTFGQGTKLEIK，SEQ ID NO:11包括SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的轻链CDRs，SEQ ID NO:5为KASQNVMDNVA，HUL03的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，轻链可变区如SEQ ID NO.12所示，SEQ ID NO.12为DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWYQQKPGKAPKRLIYSASYRFSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGQGTKLEIK，SEQ ID NO:12包括SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8所示的轻链CDRs，SEQ ID NO:8为QQYNSYPLT。

[0060] 构建HUL01, HUL02和HUL03的全长抗体：通过PCR法，将抗体的重链可变区DNA片段和重链IgG1的恒定区（其中FC上糖基化位点N突变为A）连接，获得全长重链，将轻链可变区DNA片段分别与和轻链K链的恒定区连接，获得全长轻链。全长重链和轻链DNA片段，均包含信号肽，分别克隆入PCDNA3.1（Invitrogen）质粒。将HUL01,HUL02和HUL03表达质粒瞬转293C18细胞株（ATCC No.CRL-10852），用Protein A（GE）纯化上清，获取纯化抗体。

[0061] HUL01的重链氨基酸序列和轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.18所示, SEQ ID NO.13为EVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGDSFSSGYWNWIRQHPGKGLEYIGYVSYTGSTYYIPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGYRDWLHGYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK，SEQ ID NO.18为DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWYQQKPGKAPKRLIYSASYRFSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNGYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC，HUL01的重链全长DNA序列和轻链DNA序列如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示，SEQ ID NO.21为GAGGTGCAACTGCAGGAGAGCGGCCCTGGCCTGGTGAAACCCTCCCAGACACTGTCCCTGACCTGCACCGTGTCCGGCGATTCCTTCAGCAGCGGCTACTGGAACTGGATCAGGCAGCATCCCGGAAAGGGACTGGAGTACATCGGCTACGTGTCCTACACCGGCAGCACCTACTACATCCCCTCCCTCAAGTCCCGGGTGACCATCTCCAGGGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACAGCTGCCGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCGGCTACAGGGACTGGCTGCACGGCTACTTCGACTACTGGGGCCAAGGAACCACCGTGACAGTGTCCTCCGCCAGCACCAAGGGACCATCCGTGTTCCCACTGGCTCCAAGCTCTAAATCCACTAGCGGAGGCACCGCAGCCCTGGGATGTCTGGTGAAGGATTACTTCCCAGAGCCCGTCACAGTGTCATGGAACTCCGGGGCTCTGACCTCTGGTGTCCACACATTTCCAGCAGTGCTGCAGAGTTCAGGCCTGTACTCCCTGTCCAGCGTGGTCACAGTGCCCTCTAGTTCACTGGGAACTCAGACCTATATCTGCAACGTGAATCACAAGCCATCCAATACTAAAGTCGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGTGATAAAACACATACTTGCCCCCCTTGTCCTGCACCAGAACTGCTGGGAGGACCATCCGTGTTCCTGTTTCCACCCAAGCCTAAAGACACTCTGATGATTTCTCGAACACCCGAGGTCACTTGCGTGGTCGTGGACGTGTCCCACGAGGATCCTGAAGTCAAGTTTAACTGGTACGTGGATGGAGTCGAAGTGCATAATGCTAAGACAAAACCTAGAGAGGAACAGTACGCCAGTACATATAGAGTCGTGTCAGTCCTGACTGTGCTGCATCAGGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTATAAGTGCAAAGTGTCCAATAAGGCTCTGCCCGCACCTATCGAGAAAACTATTAGCAAGGCTAAAGGCCAGCCTAGGGAACCACAGGTGTACACCCTGCCTCCATCTCGGGAGGAAATGACTAAGAACCAGGTCAGTCTGACCTGTCTGGTGAAAGGCTTCTATCCTTCCGACATCGCAGTGGAGTGGGAAAGCAATGGACAGCCAGAGAACAATTACAAGACCACACCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGGTCTTTCTTTCTGTATAGTAAGCTGACCGTGGATAAATCACGGTGGCAGCAGGGTAATGTCTTTTCTTGTAGTGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCATTACACTCAGAAATCCCTGTCACTGTCCCCTGGAAAGTGA，SEQ ID NO.22为GACATTCAGATGACCCAGAGCCCTTCCTCCCTCTCCGCTTCCGTGGGAGACAGGGTCACCATCACCTGTAAGGCCTCCCAGAACGTGGGCACCAACGTGGCCTGGTATCAACAGAAGCCCGGCAAGGCTCCCAAGCGGCTGATTTACAGCGCCTCCTACCGGTTCTCCGGAGTGCCTTCCAGGTTCTCCGGCTCCGGTTCTGGAACCGAGTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAACGGCTACCCCCTGACCTTCGGCCAGGGAACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA；HUL02的重链氨基酸序列和轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示，SEQ ID NO.14为DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVMDNVAWYQQKPGKAPKRLIYSASYRFSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNGYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC，HUL02的重链全长DNA序列和轻链DNA序列如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.23所示，SEQ ID NO.23为GACATTCAGATGACCCAGAGCCCTTCCTCCCTCTCCGCTTCCGTGGGAGACAGGGTCACCATCACCTGTAAGGCCTCCCAGAACGTGATGGACAACGTGGCCTGGTATCAACAGAAGCCCGGCAAGGCTCCCAAGCGGCTGATTTACAGCGCCTCCTACCGGTTCTCCGGAGTGCCTTCCAGGTTCTCCGGCTCCGGTTCTGGAACCGAGTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAACGGCTACCCCCTGACCTTCGGCCAGGGAACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA；HUL03的重链氨基酸序列和轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.19所示，SEQ ID NO.19为DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVMDNVAWYQQKPGKAPKRLIYSASYRFSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC，HUL03的重链全长DNA序列和轻链DNA序列如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.24所示，SEQ ID NO.24为GACATTCAGATGACCCAGAGCCCTTCCTCCCTCTCCGCTTCCGTGGGAGACAGGGTCACCATCACCTGTAAGGCCTCCCAGAACGTGGGCACCAACGTGGCCTGGTATCAACAGAAGCCCGGCAAGGCTCCCAAGCGGCTGATTTACAGCGCCTCCTACCGGTTCTCCGGAGTGCCTTCCAGGTTCTCCGGCTCCGGTTCTGGAACCGAGTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAACAGCTACCCCCTGACCTTCGGCCAGGGAACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA。

[0062] 实施例4.与PD-L1过表达细胞结合活性测定

[0063] 将PD-L1过表达细胞铺板于黑色96孔板，培养过夜，1%BSA封闭，37度,孵育1小时；抗体5ug/ml起始，3倍稀释，8浓度，100ul/孔，25度孵育1小时；PBS洗一次，然后，加入anti-human-IgG-EU（Perkin Elmer），50ng/ml，每孔100ul，25度反应0.5小时；PBS洗两次，最后，加入荧光增强液，激发光337nm/发射光620nm读数。结果显示如图1所示，所筛选的单克隆抗体HUL01, HUL02和HUL03与过表达细胞结合EC50分别为130ng/ml,69.51ng/ml和128.2ng/ml。

[0064] 实施例5.抑制PD1与PD-L1过表达细胞结合活性测定

[0065] 将PD-L1过表达细胞铺板于黑色96孔板，培养过夜；1%BSA封闭，25度，孵育1小时；抗体10ug/ml起始，3倍稀释，50ul,再加入50ul生物素重组PD1蛋白，25度孵育1小时，PBS洗一次；然后，加入EU标记链亲和素（Perkin Elmer），每孔100ul，25度反应0.5小时，PBS洗两次；最后，加入荧光增强液，激发光337nm /发射光620nm读数。结果显示如图2所示，所筛选的单克隆抗体HUL01, HUL02和HUL03与抑制PD1与PD-L1过表达细胞结合IC50分别为
228.3ng/ml,114.9ng/ml和206.2ng/ml。

[0066] 实施例６.抑制PD1与PD-L1重组蛋白结合活性测定

[0067] 96孔板（Costar）包被重组PD-L1-Fc蛋白，1ug/ml，4度过夜；1%BSA封闭，37度，孵育1小时；PBST洗二次，抗体终浓度1ug/ml开始，3倍稀释，生物素化重组PD1蛋白终浓度0.5ug/ml，同时加入，37度孵育1小时；PBST洗二次，加入链亲和素-HRP（1：10000稀释），37度，孵育1小时；PBST洗三次，加入100ul预热的TMB，室温10min；加入50ul 1M H2SO4中止反应，OD450检测吸光值。结果显示如图3所示，所筛选的单克隆抗体HUL01, HUL02和HUL03与抑制PD1与PD-L1重组蛋白结合IC50分别为117.1ng/ml,71.61 ng/ml和118ng/ml。

[0068] 实施例7.与重组PD-L1蛋白结合活性测定

[0069] 将重组PD-L1-HIS蛋白包被于96孔板（Costar）上，4度过夜；1%BSA封闭，37度，孵育1小时；PBST洗二次，抗体终浓度1ug/ml开始，3倍稀释，37度孵育1小时；PBST洗二次，加入驴抗人IgG -HRP（Jackson Immuno），37度孵育1小时；PBST洗三次，加入100ul预热的TMB, 室温10min；加入50ul 1M H2SO4中止反应，OD450检测吸光值。结果显示如图4所示，所筛选的单克隆抗体HUL02与PD-L1蛋白的直接结合EC50为20.61ng/ml。

[0070] 实施例8.单克隆抗体的亲和力测定

[0071] 采用BIAcore T200测定单克隆抗体与PD-L1的亲合常数KD,首先，将羊抗人IgG固定在 CM5 芯片上，以10 μl/min 加入10 μg/ml的单克隆抗体，持续100秒，然后，以30μl/min流速加入300nM的PD-L1-HIS，持续300秒，观察解离情况，持续1200秒。Biacore T200分析软件，分析抗体的亲合常数KD ，KD为kd/ka。结果显示（图5），HUL02的亲合常数KD为1.7E-10M。

[0072] 实施例９.种间交叉反应试验和特异性

[0073] 将重组人B7-1,人B7-2,人PDL2，鼠PD-L1,猴PD-L1和人PD-L1蛋白分别包被于96孔板（Costar）上，4度过夜；1%BSA封闭，37度孵育1小时；PBST洗二次，抗体终浓度1ug/ml，37度孵育1小时；PBST洗二次，加入驴抗人IgG抗体-HRP（Jackson Immuno），37度，孵育1小时；PBST洗三次，加入100ul预热的TMB,室温10min；加入50ul 1M H2SO4中止反应，OD450检测吸光值。结果显示（图6），HUL02的不与同家族其它蛋白人B7-1, 人B7-2和人PDL2结合，与猴PD-L1结合。

[0074] 实施例10.抗体刺激T淋巴细胞的IL-2分泌

[0075] 采用混合淋巴细胞法（MLR）检测抗体对T淋巴细胞的刺激作用。分离PBMC，先用PBS缓冲液1：1稀释血液，移取3ml的淋巴细胞分离液至离心管内，加入稀释过的血液4ml，注意加入的时候，确保使稀释后的血液至于淋巴细胞分离液的上层，不可混匀。然后，400g，RT离心30-40min。最后吸出分离的PBMC，100g离心10min。采用CD4+细胞分离试剂盒(BD公司)分5
离CD4+T细胞，DC细胞分离磁珠(BD公司)分离DC细胞。细胞铺板，每孔CD4+T细胞数量1×10个，DC数量1×104个，体积共计100ul. 加入不同浓度抗体，以已上市PD1抗体药物Keytruda为对照抗体，培养5天后采用Human IL-2 HTRF kit(Cisbio,cat#64IL2PEB)检测IL-2的浓度。结果显示（图7），HUL02刺激T淋巴细胞IL-2分泌的EC50为0.062ug/ml，优于对照抗体。

[0076] 实施例11.使用抗PD-L1抗体治疗体内肿瘤模型

[0077] 采用MC38-hPDL1细胞皮下荷瘤小鼠模型, 检查PD-L1抗体对肿瘤生长的体内效果。收集对数生长期的MC38.hPDL1细胞，去除培养液并用PBS洗两次后接种到B6-Pdl1tm(hPDL1)/Nju小鼠，接种量为5×105/100ul/只（不添加基质胶）。待平均肿瘤体积达到100mm3左右，将肿瘤体积达到分组标准的小鼠随机分为3组，分别为Vehicle control (PBS)，阳性药物（ Tecentriq in PBS）和待测药物（HUL02 in PBS），然后开始给药，给药周期为q2d x8, 给药方式为i.p，给药剂量为10mg/kg。给药当日测量小鼠体重和肿瘤体积，后续每周测量2次。当肿瘤达到肿瘤终点（1500mm')或显示体重下降超过15%时，实验终止，对全部小鼠执行安乐死。结果显示（图6），在MC38-hPDL1鼠肿瘤模型中 ，HUL02显著抑制肿瘤的生长，效果优于阳性药物。

[0078] 本发明的抗体可用基因工程技术制得，因为编码本发明人源化抗体的DNA序列可用本领域技术人员熟知的常规手段，如根据本发明公开的氨基酸序列人工合成或用PCR法扩增得到，因而也可用重组DNA方法，可用本领域熟知的各种方法将该序列连入合适的表达载体中。

[0079] 一旦制得本发明的抗体分子，就可以通过本领域已知的纯化免疫球蛋白分子的任何方法对其进行纯化，例如，通过色谱法（例如，离子交换色谱，亲和色谱，特别是通过蛋白A对特异性抗原的亲和色谱和其它柱色谱）、离心、利用溶解度差异，或通过任何其它纯化蛋白质的标准技术。在许多实施方案中，抗体从细胞分泌到培养基中，通过收集培养基并进行纯化得到抗体。

[0080] 本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作均为相关领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为更好理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

[0081] 本发明中，术语“抗体”包括完整抗体及其任何抗原结合片段（即“抗原结合部分”）或单链。“抗体”是指包含通过二硫键互相连接在一起的至少两条重（H）链和两条轻（L）链的糖蛋白，或其抗原结合部分。每条重链由重链可变区（VH）和重链恒定区（CH）组成。重链恒定区由三个结构域CH1,CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区（VL）和轻链恒定区（CL）组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可进一步分为高变区，称为互补决定区（CDR）,CDR散布在被称为构架区（FR）的更加保守的区域中。每个VH和VL均由三个CDR和四个FR组成，它们从氨基端向羧基端以如下顺序排列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。重链和轻链的可变区含有可与抗原相互作用的结合结构域。抗原的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，该宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞（例如效应细胞）和经典补体系统的第一成分（C1q）。构架区和互补决定区的范围已被精确定义（参见"Sequences of Proteins of Immunological Interest," E. Kabat等, U.S. Department of Health and Human Services, 1991)。此处所讨论的所有抗体氨基酸序列的排序都参照Kabat系统。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制，例如，其包括，特别地，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。

[0082] 本发明中，术语“抗原结合部分”是指保留与抗原特异性结合的能力的抗体的一个或多个片段。已证明抗体的抗原结合功能可由全长抗体的片段来行使。术语“抗原结合部分”中所包括的结合片段的例子包括：（1）Fab片段，即由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；（2）F(ab’)2片段，即包含在铰链区处通过二硫键连接的两个Fab片段的双价片段；（3）由VH和CH1结构域组成的Fd片段；（4）由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；（5）由VH结构域组成的dAb片段（Ward等（1989）Nature 341:544-546）；和(6)分离的互补决定区（CDR）。

[0083] 本发明中，术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别（例如IgM或IgG1）。

[0084] 术语“人源化抗体”是指其中来源于另外一种哺乳动物种如小鼠的种系的CDR序列被移植到人构架序列上的抗体。在人构架序内也可以进行其它的修饰。

[0085] 术语“嵌合抗体”是其重链和轻链基因经过构建的抗体，特别是利用基因工程改造的属于不同物种的抗体可变区和恒定区基因。例如，可以将鼠单克隆抗体基因的可变区片段连接到人抗体恒定区片段如γ1和γ3。当然，嵌合抗体的基因来源也可以使用其它哺乳动物物种。

[0086] 本发明中“KD”是指解离常数，它是由Kd和Ka的比值获得（即Kd/Ka），并且表示为摩尔浓度（M）.抗体的KD值可用本领域建立的方法测定。测定KD的一种优选方法是使用表面等离子共振，优选使用生物传感器系统，如Biacore系统。

[0087] 本发明所述至少90％的整体序列同一性是指序列同一性为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％，本发明中单克隆抗体或其抗原结合部分重链可变区和轻链可变区氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO:9和SEQ ID NO：11具有至少90％的整体序列同一性，指单克隆抗体或其抗原结合部分重链可变区和轻链可变区氨基酸序列的总和与氨基酸序列SEQ ID NO:9和SEQ ID NO：11的序列总和具有至少90%的序列同一性。

[0088] 本发明所述PD-L1抗体还包括免疫球蛋白的恒定区。

[0089] 本发明所述的癌症为包括但不限于肺癌、结肠癌、黑色素瘤、肾癌、膀胱癌、乳腺癌、肝癌、淋巴瘤、恶性血液病、胃癌、宫颈癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌；所述感染性疾病包括但不限于细菌、真菌、原生动物和病毒感染疾病；所述自身免疫性疾病包括但不限于慢性炎性疾病（如扁平苔藓或T细胞介导的慢性炎性皮肤粘膜病）。

[0090] 本发明PD-L1抗体的重链和轻链，以及PD-L1抗体还可以用于与PD-L1相关的科学研究，如发育生物学、细胞生物学、代谢、结构生物学、功能基因组学等多个领域的科学研究、或肿瘤、自身免疫性疾病等医学和药学的应用研究。

[0091] 本发明所述PD-L1抗体可以为单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体、以及前述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。

[0092] 本发明所述药物组合物中还含有药学上可接受的载体和/或稀释剂。

[0093] 本发明还可以是一种试剂或芯片，包含前述的PD-L1抗体。

[0094] 本发明还公开了采用PD-L1抗体用来抑制PD1信号通路的方法，以及该抗体用于治疗相关疾病或使用含有该抗体的试剂盒进行相关诊断与检测。

[0095] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。