本发明公开了一种替度鲁肽的合成方法，属于多肽药物合成领域。该方法以替度鲁肽序列的第2‑3位氨基酸作为伪脯二肽；或者以替度鲁肽序列的第5‑6位氨基酸作为伪脯二肽；或者以替度鲁肽序列的第22‑23位氨基酸作为伪脯二肽；或者以替度鲁肽序列的第27‑28位氨基酸作为伪脯二肽；或者以替度鲁肽序列的第29‑30位氨基酸作为伪脯二肽；再按顺序依次固相合成替度鲁肽序列的其他位点氨基酸，合成全保护替度鲁肽，经裂解沉淀，得到替度鲁肽。本发明方法提高了粗肽纯度，极大降低了物料成本和纯化成本，利于进行工业化放大生产。
1.一种替度鲁肽的合成方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
以替度鲁肽序列的第2-3位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第5-6位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第22-23位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Asn-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第27-28位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第29-30位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH；
按顺序依次固相合成替度鲁肽序列的其他位点氨基酸，合成全保护替度鲁肽，经裂解沉淀，得到替度鲁肽；
裂解采用的裂解试剂为：TFA:PhSMe:EDT:TIS:H2O:Phenol= 80:5:5:5:3:2；
（1）Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH ，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4－6h；抽干，加入DMF 洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4－0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；
取Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应0.5－1.5h，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；
配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H2O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4－0.6h后恢复至室温继续反应1.5－2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀，干燥即得替度鲁肽粗肽；
（1）Fmoc-Gln(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备：
取Wang树脂加入到固相反应器中，加入 DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4－6h；抽干，加入DMF 洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4－
0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；
取Fmoc-Thr(tBu)-OH ，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；
配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H2O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4－0.6h后恢复至室温继续反应1.5－2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥即得替度鲁肽粗肽；
（1）Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂0.4-0.6h；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入的DMAP，搅拌反应4－6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭
0.4－0.6h；加入DMF 洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF 洗涤；茚检结果呈阳性；
取Fmoc-Thr(tBu)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；
配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H2O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4－0.6h后恢复至室温继续反应1.5－2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥后即得替度鲁肽粗肽；
（1）Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
取Wang树脂加入到固相反应器中，加入 DCM溶胀树脂0.4-6h；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC ，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF 洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-
0.6h；加入DMF 洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护，反应，抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；
称取Fmoc-Thr(tBu)-OH，HOBt ，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；
配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H2O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.5-0.6h后恢复至室温继续反应1.5-2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥后即得替度鲁肽粗肽；
（1）Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
取Wang树脂加入到固相反应器中，加入 DCM溶胀树脂，抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4－6h；抽干，加入DMF 洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4－
0.6h；加入DMF 洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护，抽干，加入DMF 洗涤；茚检结果呈阳性；
取Fmoc-Thr(tBu)-OH ，HOBt ，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；
配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H2O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4－0.6h恢复至室温继续反应1.5－2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥即得替度鲁肽肽树脂粗肽。
一种替度鲁肽的合成方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种多肽药物合成领域，特别涉及GLP-2受体激动素一种替度鲁肽的合成方法。
背景技术
[0002] 替度鲁肽，英文名：teduglutide。肽序列为：
[0003] His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-lle-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-lle-Asn-Trp-Leu-lle-Gln-Thr-Lys-lle-Thr-Asp-OH；是一种胰高血糖素样肽2(GLP-2)类似物，一种天然生成的激素，可减少胃排空和分泌，并调节小肠内膜细胞的生长、增殖和修复。替度鲁肽于2001年被定性为孤儿药。在临床上用于治疗成人短肠综合征，需求应用前景广泛。在替度鲁肽的现有合成方法中，主要是采用纯固相顺序偶联的方法。
[0004] 如中国公开专利文献CN104072605A公开了一种替度鲁肽的制备方法，其同时包含了三种合成方式，一是先合成1-9位、10-18位、19-33位氨基酸片段，而后偶联各片段获得；二是先合成1-4位、5-12位、13-20位、21-33位氨基酸片段，而后偶联各片段获得；三是先合成1-4位、5-9位、10-18位、19-26位、27-33位氨基酸片段，而后偶联各片段获得。
[0005] 而公开号为WO2012028602A1公开专利文献为了解决上述专利保护替度鲁肽的合成方法中存在的Asp-Gly片段产生的降解等一系列问题，采用片段偶联方法进行了替度鲁肽的合成，即先合成全保护片段1-4，然后采用纯化后的片段1-4与片段肽树脂5-33进行固相偶联，最终裂解得到替度鲁肽。
[0006] 中国公开专利文献CN104418949A也公开了一种替度鲁肽的制备方法，其合成方式是先合成1-3位和4-33位氨基酸片段，而后再偶联而成。但是过多片段合成，会造成成本增加，操作步骤繁琐，废液过量的问题。本领域迫切需要提供一种利拉鲁肽的合成方法，以解决现有利拉鲁肽合成过程中存在的杂质多，纯度和收率低等问题。
发明内容
[0007] 本发明所要解决的技术间题是针对现有合成过程中所存在的杂质多，纯度和收率低，成本昂贵，操作步骤繁琐，废液过量，不利于工业化生产的问题，提供一种优化的替度鲁肽的合成方法，该方法提高了粗肽纯度，极大降低了物料成本和纯化成本，利于进行工业化放大生产。
[0008] 本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种替度鲁肽的合成方法，其特点是，该方法包括以下步骤：
[0009] (1)以替度鲁肽序列的第2-3位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第5-6位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第22-23位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Asn-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第27-28位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第29-30位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH；
[0010] (2)按顺序依次固相合成替度鲁肽序列的其他位点氨基酸，合成全保护替度鲁肽，经裂解沉淀，得到替度鲁肽。
[0011] 本发明所述的一种替度鲁肽的合成方法，其进一步优选的技术方案是，裂解采用的裂解试剂为：TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2。
[0012] 本发明所述的一种替度鲁肽的合成方法，其进一步优选的技术方案是，其具体步骤如下：
[0013] (1)Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
[0014] 取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1∶1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；
[0015] 取Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应0.5-1.5h，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
[0016] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；
[0017] (2)裂解
[0018] 配制裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4-0.6h后恢复至室温继续反应1.5-2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀，干燥即得替度鲁肽粗肽。
[0019] 本发明所述的一种替度鲁肽的合成方法，其进一步优选的技术方案是，其具体步骤如下：
[0020] (1)Fmoc-Gln(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备：
[0021] 取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1∶1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；
[0022] 取Fmoc-Thr(tBu)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
[0023] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；
[0024] (2)裂解
[0025] 配制裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4-0.6h后恢复至室温继续反应1.5-2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥即得替度鲁肽粗肽。
[0026] 本发明所述的一种替度鲁肽的合成方法，其进一步优选的技术方案是，其具体步骤如下：
[0027] (1)Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
[0028] 取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂0.4-0.6h；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入的DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1∶1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；
[0029] 取Fmoc-Thr(tBu)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
[0030] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Set(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；
[0031] (2)裂解
[0032] 配制裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4-0.6h后恢复至室温继续反应1.5-2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥后即得替度鲁肽粗肽。
[0033] 本发明所述的一种替度鲁肽的合成方法，其进一步优选的技术方案是，其具体步骤如下：
[0034] (1)Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
[0035] 取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂0.4-6h；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1∶1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护，反应，抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；
[0036] 称取Fmoc-Thr(tBu)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
[0037] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；
[0038] (2)裂解
[0039] 配制裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.5-0.6h后恢复至室温继续反应1.5-2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥后即得替度鲁肽粗肽。
[0040] 本发明所述的一种替度鲁肽的合成方法，其进一步优选的技术方案是，其具体步骤如下：
[0041] (1)Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
[0042] 取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂，抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1∶1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护，抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；
[0043] 取Fmoc-Thr(tBu)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；
[0044] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂。
[0045] (2)裂解
[0046] 配制裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4-0.6h恢复至室温继续反应1.5-2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥即得替度鲁肽肽树脂粗肽。
[0047] 本发明所述的一种替度鲁肽的合成方法中，在步骤(1)中，各个伪脯二肽均为定制，且符合质量标准。合成各个氨基酸所用的缩合剂可以为DIC/HOBt，HBTU/HOBT/DIEA，PyBop/HOBT/DIEA其中的一种或多种；所用的反应溶剂可以为DCM、DMF、NMP、DMSO中的一种或多种组合；所使用的Fmoc脱除试剂最好为v/v20％哌啶/DMF溶液。
[0048] 与现有技术相比，本发明方法通过合成利替度肽序列的第2-3位氨基酸或者第5-6位氨基酸或者第22-23位氨基酸或者第27-28位氨基酸或乾第29-30位氨基酸作为伪脯二肽，从碳端到氮端依次按照顺序偶联剩余氨基酸，固相合成全保护替度鲁肽，经裂解沉淀，得到替度鲁肽。本发明方法提高了粗肽纯度，极大降低了物料成本和纯化成本，利于进行工业化放大生产。
具体实施方式
[0049] 以下进一步对本发明的技术方案进行描述，以使本领域技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。
[0050] 实施例1，替度鲁肽的合成方法实验一：
[0051] (1)Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
[0052] 称取Wang树脂20.00g(Sub＝0.50mmol/g)加入到固相反应器中，加入200mL DCM溶胀树脂0.5h。抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH 12.35g，HOBT4.45g，DIC 5.1mL，50mLDMF溶液，冰浴活化10分钟，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入0.366g的DMAP，搅拌反应5h。(取小样收样，经紫外分光光度法测定Fmoc-Asp(Otbu)-Wang树脂的Sub＝0.418mmol/g。)抽干，加入DMF 250mL洗涤3次，加入吡啶/乙酸酐溶液(1∶1)300mL，封闭0.5h。加入DMF 250mL洗涤6次。加入200mLv/v 20％哌啶/DMF溶液脱保护，反应30min。抽干，加入DMF 250mL洗涤6次。茚检结果呈阳性。
[0053] 称取Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH 14.83g，HOBt 4.45g，DIC5.1mL，加入DMF80mL溶解，冰浴活化10min。将活化后的溶液加入到反应器中，反应1h，茚检检测结果呈阴性后，抽干。加入DMF洗涤3次，每次200mL。
[0054] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应。偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤3次，每次400mL，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂。
[0055] (2)裂解
[0056] 配制200mL裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入全保护肽，0.5h后恢复至室温继续反应2h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀。离心沉淀4次，每次加入乙醚500mL。干燥后所得产品即为替度鲁肽粗肽，粗肽得到40.19g，粗肽经对照品定量为15.8g，总收率90％，纯度92.0％。
[0057] 实施例2，替度鲁肽的合成方法实验二：
[0058] (1)Fmoc-Gln(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
[0059] 称取Wang树脂20.00g(Sub＝0.50mmol/g)加入到固相反应器中，加入200mL DCM溶胀树脂0.5h。抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH 12.35g，HOBT4.45g，DIC 5.1mL，50mLDMF溶液，冰浴活化10分钟，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入0.366g的DMAP，搅拌反应5h。(取小样收样，经紫外分光光度法测定Fmoc-Asp(Otbu)-Wang树脂的Sub＝0.418mmol/g。)抽干，加入DMF 250mL洗涤3次，加入吡啶/乙酸酐溶液(1∶1)300mL，封闭0.5h。加入DMF 250mL洗涤6次。加入200mL v/v 20％哌啶/DMF溶液脱保护，反应30min。抽干，加入DMF 250mL洗涤6次。茚检结果呈阳性。
[0060] 称取Fmoc-Thr(tBu)-OH 11.93g，HOBt 4.45g，DIC5.1mL，加入DMF80mL溶解，冰浴活化10min。将活化后的溶液加入到反应器中，反应1h，茚检检测结果呈阴性后，抽干。加入DMF洗涤3次，每次200mL。
[0061] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应。偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤3次，每次400mL，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂。
[0062] (2)裂解
[0063] 配制200mL裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入全保护肽，0.5h后恢复至室温继续反应2h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀。离心沉淀4次，每次加入乙醚500mL。干燥后所得产品即为替度鲁肽粗肽，粗肽得到40.19g，粗肽经对照品定量为15.8g，总收率90％，纯度92.0％。
[0064] 实施例3，替度鲁肽的合成方法实验三：
[0065] (1)Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
[0066] 称取Wang树脂20.00g(Sub＝0.50mmol/g)加入到固相反应器中，加入200mLDCM溶胀树脂0.5h。抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH 12.35g，HOBT4.45g，DIC 5.1mL，50mLDMF溶液，冰浴活化10分钟，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入0.366g的DMAP，搅拌反应5h。(取小样收样，经紫外分光光度法测定Fmoc-Asp(Otbu)-Wang树脂的Sub＝0.418mmol/g。)抽干，加入DMF 250mL洗涤3次，加入吡啶/乙酸酐溶液(1∶1)300mL，封闭0.5h。加入DMF 250mL洗涤6次。加入200mL v/v 20％哌啶/DMF溶液脱保护，反应[0067] 30min。抽干，加入DMF 250mL洗涤6次。茚检结果呈阳性。
[0068] 称取Fmoc-Thr(tBu)-OH 11.93g，HOBt 4.45g，DIC5.1mL，加入DMF80mL溶解，冰浴活化10min。将活化后的溶液加入到反应器中，反应1h，茚检检测结果呈阴性后，抽干。加入DMF洗涤3次，每次200mL。
[0069] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应。偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤3次，每次400mL，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂。
[0070] (2)裂解
[0071] 配制200mL裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入全保护肽，0.5h后恢复至室温继续反应2h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀。离心沉淀4次，每次加入乙醚500mL。干燥后所得产品即为替度鲁肽粗肽，粗肽得到40.19g，粗肽经对照品定量为15.8g，总收率90％，纯度92.0％。
[0072] 实施例4，替度鲁肽的合成方法实验四：
[0073] (1)Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
[0074] 称取Wang树脂20.00g(Sub＝0.50mmol/g)加入到固相反应器中，加入200mLDCM溶胀树脂0.5h。抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH 12.35g，HOBT4.45g，DIC 5.1mL，50mLDMF溶液，冰浴活化10分钟，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入0.366g的DMAP，搅拌反应5h。(取小样收样，经紫外分光光度法测定Fmoc-Asp(Otbu)-Wang树脂的Sub＝0.418mmol/g。)抽干，加入DMF 250mL洗涤3次，加入吡啶/乙酸酐溶液(1∶1)300mL，封闭0.5h。加入DMF 250mL洗涤6次。加入200mL v/v 20％哌啶/DMF溶液脱保护，反应30min。抽干，加入DMF 250mL洗涤6次。茚检结果呈阳性。
[0075] 称取Fmoc-Thr(tBu)-OH 11.93g，HOBt 4.45g，DIC5.1mL，加入DMF80mL溶解，冰浴活化10min。将活化后的溶液加入到反应器中，反应1h，茚检检测结果呈阴性后，抽干。加入DMF洗涤3次，每次200mL。
[0076] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应。偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤3次，每次400mL，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂。
[0077] (2)裂解
[0078] 配制200mL裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入全保护肽，0.5h后恢复至室温继续反应2h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀。离心沉淀4次，每次加入乙醚500mL。干燥后所得产品即为替度鲁肽粗肽，粗肽得到40.19g，粗肽经对照品定量为15.8g，总收率90％，纯度92.0％。
[0079] 实施例5，替度鲁肽的合成方法实验五：
[0080] (1)Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备
[0081] 称取Wang树脂20.00g(Sub＝0.50mmol/g)加入到固相反应器中，加入200mL DCM溶胀树脂0.5h。抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH 12.35g，HOBT4.45g，DIC 5.1mL，50mLDMF溶液，冰浴活化10分钟，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入0.366g的DMAP，搅拌反应5h。(取小样收样，经紫外分光光度法测定Fmoc-Asp(Otbu)-Wang树脂的Sub＝0.418mmol/g。)抽干，加入DMF 250mL洗涤3次，加入吡啶/乙酸酐溶液(1∶1)300mL，封闭0.5h。加入DMF 250mL洗涤6次。加入200mLv/v 20％哌啶/DMF溶液脱保护，反应30min。抽干，加入DMF 250mL洗涤6次。茚检结果呈阳性。
[0082] 称取Fmoc-Thr(tBu)-OH 11.93g，HOBt 4.45g，DIC5.1mL，加入DMF80mL溶解，冰浴活化10min。将活化后的溶液加入到反应器中，反应1h，茚检检测结果呈阴性后，抽干。加入DMF洗涤3次，每次200mL。
[0083] 重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应。偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤3次，每次400mL，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂。
[0084] (2)裂解
[0085] 配制200mL裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入全保护肽，0.5h后恢复至室温继续反应2h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀。离心沉淀4次，每次加入乙醚500mL。干燥后所得产品即为替度鲁肽粗肽，粗肽得到40.19g，粗肽经对照品定量为15.8g，总收率90％，纯度92.0％。通过图谱分析，最佳合成路线以伪脯二肽Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH为原料合成替度鲁肽肽树脂。
