一种三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂及其制备方法，属于饲料添加剂合成技术领域。本发明的技术方案要点为：一种三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂，其结构式为：本发明还公开了该三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的制备方法。本发明制得的三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂够作为非蛋白氮，并且可以对脲酶具有一定抑制作用，并且具有杀菌抗溃疡的作用，具有作为优异的动物饲料添加剂的潜质。

权利要求

1.一种三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂，其特征在于该饲料添加剂的分子结构为：。

2.一种权利要求1所述的三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的制备方法，其特征在于具体步骤为：（1）向反应瓶中分别加入载体和硝酸钠，并缓慢倒入浓硫酸，搅拌均匀后加入高氯酸，升温至40℃搅拌一段时间，再加入去离子水，升温至90℃搅拌一段时间后冷却至室温再加入适量去离子水、过氧化氢，静置沉淀，然后洗涤离心数次，连续超声，冷冻干燥得到氧化载体；把制得的氧化载体溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液中，进行超声分散，称量五水合硝酸铋和六水合硝酸钪溶于N,N-二甲基甲酰胺中，称取三氟甲基磺酸钠溶于乙二醇，将上述溶液混合，搅拌一段时间后倒入聚四氟乙烯高压水热釜内，加热至140℃反应一段时间后自然冷却至室温，用乙醇与去离子水交替洗涤并离心，将沉淀物置于80℃鼓风干燥箱中干燥得到复合催化剂；

（2）在高压反应釜中，氩气保护下，在内温5 10℃条件下把1,3-二氯苯加入三氟乙酸~酐，甲酸和二甲基亚砜的混合溶液中，保持温度不变，加入一定量的复合催化剂，缓慢升温至90℃搅拌一段时间后向反应釜内通入氨气，使釜内压力达到0.1MPa，保持压力不变，继续升高温至140℃，反应至TLC监控原料反应完全，冷却至室温，过滤反应液，滤液加入水，用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，用无水硫酸镁干燥后浓缩得到3,5-二氯苯甲酰胺；

（3）把3,5-二氯苯甲酰胺和苄胺加入到N,N-二甲基甲酰胺中，加热到100℃，反应至原料消失，反应液冷却到室温，倒入水中，用乙酸乙酯萃取反应液多次，合并有机相，经无水硫酸镁干燥后，浓缩得到3,5-二苄胺基苯甲酰胺；

（4）把3,5-二苄胺基苯甲酰胺和钯碳加入到甲醇中，高压釜内通入氢气，压力达到

0.2MPa，反应温度为40℃，反应至原料反应完全，过滤反应液，滤液浓缩得到3,5-胺基苯甲酰胺；

（5）把三氯氧磷加入到二氯甲烷中，在恒压滴液漏斗中加入溶有3,5-胺基苯甲酰胺的二氯甲烷混合溶液，在氮气保护下，在室温条件下滴加混合液，滴加完后，继续搅拌至原料反应完全，向反应瓶中通入氨气，由插入反应液的温度计可观察，反应温度急剧升高，然后迅速下降，反应温度下降到室温时，反应结束，过滤反应液，有机相经无水硫酸镁干燥后浓缩得到3,5-二甲基脲基苯甲酰胺；

（6）将3,5-二甲基脲基苯甲酰胺溶于N,N-二甲基甲酰胺中，配置成溶液A；把溴丙炔和三乙胺溶于N,N-二甲基甲酰胺中，配置成溶液B；把溶液A和溶液B通过四氟泵送入反应温度为40℃的碳化硅反应器中，物料在微反应器中在一定停留时间内发生取代反应，收集反应后的物料，把得到的全部反应液倒入水中，用氯仿萃取反应液多次，合并有机相，浓缩后得到N-丙炔基-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺；

（7）在反应瓶中把N-丙炔基-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺，碘化亚铜加入N,N-二甲基甲酰胺和甲醇的混合溶液中，氮气保护，开始搅拌，再加入叠氮基三甲基硅烷，升温到95℃反应至原料反应完全，水洗后用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干溶剂，硅胶柱层析分离得N-((1H-1,2,3-三氮唑-4-基)-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺；

（8）取硝酸铜溶于乙腈中，把N-((1H-1,2,3-三氮唑-4-基)-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺溶于乙醇中，将上述溶液混合后加热至一定温度，搅拌一段时间后冷却至室温，再加入无水乙醚，静置放置缓慢挥发直至析出晶体，抽滤反应液，得到配合物。

3.根据权利要求2所述的三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的载体为石墨粉；所述的五水合硝酸铋与三水合硝酸钪的投料量摩尔比为

1:0.5 1.0。

~

4.根据权利要求2所述的三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的1,3-二氯苯与三氟乙酸酐和甲酸的投料量摩尔比为1:2:2；所述的1,3-二氯苯与复合催化剂的投料量质量比为100:5。

5.根据权利要求2所述的三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述的3,5-二氯苯甲酰胺与苄胺的投料量摩尔比为1:2.5。

6.根据权利要求2所述的三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的制备方法，其特征在于：步骤（6）中所述的停留时间为3 6min。

~

7.根据权利要求2所述的三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的制备方法，其特征在于：步骤（8）中所述的反应温度为70℃。

说明书

一种三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于饲料添加剂合成技术领域，具体涉及一种三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 脲酶又称尿素水解酶，它是一种含镍寡聚酶，具有绝对的专一性，它可以特异性地催化脲水解为氨和二氧化碳，其水解产物氨可以为许多微生物体和植物的新陈代谢提供氮源，并对它们周围环境的pH值起着关键性调节作用；同时，这也引起自然界中许多负面效应。如脲酶可过度催化降解尿素生产挥发性的氨气和二氧化碳，而引起氮肥肥效的丢失和导致土壤中氨离子浓度增加及pH值升高，影响植物的正常生长；脲酶也可作为一种病原体的毒素引发胃炎、胃溃疡及胃癌等疾病。如幽门螺杆菌利用自身产生的大量脲酶去催化水解脲，导致其周围的pH值升高，来抵抗胃酸的杀灭作用。因此，有必要寻找合适的脲酶抑制剂来科学调控脲酶的活性，消除其产生的负面效应，目前已报到的脲酶抑制剂主要有两类，分别为过渡金属离子类脲酶抑制剂和有机化合物类脲酶抑制剂，前者由于重金属离子具有较大的毒性，而受到一定的应用限制；后者又因有效抑制时间短、效率低及有毒副作用，应用上也有局限性。如果把有机小分子和重金属离子形成配合物后，有机配体和金属离子均被固定在配合物骨架中，其毒性大大降低，发挥作用时间也会延长，具有很好的潜质。

[0003] 反刍动物胃内广泛存在脲酶，它分解尿素为NH3的速率是未经催化分解的1014倍，是瘤胃微生物利用NH3的速率的4倍，极大地降低了氮素的利用率，通常只有30％～40％，这不仅造成农牧业资源的严重浪费，增加生产成本，而且对动植物的生长和生态环境等也有严重的危害，并会引起严重的水源污染和水体富营养化等。因此，如何解决脲酶所引起的经济、环境和健康等问题，已成为当今世界经济和农业、畜牧业可持续发展中的一个迫切需要解决的挑战性课题。

[0004] 三氮唑及其衍生物作为一类五元氮杂环你化合物，不仅具有配位点多、配位能力强及体积小的优点，而且显示出优异的生物活性，例如抗菌性、抗肿瘤以及抗炎等活性，目前以后大量的三氮唑及其配合物用于生物活性等方面的研究。铜是仔猪生长发育不可或缺的微量元素，铜元素是饲料原料中自然存在的微量元素。在动物体内，铜存在于酶和骨胶原中，不仅参与血红蛋白和红细胞的合成，还对生殖功能和心脏功能产生作用。此外，有研究显示铜元素能抑制肠道有害微生物菌群，促进有益微生物菌群的生长，改变肠道微生物结构，从而促进机体生长。

[0005] 因此，我们在三氮唑化合物上进行了修饰，使其与铜离子进行了配位络合，合成了一种结构新颖的唑类化合物，该化合物能够作为非蛋白氮，并且可以对脲酶具有一定抑制作用，并且具有杀菌抗溃疡的作用，可作为优异的动物饲料添加剂。

发明内容

[0006] 本发明解决的技术问题是提供了一种合成方法简单、原料价格低廉，结构新颖的三氮唑唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂及其制备方法。

[0007] 本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种三氮唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的结构为：

[0008] 本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的制备方法，其特征在于具体步骤为：

[0009] (1)、向反应瓶中分别加入载体和硝酸钠，并缓慢倒入浓硫酸，搅拌均匀后加入高氯酸，升温至40℃搅拌一段时间，再加入去离子水，升温至90℃搅拌一段时间后冷却至室温再加入适量去离子水、过氧化氢，静置沉淀，然后洗涤离心数次，连续超声，冷冻干燥得到氧化载体；把制得的氧化载体溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液中，进行超声分散，称量五水合硝酸铋和六水合硝酸钪溶于N,N-二甲基甲酰胺中，称取三氟甲基磺酸钠溶于乙二醇，将上述溶液混合，搅拌一段时间后倒入聚四氟乙烯高压水热釜内，加热至140℃反应一段时间后自然冷却至室温，用乙醇与去离子水交替洗涤并离心，将沉淀物至于80℃鼓风干燥箱中干燥得到复合催化剂；所述的载体为石墨粉；所述的五水合硝酸铋与三水合硝酸钪的投料量摩尔比为1:0.5～1.0。

[0010] (2)、在高压反应釜中，氩气保护下，在内温5～10℃条件下把1,3-二氯苯加入三氟乙酸酐，甲酸和二甲基亚砜的混合溶液中，保持温度不变，加入一定量的复合催化剂，缓慢升温至90℃搅拌一段时间后向反应釜内通入氨气，使釜内压力达到0.1MPa，保持压力不变，继续升高温至140℃，反应至TLC监控原料反应完全，冷却至室温，过滤反应液，滤液加入水，用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，用无水硫酸镁干燥后浓缩得到3,5-二氯苯甲酰胺；所述的1,3-二氯苯与三氟乙酸酐和甲酸的投料量摩尔比为1:2:2；所述的1,3-二氯苯与复合催化剂的投料量质量比为100:5。

[0011] (3)把3,5-二氯苯甲酰胺和苄胺加入到N,N-二甲基甲酰胺中，加热到100℃，反应至原料消失，反应液冷却到室温，倒入水中，用乙酸乙酯萃取反应液多次，合并有机相，经无水硫酸镁干燥后，浓缩得到3,5-二苄胺基苯甲酰胺；所述的3,5-二氯苯甲酰胺与苄胺的投料量摩尔比为1:2.5。

[0012] (4)把3,5-二苄胺基苯甲酰胺和钯碳加入到甲醇中，高压釜内通入氢气，压力达到0.2MPa，反应温度为40℃，反应至原料反应完全，过滤反应液，滤液浓缩得到3,5-胺基苯甲酰胺。

[0013] (5)把三氯氧磷加入到二氯甲烷中，在恒压滴液漏斗中加入溶有3,5-胺基苯甲酰胺的二氯甲烷混合溶液，在氮气保护下，在室温条件下滴加混合液，滴加完后，继续搅拌至原料反应完全，向反应瓶中通入氨气，有插入反应液的温度计可观察，反应温度急剧升高，然后迅速下降，反应温度下降到室温时，反应结束，过滤反应液，有机相经无水硫酸镁干燥后浓缩得到3,5-二甲基脲基苯甲酰胺。

[0014] (6)将3,5-二甲基脲基苯甲酰胺溶于N,N-二甲基甲酰胺中，配置成溶液A；把溴丙炔和三乙胺溶于N,N-二甲基甲酰胺中，配置成溶液B；把溶液A和溶液B通过四氟泵送入反应温度为40℃的碳化硅反应器中，物料在微反应器中在一定停留时间内发生取代反应，收集反应后的物料，把得到的全部反应液倒入水中，用氯仿萃取反应液多次，合并有机相，浓缩后得到N-丙炔基-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺；所述的停留时间为3～6min。

[0015] (7)在反应瓶中把N-丙炔基-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺，碘化亚铜加入N,N-二甲基甲酰胺和甲醇的混合溶液中，氮气保护，开始搅拌，再加入叠氮基三甲基硅烷，升温到95℃反应至原料反应完全，水洗后用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干溶剂，硅胶柱层析分离得N-((1H-1,2,3-三氮唑-4-基)-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺。

[0016] (8)取硝酸铜溶于乙腈中，把N-((1H-1,2,3-三氮唑-4-基)-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺溶于乙醇中，将上述溶液混合后加热至一定温度，搅拌一段时间后冷却至室温，再加入无水乙醚，静置放置缓慢挥发直至析出晶体，抽滤反应液，得到配合物所述的反应温度为70℃。

[0017] 本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种唑类脲酶抑制剂型饲料添加剂的制备方法，其特征在于具体步骤为：

[0018]

具体实施方式

[0019] 以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。

[0020] 实施例1

[0021] 向反应瓶中分别加入石墨10g和硝酸钠10g，至于0℃条件下缓慢加入浓硫酸150mL，机械搅拌10min，加入高氯酸50g，升温至50℃，搅拌1h，加入去离子水500mL，升温至
80℃，搅拌50min，取出反应瓶室温下加入去离子水200mL和过氧化氢100mL，静置沉淀冷却至室温，洗涤离心数次，连续超声8h，冷冻干燥10h既得氧化石墨；把所得氧化石墨全部加入N,N-二甲基甲酰胺60mL中，进行超声分散，称量五水合硝酸铋4.8g和六水合硝酸钪2.3g溶于N,N-二甲基甲酰胺40mL中，称取三氟甲基磺酸钠10g溶于乙二醇40mL后搅拌1.5h将上述溶液混合，搅拌1h后停止。将混合后溶液倒入聚四氟乙烯高压水热釜内，140℃水热反应
24h，反应停止后自然冷却至室温，用乙醇与去离子水交替洗涤并离心。将沉淀物至于80℃鼓风干燥箱中干燥12h，得到石墨负载铋/钪催化剂A14.9g。

[0022] 实施例2

[0023] 向反应瓶中分别加入石墨10g和硝酸钠10g，至于0℃条件下缓慢加入浓硫酸150mL，机械搅拌10min，加入高氯酸50g，升温至50℃，搅拌1h，加入去离子水500mL，升温至
80℃，搅拌50min，取出反应瓶室温下加入去离子水200mL和过氧化氢100mL，静置沉淀冷却至室温，洗涤离心数次，连续超声8h，冷冻干燥10h既得氧化石墨；把所得氧化石墨全部加入N,N-二甲基甲酰胺60mL中，进行超声分散，称量五水合硝酸铋4.8g和六水合硝酸钪1.2g溶于N,N-二甲基甲酰胺40mL中，称取三氟甲基磺酸钠10g溶于乙二醇40mL后搅拌1.5h将上述溶液混合，搅拌1h后停止。将混合后溶液倒入聚四氟乙烯高压水热釜内，140℃水热反应
24h，反应停止后自然冷却至室温，用乙醇与去离子水交替洗涤并离心。将沉淀物至于80℃鼓风干燥箱中干燥12h，得到石墨负载铋/钪催化剂B11.6g。

[0024] 实施例3

[0025]

[0026] 在高压反应釜中，氩气保护下，开动冷却，内温5～10℃，把1,3-二氯苯15g加入三氟乙酸酐42g，甲酸9.2g和二甲基亚砜150mL的混合溶液中，保持温度不变，加入石墨负载铋/钪催化剂A0.7g；缓慢升温至90℃搅拌50min，向反应釜内通入氨气，使釜内压力达到0.1MPa；保持压力不变，继续升高温至140℃，反应2h后TLC监控原料反应完全，冷却至室温，过滤反应液，滤液加入水100mL，用二氯甲烷100mL萃取多次，合并有机相，用无水硫酸镁干燥后浓缩得到3,5-二氯苯甲酰胺13g；Anal.Calcd for C7H5NCl2O:C,44.24；H,2.65；N,
7.37.Found:C,44.51；H,2.69；N,7.32。

[0027] 实施例4

[0028]

[0029] 在高压反应釜中，氩气保护下，开动冷却，内温5～10℃，把1,3-二氯苯15g加入三氟乙酸酐42g，甲酸9.2g和二甲基亚砜150mL的混合溶液中，保持温度不变，加入石墨负载铋/钪催化剂B0.7g；缓慢升温至90℃搅拌50min，向反应釜内通入氨气，使釜内压力达到0.1MPa；保持压力不变，继续升高温至140℃，反应2h后TLC监控原料反应完全，冷却至室温，过滤反应液，滤液加入水100mL，用二氯甲烷100mL萃取多次，合并有机相，用无水硫酸镁干燥后浓缩得到3,5-二氯苯甲酰胺9g；Anal.Calcd for C7H5NCl2O:C,44.24；H,2.65；N,
7.37.Found:C,44.51；H,2.69；N,7.32。

[0030] 实施例5

[0031]

[0032] 在反应瓶中，把3,5-二氯苯甲酰胺19g和苄胺25g加入到N,N-二甲基甲酰胺130mL中，加热到100℃，反应1h后TLC监控显示原料消失，反应液冷却到室温，倒入水100mL中；用乙酸乙酯100mL萃取反应液三次，合并有机相，经无水硫酸镁干燥后，浓缩得到3,5-二苄胺基苯甲酰胺31g；1H NMR(400M,CDCl3):7.98(s,2H),7.74(d,J＝2.0Hz,2H),7.49(d,J＝2.0Hz,4H),7.33-7.32(m,2H),7.27(s,2H),6.89(s,2H),6.77(s,1H),4.38(s,4H)；MS(ESI)m/z:332.4[M+H]+.Anal.Calcd for C21H21N3O:C,76.11；H,6.39；N,12.68.Found:C,76.35；
H,6.32；N,12.57。

[0033] 实施例6

[0034]

[0035] 在500mL反应瓶中，把3,5-二苄胺基苯甲酰胺33g和钯碳(含量5％)1.6g加入到200mL甲醇中，高压釜内通入氢气，压力达到0.2MPa，反应温度为40℃，反应12h后经TLC监控原料反应完全，过滤反应液，滤液浓缩得到纯净的3,5-胺基苯甲酰胺12g；Anal.Calcd for C7H9N3O:C,55.62；H,6.00；N,27.80.Found:C,55.83；H,6.13；N,27.54。

[0036] 实施例7

[0037]

[0038] 在反应瓶中，把三氯氧磷30g加入到二氯甲烷300mL中，在恒压滴液漏斗中加入溶有3,5-胺基苯甲酰胺15g的二氯甲烷100mL混合溶液，在氮气保护下，在室温条件下滴加混合液，滴加完后，继续搅拌1h，TLC监控原料反应完全，向反应瓶中通入氨气，有插入反应液的温度计可观察，反应温度急剧升高，然后迅速下降，反应温度下降到室温时，反应结束，过滤反应液，有机相经无水硫酸镁干燥后浓缩得到3,5-二甲基脲基苯甲酰胺29g；Anal.Calcd for C7H15N7O2P2:C,27.37；H,4.92；N,31.92.Found:C,27.14H,4.81；N,31.76。

[0039] 实施例8

[0040]

[0041] 将3,5-二甲基脲基苯甲酰胺31g溶于N,N-二甲基甲酰胺200mL中，配置成溶液A；把溴丙炔12g和三乙胺12g溶于N,N-二甲基甲酰胺100mL中，配置成溶液B；把溶液A和溶液B分别以流速10mL/min和5mL/min通过四氟泵送入反应温度为40℃的碳化硅反应器中，物料在微反应器中发生取代反应，并且其停留时间为3min，收集反应后的物料，把得到的全部反应液倒入水中，用氯仿200mL萃取反应液4次，合并有机相，浓缩后得到N-丙炔基-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺32g；1H NMR(400M,DMSO-d6):8.41(s,1H),7.22(s,2H),6.97(s,1H),4.55(d,J+＝8.0Hz,2H),4.16(s,2H),3.25(s,1H),2.13-2.11(m,8H)；MS(ESI)m/z:346.2[M+H].Anal.Calcd for C10H17N7O3P2:C,34.79；H,4.96；N,28.40.Found:C,34.61H,4.92；N,
28.55。

[0042] 实施例9

[0043]

[0044] 将3,5-二甲基脲基苯甲酰胺31g溶于N,N-二甲基甲酰胺200mL中，配置成溶液A；把溴丙炔12g和三乙胺12g溶于N,N-二甲基甲酰胺100mL中，配置成溶液B；把溶液A和溶液B分别以流速10mL/min和5mL/min通过四氟泵送入反应温度为40℃的碳化硅反应器中，物料在微反应器中发生取代反应，并且其停留时间为6min，收集反应后的物料，把得到的全部反应液倒入水中，用氯仿200mL萃取反应液4次，合并有机相，浓缩后得到N-丙炔基-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺27g；1H NMR(400M,DMSO-d6):8.41(s,1H),7.22(s,2H),6.97(s,1H),4.55(d,J＝8.0Hz,2H),4.16(s,2H),3.25(s,1H),2.13-2.11(m,8H)；MS(ESI)m/z:346.2[M+H]+.Anal.Calcd for C10H17N7O3P2:C,34.79；H,4.96；N,28.40.Found:C,34.61H,4.92；N,28.55。

[0045] 实施例10

[0046]

[0047] 在反应瓶中加入N-丙炔基-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺3.5g，碘化亚铜0.15g和N,N-二甲基甲酰胺和甲醇的混合液30mL(VDMF：VCH3OH＝2:1)，氮气保护，开始搅拌，再加入叠氮基三甲基硅烷1.5g，升温到95℃，搅拌24h，降温，加入水20mL，乙酸乙酯30mL萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干溶剂，硅胶柱层析(VCH3OH：VDCM＝1:15)，得N-((1H-1,2,3-三氮唑-4-基)-3,5-二甲基脲基苯甲酰胺3.6g；1H NMR(400M,DMSO-d6):11.17(s,1H),8.09(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(s,1H),7.04-7.02(m,1H),6.83-6.82(m,2H),4.68(d,J＝8.0Hz,2H)，4.15(s,2H),2.17-2.15(m,8H)；13C NMR(100M,DMSO-d6):166.5,147.1,136.2,129.4,128.8,
107.9,102.3,56.5；MS(ESI)m/z:389.1[M+H]+.Anal.Calcd for C10H18N10O3P2:C,30.93；H,
4.67；N,36.08.Found:C,30.84；H,4.75；N,36.27。

[0048] 实施例11

[0049] 取硝酸铜19g溶于300mL乙腈中， 39g溶于乙醇600mL中，将上述溶液混合后加热至70℃，搅拌30min后冷却至室温，再加入无水乙醚1000mL，静置放置缓慢挥发，两天后瓶中出现晶体，抽滤反应液，得到配合物
35g。

[0050] 元素分析

[0051] 通过元素分析仪测定碳、氢、氮的含量，通过铜氨络合法测定铜离子的含量，元素分析结果见表1。

[0052] 表1配合物元素分析结果

[0053]

[0054] 结论：样品的元素分析结果与理论值符合。

[0055] 实施例12

[0056] 体外脲酶抑制实验

[0057] 牛饲喂1h后，用特制瘤胃液采集器经人工瘤胃瘘管采集瘤胃液400mL，通过4层纱布过滤后备用。每个培养管按表1中的量加入相应的试剂后，滴加4滴液体石蜡，置(39.0±0.5)℃恒温水浴振荡器上轻摇。分别在培养的1,2,4,6和8h，从各组取出部分培养管，立即加入4滴饱和氯化汞溶液并摇匀，以终止反应。用凯氏半微量-饱和氧化镁蒸馏法测定各管氨态氮含量。

[0058]

[0059] 抑制率(％)＝(对照组氨含量-试验组氨含量)÷对照组氨含量×100％[0060] 时间(h) 对照组抑制率 试验1组抑制率 试验2组抑制率 试验3组抑制率1 0％ 16.3％ 21.9％ 39.6％
2 0％ 26.8％ 29.4％ 49.1％
4 0％ 43.4％ 48.2％ 60.4％
6 0％ 52.7％ 61.8％ 71.9％
8 0％ 59.3％ 69.5％ 80.5％

[0061] 实施例13

[0062] 生物活性测定

[0063] 我们选用大肠杆菌(革兰氏阴性短杆菌)和金黄葡萄糖球菌(革兰氏阳性菌)作为抗菌活性测试对象。首先是制备液体培养基(将蛋白胨1g、酵母膏0.5g、氯化钠1g、蒸馏水100mL置于250mL锥形瓶中，放在电炉上边搅拌边加热，待混合澄清均匀时，停止加热，将瓶口用纱布和牛皮纸依次封口待用)和固体培养基(将蛋白胨1g、酵母膏0.5g、氯化钠1g、琼脂
2g、蒸馏水100mL置于250mL锥形瓶中，放在电炉上边搅拌边加热，待混合澄清均匀时，停止加热，将瓶口用纱布和牛皮纸依次封口待用)；然后通过高压灭菌锅对培养基进行灭菌处理。其次是菌液的制备，把大肠杆菌和金黄葡萄糖球菌菌种活化后，用移液枪移取100μL活化后的菌液，置于灭完菌的100mL蒸馏水中混合均匀。最后通过紫外灯对平板进行灭菌，然后趁热将培养基快速倒入平板中，厚度约0.15cm，均匀铺平，静置，让其缓慢凝固，凝固后放入37℃的保温箱中培养一天做无杂菌检测。

[0064] 用DMF分别配置所合成的目标化合物及对照化合物溶液，置于容量瓶中待用。用打孔器在滤纸上打孔，孔径为5mm，然后将滤纸片灭菌后浸泡在浓度为1mg/mL的样品溶液中待用。

[0065] 在超净工作台上，点燃酒精灯，用移液枪取10μL稀释的培养液加到固体培养基表面，并涂布均匀。用无菌镊子取浸泡过的园滤纸片铺到培养基表面。每个平板放4片，进行3次平行实验，其中一片进行空白对照。将放有药片的平板置于37℃恒温箱中培养24h，观察现象。通过琼脂培养基上分别出现不同大小的透明圆环-抑菌圈，通过测量抑菌圈直径就可以看出各样品的抑菌活性大小。

[0066]

[0067] 实施例14

[0068] 新型饲料添加剂依据新兽药一般毒性试验技术要求和GB15193.3-2003进行经口急性毒性试验：在预试验基础上，分别用20只小鼠和20只大鼠，采用间隔4h两次经口灌服，给药剂量均为16.0g/kg，给药体积为0.2mL/10g体重，结果在14d内动物采食、饮水、粪便及行为均正常，未见任何毒性反应，新型饲料添加剂对小鼠和大鼠口服LD50均大于16.0g/kg。

[0069] 以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。