一种制备云实二萜A的方法

摘要

本发明公开了一种制备云实二萜A的方法，包括：步骤S1，取云实种子粉末，用75％乙醇热回流提取，过滤，滤液减压浓缩至无醇味；步骤S2，富集：将浓缩至无醇味的提取液上样于AB‑8型大孔吸附树脂柱，树脂柱内径12cm，树脂柱床高度120cm，提取液上样量为2个柱体积，上样结束后关闭阀门静态吸附30min；先使用20％乙醇洗脱10个柱体积除杂，再使用70％乙醇以15mL/min的流速洗脱，收集第9个柱体积的70％乙醇洗脱液，浓缩干燥得富集物。步骤S3，将富集物用HSCCC分离纯化。本发明提供的方法步骤少、分离快，分离制备得到的化合物纯度高。

权利要求

1.一种制备云实二萜A的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤S1，提取：

取云实种子粉末，用75%乙醇热回流提取，过滤，滤液减压浓缩至无醇味；

步骤S2，富集：

将浓缩至无醇味的提取液上样于AB‑8型大孔吸附树脂柱，树脂柱内径12cm，树脂柱床高度120cm，提取液上样量为2个柱体积，上样结束后关闭阀门静态吸附30min；先使用20%乙醇洗脱10个柱体积除杂，再使用70%乙醇以15mL/min的流速洗脱，收集第9个柱体积的70%乙醇洗脱液，浓缩干燥得富集物；

步骤S3，云实二萜A的纯化：

将富集物用HSCCC分离纯化，HSCCC色谱参数为：两相溶剂系统：体积比为2:2:3:5的二氯甲烷‑乙酸乙酯‑正丁醇‑水；

转速：900r/min；流速：2.8mL/min；温度：25℃；检测波长：235nm；

以两相溶剂系统的下相为固定相，以两相溶剂系统的上相为流动相，将富集物用体积比1:1的上、下相溶解配制成浓度为20mg/mL的样品溶液，进样，开始采集，根据色谱图收集云实二萜A对应的流份，浓缩干燥即制备得到云实二萜A。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中1kg药材用10L 75%乙醇提取。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中提取3次，每次2h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2中上样流速3mL/min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S3中上样量为10mL。

说明书

一种制备云实二萜A的方法

技术领域

[0001] 本发明属于化学领域，具体涉及一种制备云实二萜A和Caesalmin F的方法。

背景技术

[0002] 云实二萜A和Caesalmin F是存在于药用植物云实Caesalpinia decapetala种子中的两个天然产物，二者为一对手性异构体，化学结构如下。

[0003]

[0004] 从化学结构可以看出，云实二萜A和Caesalmin F的区别仅在于C14手性不同。

[0005] 结构上的微小差异导致云实二萜A和Caesalmin F的制备过程繁琐，必须采用多种分离介质经过反复柱层析才能制备得到纯度较高的单体，费时费力。

[0006] 云实二萜A和Caesalmin F具有多种活性，具有开发成药的前景，必须开发出一种步骤少、分离快、分离纯度高的制备方法。

发明内容

[0007] 本发明的目的在于提供一种制备云实二萜A和Caesalmin F的方法。

[0008] 实现本发明上述目的技术方案如下：

[0009] 云实二萜A的制备：

[0010] 一种制备云实二萜A的方法，包括如下步骤：

[0011] 步骤S1，提取：

[0012] 取云实种子粉末，用75％乙醇热回流提取，过滤，滤液减压浓缩至无醇味。

[0013] 步骤S2，富集：

[0014] 将浓缩至无醇味的提取液上样于AB‑8型大孔吸附树脂柱，树脂柱内径12cm，树脂柱床高度120cm，提取液上样量为2个柱体积，上样结束后关闭阀门静态吸附30min；先使用20％乙醇洗脱10个柱体积除杂，再使用70％乙醇以15mL/min的流速洗脱，收集第9个柱体积的70％乙醇洗脱液，浓缩干燥得富集物。

[0015] 步骤S3，云实二萜A的纯化：

[0016] 将富集物用HSCCC分离纯化，HSCCC色谱参数为：

[0017] 两相溶剂系统：体积比为2:2:3:5的二氯甲烷‑乙酸乙酯‑正丁醇‑水；

[0018] 转速：900r/min；流速：2.8mL/min；温度：25℃；

[0019] 以下相为固定相，上相为流动相，将富集物用体积比1:1的上、下相溶解配制成浓度为20mg/mL的样品溶液，进样，开始采集，根据色谱图收集云实二萜A对应的流份，浓缩干燥即制备得到云实二萜A。

[0020] 进一步地，步骤S1中1kg药材用10L75％乙醇提取。

[0021] 进一步地，步骤S1中提取3次，每次2h。

[0022] 进一步地，步骤S2中上样流速3mL/min。

[0023] 进一步地，步骤S3中检测波长为235nm。

[0024] 进一步地，步骤S3中上样量为10mL。

[0025] Caesalmin F的制备：

[0026] 一种制备Caesalmin F的方法，包括如下步骤：

[0027] 步骤S1，提取：

[0028] 取云实种子粉末，用75％乙醇热回流提取，过滤，滤液减压浓缩至无醇味。

[0029] 步骤S2，富集：

[0030] 将浓缩至无醇味的提取液上样于AB‑8型大孔吸附树脂柱，树脂柱内径12cm，树脂柱床高度120cm，提取液上样量为2个柱体积，上样结束后关闭阀门静态吸附30min；先使用20％乙醇洗脱10个柱体积除杂，再使用70％乙醇以15mL/min的流速洗脱，收集第9个柱体积的70％乙醇洗脱液，浓缩干燥得富集物。

[0031] 步骤S3，Caesalmin F的纯化：

[0032] 将富集物用HSCCC分离纯化，HSCCC色谱参数为：

[0033] 两相溶剂系统：体积比为2:1:1:3:5的二氯甲烷‑乙酸乙酯‑四氢呋喃‑正丁醇‑水；

[0034] 转速：900r/min；流速：2.8mL/min；温度：25℃；

[0035] 以下相为固定相，上相为流动相，将富集物用体积比1:1的上、下相溶解配制成浓度为20mg/mL的样品溶液，进样，开始采集，根据色谱图收集Caesalmin F对应的流份，浓缩干燥即制备得到Caesalmin F。

[0036] 进一步地，步骤S1中1kg药材用10L75％乙醇提取。

[0037] 进一步地，步骤S1中提取3次，每次2h。

[0038] 进一步地，步骤S2中上样流速3mL/min。

[0039] 进一步地，步骤S3中检测波长为235nm。

[0040] 进一步地，步骤S3中上样量为10mL。

[0041] 本发明的突出优点：

[0042] 本发明提供的方法步骤少、分离快，分离制备得到的云实二萜A和Caesalmin F纯度高。

附图说明

[0043] 图1为云实二萜A的HSCCC纯化色谱图；

[0044] 图2为Caesalmin F的HSCCC纯化色谱图。

具体实施方式

[0045] 下面就结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，由于篇幅原因，实验过程的描述无法做到非常详细，凡是实验中未详细描述的部分均为本领域技术人员熟知的常规操作。

[0046] 一、实验材料

[0047] 云实种子采于广西南宁市，经鉴定为云实Caesalpinia decapetala(Roth)Alston的种子，晒干后粉碎，过40目筛，干燥保存，备用。

[0048] 云实二萜A和Caesalmin F的标准品购买或自制，纯度≥95％。

[0049] AB‑8型大孔吸附树脂购自河北沧州宝恩吸附材料科技有限公司。

[0050] TBE‑300C高速逆流色谱(上海同田生化技术有限公司)，BSA124S电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)，TBP‑5002输液泵、UV‑2000D紫外检测器(上海三位科学仪器有限公司)，ZDHW调温电热套(北京中兴伟业仪器有限公司)。

[0051] 二、实验方法和实验结果

[0052] 1、提取

[0053] 取云实种子粉末，用75％乙醇(体积百分浓度，下同)热回流提取(1kg药材用10L75％乙醇)，提取3次，每次2h，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至无醇味。

[0054] 2、富集

[0055] 将浓缩至无醇味的提取液上样于AB‑8型大孔吸附树脂柱，树脂柱内径12cm，树脂柱床高度120cm，提取液上样量为2个柱体积，上样流速3mL/min，上样结束后关闭阀门静态吸附30min；先使用20％乙醇洗脱10个柱体积除杂，再使用70％乙醇以15mL/min的流速洗脱，收集第9个柱体积的70％乙醇洗脱液，浓缩干燥得富集物。

[0056] 3、纯化

[0057] 3.1云实二萜A的纯化

[0058] 将富集物用HSCCC分离纯化，HSCCC色谱参数为：

[0059] 两相溶剂系统：体积比为2:2:3:5的二氯甲烷‑乙酸乙酯‑正丁醇‑水；

[0060] 转速：900r/min；流速：2.8mL/min；温度：25℃；检测波长：235nm；上样量：10mL；

[0061] 以下相为固定相，上相为流动相，将富集物用体积比1:1的上、下相溶解配制成浓度为20mg/mL的样品溶液，进样，开始采集，根据色谱图(图1)收集云实二萜A对应的流份，浓缩干燥即制备得到云实二萜A，纯度为98.8％。

[0062] 3.2 Caesalmin F的纯化

[0063] 将富集物用HSCCC分离纯化，HSCCC色谱参数为：

[0064] 两相溶剂系统：体积比为2:1:1:3:5的二氯甲烷‑乙酸乙酯‑四氢呋喃‑正丁醇‑水；

[0065] 转速：900r/min；流速：2.8mL/min；温度：25℃；检测波长：235nm；上样量：10mL；

[0066] 以下相为固定相，上相为流动相，将富集物用体积比1:1的上、下相溶解配制成浓度为20mg/mL的样品溶液，进样，开始采集，根据色谱图(图2)收集Caesalmin F对应的流份，浓缩干燥即制备得到Caesalmin F，纯度为98.5％。

[0067] 本发明提供的方法步骤少、分离快，分离制备得到的云实二萜A和Caesalmin F纯度高。

[0068] 上述实施例是对本发明实质性内容的体现，用于更好地解释本发明，但本领域技术人员应当知晓，不应将本发明的保护范围局限于上述具体的实施例。