含有肝靶向特异性配体和甲状腺素受体激动剂的药物

摘要

本文提供了结构中含有肝靶向特异性配体和甲状腺素受体激动剂的药物，是通过支链、接头和连接链将肝靶向特异性配体和甲状腺素受体激动剂连接，成为一个新的药物结构。甲状腺激素受体(TRs)分为两个亚型，TR‑α和TR‑β，其中TR‑β主要表达在肝脏，TR‑α主要表达在心脏、神经系统等。在某些实施方案中，预期本文提供的药物具有肝靶向的作用，可以把甲状腺素受体激动剂特异性的带入到肝脏，使其不进入到心脏和其他组织，可以避免甲状腺素受体激动剂对其他组织的作用引发副作用，并保持其治疗脂质代谢紊乱及相关并发症的疗效。

权利要求

1.一种结构中含有肝靶向特异性配体和甲状腺素受体激动剂的药物，所述肝靶向特异性配体X，依次通过含有位阻稳定结构的支链L、接头B和连接链D与甲状腺素受体激动剂T连接；该药物的结构通式(Ⅰ)为：(X-L)n-B-D-T

其中n是1-15的正整数；

所述肝靶向特异性配体X选自乙酰半乳糖胺或者以下结构中的一种或多种：其中，R1选自OH和NHCOOH中的一种或两种；

所述含有位阻稳定结构的支链L选自如下结构中的一种或多种：

其中，式中n1是1-10的正整数，m为1-5的正整数；含有位阻稳定结构的支链L的左侧末端连接肝靶向特异性配体X，右侧末端连接接头B左侧末端部分；

所述接头B选自以下结构式：

其中，r1、r3、r4为1-15的正整数；r6为1-20的正整数；r7为2-6的正整数；r8为1-3的正整数；

所述的连接链D选自以下结构中的一种：

其中，每个n为1-20的正整数，且每个n为相同或不同的正整数；

连接链D的右侧末端与甲状腺素受体激动剂T相应部位连接。

2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述结构通式(Ⅰ)中接头B支化多次，所得支链用于连接结构通式(Ⅰ)中的n个(X-L)和一个(D-T)。

3.根据权利要求1所述的药物，其特征在于：当n＝1时，结构通式(Ⅰ)为：X-L-B-D-T；当n＝2,3,4,5或6时，结构通式(Ⅰ)依次为：

4.根据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述的接头B选自以下结构：

5.根据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述的连接链D选自以下结构中的一种：

6.根据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述的甲状腺受体激动剂具有以下的结构通式：其中A是氧、硫、碳酰基、亚甲基、或氨基；R1是C1-C4直链或支链烷基、-CH2(氮杂环)、-CH(OH)(卤代苯或芳香烃)、-CH(OH)CH3、卤素原子或者氢；R2是卤素原子、-CH3或者氢；R3是卤素原子、CH3或者氢；R4是-CH2CH(NH)COOH、-OCH2COOH、-NHC(O)COOH、-CH2COOH、-NHC(O)CH2COOH、-CH2CH2COOH、-OCH2PO32-、-NHC(O)CH2COOH、-OH、卤素原子、C1-C4烷基。

7.根据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述的甲状腺受体激动剂是甲状腺素(T4)或三碘甲状腺素原氨酸(T3)。

8.据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述的甲状腺受体激动剂具有下列结构特征：其中，R6是C1-C4直链或支链烷基，或者氢；R5是C1-C8烷基；R7是卤素原子或C1-C4烷基；R8是C1-C4直链或支链烷基，或者氢；R9是-CH2CH(NH)COOH，-OCH2COOH，-NHC(O)COOH，-CH2COOH，-NHC(O)CH2COOH，CH2CH2COOH，-OCH2PO32-，-OH，卤素原子或C1-C4烷基。

9.据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述的甲状腺素受体激动剂具有下列结构特征：其中，X是氧、硫、碳酰基、亚甲基或氨基；Y是C1-C5烷基碳链和C＝C中的一种；R1是卤原子、三氟甲基、C1-C6的烷基或C3-C7的环烷基；R2和R3是氢、卤原子、C1-C6的烷基、C3-C7的环烷基中一种或两种，但是R2或者R3其中一个必须是氢原子；R4是氢或C1-C4的烷基；R5是氢或C1-C4的烷基；R6是羧酸或酯键；R7是氢、酰基或芳酰基。

10.根据权利要求1所述的药物，其特征在于所述药物的通式结构(X-L)n-B-D-T为Kylo-

0101至Kylo-0104所示结构中的一种：

11.如权利1-10中任一项所述的药物在制备作用于甲状腺素受体治疗肝源性疾病的药物中的应用。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于：所述的甲状腺素受体为去唾液酸糖蛋白受体，所述的肝源性疾病为非酒精性脂肪肝或非酒精性脂肪肝炎。

13.一种药物组合物，该药物组合物包括权利要求1-10任一项所述的药物以及药学上可接受的辅料。

14.根据权利要求13所述的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物为注射剂或口服制剂。

说明书

含有肝靶向特异性配体和甲状腺素受体激动剂的药物

技术领域

[0001] 本发明涉及生物医药领域，具体涉及靶向药物领域，更具体地，涉及肝靶向治疗肝源性疾病的化合物。

背景技术

[0002] 肝脏中去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)，是肝细胞特异性表达的受体，是一种高效的内吞型受体。由于体内生理情况下各种糖蛋白在酶或酸水解唾液酸后，暴露出的次末端是半乳糖残基，所以ASGPR特异性结合的糖为半乳糖基，故又称半乳糖特异性受体。半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺等单糖和多糖分子对其有高亲和性。ASGPR主要生理功能是介导血液中去唾液酸糖蛋白、脂蛋白等物质的清除，且与病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等肝脏疾病的发生发展有着密切联系。ASGPR这一特性的发现，对肝脏疾病的诊断及治疗起着重要作用(AshwellG、HarfordJ，Carbohydrate specific Receptors of theLiver[J]，AnnRevBiochem198251:531-554)。

[0003] 单糖或多糖分子利用细胞膜上的受体作为靶向用于药物传递系统的可行性研究起始于1971年(Benjamin G等,Current Opinion in Drug Discovery&Development 5:279-288；Rogers JC等,Biochem Biophys Res Commun 45:622-629)。ASGPR对半乳糖分子特异性结合的特性引起了生物医药研发领域的重视(Schwartz AL等,J.Biol.Chem.255：
9033–9036；M.Spiess,Biochemistry 29：10009–10018)。ASGPR的这一特性，使结构中含有半乳糖或半乳糖胺及其衍生物的肝源性疾病治疗药物递送具有靶向性，能确保其药效发生在肝脏，减少其它组织的分布，从而降低药物对其他部位的副作用。早期研究人员已经认识到ASGPR的优势，并已做了不少的努力，利用ASGPR的这一特性将基因片段通过连接于其特异性配体半乳糖或乙酰半乳糖胺靶向地载入到肝细胞中已有研究(Seymour L.J.，Clin.Oncol.20：1668–1676)。研究表明，成簇的糖残基可以通过同时占据ASGPR受体的结合位点而使其亲和性远高于不成簇的糖残基.三糖残基亲和性比单糖残基高50～100倍，其亲和力的次序为：四糖残基>三糖残基>>双糖残基>>单糖残基。四糖残基相对于三糖残基而言，其和ASGPR的亲和性无明显提高，这可能源于三糖残基与受体的结合已经饱和了。这种现象被称为“成簇效应”(cluster effect)。

[0004] 早期研究中，Merwin等(Merwin J R等，Bioconjug Chem 19945(6):612-620)设计合成了用三个半乳糖胺修饰的载体系统，该系统被证明可以在动物体内介导质粒DNA快速、大量富集于小鼠肝脏，并成功表达荧光素酶.后来又有研究将半乳糖胺应用在反义核苷酸(寡脱氧核苷磷酸甲酯，oligodeoxynucleosidemethylphosphonate，Oligo-MP)(Hangeland J J等，Bioconjug Chem 1995 6(6):695-701)、反义肽核酸(antisense peptide nucleic acid，asPNA)(Biessen E A，Bioconjug Chem2002 13(2):295-302)等的给药当中，均得到了较理想的治疗效果。美国阿尔尼拉姆医药品有限公司(Alnylam Pharmaceuticals Inc.)在利用ASGPR的这一特性给药机制方面取得了突破性的进展，其产品ALN-TTRSC，用于治疗淀粉样病变，已处在II期临床阶段。

[0005] 利用ASGPR的上述特性，本文提供的是一种结构中含有ASGPR的特异性配体和甲状腺素受体激动剂的化合物，是通过支链、接头和连接链将肝靶向特异性配体和甲状腺素受体激动剂连接，成为一个新的化合物结构。

[0006] 甲状腺激素受体(TRs)分为两个亚型，TR-α和TR-β，它们是两个基因的细胞核激素受体(Lazar M.，Endocr.Rev.14：348–399)。这两个受体由于组织表达丰度的差异而介导不同的生理效应，也就是说这两个受体具有不同的组织特异性(Forrest D.等，Thyroid 10：41–51)。其中,TR-α是调节心率(HR)的主要受体(Johansson C.等,Am J.Physiol.275：
R640–R646.；Gloss B.等,Endocrinology 142：544–551.),TR-β主要表达在肝脏，TR-β激动剂(甲状腺素类似化合物，一类基于甲状腺激素结构改造的新化合物)一直是治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)新药的重要开发领域，部分新药已进行到临床研究，如TRs选择性激动剂GC-
1(Sobetirome,一种TRs选择性激动剂，被给予厚望的非酒精性脂肪肝药物，由Bristol-Myers Squibb开发)能有效降低血浆胆固醇水平，对小鼠的心脏作用减到最小，然而GC-1也只是表现出相对较低的进入心脏，而不是期望中的特异性TR-β激动高选择性激动剂(Trost S等，Endocrinology 141：3057–3064)，最后终止在临床I期阶段。而另一种TRs选择性激动剂KB2115(通用名Eprotrome,由美国Karo Bio公司开发)由于特异性药理学的原因终止在临床III期。具有临床价值的用于治疗肝源性疾病的TR-β激动剂必须具有宽的治疗剂量范围、没有心率过速和都其他组织的副作用、对降低胆固醇(TC)具有高选择性和安全有效，而目前开发中的TRs选择性激动剂并不能完全满足这些条件。

[0007] 非酒精性脂肪肝是由酒精和其他明确的损肝因素之外的因素所致的，是一种与肥胖、高胆固醇血症和糖尿病有关的代谢性疾病，包括单纯性脂肪肝以及由其演变的脂肪性肝炎(NASH)和肝硬化。目前治疗干预的方法主要是基于生活方式的改变，包括饮食和运动(Méndez-Sánchez N,等Liver Int200727:1157-1165；Oh MK等，Aliment PharmacolTher 28:503-522)，尚无批准的治疗药物。

[0008] 生理性的甲状腺激素[甲状腺素(T4)和3,3'，5-三碘-L-甲状腺素(T3)]通过多种途径调节葡萄糖和脂质代谢，在脂质的代谢方面发挥重要的生理作用。通过与广泛分布在全身的特定激素受体TR-α和TR-β相互作用而产生影响。TR-β主要集中在肝脏表达，对脂质代谢有重要影响，包括降低低密度脂蛋白(LDL)胆固醇，减少全身肥胖和体重(Pramfalk C等，Biochim Biophys Acta 1812:929-937)，并且可以通过提高肝脏的脂质代谢率来降低脂质含量。Perra A等的一项研究结果表明，T3可以抑制肝细胞脂肪变性，并修复已脂肪变性的肝细胞(Perra A等，FASEB J22:2981-2989),这一研究结果显示了T3在非酒精性脂肪肝方面非凡的潜在治疗作用。

[0009] 但是，过量的甲状腺激素容易引起副作用，特别是对心脏(包括心动过速和猝死)以及骨骼和肌肉的不良反应(Braverman LE等，editors.Lippincott:The Thyroid 2000:515-517)。由于甲状腺激素的这些不利影响，限制了其在非酒精性脂肪肝治疗方面的进一步应用。如果能够消除或减少甲状腺激素对心脏和其他脏器的副作用，就可以获得能够预估的治疗效果。利用肝靶向性的传递将甲状腺激素、GC-1和KB2115等甲状腺素类似化合物带入肝脏，使之减少或避免进到肝脏外的其它组织，是治疗NAFLD/NASH新药开发方面的一个创新，这一发明具有临床和现实的经济意义。

[0010] 因此，发明一种将甲状腺激素T3、T4及其代谢物或因为副作用不能成药的治疗肝源性疾病的甲状腺素类似化合物作为化合物的一部分，制备直接靶向进入肝脏细胞的新结构化合物，减少原来药物对其它组织的副作用，不仅创新了研发思路，也改善了目前非酒精性脂肪肝治疗临床上无针对性有效药的现状。

发明内容

[0011] 本发明利用去唾液酸糖蛋白受体的上述特性，将因为副作用不能成药的治疗肝源性疾病的化合物或候选化合物靶向性的带入肝脏，治疗相应的疾病。更确切的讲，本发明利用去唾液酸糖蛋白受体与其配体高亲和性，合成一种化合物，使之能够特异性的把治疗所用的化合物带入到肝脏细胞，而很少或不进入到肝以外的组织细胞，从而减少治疗用化合物对肝脏外组织细胞的副作用。

[0012] 本发明制备了一种结构中含有肝靶向特异性配体和甲状腺素受体激动剂的药物。

[0013] 所述的肝靶向特异性配体为半乳糖及其衍生物，优选为半乳糖胺或乙酰半乳糖胺。

[0014] 所述药物中的肝靶向特异性配体X，依次通过含有位阻稳定结构的支链L、接头B和连接链D与甲状腺素受体激动剂T连接，该药物的结构通式(Ⅰ)为：

[0015] (X-L)n-B-D-T

[0016] 其中n是1-15的正整数。

[0017] 所述结构通式(I)中接头B支化多次，所得支链用于连接结构通式(I)中n个(X-L)和一个(D-T)。

[0018] 在一些优选的实施例中，当n大于1时，各个X的结构可以是相同的也可以不同。

[0019] 在一些优选的实施例中，当n大于1时，各个L的结构可以是相同的也可以是不同的。

[0020] 当n＝1时，结构通式(Ⅰ)为：X-L-B-D-T。

[0021] 当n＝2,3,4,5或6时，结构通式(Ⅰ)的结构依次如下式所示：

[0022]

[0023] 所述肝靶向特异性配体选自以下结构中的一种或多种：多糖、多糖衍生物、单糖和单糖衍生物。

[0024] 所述单糖选自以下结构中的一种或多种：甘露糖、半乳糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、木糖、葡糖胺、核糖。

[0025] 所述甘露糖选自以下结构中的一种或多种：D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖。

[0026] 所述半乳糖选自以下结构中的一种或多种：L-半乳糖、D-半乳糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖。

[0027] 所述葡萄糖选自以下结构中的一种或多种：D-葡萄糖、L-葡萄糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖。

[0028] 所述果糖选自以下结构中的一种或多种：α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖。

[0029] 所述木糖选自以下结构中的一种或多种：D-呋喃木糖、L-呋喃木糖。

[0030] 所述核糖选自以下结构中的一种或多种：核糖、D-核糖、L-核糖。

[0031] 所述单糖衍生物选自以下结构中的一种或多种：甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、葡萄糖衍生物、核糖衍生物以及其他衍生物。

[0032] 所述甘露糖衍生物为：4,6-二脱氧-4-甲酰胺基-2,3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖。

[0033] 所述半乳糖衍生物选自以下结构中的一种或多种：α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖。

[0034] 所述葡萄糖衍生物选自以下结构中的一种或多种：2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2,3,4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯。

[0035] 所述核糖衍生物选自以下结构中的一种或多种：D-4-硫代核糖、L-4-硫代核糖。

[0036] 所述其他衍生物选自以下结构中的一种或多种：2,5-脱水-D-阿洛糖腈、唾液酸、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、3,4,6,7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1,5-二硫代-α-D-吡喃葡庚糖苷乙酯。

[0037] 所述肝靶向特异性配体的通用结构式(Ⅱ)为：

[0038]

[0039] 其中，R1、R2和R3是氢或羟基保护基。

[0040] 所述羟基保护基选自以下结构：酰基和硅烷基。

[0041] 优选地，所述羟基保护基，选自以下结构：乙酰基、苯甲酰基、苯氧基-乙酰基、新戊酰基、异丁酰基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基和异丙基二甲基甲硅烷基。

[0042] 在一些优选的实施例中，肝靶向特异性配体所述的肝靶向特异性配体选自以下结构中的一种或多种：

[0043]

[0044] 其中，R1选自OH和NHCOOH中的一种或两种。

[0045] 在一些优选的实施例中，肝靶向特异性配体为乙酰半乳糖胺。

[0046] 所述支链L选自如下结构中的一种或多种：

[0047]

[0048] 其中，式中n1是1-10的正整数，m为1-5的正整数，n2为0-20的整数，n3为1-12的正整数，Z为H或CH3；含有位阻稳定结构的支链L的左侧末端连接肝靶向特异性配体X，右侧末端与接头B左侧末端部分。

[0049] 所述接头B选自以下结构式：

[0050]

[0051] 其中，A1是C、O、S或NH，r1为1至15的正整数；A2选自C1-C10直链烷烃，带有氨基、酰胺基、磷酰根、硫代磷酰基氧原子、硫原子或者环状化合物的片段，r2为0至15的整数。

[0052] 所述接头B选自以下结构式：

[0053]

[0054]

[0055]

[0056] 其中，r1、r3、r4、r5为1至15的正整数；r6为1至20的正整数，r7为2至6的正整数，r8为1至3的正整数。

[0057] 所述的接头B选自以下结构：

[0058]

[0059]

[0060] 所述的连接链D，选自带有羰基、酰胺基、氧原子、硫原子、硫代磷酰基、磷酰基或环状结构的烷基片段，连接链D的末端为羧基或氨基与甲状腺素受体激动剂T相应部位相连。

[0061] 所述的连接链D，可以选自如下结构：

[0062]

[0063] 其中，每个n为1至20的正整数，且每个n为相同或不同的正整数。

[0064] 所述的连接链D选自以下结构中的一种：

[0065]

[0066]

[0067] 所述的连接链D不包含吡咯烷或酰胺。

[0068] 所述的连接链D包含以下结构式的一种：吡咯烷、PEG、酰胺、胺、二硫键以及至少两个酰胺。

[0069] 所述的连接链D选自以下结构中的一种：

[0070]

[0071]

[0072]

[0073] 其中，每个n为1至20中的正整数，每个n为相同或不同的正整数，p为1至6的正整数；s为2至13的正整数；R1和R2可为相同或者不同的取代基团，其结构式可能为以下的一种：-H、-CH3、-CH-(CH3)2、-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-CH2-CH3、-CH2-C6H5、-C8NH6、-CH2-C6H4-OH、-CH2-COOH、-CH2-CONH2、-(CH2)2-COOH、-(CH2)4-NH2、-(CH2)2-CONH2、-(CH2)-S-CH3、-CH2-OH、-CH(CH3)-OH、-CH2-SH、-CH2-C3H3N2、-(CH2)3NHC(NH)NH2。

[0074] 所述的连接链D选自以下结构中的一种：

[0075]

[0076]

[0077] 所述药物通式结构中(X-L)n-B基团选自以下结构中的一种，且(X-L)n-B的右侧末端与连接链D左侧末端相连：

[0078]

[0079]

[0080]

[0081]

[0082]

[0083] 所述的甲状腺受体激动剂具有以下的结构通式：

[0084]

[0085] 其中A是氧、硫、碳酰基、亚甲基、或氨基；R1是C1-C4直链或支烷基、-CH2(氮杂环)、-CH(OH)(卤代苯或芳香烃)、-CH(OH)CH3、卤素原子或者氢；R2是卤素原子、-CH3或者氢；R3是卤素原子、CH3或者氢；R4是-CH2CH(NH)COOH、-OCH2COOH、-NHC(O)COOH、-CH2COOH、-NHC(O)CH2COOH、-CH2CH2COOH、-OCH2PO32-、-NHC(O)CH2COOH、OH、卤素原子或者C1-C4烷基。

[0086] 所述甲状腺素受体激动剂为甲状腺素(T4)或三碘甲状腺素原氨酸(T3)或其代谢物，甲状腺素受体激动剂结构为下图所示结构中的一种：

[0087]

[0088] 所述甲状腺素受体激动剂为下列特征结构中的一种：

[0089]

[0090] 其中，R6是C1-C4直链或支链烷基或者氢；R5是C1-C8烷基；R7是卤素原子，C1-C4烷基；R8是C1-C4直链或支链烷基或者氢；R9是-CH2CH(NH)COOH、-OCH2COOH、-NHC(O)COOH、-2-
CH2COOH、NHC(O)CH2COOH、CH2CH2COOH、-OCH2PO3 、-NHC(O)CH2COOH、OH、卤素原子或者C1-C4烷基。

[0091] 所述甲状腺素受体激动剂的结构为：

[0092]

[0093] 其中X是氧、硫、羰基、亚甲基、或氨基；Y是C1-C5烷基碳链和C＝C中的一种；R1是卤原子、三氟甲基、C1-C6的烷基、C3-C7的环烷基；R2和R3是氢、卤原子、C1-C6的烷基或C3-C7的环烷基中的一种或两种，且R2和R3其中一个必须是氢原子；R4是氢或C1-C4的烷基；R5是氢或C1-C4的烷基；R6是羧酸或酯键；R7是氢、酰基或芳酰基。

[0094] 具体地，所述甲状腺素受体激动剂的结构为下列结构中的一种：

[0095]

[0096]

[0097] 所述药物的通式结构(X-L)n-B-D-T,为Kylo-0101至Kylo-0104所示结构中的一种：

[0098]

[0099]

[0100] 所述药物在制备作用于甲状腺素受体治疗肝源性疾病的药物中的应用。

[0101] 所述甲状腺素受体为去唾液酸糖蛋白受体，所述的肝源性疾病为非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝炎。

[0102] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：

[0103] (1)本发明通过特异性肝靶向和激活肝细胞内的甲状腺素受体治疗脂质代谢紊乱及相关的并发症，逆转非酒精脂肪肝及非酒精脂肪肝炎和肝纤维化。

[0104] (2)本文提供了结构中含有肝靶向去唾液酸糖蛋白受体的特异性配体和甲状腺素受体激动剂的药物，是通过支链、接头和连接链将肝靶向特异性配体和甲状腺素受体激动剂连接，成为一个新的化合物结构。

[0105] (3)甲状腺激素受体(TRs)分为两个亚型，TR-α和TR-β，其中TR-β主要表达在肝脏，TR-α主要表达在心脏、神经系统等，本发明提供的药物具有肝靶向的作用，可以把甲状腺素受体激动剂特异性的带入到肝脏，使其不进入到心脏和其他组织，可以避免甲状腺素受体激动剂对TR-α的作用应发副作用，并保持其治疗脂质代谢紊乱及相关的并发症的疗效。

[0106] (4)含有的位阻稳定结构支链L，在新药物中的作用是位阻稳定剂，相对不含位阻结构的药物，支链L可以阻止或抑制其结合的药物的分子间或分子内的相互作用。也能够阻碍其结合的药物参与静电相互作用。所述静电相互作用就是两种或更多种物质之间由于正电荷和负电荷之间的吸引力产生的非共价结合。在本发明药物内，支链L能抑制药物与血液组分的相互作用，如噬菌作用，而提高其结合的分子循环时间。

附图说明

[0107] 为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图说明：

[0108] 图1为Kylo-0101高分辨率质谱图；

[0109] 图2为Kylo-0102高分辨率质谱图；

[0110] 图3为Kylo-0103高分辨率质谱图；

[0111] 图4为实施例4中，db/db小鼠血清中总胆固醇(TC)含量的检测结果；

[0112] 图5为实施例4中，db/db小鼠血清中低密度脂蛋白(LDL)含量的检测结果；

[0113] 图6为实施例4中，db/db小鼠血清中甘油三酯(TG)含量的检测结果；

[0114] 图7为实施例4中，db/db小鼠骨密度(BMD)的检测结果；

[0115] 图8为实施例4中，实验药品对db/db小鼠体重、脂肪含量和肌肉含量的影响；

[0116] 图9为实施例5中，不同剂量的Kylo-0101对db/db小鼠血清中TC水平的影响；

[0117] 图10为实施例5中，不同剂量的Kylo-0101对db/db小鼠血清中LDL水平的影响；

[0118] 图11为实施例5中，不同剂量的Kylo-0101对db/db小鼠血清中TG水平的影响；

[0119] 图12为实施例5中，不同剂量的Kylo-0101对db/db小鼠体重的影响；

[0120] 图13为实施例5中，不同剂量的Kylo-0101对db/db小鼠体内脂肪和肌肉的含量的影响；

[0121] 图14为实施例5中，不同剂量的Kylo-0101对db/db小鼠骨密度的影响；

[0122] 图15为实施例5中，不同剂量的Kylo-0101对db/db肝脏的重量的影响；

[0123] 图16为实施例5中，油红和HE染色肝脏切片病理组织学图片；

[0124] 图17为实施例5中，肝组织病理检查染色平均量化结果；

[0125] 图18为实施例5中，不同剂量Kylo-0101对db/db小鼠血清中fT3浓度的影响；

[0126] 图19为实施例5中，不同剂量Kylo-0101对db/db小鼠血清中的TSH影响。

具体实施方式

[0127] 以下实施例说明了本发明公开的一些实施方案，但并不局限于这些。此外，在提供具体实施方案时，发明人预期了那些具体实施方案的应用。例如具有具体同类或类似化学结构的化合物，用于不同的肝源性疾病的治疗。

[0128] 说明：

[0129] pip的中文名称为哌啶；

[0130] DMF的中文名称是N,N-二甲基甲酰胺；

[0131] Dde-Lys(Fmoc)-OH的中文名称是N-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己亚基)乙基-N'-芴甲氧羰基-L-赖氨酸；

[0132] HBTU的中文名称为O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯；

[0133] DIPEA(DIEA)的中文名称为N，N-二异丙基乙胺；

[0134] Fmoc-Glu-OtBu的中文名称为芴甲氧羰基-L-谷氨酸1-叔丁酯；

[0135] TBTU的中文名称为O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸；

[0136] ACN的中文名称为乙腈；

[0137] MTBE的中文名称为甲基叔丁基醚；

[0138] 的中文名称为固相载体，如树脂(Resin)；

[0139] 本申请中所涉及两种物质的比，在没有特别注明的情况下均指体积比；

[0140] 本申请中所涉及的含量，在没有特别注明的情况下均指体积百分浓度。

[0141] 实施例1：药物1(Kylo-0101)的制备

[0142] (1)化合物1-1经过如下所示的化学反应生成化合物1-2：

[0143]

[0144] 称取化合物1-1(0.31g,0.1mmol)倒入合成管内,加入pip/DMF(2ml/8ml),氮气鼓泡30-40min后真空抽除,再使用DMF清洗化合物1-2，每次使用10ml，冲洗3次,洗去pip及反应产生的杂质；

[0145] (2)化合物1-2经过如下所示的化学反应生成化合物1-3：

[0146]

[0147] 称取Dde-Lys(Fmoc)-OH(0.16g,0.3mmol)、HBTU(0.114g,0.3mmol)加入合成管内，加入DMF(10mL)溶解以上固体后加入DIPEA(55μL)后氮气鼓泡30-60min，将反应液移除后使用DMF清洗剩余的固体化合物1-3，每次使用10ml，冲洗3次，以去除HBTU、DIPEA和反应产生的杂质；

[0148] (3)化合物1-3经过如下所示的化学反应生成化合物1-4：

[0149]

[0150] 向装有化合物1-3的合成管内加入pip/DMF(2ml/8ml),氮气鼓泡20-30min后真空抽出反应液和反应生成的杂质,再使用DMF清洗剩余的固体化合物1-4，每次使用10ml，冲洗2次，去除pip和反应产生的杂质；

[0151] (4)化合物1-4经过如下所示的化学反应生成化合物1-5：

[0152]

[0153] 称取Fmoc-Glu-OtBu(0.13g,0.3mmol)、HBTU(0.114g,0.3mmol)加入化合物1-4(0.1mmol)内，加入DMF(10mL)溶解以上固体后加入DIPEA(55μL)后氮气鼓泡15-30min，将反应液移除后，使用DMF清洗余下的固体化合物1-5，每次使用10ml，冲洗3次，去除HBTU、DIPEA和反应产生的杂质；

[0154] (5)化合物1-5经过如下所示的化学反应生成化合物1-6：

[0155]

[0156] 化合物1-5(0.1mmol)中加入pip/DMF(2ml/8ml),氮气鼓泡15-30min后真空抽出反应液和反应生成的杂质,再使用DMF清洗余下的化合物1-6，每次使用10ml，冲洗6次，洗去pip和反应产生的杂质；

[0157] (6)三碘甲状腺原氨酸经过如下所示的化学反应生成化合物1-7：

[0158]

[0159] 称取三碘甲状腺原氨酸0.5g，放置于茄形瓶中，加入二氧六环4ml、纯化水1ml、三乙胺0.3ml，加入Boc-酸酐232mg,室温、避光搅拌反应2h，加水4ml，加入二氯甲烷10ml，滴加盐酸调节pH值至4；静置，分层，水层加二氯甲烷10ml再提取一次，合并有机层；加5g无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋蒸仪浓缩至干；浓缩物加入石油醚20ml打浆，过滤，滤饼用40ml石油醚洗涤，滤饼减压拉干；得化合物1-7(白色固体)630mg；

[0160] (7)化合物1-6经过如下所示的化学反应生成化合物1-8：

[0161]

[0162] 称取化合物1-7(0.23g,0.3mmol)、HBTU(0.114g,0.3mmol)加入含有0.1mmol化合物1-6的合成管内，加入DMF(10mL)溶解以上固体后加入DIPEA(55μL)，氮气鼓泡10-20min，将反应液移除后使用DMF清洗余下的化合物1-8，每次使用10ml，冲洗3次，去除HBTU、DIPEA和反应产生的活性酯；

[0163] (8)化合物1-8经过如下所示的化学反应生成化合物1-9：

[0164]

[0165] 向化合物1-8(0.1mmol)内加入水合肼/DMF(0.2ml/9.8ml)溶液，氮气鼓泡10min后使用真空移除水合肼的DMF溶液，使用DMF清洗化合物1-9，每次使用10ml，冲洗6次，去除水合肼和反应产生的杂质；

[0166] (9)化合物1-10的制备：

[0167] 步骤一：

[0168]

[0169] 称取1,5-戊二酸单苄酯0.21g，用2mlDMF溶解，然后加入TBTU 0.36g和DIEA 0.4ml，搅拌反应5分钟，将化合物a 1.09g溶于10mlDMF中，慢慢加到上述反应液中，室温搅拌反应过夜；减压蒸干反应液，蒸干后，加二氯甲烷40ml，水20ml，搅拌15分钟，分层，有机层用10g无水硫酸钠干燥，干燥后的有机层过层析柱(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝1％-10％)，通过点板(展开剂含有体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇)鉴定所要收集的目标物质化合物b,收集含纯品化合物b的洗脱剂，减压蒸干溶剂，得白色产品化合物b 0.85g；

[0170] 步骤二：

[0171]

[0172] 100ml单口瓶中投化合物b 0.85g,加钯炭127mg,水泵抽真空，补氢气，重复三次，氢气加压反应过夜，第二日，反应液TLC点板未见化合物b点。过滤(12g硅藻土助滤)，减压蒸干滤液，得化合物1-10重量90.76g。

[0173] (10)化合物1-9和化合物1-10经过如下所示的化学反应生成化合物1-11：

[0174]

[0175] 称取化合物1-10(0.57g,0.3mmol)、HBTU(0.114g,0.3mmol)加入装有化合物1-9(0.1mmol)的合成管内，加入DMF(10mL)溶解以上固体后加入DIPEA(55μL)后氮气鼓泡10-20min，将反应液移除后使用DMF清洗余下的化合物1-11，每次使用10ml，冲洗；

[0176] (11)化合物1-11经过如下所示的化学反应生成化合物1-12：

[0177]

[0178] 将F溶液(6ml，三氟乙酸：三异丙基硅烷：水＝90:3.5:5.5)缓慢倒入装有化合物1-11(0.3g,0.05mmol)的离心管中,控制温度30-35℃，转速为200r/min，切割1小时后取出，过滤去除固体，滤液(5ml)缓慢倒入MTBE(20ml)中，混悬液用离心机离心，转速设置为3000r/min，固体再用MTBE(20ml)分散后再次离心，收集固体用真空抽干1小时，得到46mg白色粉末，以化合物1-11计收率为34％；

[0179] 将得到的白色粉末使用ACN/水2ml(0.2ml/1.8ml)溶解后上样，使用填料商品名GE Resource15RPC(50ml)，流动相为水与乙腈的混合物(乙腈含量10％～90％)，梯度洗脱，并收集全部产品，冻干后得到12mg纯品化合物1-12；

[0180] (12)化合物1-12经过如下所示的化学反应生成药物1(Kylo-0101)：

[0181]

[0182] 向冻干后的化合物1-12(12mg，0.0043mmol)加入甲醇钠/甲醇(20mg/ml)溶液，设置摇床温度30-35℃，转速200r/min，摇动20min，反应液加入1mol/L HCl(5-7滴)调节pH至7，使用旋蒸蒸干溶剂，水浴温度40-45℃，残留物加入ACN/水2ml(0.2ml/1.8ml)溶解后上样，使用填料商品名为GE Resource15RPC(10ml)，流动相为水与乙腈的混合物(乙腈含量
10％～90％)，进行纯化，洗脱并收集全部产品，冻干后得到7mg纯品药物1(Kylo-0101)，收率67.3％，如图1所示，Kylo-0101质谱检测质荷比为2时目标峰为1232.35108(2+)。

[0183] 实施例2：药物2(Kylo-0102)的制备

[0184] 化合物2-1经过如下所示的化学反应生成药物2(Kylo-0102)，反应物的具体组成如表14所示：

[0185]

[0186] 向化合物2-1(20mg，0.0078mmol)中加入甲醇钠/甲醇(20mg/5ml)溶液，设置摇床温度30-35℃，转速200r/min，摇动30min，反应液加入1mol/L HCl(5-7滴)调节pH至7，使用旋蒸蒸干溶剂，水浴温度40-45℃，残留物加入ACN/水(0.2ml/1.8ml)溶解后上样，使用填料商品名为GE Resource15RPC(10ml)，流动相为水与乙腈的混合物(乙腈含量10％～90％)，进行纯化，洗脱并收集全部产品，冻干后得到12mg纯品药物2(Kylo-0102)，收率71.1％，如图2所示，Kylo-0102质谱检测质荷比为1时目标产物为2201.55613(1+)、质荷比为2时目标产物为1111.75962(2+)。

[0187] 实施例3：药物3(Kylo-0103)的制备方法

[0188] 化合物3-1经过如下所示的化学反应生成药物3(Kylo-0103)，反应物的具体组成如表15所示：

[0189]

[0190] 向化合物3-1(20mg，0.0076mmol)加入甲醇钠/甲醇(20mg/5ml)溶液，设置摇床温度30-35℃，转速200r/min，摇动30min，反应液加入1mol/L HCl(5-7滴)调节pH至7，使用旋蒸蒸干溶剂，水浴温度40-45℃，残留物加入ACN/水(0.2ml/1.8ml)溶解后上样，使用填料商品名为GE Resource15RPC(10ml)，流动相为水和乙腈的混合物(乙腈含量10％～90％)，进行纯化，洗脱并收集全部产品，冻干后得到12.5mg纯品药物3(Kylo-0103)，收率72.7％，如图3所示，Kylo-0103质谱检测质荷比为1时目标产物为2283.69975(1+)。

[0191] 实施例4动物实验1

[0192] 材料：选取30只遗传肥胖模型小鼠(db/db小鼠)作为给药组，6周龄，雄性，SPF级，南京大学-南京生物医药研究院提供，生产许可证号：SCXK(苏)2015-0001，动物合格证号NO.201820469。使用许可证号：SCXK(苏)2018-0027。实验前小鼠需先适应环境，选择健康小鼠作为受试动物。IVC笼具饲养，饲养密度为5只/笼，每周更换两次垫料。实验动物房要求：室温22～24℃，相对湿度40～70％，自动照明，12h明暗交替(08点00分开灯，20点00分关灯)，实验动物房标准符合中华人民共和国国标GB14925-2010。

[0193] 实验药品：见表1。

[0194] 表1

[0195]

[0196] 备注：Kylo-0100为T3，作为阳性对照药，实验药物用生理盐水溶解。

[0197] 甲苯噻嗪联合氯胺酮麻醉剂配制：混合液中甲苯噻嗪和氯胺酮浓度分别为10mg/ml，0.5mg/ml。

[0198] 分组和给药方案如表2所示。

[0199] 表2

[0200]

[0201] 每周两次称量体重，连续给药21天，最后一次给药结束后，过夜禁食15-16小时，CO2麻醉处死小鼠，心脏穿刺采集血液，室温静置2小时，低温离心机3000RPM离心10分钟，收集血清-80℃冰箱保存备用。利用血生化仪测定血清中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酯(TG)的含量。

[0202] 给药干预第18天时，小鼠腹腔注射麻醉剂(甲苯噻嗪联合氯胺酮，10ml/Kg，IP),骨密仪检测小鼠的骨密度及体脂比。

[0203] 图4中的实验数据显示，Kylo-0100～Kylo-0103组小鼠的血清TC水平明显比生理盐水对照组低，降低率分别达到34.68％、52.25％、37.61％和44.37％。

[0204] 图5中的实验数据显示，Kylo-0100～Kylo-0103组小鼠的血清LDL水平明显比生理盐水对照组低，降低率达到40.68％、54.24％、22.03％和15.25％。

[0205] 图6中的实验数据显示，Kylo-0100～Kylo-0103组小鼠的血清TG水平明显比生理盐水对照组低，降低率分别达到42.55％、62.42％、44.88％和43.94％。

[0206] 图7中的实验数据显示，Kylo-0100组小鼠的骨密度(BMD)明显低于生理盐水对照组的小鼠骨密度；其中Kylo-0101给药组小鼠的骨密度和生理盐水对照组相比，基本没有变化。

[0207] 图8中的实验数据显示，Kylo-0100对小鼠的体重影响比较明显，其中Kylo-0101对小鼠的体重没有明显的影响,说明Kylo-0101主要作用在肝脏，没有对小鼠产生整体的不良影响。

[0208] 实施例5动物实验2

[0209] 动物和饲养：选取36只雄性6周龄遗传肥胖小鼠模型(db/db小鼠)和5只同窝野生型作为给药组，南京大学-南京生物医药研究院提供，生产许可证号：SCXK(苏)2015-0001，动物合格证号NO.201826897，使用许可证号：SCXK(苏)2018-0027。

[0210] 实验前小鼠需先适应环境，选择健康小鼠作为受试动物。IVC笼具饲养，饲养密度为5只/笼，每周更换两次垫料。实验动物房要求：室温22～24℃，相对湿度40～70％，自动照明，12h明暗交替(08点00分开灯，20点00分关灯)，实验动物房标准符合中华人民共和国国标GB14925-2010。

[0211] 实验药品如表3所示。

[0212] 表3

[0213]

[0214] 甲苯噻嗪联合氯胺酮麻醉剂配制：混合液中甲苯噻嗪和氯胺酮浓度分别为10mg/ml，0.5mg/ml。

[0215] 分组和给药方案，如表4所示。

[0216] 表4

[0217]

[0218]

[0219] 备注：所给药物用生理盐水溶解。

[0220] 实验设计：实验开始前，称量体重，根据体重随机分组。每周一和周四称量小鼠体重。给药干预第18天时，小鼠腹腔注射麻醉剂(甲苯噻嗪联合氯胺酮，10ml/kg，IP)麻醉，检测小鼠的骨密度及体脂比。连续给药21天，最后一次给药结束后，过夜禁食15-16小时。CO2麻醉处死小鼠，心脏穿刺采集全血，静置2小时收集血清。血清分为三份，一份100μl检测血清中血糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、磷酸酯酶(AP)水平；剩余两份均分用于三碘甲状腺氨酸(T3结合和游离)、甲状腺素(T4结合和游离)、TSH(促甲状腺激素)含量的测定。称量肝脏重量、心脏重量；肝脏分成三份，一份液氮冻存，一份10％中性甲醛固定，一份OCT(聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物)冰冻包埋。

[0221] 组织分析及病理检测：肝脏组织用异丙醇按照质量体积比1：9匀浆处理，静置过夜后离心取上清，血生化检测上清中TC和TG的含量。将浸泡在10％中性甲醛中的肝组织进行常规石蜡包埋、切片(3μm)及经苏木精-伊红(HE)染色后脱水封片，观察肝脏病变情况并全切片扫描拍照；将浸没在OCT中的肝组织进行冰冻切片(5μm)，油红染色，苏木素染核，脱水封片后观察肝脏组织脂质沉积情况并拍照。将给药组和模型对照组的肝脏脂肪蓄积情况进行比较。

[0222] 统计分析：定量指标采用均数±均数标准误(Mean±sem)，采用T检验(TTest2.3)对模型对照组和其余组进行组间差异比较，所有的统计分析，均在Excel表中完成。

[0223] 图9中的实验数据显示，Kylo-0101各个剂量组中的小鼠血清中TC水平降低，且呈明显剂效关系，30μg/kg剂量时，血清TC水平降低达48％。

[0224] 图10中的实验数据显示，Kylo-0101各个剂量组中的小鼠血清中LDL水平降低，且呈明显剂效关系，30μg/kg剂量时，血清LDL水平降低达58％。

[0225] 图11中的实验数据显示，Kylo-0101各个剂量组中的小鼠血清中TG水平降低，且呈明显剂效关系，30μg/kg剂量时，血清TG水平降低达41.8％。

[0226] 图12中的实验数据显示，Kylo-0101各个剂量组的小鼠体重有下降，但不显著。

[0227] 图13中的实验数据显示，Kylo-0101各个剂量没有明显降低体内的脂肪和肌肉的含量。

[0228] 图14中的实验数据显示，Kylo-0101各个剂量组的小鼠骨密度和模型对照组相比，基本没有变化。

[0229] 图15中的实验数据显示，Kylo-0101剂量的增加与肝脏的重量降低呈较为明显的剂效关系。

[0230] 油红染色主要为细胞内脂滴的特异性染色，经过染色的脂滴如图16中深色斑点所示，油红染色病理组织学检查结果显示，相比于模型对照组，Kylo-0101四个剂量组脂滴阳性染色程度明显减弱，脂滴数量明显减少，并呈显著的剂效反应。肝脏小叶中心性脂肪变性会在肝细胞内形成大小不一的脂肪空泡，其中以小空泡为主，经过HE染色以后形成如图16所示的浅色斑点。图16中，HE染色切片病理组织学检查结果显示，Kylo-0101四个剂量组的肝细胞脂肪变性程度明显低于模型对照组，肝脏切片可见脂肪变性所致的肝细胞空泡明显减少，并呈显著的剂效反应。

[0231] 图17中肝脏病理检查染色平均量化结果显示，HE染色与油红染色具有较高的一致性，且Kylo-0101的剂量为30μg/kg时，肝脏的脂肪含量降到几乎与正常(野生型)小鼠的肝脏脂肪含量接近。一般认为正常的平均量化值小于1时为正常。

[0232] 图18的检测结果表明，Kylo-0101各剂量下，小鼠血清中fT3浓度稍有增加，但没有显著差别。

[0233] 图19的检测结果表明，Kylo-0101各剂量没有对小鼠血清中TSH浓度产生影响。

[0234] 实施例6肝靶向特异性配体X对药物与ASGPR的结合率、心率和骨密度的影响[0235] 表5中药物Kylo-0101，Kylo-0105～Kylo-0107的区别仅在于X结构的不同，表中的实验数据显示，在L、B、D、T结构相同的情况下，通过改变X的结构会对药物与ASGPR的结合率、心率和骨密度产生影响，其中，药物Kylo-0101的效果最佳，在具有较高ASGPR结合率的同时，对心率和骨密度的影响最小。这说明，在本发明所制备的组合物中，肝靶向特异性配体X，虽然用于和ASGPR相结合，但是，也会对整个药物的治疗功效产生一定的影响。

[0236] 表5

[0237]

[0238] 表5中数字6到1，表示该组合形成的药物与去唾液酸糖蛋白受体ASGPR的结合率从高至低；对心脏毒性和骨密度影响是从高至低。

[0239] 实施例7含位阻稳定结构的支链L对药物稳定性的影响

[0240] 表6

[0241]

[0242] 表6中药物Kylo-0101、Kylo-0108～Kylo-0110的区别仅在于L结构的不同，表中的实验数据显示，在X、B、D、T结构相同的情况下，通过改变L的结构会对药物的稳定性产生影响，当选用Kylo-0101和Kylo-0110药物中的L结构时，能够获得高稳定性的药物。

[0243] 实施例8接头B对药物与ASGPR的结合率、心率和骨密度的影响

[0244] 表7中药物Kylo-0101、Kylo-0111～Kylo-0113的区别仅在于B结构的不同，表中的实验数据显示，在X、L、D、T结构相同的情况下，通过改变B的结构会对药物与ASGPR的结合率、心率和骨密度产生影响，当选用Kylo-0101和Kylo-0112药物中的B结构时，能够获得良好的受体结合率和较小的心脏、骨密度副作用。

[0245] 表7中数字6到1，表示该组合形成的药物与去唾液酸糖蛋白受体ASGPR的结合率从高至低；对心脏毒性和骨密度影响是从高至低。

[0246] 表7

[0247]

[0248] 实施例9连接链D对药物降血脂功能的影响

[0249] 表8

[0250]

[0251] 备注：表8中TC、LDL和TG下的数字分别代表该组合物降低TC、LDL和TG的功能的强弱，数字6到1，表示功能由强到弱。

[0252] 表8中药物Kylo-0101、Kylo-0102、Kylo-0114的区别仅在于D结构的不同。D单独作为一个连接结构是不存在降血脂功效的，但是，表中的实验数据显示，在X、L、B、T结构相同的情况下，通过改变D的结构会对药物降低TC、TG和LDL的功能产生影响。在本发明的实验条件下，选用药物Kylo-0101结构中的D能获得最佳的降TC、TG和LDL功效。