一种泛酸钠异构体的检测方法

摘要

本发明的目的是提供一种泛酸钠异构体的检测方法，采用试剂直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)衍生物对D‑泛酸钠中的异构体L‑泛酸钠进行柱前衍生化，从而实现D‑泛酸钠中的异构体L‑泛酸钠的分离测定，使其在系统适用性、专属性、精密度、检测限、定量限、线性和范围、准确度和耐用性等方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于泛酸钠原料药的质量控制。

权利要求

1.一种泛酸钠异构体的检测方法，包括以下步骤：

(1)配制溶液，分别配制空白溶液、DL-泛酸钙储备液、系统适用性溶液和测试溶液；所述空白溶液中包括95％乙醇溶液和稀释液溶液；所述DL-泛酸钙储备液中包括DL-泛酸钙、

95％乙醇溶液和稀释液溶液；所述系统适用性溶液中包括DL-泛酸钙储备液、95％乙醇溶液和稀释液溶液；所述测试溶液中包括D-泛酸钠样品、95％乙醇溶液和稀释液溶液；

(2)测定方法：分别将空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：用直链淀粉—三(3,5—二甲苯基氨基甲酸酯)衍生物为填充剂；流速1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μl；运行时间：15min；检测波长：210nm；进行等度洗脱，洗脱时间为15min；所述稀释溶液为流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸体系；所述正己烷-异丙醇-三氟乙酸体系溶液中正己烷：异丙醇：三氟乙酸的体积比为85：15：0.2。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述空白溶液的配制步骤为：取10ml容量瓶，先加2ml 95％乙醇，再用稀释液稀释至刻度，摇匀即得空白溶液；

所述DL-泛酸钙储备液：取DL-泛酸钙对照品12mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加95％乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀即得DL-泛酸钙储备液；

所述系统适用性溶液：精密量取DL-泛酸钙储备液1.0ml，置10ml容量瓶中，加1ml 95％乙醇，用稀释液稀释至刻度，摇匀即得系统适用性溶液；

所述测试溶液：取D-泛酸钠样品60mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加2ml 95％乙醇超声溶解后，用稀释液稀释至刻度，摇匀即得测试溶液；

所述三氟乙酸为AR及以上级；

所述三氟乙酸为扫尾剂；

所述95％乙醇为AR及以上级；

所述色谱柱为Chiralpak AD-H,5μm,4.6×250mm。

说明书

一种泛酸钠异构体的检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种HPLC法测定泛酸钠异构体的方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

[0002] 泛酸钠（CAS号：867-81-2）是一种白色结晶或结晶性粉末，英文名称D-Pantothenic Acid Sodium Salt，别名右旋泛酸钠，化学名（R）-N-（2，4-二羟基-3，3-二甲基-1-氧代丁基）-β-氨基丙酸单钠盐，是维生素B5的钠盐形式。泛酸商品名为Unithroid，为维生素类药物，是辅酶A（CoA）的前体物质，在体内参与蛋白质、脂肪、糖类的新陈代谢，用于各种需要补充维生素的疾病，补充维持人体正常生理代谢所必需的营养。泛酸钠临床上用于维生素B缺乏症及周围神经炎以及手术后的肠绞痛的治疗，与维生素C合用可治疗播散性红斑狼疮，除了作为药物用于疾病治疗外，也是人体和动物维持正常生理不可缺少的微量元素，因此广泛应用于食品加工和饲料生产中。所述维生素是维持人类机体正常代谢功能所必须的微量营养物质，主要作用于机体的能量转移和代谢调节，它作为体内数十种辅酶的组成成分，对于催化碳水化合物、脂类及蛋白质代谢的酶类至关重要，对于药物代谢、自由基的捕获、防止细胞损伤及细胞膜的过氧化反应也是必需的。由于人体内不能合成或合成量很少，必须定量定时从食物中获取。

[0003] 因泛酸钠（D-泛酸钠）生产过程中使用了起始物料DL-泛解酸内酯，合成了DL-泛酸钠，经过拆分，最终得到D-泛酸钠，因此D-泛酸钠的异构体，即L-泛酸钠可能存在于D-泛酸钠成品中，根据ICH指导原则中的质量指导原则部分，需要控制原料药中的杂质。目前还没有文献报道泛酸钠异构体的检测方法，本发明首次提出了一种泛酸钠异构体的检测方法，采用试剂直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)衍生物对D-泛酸钠中的异构体L-泛酸钠进行柱前衍生化，从而实现D-泛酸钠中的异构体L-泛酸钠的分离测定。

发明内容

[0004] 本发明的目的是提供一种泛酸钠异构体的检测方法，采用试剂直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)衍生物对D-泛酸钠中的异构体L-泛酸钠进行柱前衍生化，从而实现D-泛酸钠中的异构体L-泛酸钠的分离测定，使其在系统适用性、专属性、精密度、检测限、定量限、线性和范围、准确度和耐用性等方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于泛酸钠原料药的质量控制。

[0005] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

[0006] 一种泛酸钠异构体的检测方法，包括以下步骤：

[0007] （1）配制溶液，分别配制空白溶液、DL-泛酸钙储备液、系统适用性溶液和测试溶液；所述空白溶液中包括95%乙醇溶液和稀释溶液；所述DL-泛酸钙储备液中包括DL-泛酸钙对照品、95%乙醇溶液和稀释溶液；所述系统适用性溶液中包括DL-泛酸钙储备液、95%乙醇溶液和稀释系溶液；所述测试溶液中包括D-泛酸钠样品、95%乙醇溶液和稀释溶液；

[0008] （2）测定方法：分别将空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：用直链淀粉—三（3,5—二甲苯基氨基甲酸酯）衍生物为填充剂；流速1.0±0.1mL/min；柱温：25±2℃；进样量：10μl；运行时间：15min；检测波长：210nm；流动相为正己烷-异丙醇-三氟乙酸体系，进行梯度洗脱。

[0009] 本发明的一种泛酸钠异构体的检测方法，所述空白溶液的配制步骤为：取10ml容量瓶，先加95%乙醇，再用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得空白溶液；

[0010] 所述DL-泛酸钙储备液：取DL-泛酸钙对照品，精密称定，置10ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解并用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得DL-泛酸钙储备液；

[0011] 所述系统适用性溶液：精密量取DL-泛酸钙储备液，置10ml容量瓶中，加95%乙醇，用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得系统适用性溶液；

[0012] 所述测试溶液：取D-泛酸钠样品，精密称定，置10ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解后，用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得测试溶液；

[0013] 所述稀释溶液为流动相，即：正己烷-异丙醇-三氟乙酸体系；

[0014] 所述正己烷-异丙醇-三氟乙酸体系溶液中正己烷：异丙醇：三氟乙酸=85：15：0.2（V/V/V）

[0015] 所述三氟乙酸为AR及以上级；

[0016] 所述三氟乙酸为扫尾剂，可以改善峰形；

[0017] 所述95%乙醇为AR及以上级；

[0018] 所述色谱柱可为Chiralpak AD-H，5μm，4.6×250mm；

[0019] 更优选的，本发明所述的测定方法，包括以下步骤：

[0020] （1）配制溶液，分别配制空白溶液、DL-泛酸钙储备液、系统适用性溶液和测试溶液；所述空白溶液的配制步骤为：取10ml容量瓶，先加2ml95%乙醇，再用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得空白溶液。

[0021] DL-泛酸钙储备液，取DL-泛酸钙对照品约12mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解并用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得DL-泛酸钙储备液（DL-泛酸钙浓度：1.2mg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：0.6mg/ml）。

[0022] 系统适用性溶液，精密量取DL-泛酸钙储备液1.0ml，置10ml容量瓶中，加1ml95%乙醇，用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得系统适用性溶液（DL-泛酸钙浓度：0.12mg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：0.06mg/ml）。

[0023] 测试溶液，取D-泛酸钠样品约60mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加2ml95%乙醇超声溶解后，用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得测试溶液（D-泛酸钠浓度：6mg/ml）。

[0024] 所述稀释溶液为流动相，即：正己烷-异丙醇-三氟乙酸体系；所述正己烷-异丙醇-三氟乙酸体系溶液中正己烷：异丙醇：三氟乙酸=85：15：0.2（V/V/V）；所述三氟乙酸为AR及以上级；所述三氟乙酸为扫尾剂，可以改善峰形；所述95%乙醇为AR及以上级。

[0025] （2）测定方法：分别将空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：用直链淀粉—三（3,5—二甲苯基氨基甲酸酯）衍生物为填充剂；流速1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μl；运行时间：15min；检测波长：210nm；流动相为正己烷-异丙醇-三氟乙酸体系，进行梯度洗脱；所述色谱柱可为Chiralpak AD-H,5μm, 4.6×250mm。

[0026] 所述的L-泛酸钠含量的测定方法还包括在检测之前的方法验证，该方法验证为按照正式检测的色谱条件，测定结果为：

[0027]

[0028] 有益效果

[0029] 由以上技术方案可知，本发明所述的检测方法对泛酸钠异构体的色谱峰分离度高、具有较高的系统适用性，同时在专属性、精密度、定量限、检测限、准确度、线性和范围和耐用性都符合标准。本发明利用方便快捷的高效液相色谱法，对泛酸钠异构体的检测，可用于监测泛酸钠原料药及制剂的质量。本发明首次提出了泛酸钠异构体的检测方法，具有准确度高、精密度高、重现性好、稳定性好、专属性强等特点，同时本发明的测定方法操作简单，所用时间比较短，成本低，耗时短。

附图说明

[0030] 图1为泛酸钠异构体检测空白溶液的液相色谱图；

[0031] 图2为泛酸钠异构体检测空白溶液的放大液相色谱图；

[0032] 图3为泛酸钠异构体检测参比溶液的液相色谱图；

[0033] 图4为泛酸钠异构体检测参比溶液的放大液相色谱图；

[0034] 图5为泛酸钠异构体检测系统适用性溶液的液相色谱图；

[0035] 图6为泛酸钠异构体检测系统适用性溶液的放大液相色谱图；

[0036] 图7为泛酸钠异构体检测D-泛酸钠定位溶液的液相色谱图；

[0037] 图8为泛酸钠异构体检测D-泛酸钠定位溶液的放大液相色谱图；

[0038] 图9为泛酸钠异构体检测选择性溶液的液相色谱图；

[0039] 图10为泛酸钠异构体检测选择性溶液的放大液相色谱图；

[0040] 图11为泛酸钠异构体检测定量限溶液的液相色谱图；

[0041] 图12为泛酸钠异构体检测定量限溶液的放大液相色谱图；

[0042] 图13为泛酸钠异构体线性关系图。

具体实施方式

[0043] 下面用具体实施例来进一步解释和说明本发明，但并不以任何方式限制本发明的范围。

[0044] 实施例1

[0045] (1)实验材料与仪器条件

[0046] 仪器：高效液相色谱仪：Thermo；色谱柱：Chiralpak AD-H，5μm，4.6×250 mm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μl；运行时间：15min；检测波长：210nm。分别将空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：用直链淀粉-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）衍生物为填充剂；流速1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μl；运行时间：15min；检测波长：210nm；流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸，进行梯度洗脱，其梯度如表1。

[0047] 表1-梯度洗脱条件时间（min） 流动相A 流动相B 流动相C
0 85 15 0.2
5 85 15 0.2
10 85 15 0.2
15 85 15 0.2

[0048] （2）实验步骤

[0049] 配制正己烷：异丙醇：三氟乙酸=85：15：0.2（V/V/V）混合溶液；

[0050] 配制1.2mg/mlDL-泛酸钙储备液，所述储备液采用DL-泛酸钙对照品、95%乙醇溶液和稀释液配制；

[0051] 配制系统适用性溶液，所述系统适用性溶液采用0.12mg/ml的DL-泛酸钙储备液和95%乙醇溶液和稀释液配制；

[0052] 配制测试溶液，所述测试溶液采用D-泛酸钠样品、95%乙醇溶液和稀释液，其中D-泛酸钠浓度为6mg/ml；

[0053] 空白溶液：取10ml容量瓶，先加2ml95%乙醇，再用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得空白溶液。

[0054] DL-泛酸钙储备液：取DL-泛酸钙对照品约12mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解并用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得DL-泛酸钙储备液（DL-泛酸钙浓度：
1.2mg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：0.6mg/ml）。

[0055] 系统适用性溶液：精密量取DL-泛酸钙储备液1.0ml，置10ml容量瓶中，加1ml95%乙醇，用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得系统适用性溶液（DL-泛酸钙浓度：0.12mg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：0.06mg/ml）。

[0056] ⑧测试溶液：取D-泛酸钠样品约60mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加2ml95%乙醇超声溶解后，用稀释溶液稀释至刻度，摇匀即得测试溶液（D-泛酸钠浓度：6mg/ml）。

[0057] ⑨参比溶液：取D-泛酸钙对照品约30mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置10ml容量瓶中，加1ml95%乙醇，用稀释液稀释至刻度，摇匀（D-泛酸钠浓度：0.06mg/ml）。

[0058] ⑩选择性溶液：取D-泛酸钠样品约60mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加1ml95%乙醇，再精密移取DL-泛酸钙储备液1.0ml，超声溶解后加稀释液稀释至刻度，摇匀（D-泛酸钠浓度：6mg/ml，L-泛酸钠浓度：0.06mg/ml）。

[0059] 待系统稳定后，进空白溶液1针，系统适用性溶液1针，测试溶液1针。系统适用性溶液中D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度≥1.5，测试溶液色谱图中仅积分D-泛酸钠与L-泛酸钠的色谱峰，按面积归一化法计算，计算结果如表2所示。

[0060] 表2-泛酸钠中L-泛酸钠的样品含量

[0061]

[0062] 实施例2本发明所述检测方法系统适用性试验

[0063] 系统适用性是通过测定5针参比溶液中D-泛酸钠峰面积的RSD以及系统适用性溶液中D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度而实现的，要求5针参比溶液中D-泛酸钠峰面积的RSD≤2.0%，系统适用性溶液中D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度≥1.5。如实施例1所述配制空白溶液、参比溶液、系统适用性溶液，在实施例1所述色谱条件下，进空白溶液1针，参比溶液5针，系统适用性溶液1针，得到色谱图，如图1、图2、图3、图4、图5和图6，根据公式换算结果如下表所示：

[0064] 表3-系统适用性测定结果

[0065]

[0066] 结论为：5针参比溶液中D-泛酸钠峰面积的RSD为0.4%，符合方案中RSD应小于2.0%的要求。

[0067] 实施例3 本发明所述检测方法专属性试验

[0068] 方法的专属性是通过研究峰鉴别和选择性而实现的，要求空白溶剂对检测无干扰；D-泛酸钠定位溶液对L-泛酸钠的检测无干扰；选择性溶液中L-泛酸钠与相邻峰的分离度≥1.5，L-泛酸钠的回收率应在90.0% 110.0%之间。如实施例1所述配制空白溶液、DL-泛~酸钠储备液、L-泛酸钠定位溶液（系统适用性溶液）、D-泛酸钠定位溶液和选择性溶液。待系统平衡后，进空白溶液1针、L-泛酸钠定位溶液3针、选择性溶液3针、D-泛酸钠定位溶液1针，记录色谱图，如图1、图2、图7、图8、图9和图10，得出专属性检测结果如下。

[0069] 表4-专属性检测结果

[0070]

[0071] 结论：空白溶剂对检测无干扰；D-泛酸钠定位溶液对L-泛酸钠的检测无干扰；选择性溶液中L-泛酸钠与相邻峰的分离度为2.2，符合方案中分离度≥1.5要求。

[0072] 表5-专属性选择性测定结果

[0073]

[0074] 结论：选择性溶液中L-泛酸钠的回收率为99.5% 100.3%%，符合方案中回收率应在~90.0% 110.0%之间要求。
~

[0075] 实施例4本发明所述检测方法精密度试验

[0076] （1）重复性：精密度的重复性是通过测定6份测试溶液而实现的，要求6份测试溶液中L-泛酸钠含量测定结果之间的RSD应符合可接受标准。如实施例1所述配制空白溶液和测试溶液。待系统平衡后，进空白溶液1针，6份测试溶液各1针，记录色谱图，如图1、图2、图7和图8，根据公式换算得出结果如下表所示：

[0077] 表6-精密度(重复性)测定结果

[0078]

[0079] 结论：6份测试溶液中L-泛酸钠含量测定的RSD为9.1%，，符合方案中6份测试溶液中L-泛酸钠含量测定结果应不大于10.0%要求。

[0080] （2）中间精密度：中间精密度是通过考察另一名检验员在不同时间，不同仪器上测定6份测试溶液测定结果的RSD而实现的，要求5针参比溶液中D-泛酸钠的峰面积RSD≤2.0%；系统适用性溶液中D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度≥1.5；6份测试溶液中L-泛酸钠含量测定结果RSD≤10.0%。重复性与中间精密度12次测定结果中：L-泛酸钠含量测定结果RSD≤10.0%。如实施例1所示配制空白溶液、参比溶液、DL-泛酸钙储备液、系统适用性溶液、测试溶液。待系统平衡后，进空白溶液1针，参比溶液5针，系统适用性溶液1针、6份测试溶液各1针，记录色谱图，如图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7和图8，得出如下结果：

[0081] 表7-中间精密度系统适用性测定结果溶液名称 D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度
系统适用性溶液 2.2

[0082] 结论：用性溶液中D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度为2.2，系统适用性溶液中D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度≥1.5）

[0083] 表8-参比溶液重复性测定结果

[0084]

[0085] 结论：5针参比溶液中D-泛酸钠峰面积的RSD为0.4%，符合方案中5针对照品溶液中D-泛酸钠峰面积的RSD≤10.0%的要求。

[0086] 表9-中间精密度测定结果

[0087]

[0088] 结论：6份测试溶液中L-泛酸钠含量测定结果RSD为0，符合方案中6份测试溶液测定结果之间的RSD应不大于10.0%要求。

[0089] 表10-精密度测定结果汇总

[0090]

[0091] 结论：12次测定结果中L-泛酸钠含量测定结果RSD为6.7%，符合方案要求。（重复性与中间精密度12次测定结果中：L-泛酸钠含量测定结果RSD≤10.0%。）

[0092] 实施例5本发明所述检测方法的定量限和检测限

[0093] 最低检测限是通过检测其响应信号与噪声之比约为3:1而得到；最低定量限是通过检测其响应信号与噪声之比约为10：1而得到的。在定量限浓度水平下，重复考察6个测试溶液，要求6次所得的色谱图中峰面积的RSD应不大于10.0%。

[0094] 测试溶液（a）：精密量取L-泛酸钠定位溶液1.0ml，置20ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀（DL-泛酸钙浓度：（6μg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：3μg/ml）。

[0095] LOQ溶液：根据测试溶液（a）所测得的信噪比，调整样品稀释比例，使L-泛酸钠信噪比达到S/N≈10的要求；同法配制6份。

[0096] LOD溶液：精密量取LOQ溶液3.0ml，置10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀。

[0097] 待系统平衡后，进空白溶液、测试溶液（a）、6份LOQ溶液、LOD溶液各1针，记录色谱图，如图1、图2、图11和图12。

[0098] 表11-定量限、检测限测定结果溶液名称 名称 峰面积 S/N 相当于样品中的百分比%
LOQ-1 L-泛酸钠 0.101 11.6 0.05
LOD L-泛酸钠 0.035 2.8 0.02

[0099] 结论：LOQL-泛酸钠=0.05%；LOD=0.02%，符合方案的要求。（标准规定：LOQL-泛酸钠≤0.05%；LOD≈1/3LOQ）

[0100] 表12-LOQ重复性测定结果

[0101]

[0102] 结论：L-泛酸钠的LOQ精密度重复性测试结果峰面积RSD为2.6%，符合方案要求。（RSD≤10.0%）

[0103] 实施例6本发明所述检测方法的线性和范围

[0104] 在LOQ～150%浓度范围内取5个浓度点，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标画曲线，要求在LOQ  150%浓度范围内应呈线性，线性回归系数R2应不小于0.99。如实施例1所述配~制DL-泛酸钙储备液、空白溶液、D-泛酸钠溶液、系统适用性溶液、测试溶液和选择性溶液；

[0105] 线性-LOQ溶液：同实施例5中LOQ溶液的配制；

[0106] 线性-80%溶液：取DL-泛酸钙储备液2.0ml，置25ml容量瓶中，加3ml95%乙醇，用稀释液稀释至刻度，摇匀。（DL-泛酸钙浓度：0.096mg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：0.048mg/ml）[0107] 线性-100%溶液：取DL-泛酸钙储备液1.0ml，置10ml容量瓶中，加1ml95%乙醇，用稀释液稀释至刻度，摇匀。（DL-泛酸钙浓度：0.12mg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：0.06mg/ml）[0108] 线性-120%溶液：取DL-泛酸钙储备液3.0ml，置25ml容量瓶中，加2ml95%乙醇，用稀释液稀释至刻度，摇匀。（DL-泛酸钙浓度：0.144mg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：0.072mg/ml）[0109] 线性-150%溶液：取DL-泛酸钙储备液3.0ml，置20ml容量瓶中，加1ml95%乙醇，用稀释液稀释至刻度，摇匀。（DL-泛酸钙浓度：0.18mg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：0.09mg/ml）[0110] 根据DL-泛酸钙储备液稀释分别得到47.52μg/ml线性-80%溶液、59.40μg/ml线性-100%溶液、71.27μg/ml线性-120%溶液、89.09μg/ml线性-150%溶液。

[0111] 待系统平衡后，然后进各LOQ溶液1针，线性-80%溶液、线性-100%溶液、线性-120%溶液、线性-150%溶液各3针，记录色谱图，得出如下结果：

[0112] 表13-L-泛酸钠线性和范围测定结果

[0113]

[0114] 如图13泛酸钠异构体线性关系图。

[0115] 结论：L-泛酸钠在2.9095μg/ml到89.09μg/ml浓度范围内呈线性，斜率为0.0334，截距为-0.0014，线性回归系数R2=0.9997，符合方案要求（R2≥0.99）。

[0116] 实施例7本发明所述检测方法的准确度

[0117] 准确度是通过各被测组分实测浓度和理论浓度之间的回收率而实现的，要求各浓度点的L-泛酸钠的回收率在90.0% 110.0%之间。如实施例1所述配制空白溶液、测试溶液、~参比溶液。

[0118] DL-泛酸钙储备液：取DL-泛酸钙对照品约12mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀（DL-泛酸钙浓度：1.2mg/ml，相当于L-泛酸钠浓度：0.6mg/ml）同法配制3份。

[0119] 准确度-LOQ储备液：取D-泛酸钠样品适量，参考实施例6检测限和定量限下LOQ溶液的最终浓度，配制成含D-泛酸钠浓度为6mg/ml，L-泛酸钠浓度为LOQ浓度的溶液，作为准确度-LOQ储备液；同法配制3份。

[0120] 准确度-100%储备液：取泛酸钠样品约60mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加1ml95%乙醇，再精密移取DL-泛酸钙储备液1.0ml，超声溶解后加稀释液稀释至刻度，摇匀（D-泛酸钠浓度：6mg/ml，L-泛酸钠浓度：0.06mg/ml），同法配制3份。

[0121] 准确度-150%储备液：取泛酸钠样品约120mg，精密称定，置20ml容量瓶中，加1ml95%乙醇，再精密移取DL-泛酸钙储备液3.0ml，超声溶解后加稀释液稀释至刻度，摇匀（D-泛酸钠浓度：6mg/ml，L-泛酸钠浓度：0.09mg/ml），同法配制3份。

[0122]

[0123] 结论：L-泛酸钠真实浓度回收率在95.7% 106.2%，符合方案的要求。（标准规定：L-~泛酸钠在各浓度的回收率应在90.0% 110.0%）
~

[0124] 实施例8本发明所述检测方法的耐用性

[0125] 考察系统适用性溶液和测试溶液在室温下放置0天、1天、2天后进样，考察其测定结果随时间变化的规律，为检测时系统适用性溶液和测试溶液的放置时间提供依据。如实施例1所述配制空白溶液、DL-泛酸钙储备液、系统适用性溶液、测试溶液，分别于0天，1天，2天配制上述系统适用性溶液、测试溶液各1份。待系统平衡后，取系统适用性溶液0天，1天，2天，测试溶液0天，1天，2天各进1针，记录色谱图，得到如表15所示结果。

[0126] 表15-溶液稳定性测试结果

[0127]

[0128] 结论：系统适用性溶液中D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度均为2.3；与系统适用性溶液0天相比较，L-泛酸钠的回收率为99.6% 100.4%；测试溶液中L-泛酸钠含量的RSD%为0，~溶液稳定。（系统适用性溶液中D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度≥1.5；与系统适用性溶液0天相比较，L-泛酸钠的回收率在90.0% 110.0%之间，则系统适用性溶液在考察期间稳定；测~
试溶液0天、1天、2天测定结果中L-泛酸钠含量的RSD%≤10.0%，则测试溶液在考察期间稳定。）

[0129] 实施例9 本发明所述检测方法的参数变化

[0130] 通过考察各实验条件参数的微小变化后样品的检测结果。要求在各个测定参数变动下，空白溶剂对检测无干扰；系统适用性溶液中D-泛酸钠与L-泛酸钠峰的分离度≥1.5；选择性溶液中L-泛酸钠与相邻峰分离度应不小于1.5，L-泛酸钠的回收率应在90.0 110.0%~
之间；各条件下测试溶液中L-泛酸钠测定结果的RSD≤10.0%。如实施例1所述配制空白溶液、DL-泛酸钙储备液、系统适用性溶液、测试溶液和选择性溶液，待系统平衡后，然后进空白溶液1针，系统适用性溶液1针，测试溶液1针、选择性溶液1针，记录色谱图，得到如表16所示结果。

[0131] 表16-L-泛酸钠含量测定结果汇总表

[0132]

[0133] 结论：各条件下测试溶液中L-泛酸钠测定结果的RSD为9.2%，符合方案要求。（各条件下测试溶液中L-泛酸钠测定结果的RSD≤10.0%。）

[0134] 以上实施例仅为本发明的优选实施方案，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。