一种可注射的高载药量的紫杉醇凝胶及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种可注射的高载药量的紫杉醇凝胶及其制备方法和应用。所述凝胶包括紫杉醇、有机良溶剂和水相不良溶剂，制备该凝胶时，按照配方量称取紫杉醇溶解在有机良溶剂中，10‑80℃超声溶解后，加入水相不良溶剂，再次超声分散后，静置一段时间，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。本发明的凝胶制备方法简单，而且无需对紫杉醇药物改性修饰，也不需要借助其它的凝胶载体，从而避免了药物活性降低和载体带来毒副作用的问题，同时具有高的载药量可以减少给药次数，具有较好的应用前景。

权利要求

1.一种可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，包括紫杉醇、有机良溶剂和水相不良溶剂；其中紫杉醇的含量为5-120 mg/mL；有机良溶剂和水相不良溶剂的体积比为10:（1-10）；所述水相不良溶剂为蒸馏水或含有磷酸、磷酸盐、盐酸、盐酸盐、钾盐、钠盐、氨基酸、钙盐、镁盐、锌盐、葡萄糖中一种或多种的溶液；所述有机良溶剂选自药学上可接受的醇类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂、醚类溶剂或酰胺类溶剂。

2.根据权利要求1所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述紫杉醇的含量为10-100 mg/mL。

3.根据权利要求2所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述紫杉醇的含量为10-80 mg/mL。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述有机良溶剂和水相不良溶剂的体积比为10:（2-9）。

5.根据权利要求4所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述有机良溶剂和水相不良溶剂的体积比为10:（3-8）。

6.根据权利要求1所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，以重量百分数%计，所述凝胶含有0.25-12%的紫杉醇，55-80%的有机良溶剂和11-44%的水相不良溶剂。

7.根据权利要求6所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，以重量百分数%计，所述凝胶含有0.55-12%的紫杉醇，58-79%的有机良溶剂和14-41%的水相不良溶剂。

8.根据权利要求7所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，以重量百分数%计，所述凝胶含有0.57-6%的紫杉醇，58-77%的有机良溶剂和17-41%的水相不良溶剂。

9.根据权利要求1所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述水相不良溶剂为磷酸盐缓冲溶液。

10.根据权利要求1所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述水相不良溶剂为低渗或等渗溶液。

11.根据权利要求1所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述醇类溶剂选自聚乙二醇和乙醇中的一种或多种的混合溶剂。

12.根据权利要求11所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述醇类溶剂为聚乙二醇中的一种或多种。

13.根据权利要求12所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述醇类溶剂为PEG200、PEG400和PEG600中的一种或多种。

14.根据权利要求13所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述醇类溶剂为PEG400。

15.根据权利要求1-14任意一项所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，还包括一种或一种以上的选自下述的联用药物：抗肿瘤药物、抗炎药物或染料类药物。

16.根据权利要求15所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其特征在于，所述抗肿瘤药物选自多西紫杉醇、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、喜树碱、10-羟基喜树碱、鲁比替康、

9-氨基喜树碱、顺铂、卡铂、长春碱、长春新碱、卡倍他滨、去甲基斑蝥素、多柔比星、表柔比星、柔红霉素、阿霉素、奥沙利泊、吉西他滨、培美曲赛、替莫唑胺、替尼泊苷、依托泊苷、长春地辛、长春氟宁、长春瑞宾、替加氟、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托蒽醌、拓扑替康、伊立替康中的一种或几种；所述抗炎药物选自阿司匹林、水杨酸镁、水杨酸钠、水杨酸胆碱镁、二氟尼柳、双水杨酸酯、布洛芬、吲哚美辛、氟比布洛芬、苯氧基布洛芬、萘普生、萘丁美酮、吡罗昔康、保泰松、双氯灭痛、芬洛芬、酮基布洛芬、酮咯酸、四氯芬那酸、舒林酸、托美丁、地塞米松中的一种或几种；所述染料类药物选自异硫氰酸荧光素、羟基荧光素、四氯荧光素、红色罗丹明、四甲基罗丹明、罗丹明B、Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7、AlexaFluor 

350、AlexaFluor 405、AlexaFluor 430、AlexaFluor 488、AlexaFluor 532、AlexaFluor 

546、AlexaFluor 555、AlexaFluor 568、AlexaFluor 594、AlexaFluor 610、AlexaFluor 

633、AlexaFluor 647、AlexaFluor 680、AlexaFluor 700、AlexaFluor 750、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、多甲藻黄素-叶绿素蛋白中的一种或几种。

17.如权利要求1-16任意一项所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶在制备抗肿瘤药物中的应用。

18.一种如权利要求1-16任意一项所述的可注射的高载药量的紫杉醇凝胶的制备方法，包括，按照配方量称取紫杉醇溶解在有机良溶剂中，10-80℃超声溶解后，加入水相不良溶液，再次超声分散后，静置一段时间，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。

说明书

一种可注射的高载药量的紫杉醇凝胶及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种可注射的高载药量的紫杉醇凝胶及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 紫杉醇是20世纪90年代应用于临床的新一代广谱抗癌药，其水溶性差，临床上最早使用的紫杉醇制剂(Taxol)是以聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇混合液(1:1)作为助溶剂，给药前用生理盐水或者5％葡萄糖液稀释后注射使用。助溶剂会导致多种不良反应，非常明确的包括过敏反应和神经毒性，过敏反应发生率39％，其中严重过敏反应发生率2％，一旦发生，将严重危及病人生命。为预防紫杉醇的过敏反应，用药前30分钟必须做抗过敏的预处理。给药方案复杂，而且用药不能太快，注射一次紫杉醇需要长达三个小时。此外，聚氧乙烯蓖麻油在血循环中形成的小微粒会将紫杉醇分子包裹，阻碍药物作用。

[0003] 为了解决紫杉醇水溶性差和助溶剂具有毒副作用的问题，研究了更多的给药方法。例如，阿博利斯的白蛋白结合紫杉醇制剂(Abraxane)，通过用纳米尺寸的人血白蛋白来结合紫杉醇，增加药物在肿瘤组织的富集，提高了疗效，无需预处理，且毒副作用降低，静脉注射时间缩短至30min，甚至在一些紫杉醇本身无效的癌症类型中展现了疗效。但是该制剂涉及大分子蛋白的制备、修饰，生产条件和工艺都十分苛刻，成本高，仿制难度大。韩国率先上市的注射用紫杉醇胶束(Genexol-PM)，根据聚合物分子间的氢键、静电作用和范德华力自发组装形成核-壳结构的胶束，紫杉醇被包裹于疏水性内核中。在药物递送过程中，聚合物胶束能使药物保持良好的药代动力学特征、药理学特性及稳定性，从而达到更好地治愈疾病的目的，与传统的紫杉醇相比，GPM表现出更高的人体耐受性和更好的抗肿瘤效果。但GPM载药量低，胶束处于亚稳态，稳定性较差，其溶液在室温条件下的稳定时间不超过24h。

[0004] 凝胶作为一种药物载体，用于皮下局部注射，能够将药物最大程度地富集在肿瘤组织区域，而具有缓释功能的凝胶则大大减少了给药次数和用药周期，避免不必要的毒副作用，提高治疗效果。然而，从目前众多的研究结果来看，紫杉醇载药凝胶体系均需要借助其他载体或将紫杉醇进行修饰来构建凝胶。专利CN105796482A公布了一种紫杉醇缓释温敏凝胶，具有较好的凝胶强度且能够持续7天释放紫杉醇，但是需要大量的基于Soluplus的温敏凝胶基质，紫杉醇含量仅为0.01％～5％，载药量低。专利CN108096184A从天然产物中提取出凝胶质，利用天然产物凝胶质构建了一种具有增强抗肿瘤药物活性的凝胶药物载药体系，使用该药物体系能够增强抗肿瘤药物治疗效果，然而天然产物凝胶质提取工艺复杂。专利CN104721131A基于温敏性嵌段聚合物聚乙二醇-聚己内酯-聚乙二醇材料，构建了包含有紫杉醇药物的原位凝胶体系。专利CN108033996A通过对紫杉醇进行多肽修饰，通过水解作用构建出基于紫杉醇前药的凝胶体系。专利CN107952079A公开以Pt类抗肿瘤药物与两亲性嵌段共聚物化学键合得到的含Pt的两亲性嵌段共聚物为凝胶载体材料的紫杉醇热致凝胶。毛丽娜在《小分子水凝胶用作紫杉醇药物载体的研究》及专利CN102532263A中，设计通过小分子短肽FFFKESSEE或者KESSEE把紫杉醇衍生物和地塞米松衍生物连接起来，并引入二硫键化合物，从而使成胶前体分子在谷胱甘肽、二硫苏糖醇等还原剂作用下形成小分子水凝胶。

[0005] 总结以上众多与紫杉醇凝胶相关的现有技术发现，目前用于紫杉醇的凝胶缓释体系往往需要借助一定的载体，不仅增加了体系的复杂性、降低了载药量、还要考虑载体的毒副作用和生物相容性，而基于紫杉醇药物修饰构建的凝胶却又面临着药物活性损失的风险。总而言之，目前还没有一种令人满意的高载药量紫杉醇凝胶的研究报道出现。

发明内容

[0006] 针对现有技术存在的问题，本发明的发明人根据实验过程中偶然发现的紫杉醇自身具有的特点，提供了一种基于紫杉醇药物构建的凝胶体系，该体系具有载药量高的优点，同时制备方法简单，操作简便，可以将其注射到体内原位形成凝胶缓慢释放药物，在抗肿瘤领域具有较好的应用前景。

[0007] 本发明采用的技术方案如下：

[0008] 一种可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，包括紫杉醇、有机良溶剂和水相不良溶剂。

[0009] 进一步地，上述高载药量的紫杉醇凝胶，其中紫杉醇的含量为5-120mg/mL；优选紫杉醇的含量为10-100mg/mL；更优选紫杉醇的含量为10-80mg/mL。

[0010] 进一步地，上述可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，其中有机良溶剂和水相不良溶剂的体积比为10:(1-10)；优选有机良溶剂和水相不良溶剂的体积比为10:(2-9)；更优选有机良溶剂和水相不良溶剂的体积比为10:(3-8)。

[0011] 进一步地，上述可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，以重量百分数％计，含有0.25-12％的紫杉醇，55-80％的有机良溶剂和11-44％的水相不良溶剂；优选地，所述凝胶含有
0.55-12％的紫杉醇，58-79％的有机良溶剂和14-41％的水相不良溶剂；更优地，所述凝胶含有0.57-6％的紫杉醇，58-77％的有机良溶剂和17-41％的水相不良溶剂。

[0012] 进一步地，上述可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，所述水相不良溶剂为蒸馏水或含有磷酸、磷酸盐、盐酸、盐酸盐、钾盐、钠盐、氨基酸、钙盐、镁盐、锌盐、葡萄糖等一种或多种的溶液；优选为磷酸盐缓冲溶液。

[0013] 进一步地，上述可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，所述水相不良溶剂为低渗或等渗溶液。

[0014] 进一步地，上述可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，所述有机良溶剂选自药学上可接受的醇类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂、醚类溶剂和酰胺类溶剂等。

[0015] 进一步地，本发明作为有机良溶剂的醇类溶剂选自聚乙二醇和乙醇中的一种或多种的混合溶剂。优选醇类溶剂为聚乙二醇中的一种或多种。

[0016] 所述聚乙二醇包括但不限于PEG200、PEG400和PEG600中的一种或多种；优选为PEG400。

[0017] 进一步地，上述可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，还包括一种或一种以上的选自下述的联用药物：抗肿瘤药物、抗炎药物和染料类药物。

[0018] 进一步地，所述抗肿瘤药物包括但不限于多西紫杉醇、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、喜树碱、10-羟基喜树碱、鲁比替康、9-氨基喜树碱、顺铂、卡铂、长春碱、长春新碱、卡倍他滨、去甲基斑蝥素、多柔比星、表柔比星、柔红霉素、阿霉素、奥沙利泊、吉西他滨、培美曲赛、替莫唑胺、替尼泊苷、依托泊苷、长春地辛、长春氟宁、长春瑞宾、替加氟、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托蒽醌、拓扑替康、伊立替康等；所述抗炎药物包括但不限于阿司匹林、水杨酸镁、水杨酸钠、水杨酸胆碱镁、二氟尼柳、双水杨酸酯、布洛芬、吲哚美辛、氟比布洛芬、苯氧基布洛芬、萘普生、萘丁美酮、吡罗昔康、保泰松、双氯灭痛、芬洛芬、酮基布洛芬、酮咯酸、四氯芬那酸、舒林酸、托美丁、地塞米松等；所述染料类药物包括但不限于荧光素类染料，如异硫氰酸荧光素、羟基荧光素、四氯荧光素等及其类似物；罗丹明类染料，如红色罗丹明、四甲基罗丹明、罗丹明B等；Cy系列菁染料，如Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7；Alexa系列染料，如AlexaFluor 350、AlexaFluor 405、AlexaFluor 430、AlexaFluor 488、AlexaFluor 532、AlexaFluor 546、AlexaFluor 555、AlexaFluor 568、AlexaFluor 594、AlexaFluor 610、AlexaFluor 633、AlexaFluor 647、AlexaFluor 680、AlexaFluor 700、AlexaFluor 750；蛋白类染料，如藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、多甲藻黄素-叶绿素蛋白等。

[0019] 本发明还提供了前述可注射的高载药量的紫杉醇凝胶在制备抗肿瘤药物中的应用。

[0020] 本发明还进一步提供了前述可注射的高载药量的紫杉醇凝胶的制备方法，包括，按照配方量称取紫杉醇溶解在有机良溶剂中，10-80℃超声溶解后，加入水相不良溶液，再次超声分散后，静置一段时间，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。

[0021] 本发明的有益效果在于：发现并利用紫杉醇药物能够构建凝胶体系的特性，通过紫杉醇的水相不良溶剂诱导溶于有机溶剂的紫杉醇形成水凝胶，得到的制剂载药量高，原料常规且安全性好，成本低，制备工艺简单，避免了使用凝胶载体所带来的制造难度高和毒副作用大等问题，也不涉及对紫杉醇药物的修饰改性，较好地保留了药物活性。

附图说明

[0022] 图1为实施例1的紫杉醇凝胶形成照片；

[0023] 图2为实施例2中紫杉醇凝胶SEM照片；

[0024] 图3为实施例4-9的双药紫杉醇凝胶形成照片；

[0025] 图4为实施例10的三药紫杉醇凝胶形成照片；

[0026] 图5为试验例1中紫杉醇凝胶的动态频率和动态应变扫描曲线图；

[0027] 图6为试验例2中紫杉醇凝胶所用材料的细胞毒性实验MCF-7细胞存活率柱状图；

[0028] 图7为试验例3中小鼠皮下紫杉醇凝胶照片；

[0029] 图8为试验例3中小鼠体内凝胶的SEM照片。

具体实施方式

[0030] 以下通过具体实施方式对本发明的发明内容做进一步的阐释。

[0031] 在本发明获得之前，本领域研究人员均致力于寻找低毒性、低成本、高生物相容性、易制备的凝胶载体以携载难溶性的紫杉醇，或者将紫杉醇修饰改性，连接易于成凝胶的嵌合片段再制成凝胶，始终将紫杉醇与其他小分子药物一样视为只能被药用递送系统携载的对象，也因此在凝胶载体和修饰改性方面耗费较多的精力。然而，本发明人在研究紫杉醇凝胶的过程中，偶然地将紫杉醇与有机良溶剂和水相溶剂超声分散静置后，十分惊喜地发现混合溶液形成了凝胶，紫杉醇不需要凝胶载体或者改性修饰，其自身即具备凝胶载体的性能。

[0032] 凝胶是介于晶体和沉淀之间的一种状态，分子排列规则成晶体，分子无规聚集为沉淀，而晶体的形成需要苛刻的实验条件。本发明的发明人在获得上述发现后，受到凝胶形成的机理启发，通过大量实验尝试，在紫杉醇的有机溶液中加入适量的紫杉醇不良溶剂如蒸馏水、PBS、生理盐水、葡萄糖注射液等等，诱导紫杉醇分子间相互作用，成功制备了不同紫杉醇含量的凝胶。进一步的探究表明，这种紫杉醇凝胶不仅具有较好的流变学性能，而且具有可注射性能，能够在小鼠皮下形成凝胶。

[0033] 本发明提出的这种直接利用紫杉醇小分子化合物构建凝胶的方法，不涉及复杂的化学合成，避免了紫杉醇药物活性丧失的风险，实施方法十分简单，可重复性强。所选用的试剂具有良好的生物相容性，尤其是聚乙二醇类有机良溶剂和所例举的水相不良溶剂，都是常用的药物试剂。这样的研究发现将改变本领域人员一直以来既有的研究思路，并使得紫杉醇凝胶的载药量实现从微克量级到毫克量级的提高。

[0034] 基于上述发现，本发明提供了一种可注射的高载药量的紫杉醇凝胶，该凝胶包括紫杉醇、有机良溶剂和水相不良溶剂。

[0035] 根据一些具体实施例，本发明的可注射的凝胶中紫杉醇的含量为5-120mg/mL；优选紫杉醇的含量为10-100mg/mL；更优选紫杉醇的含量为10-80mg/mL。

[0036] 根据一些具体实施例，本发明的可注射的凝胶中有机良溶剂和水相不良溶剂的体积比为10:(1-10)；优选有机良溶剂和水相不良溶剂的体积比为10:(2-9)；更优选有机良溶剂和水相不良溶剂的体积比为10:(3-8)。

[0037] 根据一些具体实施例，以重量百分数％计，本发明的凝胶中含有0.25-12％的紫杉醇，55-80％的有机良溶剂和11-44％的水相不良溶剂；优选地，所述凝胶含有0.55-12％的紫杉醇，58-79％的有机良溶剂和14-41％的水相不良溶剂；更优地，所述凝胶含有0.57-6％的紫杉醇，58-77％的有机良溶剂和17-41％的水相不良溶剂

[0038] 本发明所述的有机良溶剂是指与水相不良溶剂相比，具有较好的紫杉醇溶解性的有机溶剂，本发明所述的水相不良溶剂是指与有机良溶剂相比，具有较差的紫杉醇溶解性的含有或不含有溶质的水溶液，所述溶质包括但不限于磷酸、磷酸盐、盐酸、盐酸盐、钾盐、钠盐、氨基酸、钙盐、镁盐、锌盐、葡萄糖等人体能够接受的物质。

[0039] 出于紫杉醇凝胶对周围组织的渗透性影响，优选本发明所述水相不良溶剂为低渗或等渗溶液。

[0040] 根据一些具体实施例，本发明的凝胶所用的水相不良溶剂为蒸馏水、磷酸盐缓冲液、生理盐水或葡萄糖注射液等。优选为磷酸盐缓冲溶液。

[0041] 本发明所述有机良溶剂选自药学上可接受的醇类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂、醚类溶剂和酰胺类溶剂等。根据本发明的一些实施例，所述醇类溶剂选自聚乙二醇和乙醇中的一种或多种的混合溶剂。优选醇类溶剂为聚乙二醇中的一种或多种。所述聚乙二醇包括但不限于PEG200、PEG400和PEG600中的一种或多种；优选为PEG400。

[0042] 本发明的有机良溶剂为醇类溶剂，尤其是聚乙二醇类溶剂时，对绝大数亲疏水化合物都有很好的溶解性，因此可以在紫杉醇凝胶的基础上加入其他的联用药物，以提高凝胶的抗肿瘤效果，或者降低紫杉醇的副作用，或者使凝胶具有成像功能等。

[0043] 根据一些具体的实施例，紫杉醇的联用药物选自抗肿瘤药物、抗炎药物和染料类药物中的一种或一种以上。

[0044] 所述抗肿瘤药物包括但不限于多西紫杉醇、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、喜树碱、10-羟基喜树碱、鲁比替康、9-氨基喜树碱、顺铂、卡铂、长春碱、长春新碱、卡倍他滨、去甲基斑蝥素、多柔比星、表柔比星、柔红霉素、阿霉素、奥沙利泊、吉西他滨、培美曲赛、替莫唑胺、替尼泊苷、依托泊苷、长春地辛、长春氟宁、长春瑞宾、替加氟、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托蒽醌、拓扑替康、伊立替康等；所述抗炎药物包括但不限于阿司匹林、水杨酸镁、水杨酸钠、水杨酸胆碱镁、二氟尼柳、双水杨酸酯、布洛芬、吲哚美辛、氟比布洛芬、苯氧基布洛芬、萘普生、萘丁美酮、吡罗昔康、保泰松、双氯灭痛、芬洛芬、酮基布洛芬、酮咯酸、四氯芬那酸、舒林酸、托美丁、地塞米松等；所述染料类药物包括但不限于荧光素类染料，如异硫氰酸荧光素、羟基荧光素、四氯荧光素等及其类似物；罗丹明类染料，如红色罗丹明、四甲基罗丹明、罗丹明B等；Cy系列菁染料，如Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7；Alexa系列染料，如AlexaFluor 350、AlexaFluor 405、AlexaFluor 430、AlexaFluor 488、AlexaFluor 532、AlexaFluor 546、AlexaFluor 555、AlexaFluor 568、AlexaFluor 594、AlexaFluor 
610、AlexaFluor 633、AlexaFluor 647、AlexaFluor 680、AlexaFluor 700、AlexaFluor 
750；蛋白类染料，如藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、多甲藻黄素-叶绿素蛋白等。

[0045] 本发明还提供了前述可注射的高载药量的紫杉醇凝胶在制备抗肿瘤药物中的应用。

[0046] 本发明可注射的高载药量的紫杉醇凝胶的制备方法，包括，按照配方量称取紫杉醇溶解在有机良溶剂中，10-80℃超声溶解后，加入水相溶液，再次超声分散后，静置一段时间，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。

[0047] 根据本发明的一些具体实施例，上述制备方法是在室温下将紫杉醇超声溶解在有机良溶剂中。

[0048] 以下通过具体实施例体现本发明的内容及优势。

[0049] 以下实施例中，使用经典的倒置观察法检测高载药量凝胶的形成与否。实施例中所涉及到的实验试剂来源如下：紫杉醇为大连美仑生物制剂公司产品，乙醇、PEG200、PEG400、PEG600等皆为分析纯，购自成都市科龙化工试剂厂。实验动物为健康BALB/c雌性小鼠，3-4周龄，体重18-24g，分笼饲养，自由进食饮水。以下实施例所用的PBS缓冲液配置方法为800mL去离子水溶解氯化钠8g、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠1.42g、磷酸二氢钾0.27g，并使用浓盐酸调制pH到7.4，最后定容到1L，使用前做灭菌处理。

[0050] 实施例1

[0051] 分别称取8.8mg、20mg、40mg、80mg、135mg的紫杉醇，依次溶解在含有1mL的PEG400的螺纹瓶中，室温下超声溶解后，每个螺纹瓶中分别缓慢加入0.75mL、0.70mL、0.55mL、0.33mL、0.10mL的PBS磷酸缓冲盐溶液，再次超声分散后，室温下静置一段时间，即制得紫杉醇含量分别为0.522％(5mg/mL)、1.22％(10mg/mL)、2.44％(25mg/mL)、5.63％(60mg/mL)、
11.33％(120mg/mL)的紫杉醇凝胶，倒置观察法的凝胶形成照片如图1所示。

[0052] 实施例2

[0053] 称取50mg紫杉醇药物加入到1mL的乙醇的螺纹瓶中，室温下超声分散均匀后滴加0.1mL PBS磷酸缓冲盐溶液，再次超声后，室温下静置一段时间，即制得紫杉醇含量为
5.17％(45mg/mL)的凝胶，紫杉醇凝胶SEM照片如图2所示。

[0054] 实施例3

[0055] 称取60mg紫杉醇药物加入到含有1mL PEG200的螺纹瓶中，室温下超声分散均匀后，缓慢加入0.3mL的5％葡萄糖注射液，再次超声后，室温下静置一段时间，即制得紫杉醇含量为3.99％(42mg/mL)的凝胶。

[0056] 实施例4

[0057] 称取40mg的紫杉醇和20mg喜树碱溶解在含有1mL的PEG400螺纹瓶中，室温下超声助溶后，缓慢滴加0.45mL的PBS磷酸缓冲盐溶液，再次超声分散后，室温下静置，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。

[0058] 实施例5

[0059] 称取40mg的紫杉醇和20mg顺铂溶解在含有1mL的PEG400螺纹瓶中，室温下超声助溶后，缓慢滴加0.45mL的PBS磷酸缓冲盐溶液，再次超声分散后，室温下静置，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。

[0060] 实施例6

[0061] 称取40mg的紫杉醇和20mg SN-38溶解在含有1mL的PEG400螺纹瓶中，室温下超声助溶后，缓慢滴加0.45mL的PBS磷酸缓冲盐溶液，再次超声分散后，室温下静置，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。

[0062] 实施例7

[0063] 称取40mg的紫杉醇和20mg盐酸阿霉素溶解在含有1mL的PEG400螺纹瓶中，室温下超声助溶后，缓慢滴加0.45mL的PBS磷酸缓冲盐溶液，再次超声分散后，室温下静置，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。

[0064] 实施例8

[0065] 称取40mg的紫杉醇和20mg姜黄素溶解在含有1mL的PEG400螺纹瓶中，室温下超声助溶后，缓慢滴加0.45mL的PBS磷酸缓冲盐溶液，再次超声分散后，室温下静置，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。

[0066] 实施例9

[0067] 称取40mg的紫杉醇和20mg氯尼达明溶解在含有1mL的PEG400螺纹瓶中，室温下超声助溶后，缓慢滴加0.45mL的PBS磷酸缓冲盐溶液，再次超声分散后，室温下静置，即制得高载药量的紫杉醇凝胶。

[0068] 实施例4-9制得的紫杉醇凝胶形成图片依次如图3中所示，本发明可以成功的构建紫杉醇双药凝胶体系。

[0069] 实施例10

[0070] 称取40mg的紫杉醇，10mg盐酸阿霉素和10mg顺铂溶解在含有1mL的PEG400螺纹瓶中，室温下超声助溶后，缓慢滴加0.45mL的PBS磷酸缓冲盐溶液，再次超声分散后，室温下静置，即制得含有紫杉醇、盐酸阿霉素和顺铂三种化疗药物的凝胶，凝胶形成图片如图4所示，紫杉醇多药凝胶系统构建成功。

[0071] 试验例1紫杉醇凝胶流变学试验

[0072] 为了更加深入的了解研究紫杉醇凝胶的性能，本发明使用哈克旋转流变仪对紫杉醇凝胶进行动态应变扫描和动态频率扫描。动态应变扫描条件为：25℃下，固定频率10rad/s，应变扫描范围为0.1-100。动态频率扫描条件为：25℃下，固定应变0.5％，频率扫描范围为0.1-100rad/s。所测试的紫杉醇凝胶中紫杉醇浓度为40mg/mL，按照与实施例1相同的方法制备，测试结果如图5所示。

[0073] 试验例2MCF-7细胞毒试验

[0074] 为了更加深入研究紫杉醇凝胶的生物相容性，我们评价了在制备紫杉醇凝胶中所用材料对人乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞毒性。实验条件简述为：以每孔5000个MCF-7细胞密度计，将肿瘤细胞接种在96孔板上，保持温度37.5℃恒定，于5％CO2的气氛下培养MCF-7细胞48h。将提前配置好的紫杉醇纯药、PEG400、紫杉醇凝胶经培养基稀释到设定的浓度后，以每个浓度设定5个复孔，加入到96孔板内，同时设置阴性对照组和空白调零组。于37.5℃和5％CO2条件下培养细胞48h后，每孔加入10uL MTT(5mg/mL)，继续在培养箱内培养4h后，小心吸出培养基，并且每孔加入150ul的DMSO用于溶解甲臜。将96孔板于震荡仪上震荡15min，使生成的甲臜充分溶解。使用酶标仪检测每孔在490nm处的吸光值。并且计算细胞存活率，结果如图6所示。细胞存活率由如下公式计算得出：

[0075] 细胞存活率(％)＝[(ODt-OD0)/(ODb-OD0)]×100％

[0076] ODt是实验组吸光度值，ODb是阴性对照组的吸光度值，OD0无细胞空白组的吸光度值。

[0077] MCF-7细胞毒性评价结果表示：当PEG400浓度为6.5-100μg/mL时，细胞存活率都在80％以上，表明PEG400几乎没有细胞毒性，不会对基体产生附加伤害。而紫杉醇纯药和紫杉醇凝胶的细胞毒性都表现为浓度依赖性。但相比于紫杉醇纯药的较高毒副作用，在低浓度时紫杉醇凝胶中的PEG400会降低紫杉醇的细胞毒性，这样不会对正常组织造成过多伤害，而高浓度紫杉醇凝胶仍然表现出较高的细胞毒性，能有效的杀死肿瘤细胞。

[0078] 试验例3紫杉醇凝胶可注射性研究

[0079] 准确称量紫杉醇60mg溶解在含有1mL的PEG400螺纹瓶中，加入0.45mL PBS再次超声分散后，使用注射头注射0.2mL于雌性小鼠背部皮下，4h后刨开皮下并观察成凝胶情况，如图7所示。取部分皮下凝胶进行SEM扫描，照片如图8所示。

[0080] 可见，本发明的凝胶具有可注射性，注射后的混合液在小鼠体内形成凝胶而非以液体形式存在，因而具有药物缓释的功能，可以应用于抗肿瘤领域，延长给药周期，提高患者依从性。