一种纳米自微乳剂、兽药纳米自微乳剂及其制备方法与应用

摘要

本发明提供了一种纳米自微乳剂、兽药纳米自微乳剂及其制备方法与应用。纳米自微乳剂包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂24%~48%、助乳化剂16%~32%、油相10%~20%，余量为水；乳化剂与助乳化剂的体积比为3:2；乳化剂和助乳化剂的总体积与油相的体积之比为4:1；助乳化剂为无水乙醇；乳化剂为吐温‑80；油相为桉油。本发明通过选取特定种类的油相、乳化剂以及助乳化剂，并按照一定配比进行组合，获得具有高度自乳化能力的纳米自微乳剂，其能够应于兽药制剂中，获得兽药纳米自微乳剂。对于兽药为恩诺沙星时，恩诺沙星纳米自微乳剂能够在稀释到给药浓度后，仍能长时间稳定存在，克服了现有技术中普通微乳在稀释后出现药物析出、分散不均匀的问题，适用于喷雾给药的方式。

权利要求

1.纳米自微乳剂在制备兽药制剂中的应用，其特征在于，所述纳米自微乳剂包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂24％～48％、助乳化剂16％～32％、油相10％～20％，余量为水；

所述乳化剂与助乳化剂的体积比为3:2；所述乳化剂和助乳化剂的总体积与所述油相的体积之比为4:1；所述助乳化剂为无水乙醇；所述乳化剂为吐温-80；所述油相为桉油；

所述兽药为恩诺沙星或盐酸恩诺沙星。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述纳米自微乳剂包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂24～36％、助乳化剂16～24％、油相10～15％，余量为水。

3.权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述纳米自微乳剂的制备方法包括以下步骤：S1.按配比将乳化剂与助乳化剂混合，得到混合乳化剂，S2.按配比将混合乳化剂与油相混合，得到混合自微乳体系；

S3.按配比将步骤S2所得混合自微乳体系与水相进行混合。

4.一种兽药纳米自微乳剂，其特征在于，包括兽药和权利要求1或2所述的纳米自微乳剂，所述兽药与纳米自微乳剂的用量之比为0.2g～5g：100ml；所述兽药为恩诺沙星或盐酸恩诺沙星。

5.根据权利要求4所述的兽药纳米自微乳剂，其特征在于，所述兽药纳米自微乳剂还包括抗氧化剂，所述抗氧化剂的用量为：每100ml兽药纳米自微乳剂0.004g。

6.权利要求4～5任一项所述兽药纳米自微乳剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.按配比将乳化剂与助乳化剂混合，得到混合乳化剂，S2.按配比将混合乳化剂与油相混合，得到自微乳体系；

S3.按配比将步骤S2所得自微乳体系与含有兽药的水溶液进行混合，即得所述兽药纳米自微乳剂。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述混合的步骤为所述含有兽药的水溶液滴加到所述自微乳体系中，边滴加边搅拌。

8.权利要求4～5任一项所述兽药纳米自微乳剂在制备兽药制剂中的应用，其特征在于，所述兽药制剂的制剂形式为气雾喷剂。

说明书

一种纳米自微乳剂、兽药纳米自微乳剂及其制备方法与应用

技术领域

[0001] 本发明涉及兽药制剂领域，更具体地，涉及一种纳米自微乳剂、兽药纳米自微乳剂及其制备方法与应用。

背景技术

[0002] 恩诺沙星和盐酸恩诺沙星是动物专用的第三代喹诺酮类抗菌药物，不但对静止期和生长期细菌具有良好的抗菌作用，同时还具有抗菌谱广、杀菌活性强，组织浓度高、毒副作用小，与其他抗菌药无交叉耐药性等优点，目前广泛应用于兽医临床，主要治疗动物细菌性疾病和支原体感染等病症。

[0003] 恩诺沙星和盐酸恩诺沙星几乎不溶于水，水溶性差，对动物的给药方式有很大的限制，且不利于动物机体吸收。目前恩诺沙星和盐酸恩诺沙星的常用剂型主要有粉剂、注射剂和混悬剂。粉剂不便于动物口服，注射剂在体内作用时间短，需要多次对动物重复给药，且易引起动物的应激反应等。现有技术中有将恩诺沙星和/或盐酸恩诺沙星制成乳剂，例如专利CN201310120581.8，虽然该乳剂相对于其他制剂能够增加恩诺沙星的分散度，但该乳剂为普通微乳，乳剂中的乳滴粒径较大，自微乳化能力弱或几乎无自微乳化能力，乳剂在稀释后不稳定，恩诺沙星容易析出，造成通过胃肠道吸收时生物利用度不高，或难以通过喷雾装置形成粒径达到纳米级别的乳滴，无法通过喷雾的方式进行给药，因此给药途径受到限制。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于克服上述现有技术的问题，提供一种纳米自微乳剂，所述纳米自微乳剂具有高度的自微乳化能力，可无限稀释成澄清透明纳米乳体系，可应用于制备兽药制剂。

[0005] 本发明的另一个目的是提供所述纳米自微乳剂的制备方法。

[0006] 本发明的另一个目的是提供所述纳米自微乳剂在制备兽药制剂中的应用。利用所述纳米自微乳剂制备后的兽药制剂，在稀释后，药液均能稳定存在，克服了普通微乳在稀释后出现药物析出，分散不均匀等现象，提高胃肠道吸收时的生物利用度。

[0007] 根据上述应用，本发明还有一个目的是提供一种兽药纳米自微乳剂。

[0008] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

[0009] 一种纳米自微乳剂，包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂24％～48％、助乳化剂16％～32％、油相10％～20％，余量为水；

[0010] 所述乳化剂与助乳化剂的体积比为3:2；所述乳化剂和助乳化剂的总体积与所述油相的体积之比为4:1；所述助乳化剂为无水乙醇；所述乳化剂为吐温-80；所述油相为桉油。

[0011] 本发明通过选取特定种类的油相、乳化剂以及助乳化剂，并按照一定的配比进行组合，获得了一种具有高度自乳化能力的纳米自微乳剂。所述纳米自微乳剂能够被水无限稀释，且稀释后仍能得到澄清透明的体系，进一步地，所述纳米自微乳剂中的桉油不仅起到油相的作用，还具有抗菌作用，桉油(即桉树精油)对大肠杆菌，沙门氏菌等常见的革兰氏阴性菌具有较强的抗菌作用。因此，所述纳米自微乳剂具有一定的杀菌能力。

[0012] 所述乳化剂为亲水性表面活性剂吐温-80(聚山梨酯80)。采用吐温-80除了作为乳化剂，同时也能起到良好的润湿作用，使含有药物的乳液经喷雾给药后能附着在禽只呼吸道各处，及禽舍周边环境内，更好地发挥杀菌效果。

[0013] 优选地，所述纳米自微乳剂包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂24～36％、助乳化剂16～24％、油相10～15％，余量为水。更优选地，所述纳米自微乳剂包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂24％、助乳化剂16％、油相10％，余量为水。

[0014] 本发明所述纳米自微乳剂的制备方法包括以下步骤：

[0015] S1.按配比将乳化剂与助乳化剂混合，得到混合乳化剂，

[0016] S2.按配比将混合乳化剂与油相混合，得到自微乳体系；

[0017] S3.按配比将步骤S2所得自微乳体系与水进行混合。

[0018] 进一步地，步骤S3中，所述混合的步骤为将所述水滴加到所述混合自微乳体系中，边滴加边搅拌。

[0019] 本发明所述纳米自微乳剂具有高度的自微乳化能力，可应用于制备兽药制剂，特别对于不易溶于水的兽药如恩诺沙星，含有所述兽药的纳米自微乳剂能够被水无限稀释，且稀释后仍能得到澄清透明的体系，所述兽药仍分散均匀，不会析出，因此，所述纳米自微乳剂在制备兽药制剂中的应用也应在本发明的保护范围中。

[0020] 根据上述应用，本发明还提供了一种兽药纳米自微乳剂。所述兽药纳米自微乳剂，包括兽药和权利要求1或2所述的纳米自微乳剂，所述兽药与纳米自微乳剂的用量之比为0.2g～5g：100ml。

[0021] 优选地，所述兽药为难溶于水的兽药，包括但不限于恩诺沙星、盐酸恩诺沙星。进一步地，所述兽药为恩诺沙星。

[0022] 对于恩诺沙星纳米自微乳剂，所述恩诺沙星纳米自微乳剂为水包油型纳米乳剂，此时水相既作为连续相，又作为分散相，减少了油相中药物与外相的接触机会，提高了药物的稳定性，进而提高了生物利用度。经实验验证，将所述恩诺沙星纳米自微乳剂经水稀释到采用饮水及喷雾不同方式给药浓度后，即使在室温条件下24小时后，稀释后的恩诺沙星纳米自微乳剂均能稳定存在，克服了现有技术中普通微乳在稀释后出现药物析出，分散不均匀等现象。且所述恩诺沙星纳米自微乳剂中的油相为桉油，恩诺沙星存在于桉油中，恩诺沙星与桉油共同作用，能够增强恩诺沙星纳米自微乳剂的杀菌能力。

[0023] 基于所述恩诺沙星纳米自微乳剂稀释后的稳定性，所述恩诺沙星纳米自微乳剂能够通过喷雾给药的方式治疗动物细菌性疾病，因此，所述恩诺沙星纳米自微乳剂在制备兽药制剂中的应用也应在本发明的保护范围中，所述兽药制剂的制剂形式为气雾喷剂。所述兽药制剂的给药方式为喷雾给药。

[0024] 优选地，所述兽药纳米自微乳剂还包括pH调节剂，以调节兽药纳米自微乳剂的pH。对于恩诺沙星纳米自微乳剂，pH为9.5～11.0。

[0025] 优选地，所述兽药纳米自微乳剂还包括抗氧化剂，所述抗氧化剂的用量为：每100ml兽药纳米自微乳剂0.004g。所述抗氧化剂包括但不限于焦亚硫酸钠。

[0026] 本发明所述兽药纳米自微乳剂的制备方法，包括以下步骤：

[0027] S1.按配比将乳化剂与助乳化剂混合，得到混合乳化剂，

[0028] S2.按配比将混合乳化剂与油相混合，得到自微乳体系；

[0029] S3.按配比将步骤S2所得自微乳体系与含有兽药的水溶液进行混合，即得所述兽药纳米自微乳剂。

[0030] 优选地，步骤S3中，所述混合的步骤为所述含有兽药的水溶液滴加到所述自微乳体系中，边滴加边搅拌。

[0031] 优选地，步骤S3中，还包括调节所述兽药纳米自微乳剂pH至9.5～11.0。

[0032] 对于兽药为恩诺沙星，所述含有恩诺沙星的水溶液的制备方法为：将恩诺沙星溶解在pH值为10的水溶液中。

[0033] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：

[0034] 本发明通过选取特定种类的油相、乳化剂以及助乳化剂，并按照一定的配比进行组合，获得了一种具有高度自乳化能力的纳米自微乳剂，能够应用于兽药制剂中，获得兽药纳米自微乳剂。对于兽药为难溶于水的恩诺沙星时，所述恩诺沙星纳米自微乳剂能够在稀释到给药浓度后，在室温条件下仍能长时间稳定存在，克服了现有技术中普通微乳在稀释后出现药物析出，分散不均匀等现象，进一步提高生物利用率，能够通过喷雾给药的方式治疗动物细菌性疾病。另外，在稳定存在的同时，所述恩诺沙星纳米自微乳剂中桉油与恩诺沙星共同作用，能够起到增强杀菌的效果。

具体实施方式

[0035] 下面结合具体实施方式对本发明作进一步的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例中的原料均可通过市售得到；除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

[0036] 实施例1

[0037] 一种纳米自微乳剂，包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂24％、助乳化剂16％、油相10％，余量为水。其中，助乳化剂为无水乙醇，乳化剂为亲水性表面活性剂吐温-
80，油相为桉油。

[0038] 在本实施例中，乳化剂与助乳化剂的体积比为3:2；乳化剂和助乳化剂的总体积与油相的体积之比为4:1。

[0039] 上述纳米自微乳剂的制备方法，包括以下步骤：

[0040] S1.按配比将乳化剂与助乳化剂混合，得到混合乳化剂，

[0041] S2.按配比将混合乳化剂与油相搅拌混合，得到自微乳体系；搅拌时注意控制搅拌的频率，慢了易造成混合不均匀，速度过快易导致大量气泡的产生。

[0042] S3.按配比将步骤S2所得自微乳体系与水进行混合，混合的步骤为将水滴加到混合乳液中，边滴加边搅拌。

[0043] 实施例2

[0044] 一种纳米自微乳剂，包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂30％、助乳化剂20％、油相12.5％，余量为水。其中，助乳化剂为无水乙醇，乳化剂为亲水性表面活性剂吐温-80，油相为桉油。

[0045] 在本实施例中，乳化剂与助乳化剂的体积比为3:2；乳化剂和助乳化剂的总体积与油相的体积之比为4:1。

[0046] 其制备方法与实施例1相同。

[0047] 实施例3

[0048] 一种纳米自微乳剂，包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂36％、助乳化剂24％、油相15％，余量为水。其中，助乳化剂为无水乙醇，乳化剂为亲水性表面活性剂吐温-
80，油相为桉油。

[0049] 在本实施例中，乳化剂与助乳化剂的体积比为3:2；乳化剂和助乳化剂的总体积与油相的体积之比为4:1。

[0050] 其制备方法与实施例1相同。

[0051] 实施例4

[0052] 一种纳米自微乳剂，包括以下按体积百分比计算的组分：乳化剂48％、助乳化剂32％、油相20％。其中，助乳化剂为无水乙醇，乳化剂为亲水性表面活性剂吐温-80，油相为桉油。

[0053] 在本实施例中，乳化剂与助乳化剂的体积比为3:2；乳化剂和助乳化剂的总体积与油相的体积之比为4:1。

[0054] 其制备方法与实施例1相同。

[0055] 对比例1～12

[0056] 对比例1～12的纳米自微乳剂的组分及用量如表1所示，其中，乳化剂与助乳化剂的体积比为A，乳化剂和助乳化剂的总体积与油相的体积之比为B。其制备方法与实施例1相同。

[0057] 表1

[0058]

[0059]

[0060] 下表2为上述实施例及对比例所制备得到的乳剂体系的性状及稀释(100～1000倍)后的情况：

[0061] 表2

[0062]

[0063]

[0064] 分别对实施例1、对比例7～10乳剂体系进行药敏试验，其抑菌效力结果如下表3所示：

[0065] 表3

[0066]

[0067]

[0068] 兽药纳米自微乳剂的制备

[0069] 将上述实施例及对比例的乳剂体系的成分及用量应用在制备恩诺沙星微乳体系，制备方法包括以下步骤：

[0070] S1.按配比将乳化剂与助乳化剂混合，得到混合乳化剂，

[0071] S2.按配比将混合乳化剂与油相混合，得到自微乳体系；

[0072] S3.按配比将步骤S2所得自微乳体系与含有恩诺沙星的水溶液进行混合，混合的步骤为将含有恩诺沙星的水溶液滴加到自微乳体系中(恩诺沙星与自微乳体系的用量之比为0.2g～5g：100ml)，在本实施例中，边滴加边搅拌，然后用15％的NaOH溶液调节pH为9.5～11.0，即得目标产品。

[0073] 该含有恩诺沙星的水溶液的制备步骤如下：

[0074] 称取焦亚硫酸钠放于盛有一定量灭菌蒸馏水的烧杯中，搅拌使其完全溶解，吸取适量15％的NaOH溶液调节溶液pH值为10.0左右，再加入准确称取的恩诺沙星原料药，进行磁力搅拌待其充分溶解后定容，制得含有恩诺沙星的水溶液，遮光备用。

[0075] 下表4为上述实施例及对比例所制备得到的恩诺沙星乳剂体系的性状及稀释(100～1000倍)后的情况：

[0076] 表4

[0077]

[0078]

[0079] 另外，结合长期稳定性实验研究，在温度为40±2℃及相对湿度60±5％条件下，本发明实施例1～3制备得到的恩诺沙星纳米自微乳剂的各性状变化符合2015年版《中国兽药典》中规定的乳剂的考查要求，因此本发明的恩诺沙星纳米自微乳剂稳定性强，在大量稀释后仍均一稳定，无药物析出，能够适用于喷雾给药的方式。

[0080] 体外抑菌效能评估

[0081] 选择大肠杆菌ATCC@25922，金黄色葡萄球菌ATCC@29213，沙门氏菌ATCC@14028作为试验菌株，通过肉汤稀释法考查恩诺沙星纳米自微乳剂与恩诺沙星标准品(批号：DK03-1712177，上海京新药业有限公司)在相同药物浓度下对以上三种标准菌株的抑菌效能，结果如下表所示。

[0082] 表5

[0083]

[0084] 结果与分析：相同药物浓度的恩诺沙星纳米自微乳剂和恩诺沙星标准品，对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌和沙门氏菌标准株的MIC值相同，表明本发明的恩诺沙星纳米自微乳剂具有抑菌效力，自微乳体系没有破坏恩诺沙星药物的抑菌效力。

[0085] 喷雾给药试验

[0086] 通过以下预防感染性试验来验证恩诺沙星纳米自微乳剂喷雾给药的效果。

[0087] 预防感染性试验：试验对象为260只健康的一周龄雏鸡，试验菌株大肠杆菌O78和鸡白痢沙门氏菌CVCC1800由华南农业大学药理教研室保存，通过菌株的纯化及复活，经改良寇氏法得出引起雏鸡群半数死亡的感染剂量，其中腹腔注射大肠杆菌0.2ml，菌液浓度为106CFU/ml，腹腔注射鸡白痢沙门氏菌0.2ml，菌液浓度为106CFU/ml。

[0088] 通过采取恩诺沙星纳米自微乳剂喷雾给药和10％恩诺沙星溶液饮水给药两种不同的给药方式，预防大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌对一周龄雏鸡引起的常见性疾病，从而比较两种不同给药方式对雏鸡群的保护率，结果如下表6所示。

[0089] 其中，低剂量喷雾给药组中，恩诺沙星纳米自微乳剂的稀释444倍，恩诺沙星的浓度为112ug/ml。

[0090] 中剂量喷雾给药组中，恩诺沙星纳米自微乳剂的稀释倍数222倍，恩诺沙星的浓度为225ug/ml。

[0091] 高剂量喷雾给药组中，恩诺沙星纳米自微乳剂的稀释111倍，恩诺沙星的浓度为450ug/ml。

[0092] 表6：恩诺沙星纳米自微乳剂喷雾给药和10％恩诺沙星溶液饮水给药对致病性大肠杆和沙门氏菌的预防性试验结果

[0093]

[0094] 通过对比表6中高、中、低剂量的喷雾给药组和阳性对照组及6组的饮水给药组，可以得出高、中、低剂量的喷雾给药能使一周龄雏鸡群得到保护，且随着剂量的递增，保护率逐渐提高，高剂量的喷雾给药保护率几乎达到饮水给药的效果，能起到较好的预防大肠杆菌和沙门氏菌病的作用，对比7，8，9组和阳性对照组可以得出，本发明所制备得到的恩诺沙星纳米自微乳剂能够通过喷雾给药的方式发挥治疗感染性疾病的效果。喷雾给药作为一种简单、快捷、有效的给药方式在规模化养殖中将发挥重要作用。

[0095] 显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。