一类含有氮杂环丁烷骨架的非天然氨基酸衍生物及其合成方法转让专利
申请号 : CN201710746565.8
文献号 : CN109422730B
文献日 : 2020-04-21
发明人 : 吴滨 , 赵杰
申请人 : 中南民族大学
摘要 :
本发明属于化学合成技术领域，具体公开了一类含有氮杂环丁烷骨架的非天然氨基酸衍生物的合成方法，其目标产物非天然氨基酸衍生物的结构式如说明书中式（I）、（II）、（III）、（IV）和（V）所示，式中化合物是一类含有氮杂环丁烷骨架的非天然α‑、β‑和γ‑氨基酸衍生物，氮原子被2‑吡啶甲酸保护；羧基甲酯化；式（I）为含有氮杂环丁烷骨架的非天然α‑氨基酸衍生物；式（II）为含有氮杂环丁烷桥环骨架的非天然α‑氨基酸衍生物,其中n=1或2；式（III）为含有氮杂环丁烷并环骨架的非天然α‑氨基酸衍生物；式（IV）为含有氮杂环丁烷桥环骨架的非天然β‑氨基酸衍生物；式（V）为含有氮杂环丁烷并环骨架的非天然γ‑氨基酸衍生物。本发明的实验结果证明：这些化合物均具有潜在的降血脂活性。
权利要求 :
1.含有氮杂环丁烷骨架的非天然氨基酸衍生物，其结构式如式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所示：所述n＝1或2。
2.根据权利要求1所述的含有氮杂环丁烷骨架的非天然氨基酸衍生物，其特征在于：其结构式为
3.一种权利要求1或2所述的含有氮杂环丁烷骨架的非天然氨基酸衍生的合成方法：以
为原料，以Pd(II)为催化剂，银盐为氧化剂，添加五氟碘苯、苯醌和碱，在溶剂中，微波130～170℃反应1～4小时，得到目标产物；
中的n＝1或2。
4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：所述催化剂Pd(II)为醋酸钯Pd(OAc)2、三氟醋酸钯Pd(OCOCF3)2、二氯化钯PdCl2、二碘化钯PdI2、二氯二苯腈钯PdCl2(PhCN)2、二氯二(三苯基膦基)钯PdCl2(PPh3)2和/或二氯二乙腈钯PdCl2(CH3CN)2，催化剂用量为0.01～
0.2当量。
5.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：所述氧化剂银盐为醋酸银、碳酸银、三氟醋酸银、四氟硼酸银、六氟锑酸银和/或六氟磷酸银，银盐用量为1～3当量。
6.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：所述溶剂是1,2-二氯乙烷或1,1,2,2-四氯乙烷。
7.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：所述碱是1或2价金属的碳酸盐、碳酸氢盐、醋酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐或磷酸二氢盐。
8.根据权利要求7所述的合成方法，其特征在于：所述碱为碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、碳酸锂、碳酸钙、碳酸氢钾、醋酸钠、醋酸钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢钠和/或磷酸二氢钠，所述碱的用量为1～3当量。
9.权利要求1-2中任一所述的含有氮杂环丁烷骨架的非天然氨基酸衍生物在制备降血脂的药物中的应用。
说明书 :
一类含有氮杂环丁烷骨架的非天然氨基酸衍生物及其合成
方法
技术领域
[0001] 本发明属于化学合成领域，具体地，涉及包括式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)所示的一类含有氮杂环丁烷骨架的非天然α-、β-和γ-氨基酸衍生物及其合成方法。
背景技术
[0002] 氨基酸是至少有一个羧基和一个氨基的两性化合物，按氨基连接碳的位置可分为α、β、γ等氨基酸，按其存在方式氨基酸可分为天然氨基酸和非天然氨基酸两类。天然氨基酸是自然界存在的氨基酸，非天然氨基酸是由人工合成的氨基酸。氨基酸及其衍生物因其特殊的结构和性质在农业、工业、日用化工、食品、医药等方面都有着广泛的用途。例如可用作食品、化妆品的添加剂、医药制剂、洗涤剂、作表面活性剂、燃料添加剂、烫发剂和电化学的生产等。
[0003] 生物体中蛋白质仅仅有20种天然氨基酸执行了一系列显著功能，仅有的20种天然氨基酸携有的功能基团数量有限，无法满足化学、生物科学研究和应用中对蛋白质结构和功能的需求。目前，通过化学修饰、基因定点突变和计算机辅助蛋白质设计，虽然对蛋白质的结构改造赋予了天然蛋白质新的功能，但这些方法都依赖于20种天然氨基酸本身；其用于修饰改造的功能基团仅有巯基、羟基、羧基、氨基等几种有限基团，功能化方式十分有限。与此相反，非天然氨基酸可以根据人类的需求进行设计，赋予多样性功能基团，在蛋白质修饰中表现突出。
[0004] 多肽和蛋白质类药物是目前医药研发领域中最活跃，进展最快的部分。天然多肽药物由于酶解稳定性差、体内半衰期短、伴随一定的毒副作用等缺点而限制其发展成为优秀的临床用药。将非天然氨基酸引入多肽药物内，可显著改善多肽药物的稳定性、提高多肽药物通透血脑屏障的能力以及降低多肽药物的毒性。因而发展新型的多功能的非天然氨基酸对于多肽药物的研发有着十分重要的作用。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于提供了一类含有氮杂环丁烷骨架的非天然氨基酸衍生物及其合成方法，其目标产物非天然氨基酸衍生物的结构式如式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所示：
[0006]
[0007] 式(I)-(V)化合物是同一类含有氮杂环丁烷骨架的非天然α-、β-和γ-氨基酸衍生物，氮原子被2-吡啶甲酸保护；羧基甲酯化；式(I)为含有氮杂环丁烷骨架的非天然α-氨基酸衍生物；式(II)为含有氮杂环丁烷桥环骨架的非天然α-氨基酸衍生物，其中n＝1或2；式(III)为含有氮杂环丁烷并环骨架的非天然α-氨基酸衍生物；式(IV)为含有氮杂环丁烷桥环骨架的非天然β-氨基酸衍生物；式(V)为含有氮杂环丁烷并环骨架的非天然γ-氨基酸衍生物。
[0008] 式(I)-(V)化合物的合成方法如路线2～6所示，以Pd(II)为催化剂，银盐为氧化剂，通过钯催化对酰胺底物1(路线2)，3(路线3)，5(路线4)，7(路线5)，9(路线6)的γ位的sp3(C-H)键进行活化，同时发生分子内氨化环化反应，成功构建含有氮杂环丁烷骨架，甚至张力更大的氮杂环丁烷桥环、并环骨架的非天然氨基酸衍生物。
[0009] 路线2
[0010]
[0011] 反应条件：Pd(OAc)2(10mol％),AgOAc(3equiv),C6F5I(5equiv),BQ(0.5equiv),Na3PO4(1.5equiv),in TCE,microwave,170℃,2h.C6F5I＝Iodoperfluorobenzene,BQ＝Benzoquinone,TCE＝1,1,2,2-Tetrachloroethane.
[0012] 如路线2所示，合成方法以2-吡啶甲酸保护的氨基酸衍生物1为原料，以Pd(OAc)2为催化剂，AgOAc为氧化剂，添加五氟碘苯、苯醌和磷酸钠，以TCE为溶剂，微波170℃反应2小时，选择性地对氮γ位sp3(C-H)键活化，并进行分子内的氨化关环生成含有氮杂环丁烷骨架的非天然α-氨基酸衍生物2(即式(I)化合物)。
[0013] 路线3
[0014]
[0015] 反应条件：Pd(OAc)2(10mol％),AgOAc(3equiv),C6F5I(5-10equiv),BQ(0.5equiv),Na3PO4(1.2-3equiv),in DCE or TCE,microwave,130℃,4h.C6F5I＝Iodoperfluorobenzene,BQ＝Benzoquinone,DCE＝1,2-Dichloroethane,TCE＝1,1,2,2-Tetrachloroethane.
[0016] 如路线3所示，合成方法以2-吡啶甲酸保护的氨基酸衍生物3为原料，以Pd(OAc)2为催化剂，AgOAc为氧化剂，添加五氟碘苯、苯醌和磷酸钠，以DCE或TCE为溶剂，微波130℃反3
应4小时，选择性地对氮γ位sp (C-H)键活化，并进行分子内的氨化关环生成含有氮杂环丁烷桥环骨架的非天然α-氨基酸衍生物4(即式(II)化合物)，其中n＝1或2。
应4小时，选择性地对氮γ位sp (C-H)键活化，并进行分子内的氨化关环生成含有氮杂环丁烷桥环骨架的非天然α-氨基酸衍生物4(即式(II)化合物)，其中n＝1或2。
[0017] 路线4
[0018]
[0019] 反应条件：Pd(OAc)2(10mol％),AgOAc(3equiv),C6F5I(5equiv),BQ(0.5equiv),Na3PO4(1.2equiv),in DCE,microwave,130℃,4h.C6F5I＝Iodoperfluorobenzene,BQ＝Benzoquinone,DCE＝1,2-Dichloroethane.
[0020] 如路线4所示，合成方法以2-吡啶甲酸保护的氨基酸衍生物5为原料，以Pd(OAc)2为催化剂，AgOAc为氧化剂，添加五氟碘苯、苯醌和磷酸钠，以DCE为溶剂，微波130℃反应4小时，选择性地对氮γ位sp3(C-H)键活化，并进行分子内的氨化关环生成含有氮杂环丁烷并环骨架的非天然α-氨基酸衍生物6(即式(III)化合物)。
[0021] 路线5
[0022]
[0023] 反应条件：Pd(OAc)2(10mol％),AgOAc(3equiv),C6F5I(10equiv),BQ(0.5equiv),Na3PO4(3equiv),in DCE,microwave,130℃,4h.C6F5I＝Iodoperfluorobenzene,BQ＝Benzoquinone,DCE＝1,2-Dichloroethane.
[0024] 如路线5所示，合成方法以2-吡啶甲酸保护的脂肪胺衍生物7为原料，以Pd(OAc)2为催化剂，AgOAc为氧化剂，添加五氟碘苯、苯醌和磷酸钠，以DCE为溶剂，微波130℃反应4小时，选择性地对氮γ位sp3(C-H)键活化，并进行分子内的氨化关环生成含有氮杂环丁烷桥环骨架的非天然β-氨基酸衍生物8(即式(IV)化合物)。
[0025] 路线6
[0026]
[0027] 反应条件：Pd(OAc)2(20mol％),AgOAc(3equiv),C6F5I(10equiv),BQ(0.5equiv),Na3PO4(3equiv),in TCE,microwave,160℃,4h.C6F5I＝Iodoperfluorobenzene,BQ＝Benzoquinone,DCE＝1,2-Dichloroethane.
[0028] 如路线6所示，合成方法以2-吡啶甲酸保护的脂肪胺衍生物9为原料，以Pd(OAc)2为催化剂，AgOAc为氧化剂，添加五氟碘苯、苯醌和磷酸钠，以DCE为溶剂，微波160℃反应4小3
时，选择性地对氮γ位sp (C-H)键活化，并进行分子内的氨化关环生成含有氮杂环丁烷并环骨架的非天然γ-氨基酸衍生物10(即式(V)化合物)。
时，选择性地对氮γ位sp (C-H)键活化，并进行分子内的氨化关环生成含有氮杂环丁烷并环骨架的非天然γ-氨基酸衍生物10(即式(V)化合物)。
[0029] 与现有技术相比，本发明的优点和有益效果在于：
[0030] 本发明提供了一类新的合成非天然氨基酸衍生物的方法，采用Pd(II)为催化剂，银盐为氧化剂，碱作为酸碱平衡剂，苯醌用于稳定金属催化剂，五氟碘苯氧化加成到金属中心钯上，由于这个中间体络合物空间上十分拥挤，五氟苯基本身缺电子的性质导致其不易发生分子间的还原消除而发生偶联反应，而是发生了分子内的还原消除，生成了五元氮杂桥环化合物。基于所述合成方法，得到一系列非天然α-、β-及γ-氨基酸衍生物，如式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)所示：
[0031]
[0032] 本发明提供的合成方法通过金属催化的sp3(C-H)键活化反应，一步构建刚性的、结构新颖的一系列非天然α-、β-及γ-氨基酸衍生物。该方法为非天然氨基酸的合成提供了一种新的选择。
附图说明
[0033] 图1为实施例1-7制备的化合物对HL7702肝细胞细胞存活率影响实验结果。
[0034] 图2为实施例1-7制备的化合物对HL7702肝细胞甘油三酯含量的影响。与空白组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；n＝3。
具体实施方式
[0035] 以下具体实施例仅用于详细说明本发明的具体实施方式，并不限制本发明的权利要求书请求保护的范围。
[0036] 以下具体实施方式中TCE指1,1,2,2-Tetrachloroethane(1,1,2,2-四氯乙烷)；
[0037] EDCI指1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide Hydrochloride(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)；
[0038] DMAP指4-dimethylaminopyridine(4-二甲氨基吡啶)。
[0039] 原料的合成
[0040] (1)化合物1的制备:
[0041]
[0042] 操作如下：将D-正缬氨酸(586mg，5mmol)和5mL甲醇加入到15mL圆底烧瓶中，并置于冰浴中搅拌。向其中滴加氯化亚砜(1.1mL，15mmol)，渐渐恢复至室温，反应过夜。反应结束后，减压蒸干，加入少量石油醚并过滤，固体用石油醚少量多次的洗，得到白色固体即D-正缬氨酸酯盐酸盐。将所得D-正缬氨酸酯盐酸盐、吡啶甲酸(739mg，6mmol)、EDCI(1.44g，7.5mmol)、DMAP(61mg，0.5mmol)以及二氯甲烷(7mL)加入到15mL圆底烧瓶中，室温下搅拌反应过夜。反应结束后直接通过硅胶色谱柱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)分离得到630mg目标产
25 1
物1，两步反应总产率53％。[α] D-26.2(c 0.68,CHCl3)；H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.64–8.54(m,1H),8.44(d,J＝7.6Hz,1H),8.16(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(td,J＝7.7and 1.6Hz,1H),
7.46–7.35(m,1H),4.86–4.71(m,1H),3.75(s,3H),1.98–1.85(m,1H),1.85–1.71(m,1H),
1.50–1.35(m,2H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.8,164.0,149.4,
148.2,137.3,126.3,122.3,52.3,52.0,34.6,18.7,13.6；HRMS(EI)Calcd for C12H16N2O3[M+]:236.1161,found 236.1154；IR(film)ν(cm-1):2960,1744,1679,1518,1436,1207,752。
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物1，两步反应总产率53％。[α] D-26.2(c 0.68,CHCl3)；H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.64–8.54(m,1H),8.44(d,J＝7.6Hz,1H),8.16(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(td,J＝7.7and 1.6Hz,1H),
7.46–7.35(m,1H),4.86–4.71(m,1H),3.75(s,3H),1.98–1.85(m,1H),1.85–1.71(m,1H),
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[0043] (2)化合物5的制备:
[0044]
[0045] 操作如下：将环己基甘氨酸(629mg，4mmol)和4mL甲醇加入到15mL圆底烧瓶中，并置于冰浴中搅拌。向其中滴加氯化亚砜(0.9mL，12mmol)，渐渐恢复至室温，反应过夜。反应结束后，减压蒸干，加入少量石油醚并过滤，固体用石油醚少量多次的洗，得到白色固体即环己基甘氨酸酯盐酸盐。将所得环己基甘氨酸酯盐酸盐、吡啶甲酸(591mg，4.8mmol)、EDCI(1.15g，6mmol)、DMAP(50mg，0.4mmol)以及二氯甲烷(5mL)加入到15mL圆底烧瓶中，室温下搅拌反应过夜。反应结束后直接通过硅胶色谱柱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)分离得到791mg目标产物5，两步反应总产率72％。[α]25D+33.8(c 1.22,CHCl3)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(d,J＝4.4Hz,1H),8.49(d,J＝8.7Hz,1H),8.15(d,J＝7.8Hz,1H),7.82(t,J＝7.6Hz,
1H),7.51–7.33(m,1H),4.70(dd,J＝9.1and5.6Hz,1H),3.74(s,3H),1.96–1.86(m,1H),
13
1.80–1.56(m,5H),1.33–1.03(m,5H)；C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.2,164.1,149.4,148.2,
137.2,126.3,122.2,57.0,52.1,41.0,29.5,28.3,25.88,25.86；HRMS(EI)Calcd for C15H20N2O3[M+]:276.1474,found 276.1476；IR(film)ν(cm-1):3389,2929,2855,1743,1681,
1517。
1H),7.51–7.33(m,1H),4.70(dd,J＝9.1and5.6Hz,1H),3.74(s,3H),1.96–1.86(m,1H),
13
1.80–1.56(m,5H),1.33–1.03(m,5H)；C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.2,164.1,149.4,148.2,
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1517。
[0046] (3)化合物9的制备:
[0047]
[0048] 操作如下：将加巴喷丁(685mg，4mmol)和4mL甲醇加入到10mL圆底烧瓶中，并置于冰浴中搅拌。向其中滴加氯化亚砜(0.9mL，12mmol)，渐渐恢复至室温，反应过夜。反应结束后，减压蒸干，加入少量石油醚并过滤，固体用石油醚少量多次的洗，得到白色固体即加巴喷丁甲酯盐酸盐。将所得加巴喷丁甲酯盐酸盐、吡啶甲酸(591mg，4.8mmol)、EDCI(1.15g，6mmol)、DMAP(49mg，0.4mmol)以及二氯甲烷(5mL)加入到10mL圆底烧瓶中，室温下搅拌反应过夜。反应结束后直接通过硅胶色谱柱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)分离得到699mg目标产物
1
9，两步反应总产率61％。H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(d,J＝4.4Hz,1H),8.49(s,1H),8.19(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(td,J＝7.7and 1.4Hz,1H),7.41(dd,J＝6.8and 5.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.51(d,J＝6.8Hz,2H),2.39(s,2H),1.66–1.56(m,2H),1.55–1.32(m,8H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.8,164.6,150.0,148.2,137.2,126.0,122.3,51.6,45.8,41.3,38.1,+
34.1,25.9,21.5；HRMS(EI)Calcd for C16H22N2O3[M ]:290.1630,found 290.1635；IR(KBr)ν(cm-1):3391,2930,2862,1732,1681,1527,1436,1207,752。
1
9，两步反应总产率61％。H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(d,J＝4.4Hz,1H),8.49(s,1H),8.19(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(td,J＝7.7and 1.4Hz,1H),7.41(dd,J＝6.8and 5.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.51(d,J＝6.8Hz,2H),2.39(s,2H),1.66–1.56(m,2H),1.55–1.32(m,8H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.8,164.6,150.0,148.2,137.2,126.0,122.3,51.6,45.8,41.3,38.1,+
34.1,25.9,21.5；HRMS(EI)Calcd for C16H22N2O3[M ]:290.1630,found 290.1635；IR(KBr)ν(cm-1):3391,2930,2862,1732,1681,1527,1436,1207,752。
[0049] (4)化合物11的制备:
[0050]
[0051] 操作参照文献：Gong Chen；Gang He.Angew.Chem.Int.Ed.,2011,50,5192–5196。
[0052] (5)化合物13的制备:
[0053]
[0054] 操作如下：将1-氨基环庚酸(560mg，3.56mmol)和4mL甲醇加入到15mL圆底烧瓶中，并置于冰浴中搅拌。向其中滴加氯化亚砜(0.8mL，11mmol)，渐渐恢复至室温，反应过夜。反应结束后，减压蒸干，加入少量石油醚并过滤，固体用石油醚少量多次的洗，得到白色固体即氨基环庚酸酯盐酸盐。将所得氨基环庚酸酯盐酸盐、吡啶甲酸(529mg，4.3mmol)、EDCI(1.04g，5.4mmol)、DMAP(50mg，0.4mmol)以及二氯甲烷(5mL)加入到15mL圆底烧瓶中，室温下搅拌反应过夜。反应结束后直接通过硅胶色谱柱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)分离得到742mg目标产物13，两步反应总产率75％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55(d,J＝4.2Hz,1H),
8.29(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.82(t,J＝7.4Hz,1H),7.49–7.35(m,1H),3.72(s,
3H),2.32–2.13(m,4H),1.61(s,8H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.9,163.4,149.7,148.0,
137.3,126.2,122.1,62.2,52.4,36.3,29.3,22.7；HRMS(EI)Calcd for C15H20N2O3[M+]:
276.1474,found 276.1460；IR(KBr)ν(cm-1):3380,2930,1730,1670,1512,1042,750,586。
8.29(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.82(t,J＝7.4Hz,1H),7.49–7.35(m,1H),3.72(s,
3H),2.32–2.13(m,4H),1.61(s,8H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.9,163.4,149.7,148.0,
137.3,126.2,122.1,62.2,52.4,36.3,29.3,22.7；HRMS(EI)Calcd for C15H20N2O3[M+]:
276.1474,found 276.1460；IR(KBr)ν(cm-1):3380,2930,1730,1670,1512,1042,750,586。
[0055] (6)化合物15的制备:
[0056]
[0057] 操作如下：将反-4-氨基环己基甲酸盐酸盐(898mg，5mmol)和5mL甲醇加入到15mL圆底烧瓶中，并置于冰浴中搅拌。向其中滴加氯化亚砜(1.1mL，15mmol)，渐渐恢复至室温，反应过夜。反应结束后，减压蒸干，加入少量石油醚并过滤，固体用石油醚少量多次的洗，得到白色固体即反-4-氨基环己基甲酸酯盐酸盐。将所得反-4-氨基环己基甲酸酯盐酸盐、吡啶甲酸(739mg，6mmol)、EDCI(1.44g，7.5mmol)、DMAP(61mg，0.5mmol)以及二氯甲烷(7mL)加入到15mL圆底烧瓶中，室温下搅拌反应过夜。反应结束后直接通过硅胶色谱柱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)分离得到558mg目标产物15，两步反应总产率43％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝4.2Hz,1H),8.18(d,J＝7.8Hz,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,1H),7.83(td,J＝7.7and
1.7Hz,1H),7.41(ddd,J＝7.6,4.8and 1.1Hz,1H),4.02–3.86(m,1H),3.68(s,3H),2.30(tt,J＝12.1and 3.6Hz,1H),2.21–2.11(m,2H),2.11–1.98(m,2H),1.62(qd,J＝13.3and
3.3Hz,2H),1.33(qd,J＝12.8and 3.4Hz,2H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.7,163.4,
149.9,147.9,137.3,126.0,122.1,51.6,47.6,42.3,32.0,27.7；HRMS(EI)Calcd for C14H18N2O3[M+]:262.1317,found 262.1310；IR(KBr)ν(cm-1):3378,2927,1720,1667,1519,
1203,754,599。
1.7Hz,1H),7.41(ddd,J＝7.6,4.8and 1.1Hz,1H),4.02–3.86(m,1H),3.68(s,3H),2.30(tt,J＝12.1and 3.6Hz,1H),2.21–2.11(m,2H),2.11–1.98(m,2H),1.62(qd,J＝13.3and
3.3Hz,2H),1.33(qd,J＝12.8and 3.4Hz,2H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.7,163.4,
149.9,147.9,137.3,126.0,122.1,51.6,47.6,42.3,32.0,27.7；HRMS(EI)Calcd for C14H18N2O3[M+]:262.1317,found 262.1310；IR(KBr)ν(cm-1):3378,2927,1720,1667,1519,
1203,754,599。
[0058] (7)化合物17的制备:
[0059]
[0060] 操作如下：将顺-4-氨基环己基甲酸(286mg，2mmol)和2mL甲醇加入到10mL圆底烧瓶中，并置于冰浴中搅拌。向其中滴加氯化亚砜(0.5mL，6mmol)，渐渐恢复至室温，反应过夜。反应结束后，减压蒸干，加入少量石油醚并过滤，固体用石油醚少量多次的洗，得到白色固体即顺-4-氨基环己基甲酸酯盐酸盐。将所得顺-4-氨基环己基甲酸酯盐酸盐、吡啶甲酸(296mg，2.4mmol)、EDCI(575mg，3mmol)、DMAP(25mg，0.2mmol)以及二氯甲烷(3mL)加入到10mL圆底烧瓶中，室温下搅拌反应过夜。反应结束后直接通过硅胶色谱柱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)分离得到234mg目标产物17，两步反应总产率45％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝4.5Hz,1H),8.35–7.95(m,2H),7.82(t,J＝7.7Hz,1H),7.40(dd,J＝6.8and 5.4Hz,
1H),4.25–4.00(m,1H),3.68(s,3H),2.64–2.39(m,1H),2.10–1.88(m,3H),1.83–1.68(m,
5H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.5,163.4,149.9,148.0,137.3,126.0,122.0,51.6,45.7,
40.2,29.4,25.0；HRMS(EI)Calcd for C14H18N2O3[M+]:262.1317,found 262.1313；IR(film)ν(cm-1):3384,2945,1731,1675,1521,1204,753。
1H),4.25–4.00(m,1H),3.68(s,3H),2.64–2.39(m,1H),2.10–1.88(m,3H),1.83–1.68(m,
5H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.5,163.4,149.9,148.0,137.3,126.0,122.0,51.6,45.7,
40.2,29.4,25.0；HRMS(EI)Calcd for C14H18N2O3[M+]:262.1317,found 262.1313；IR(film)ν(cm-1):3384,2945,1731,1675,1521,1204,753。
[0061] 实施例1化合物2(式(I)化合物)的制备:
[0062]
[0063] 操作如下：在室温下，将2-吡啶甲酸保护的氨基酸衍生物1(35.5mg,0.15mmol)、Pd(OAc)2(3.4mg,0.015mmol)、AgOAc(75mg,0.45mmol)、C6F5I(220mg,0.75mmol)、BQ(8.1mg,0.075mmol)、Na3PO4(37mg,0.225mmol)以及TCE(1mL)加入到10mL微波反应管中，功率20W，
170℃反应2小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：
1为展开剂，通过制备板分离得到25.3mg目标化合物2，产率72％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
8.61–8.34(m,1H),8.19–7.99(m,1H),7.85–7.70(m,1H),7.38–7.27(m,1H),5.59–5.11(m,
1H),4.97–4.54(m,1H),3.83–3.49(m,3H),2.60–2.35(m,1H),2.35–2.09(m,1H),1.66–1.34(m,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.3,172.1,171.6,164.9,164.3,151.6,151.4,151.3,
148.2,147.4,147.3,136.9,136.7,125.6,125.4,125.3,124.1,123.5,123.4,63.3,63.1,
61.2,57.1,56.8,56.7,52.3,52.0,51.9,29.9,29.6,28.5,22.5,20.7,20.4；HRMS(EI)Calcd for C12H14N2O3[M+]:234.1004,found 234.1005；IR(KBr)ν(cm-1):2966,1748,1643,
1413,1205,750,696。
170℃反应2小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：
1为展开剂，通过制备板分离得到25.3mg目标化合物2，产率72％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
8.61–8.34(m,1H),8.19–7.99(m,1H),7.85–7.70(m,1H),7.38–7.27(m,1H),5.59–5.11(m,
1H),4.97–4.54(m,1H),3.83–3.49(m,3H),2.60–2.35(m,1H),2.35–2.09(m,1H),1.66–1.34(m,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.3,172.1,171.6,164.9,164.3,151.6,151.4,151.3,
148.2,147.4,147.3,136.9,136.7,125.6,125.4,125.3,124.1,123.5,123.4,63.3,63.1,
61.2,57.1,56.8,56.7,52.3,52.0,51.9,29.9,29.6,28.5,22.5,20.7,20.4；HRMS(EI)Calcd for C12H14N2O3[M+]:234.1004,found 234.1005；IR(KBr)ν(cm-1):2966,1748,1643,
1413,1205,750,696。
[0064] 实施例2化合物6(式(III)化合物)的制备:
[0065]
[0066] 操作如下：在室温下，将2-吡啶甲酸保护的氨基酸衍生物5(41.4mg,0.15mmol)、Pd(OAc)2(3.4mg,0.015mmol)、AgOAc(75mg,0.45mmol)、C6F5I(220mg,0.75mmol)、BQ(8.1mg,0.075mmol)、Na3PO4(29.5mg,0.18mmol)以及DCE(1mL)加入到10mL微波反应管中，功率20W，
130℃反应4小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：
1
1为展开剂，通过制备板分离得到25.6mg目标化合物6，产率62％。H NMR(400MHz,CDCl3)δ
8.57(d,J＝4.4Hz,0.25H),8.42(d,J＝4.3Hz,1H),8.11(d,J＝7.9Hz,1H),8.06(d,J＝
7.9Hz,0.25H),7.83–7.71(m,1.25H),7.39–7.27(m,1.25H),5.28(d,J＝4.6Hz,1H),5.20(dd,J＝14.1,6.2Hz,0.25H),4.83–4.70(m,1.25H),3.77(s,0.75H),3.57(s,3H),2.91–
2.81(m,0.25H),2.74–2.61(m,1.25H),2.30–2.15(m,1H),1.94–1.82(m,3H),1.80–1.64(m,
4H),1.58–1.42(m,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.9,171.3,165.9,165.2,151.7,148.3,
147.4,136.8,136.6,125.5,125.3,124.0,123.4,69.8,62.8,62.5,58.5,52.2,51.9,34.1,
33.4,27.4,24.3,24.0,22.8,18.7,18.6,18.0,17.6；HRMS(EI)Calcd for C15H18N2O3[M+]:
274.1317,found 274.1322；IR(KBr)ν(cm-1):2948,1747,1642,1450,1414,1204,751。
130℃反应4小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：
1
1为展开剂，通过制备板分离得到25.6mg目标化合物6，产率62％。H NMR(400MHz,CDCl3)δ
8.57(d,J＝4.4Hz,0.25H),8.42(d,J＝4.3Hz,1H),8.11(d,J＝7.9Hz,1H),8.06(d,J＝
7.9Hz,0.25H),7.83–7.71(m,1.25H),7.39–7.27(m,1.25H),5.28(d,J＝4.6Hz,1H),5.20(dd,J＝14.1,6.2Hz,0.25H),4.83–4.70(m,1.25H),3.77(s,0.75H),3.57(s,3H),2.91–
2.81(m,0.25H),2.74–2.61(m,1.25H),2.30–2.15(m,1H),1.94–1.82(m,3H),1.80–1.64(m,
4H),1.58–1.42(m,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.9,171.3,165.9,165.2,151.7,148.3,
147.4,136.8,136.6,125.5,125.3,124.0,123.4,69.8,62.8,62.5,58.5,52.2,51.9,34.1,
33.4,27.4,24.3,24.0,22.8,18.7,18.6,18.0,17.6；HRMS(EI)Calcd for C15H18N2O3[M+]:
274.1317,found 274.1322；IR(KBr)ν(cm-1):2948,1747,1642,1450,1414,1204,751。
[0067] 实施例3化合物10(式(V)化合物)的制备:
[0068]
[0069] 操作如下：在室温下，将2-吡啶甲酸保护的酰胺衍生物9(28.6mg，0.1mmol)、Pd(OAc)2(4.5mg,0.02mmol)、AgOAc(50mg,0.3mmol)、C6F5I(294mg,1.0mmol)、BQ(5.4mg,0.05mmol)、Na3PO4(49.2mg,0.3mmol)以及TCE(1mL)加入到10mL微波反应管中，功率20W，160℃反应4小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：1为展开剂，通过制备板分离得到15.9mg目标化合物10，产率56％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(d,J＝2.7Hz,1H),8.15–7.95(m,1H),7.86–7.70(m,1H),7.40–7.29(m,1H),4.90(t,J＝
4.8Hz,0.4H),4.64(d,J＝10.7Hz,0.6H),4.44–4.37(m,0.6+0.6H),4.11(d,J＝10.8Hz,
0.4H),3.96(d,J＝10.8Hz,0.4H),3.72–3.60(m,3H),2.74–2.54(m,2H),2.32–2.20(m,
0.6H),1.94–1.28(m,7.4H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.7,166.1,165.8,152.33,152.28,
148.2,148.0,136.73,136.69,125.21,125.15,123.8,123.7,68.9,65.1,62.7,55.5,51.5,
44.0,43.4,35.2,34.9,28.6,27.7,26.3,24.0,18.2,18.0,17.0,16.6；HRMS(EI)Calcd for + -1
C16H20N2O3[M]:288.1474,found288.1482；IR(KBr)ν(cm ):2946,1736,1633,1450,1417,
750,696。
4.8Hz,0.4H),4.64(d,J＝10.7Hz,0.6H),4.44–4.37(m,0.6+0.6H),4.11(d,J＝10.8Hz,
0.4H),3.96(d,J＝10.8Hz,0.4H),3.72–3.60(m,3H),2.74–2.54(m,2H),2.32–2.20(m,
0.6H),1.94–1.28(m,7.4H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.7,166.1,165.8,152.33,152.28,
148.2,148.0,136.73,136.69,125.21,125.15,123.8,123.7,68.9,65.1,62.7,55.5,51.5,
44.0,43.4,35.2,34.9,28.6,27.7,26.3,24.0,18.2,18.0,17.0,16.6；HRMS(EI)Calcd for + -1
C16H20N2O3[M]:288.1474,found288.1482；IR(KBr)ν(cm ):2946,1736,1633,1450,1417,
750,696。
[0070] 实施例4化合物12(式(II)化合物n＝1的情况)的制备:
[0071]
[0072] 操作如下：在室温下，将2-吡啶甲酸保护的氨基酸衍生物11(39.4mg,0.15mmol)、Pd(OAc)2(3.4mg,0.015mmol)、AgOAc(75mg,0.45mmol)、C6F5I(220mg,0.75mmol)、BQ(8.1mg,0.075mmol)、Na3PO4(29.5mg,0.18mmol)以及DCE(1mL)加入到10mL微波反应管中，功率20W，
130℃反应4小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：
1为展开剂，通过制备板分离得到33.7mg目标化合物12，产率86％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
8.56(d,J＝4.2Hz,0.5H),8.37(d,J＝4.3Hz,0.5H),8.10(dd,J＝13.4and 7.9Hz,1H),7.77(t,J＝7.3Hz,1H),7.39–7.27(m,1H),5.45–5.14(m,0.5H),4.70–4.48(m,0.5H),3.77(s,
1.5H),3.53(s,1.5H),2.91–2.77(m,1H),2.69–2.51(m,1H),2.47–2.38(m,0.5H),2.37–
2.27(m,0.5H),2.22–2.14(m,0.5H),2.13–2.05(m,0.5H),2.02–1.92(m,1H),1.85–1.73(m,
2H),1.73–1.62(m,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.69,170.67,165.6,164.3,151.7,
151.0,148.3,146.9,136.8,136.7,125.6,125.5,123.7,123.5,74.2,69.0,65.4,58.9,
52.3,51.6,35.6,34.3,29.4,28.1,25.8,25.1,15.3,15.1；HRMS(EI)Calcd for C14H16N2O3[M+]:260.1161,found260.1168；IR(KBr)ν(cm-1):2955,1740,1635,1395,1118,750。
130℃反应4小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：
1为展开剂，通过制备板分离得到33.7mg目标化合物12，产率86％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
8.56(d,J＝4.2Hz,0.5H),8.37(d,J＝4.3Hz,0.5H),8.10(dd,J＝13.4and 7.9Hz,1H),7.77(t,J＝7.3Hz,1H),7.39–7.27(m,1H),5.45–5.14(m,0.5H),4.70–4.48(m,0.5H),3.77(s,
1.5H),3.53(s,1.5H),2.91–2.77(m,1H),2.69–2.51(m,1H),2.47–2.38(m,0.5H),2.37–
2.27(m,0.5H),2.22–2.14(m,0.5H),2.13–2.05(m,0.5H),2.02–1.92(m,1H),1.85–1.73(m,
2H),1.73–1.62(m,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.69,170.67,165.6,164.3,151.7,
151.0,148.3,146.9,136.8,136.7,125.6,125.5,123.7,123.5,74.2,69.0,65.4,58.9,
52.3,51.6,35.6,34.3,29.4,28.1,25.8,25.1,15.3,15.1；HRMS(EI)Calcd for C14H16N2O3[M+]:260.1161,found260.1168；IR(KBr)ν(cm-1):2955,1740,1635,1395,1118,750。
[0073] 实施例5化合物14(式(II)化合物n＝2的情况)的制备:
[0074]
[0075] 操作如下：在室温下，将2-吡啶甲酸保护的氨基酸衍生物13(41.0mg,0.15mmol)、Pd(OAc)2(3.4mg,0.015mmol)、AgOAc(75mg,0.45mmol)、C6F5I(440mg,1.5mmol)、BQ(8.1mg,0.075mmol)、Na3PO4(74mg,0.45mmol)以及TCE(1mL)加入到10mL微波反应管中，功率20W，130℃反应4小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：1为展开剂，通过制备板分离得到34.2mg目标化合物14，产率83％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55(d,J＝4.1Hz,0.4H),8.36(d,J＝4.1Hz,0.6H),8.19–7.96(m,1H),7.76(t,J＝7.6Hz,1H),
7.38–7.25(m,1H),5.34(d,J＝6.8Hz,0.4H),4.82–4.62(m,0.6H),3.75(s,1.2H),3.44(s,
1.8H),2.80(t,J＝9.3Hz,1H),2.74–2.55(m,1H),2.35–1.94(m,3H),1.83–1.49(m,5H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.09,172.06,163.8,163.1,151.7,151.0,148.2,146.9,136.8,
136.6,125.4,125.3,123.9,123.4,73.7,69.3,63.7,57.8,52.3,51.6,33.1,32.6,31.7,
31.2,29.4,28.0,23.7,23.6,23.3,22.9；HRMS(EI)Calcd for C15H18N2O3[M+]:274.1317,-1
found 274.1318；IR(KBr)ν(cm ):2932,1738,1631,1450,1413,1122,750,694。
7.38–7.25(m,1H),5.34(d,J＝6.8Hz,0.4H),4.82–4.62(m,0.6H),3.75(s,1.2H),3.44(s,
1.8H),2.80(t,J＝9.3Hz,1H),2.74–2.55(m,1H),2.35–1.94(m,3H),1.83–1.49(m,5H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.09,172.06,163.8,163.1,151.7,151.0,148.2,146.9,136.8,
136.6,125.4,125.3,123.9,123.4,73.7,69.3,63.7,57.8,52.3,51.6,33.1,32.6,31.7,
31.2,29.4,28.0,23.7,23.6,23.3,22.9；HRMS(EI)Calcd for C15H18N2O3[M+]:274.1317,-1
found 274.1318；IR(KBr)ν(cm ):2932,1738,1631,1450,1413,1122,750,694。
[0076] 实施例6化合物16(式(IV)化合物的一种构型)的制备:
[0077]
[0078] 操作如下：在室温下，将2-吡啶甲酸保护的氨基酸衍生物15(39.4mg,0.15mmol)、Pd(OAc)2(3.4mg,0.015mmol)、AgOAc(75mg,0.45mmol)、C6F5I(440mg,1.5mmol)、BQ(8.1mg,0.075mmol)、Na3PO4(74mg,0.45mmol)以及DCE(1mL)加入到10mL微波反应管中，功率20W，130℃反应4小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：1为展开剂，通过制备板分离得到28.0mg目标化合物16，产率72％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(t,J＝5.0Hz,1H),8.09(dd,J＝7.7and 3.8Hz,1H),7.79(t,J＝7.7Hz,1H),7.35(dd,J＝
7.0and 5.2Hz,1H),5.34–5.24(m,0.5H),5.24–5.11(m,0.5H),4.80–4.68(m,0.5H),4.66–
4.52(m,0.5H),3.70(s,3H),3.59–3.41(m,1H),2.69–2.55(m,1H),2.46–2.15(m,2H),2.06–
1.87(m,2H),1.81–1.77(m,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.1,164.3,163.4,152.0,
148.34,148.30,136.8,136.7,125.4,125.3,123.7,66.6,66.4,61.0,60.1,51.84,51.82,
43.9,40.9,27.6,26.9,26.6,25.0,18.2,18.0；HRMS(EI)Calcd for C14H16N2O3[M+]:
260.1161,found 260.1157；IR(KBr)ν(cm-1):2955,1732,1630,1448,1413,750,694。
7.0and 5.2Hz,1H),5.34–5.24(m,0.5H),5.24–5.11(m,0.5H),4.80–4.68(m,0.5H),4.66–
4.52(m,0.5H),3.70(s,3H),3.59–3.41(m,1H),2.69–2.55(m,1H),2.46–2.15(m,2H),2.06–
1.87(m,2H),1.81–1.77(m,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.1,164.3,163.4,152.0,
148.34,148.30,136.8,136.7,125.4,125.3,123.7,66.6,66.4,61.0,60.1,51.84,51.82,
43.9,40.9,27.6,26.9,26.6,25.0,18.2,18.0；HRMS(EI)Calcd for C14H16N2O3[M+]:
260.1161,found 260.1157；IR(KBr)ν(cm-1):2955,1732,1630,1448,1413,750,694。
[0079] 实施例7化合物18(式(IV)化合物的另一种构型)的制备:
[0080]
[0081] 操作如下：在室温下，将2-吡啶甲酸保护的氨基酸衍生物17(39.4mg,0.15mmol)、Pd(OAc)2(3.4mg,0.015mmol)、AgOAc(75mg,0.45mmol)、C6F5I(440mg,1.5mmol)、BQ(8.1mg,0.075mmol)、Na3PO4(74mg,0.45mmol)以及DCE(1mL)加入到10mL微波反应管中，功率20W，130℃反应4小时。反应结束后自然冷却至室温，硅藻土过滤，旋干。以石油醚：乙酸乙酯＝4：1为展开剂，通过制备板分离得到16.8mg目标化合物18，产率54％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝4.3Hz,0.4H),8.44(d,J＝4.3Hz,0.6H),8.03(d,J＝7.7Hz,1H),7.86–7.63(m,1H),
7.38–7.26(m,1H),5.55(s,0.6H),5.13(s,0.4H),4.93(s,0.4H),4.60(d,J＝1.8Hz,0.6H),
3.74(s,1.2H),3.20(s,1,8H),2.97–2.81(m,5H),2.81–2.72(m,0.5H),2.62–2.45(m,1H),
2.27–2.10(m,1H),2.10–1.91(m,1H),1.91–1.74(m,1H),1.59–1.43(m,1H).；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ173.8,173.6,164.7,164.2,152.1,152.0,148.1,147.6,136.7,136.6,
125.15,125.10,123.8,123.6,67.6,66.4,62.1,60.2,52.1,51.3,45.3,43.6,33.5,32.3,
27.3,24.6,17.9,17.4；HRMS(EI)Calcd for C14H16N2O3[M+]:260.1161,found 260.1165；IR(KBr)ν(cm-1):2955,1735,1629,1449,1414,1205,751,696。
7.38–7.26(m,1H),5.55(s,0.6H),5.13(s,0.4H),4.93(s,0.4H),4.60(d,J＝1.8Hz,0.6H),
3.74(s,1.2H),3.20(s,1,8H),2.97–2.81(m,5H),2.81–2.72(m,0.5H),2.62–2.45(m,1H),
2.27–2.10(m,1H),2.10–1.91(m,1H),1.91–1.74(m,1H),1.59–1.43(m,1H).；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ173.8,173.6,164.7,164.2,152.1,152.0,148.1,147.6,136.7,136.6,
125.15,125.10,123.8,123.6,67.6,66.4,62.1,60.2,52.1,51.3,45.3,43.6,33.5,32.3,
27.3,24.6,17.9,17.4；HRMS(EI)Calcd for C14H16N2O3[M+]:260.1161,found 260.1165；IR(KBr)ν(cm-1):2955,1735,1629,1449,1414,1205,751,696。
[0082] 实施例1-7制备的化合物对HL7702肝细胞甘油三酯含量的影响实验
[0083] (1)材料
[0084] 样品：化合物2，6，10，12，14，16，18
[0085] 仪器：生物安全柜，ESCO(新加坡)；CO2细胞孵箱：ESCO(新加坡)；Cky31倒置显微镜Olympus(日本)；离心机，Termo Fisher Scientific(美国)；GF-M3000酶标仪，山东高密彩虹分析仪器有限公司(中国)等。
[0086] 试剂：高糖DMEM培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素、胰蛋白酶消化液均购于BI公司；油酸、无游离脂肪酸的牛血清蛋白第五组分及DMSO均购于Sigma；细胞增殖检测试剂盒(CellTiter AQueous One Solution Reagent)购于Promega公司；BCA检测试剂盒购于Thermo Fisher Scientific；姜黄素购于广东一力集团制药有限公司；多聚甲醛、甘油三酯测试盒购于南京建成生物研究所。
[0087] (2)实验方法
[0088] 样品溶液配制：检测样品均用DMSO溶解，初浓度为100mmol/L，样品终浓度为100μmol/L。姜黄素初浓度为20mmol/L，终浓度为20μmol/L。
[0089] 样品对肝细胞细胞存活率的影响：根据文献[1]方法检测样品对细胞活力的影响。样品分别孵育人肝HL7702细胞48h后，用CellTiter AQueous One Solution Reagent溶液孵育1h。用酶标仪检测490nm波长处的OD值，同时设置调零孔。结果以细胞存活率(％)表示。细胞存活率(％)＝(实测OD值-调零孔OD值)/(空白组OD值-调零孔OD值)×100。
[0090] 文献[1]Xu C；Hu Y；Hou L et al.J Mol Cell Cardiol,2014,75,111-121.[0091] 高脂细胞模型建立：以含10％胎牛血清的DMEM培养基培养人肝细胞株HL7702。待细胞密度大约为70％时，以终浓度为0.2mmol/L的油酸孵育HL7702细胞48h建立高脂细胞模型。
[0092] 样品对肝细胞甘油三酯含量的影响：将HL7702肝细胞接种于24孔板，加入油酸的同时分别加入待测样品，以姜黄素作为阳性对照。孵育48h后，参照甘油三酯测试盒说明书检测甘油三酯(TG)的含量，并以BCA法测定蛋白质浓度。细胞中TG含量以每g细胞蛋白中含TG量(mg/g)表示。
[0093] (3)实验结果
[0094] 如图1所示，100μmol/L的化合物2、6、10、12、14、16、18及20μmol/L姜黄素对HL7702肝细胞无明显的毒性；如图2所示化合物2、6、10、12、14、16、18及姜黄素可以显著降低油酸诱导的HL7702肝细胞TG的含量。