一种C反应蛋白保存液、校准品、质控品和检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种C反应蛋白保存液、校准品、质控品和检测试剂盒，所述C反应蛋白保存液包括缓冲液、0.9～9.0wt％氯化钠、10～30wt％山梨醇、0.5～5wt％蔗糖、0.05～0.2wt％表面活性剂、0.05～0.1wt％防腐剂和0.5～5wt％蛋白保护剂。本发明的C反应蛋白保存液能够延长C反应蛋白低温保存的有效期并且通过各组分之间的相互配合能够达到常温保存的效果，使用本发明的C反应蛋白保存液能够避免因低温保存不当导致的浪费，降低了检测成本。

权利要求

1.一种C反应蛋白校准品，其特征在于，包括C反应蛋白保存液和校准所需浓度的C反应蛋白，所述C反应蛋白保存液包括缓冲液、0.9 9.0wt%氯化钠、10 30wt%山梨醇、0.5 5wt%蔗~ ~ ~糖、0.05 0.2wt%表面活性剂、0.05 0.1wt%防腐剂和2 5wt%蛋白保护剂，所述蛋白保护剂为~ ~ ~复合蛋白保护剂HPD。

2.根据权利要求1所述的一种C反应蛋白校准品，其特征在于，所述缓冲液的pH为7.5~

9.0，所述缓冲液为10 50mmol/L的Tris缓冲液、0.05‑0.2mol/L的磷酸盐缓冲液中的一种。

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3.根据权利要求1所述的一种C反应蛋白校准品，其特征在于，所述表面活性剂为Triton X‑405、吐温20、十六烷基溴化铵、十六烷基‑3‑甲基氯化铵中的一种或多种组合。

4.根据权利要求1所述的一种C反应蛋白校准品，其特征在于，所述防腐剂为KroVin400、叠氮钠、Proclin‑300中的一种。

5.一种C反应蛋白质控品，其特征在于，包括C反应蛋白保存液和质控所需浓度的C反应蛋白，所述C反应蛋白保存液包括缓冲液、0.9 9.0wt%氯化钠、10 30wt%山梨醇、0.5 5wt%蔗~ ~ ~糖、0.05 0.2wt%表面活性剂、0.05 0.1wt%防腐剂和2 5wt%蛋白保护剂，所述蛋白保护剂为~ ~ ~复合蛋白保护剂HPD。

6.根据权利要求5所述的一种C反应蛋白质控品，其特征在于，所述缓冲液的pH为7.5~

9.0，所述缓冲液为10 50mmol/L的Tris缓冲液、0.05‑0.2mol/L的磷酸盐缓冲液中的一种。

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7.根据权利要求5所述的一种C反应蛋白质控品，其特征在于，所述表面活性剂为Triton X‑405、吐温20、十六烷基溴化铵、十六烷基‑3‑甲基氯化铵中的一种或多种组合。

8.根据权利要求5所述的一种C反应蛋白质控品，其特征在于，所述防腐剂为KroVin400、叠氮钠、Proclin‑300中的一种。

9.一种C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1‑4任一项所述的C反应蛋白校准品和/或权利要求5‑8任一项所述的C反应蛋白质控品。

说明书

一种C反应蛋白保存液、校准品、质控品和检测试剂盒

技术领域

[0001] 本发明涉及蛋白保存技术领域，尤其是涉及一种C反应蛋白保存液、校准品、质控品和检测试剂盒。

背景技术

[0002] C反应蛋白(CRP)是1930年由Tillett和Francis发现的肺炎患者血清中一种与肺炎球菌(现称肺炎链球菌)非特异型的菌体多糖成分C多糖(C‑polysacch aride，CPS)发生沉淀反应的物质。1941年Macleod和Avery先后证实这是一种急性感染时出现的蛋白质，与C2+
多糖体的絮状沉淀反应依赖于Ca 的存在。CRP在组织受损、发炎或感染时，经细胞因子如白细胞介素6(IL‑6)等诱导，主要在肝脏中合成，为急性期时相反应蛋白。CRP在健康人血清中浓度很低，但对炎症反应非常敏感，炎症开始4h～7h其浓度就显著升高，是非特异性的炎症指示剂。CRP水平可以反映机体潜在的炎症活跃程度，广泛应用于临床。CRP作为一种敏感的炎性反应标志物，它的升高可以提示许多炎性反应的发生，且升高程度常与炎性反应、组织损伤的程度呈正相关，现已被广泛地应用于医学的各个领域，对心血管、消化、呼吸、泌尿、内分泌和生殖等系统炎性反应疾病、各种炎性反应过程与组织坏死、损伤和其恢复期的筛查、监测、病情评估与疗效判断都有重要价值。随着CRP检测技术不断更新和提高，CRP在临床上的应用前景将更加广阔。

[0003] CRP由5个完全相同的非糖基化的亚单位非共价联结，每个亚单位相对分子质量23017，由206个氨基酸残基组成。CRP这种盘状五聚体特征结构使其归于五聚素(pentraxins)家族。这种五聚体结构容易受外界条件的影响发生变性，在低浓度时极易降解而失活，而且低浓度时易吸附于管壁造成损失。对于C反应蛋白，一般冻存于‑20℃或‑80℃，但反复冻融可使其活性降低。

[0004] 目前，C反应蛋白校准品及质控品常常为2～8℃保存下的液态校准品，一般有效期为1年。在常温下往往放置7天，就已经降解，放置一个月，则几乎完全降解。因此保存过程中要非常小心，尤其是运输过程中，必须保证冷链运输，且温度要时时监控，稍有不慎，则会导致校准品或质控品发生变质，进而导致错误的测试结果。目前技术的C反应蛋白校准品和质控品运输成本高，包装复杂，耗时耗力，一旦出现变质现象则只能丢弃，浪费严重。

[0005] 现有技术中存在一些用于保持蛋白质稳定性和活性的保存液，但有些不适用于C反应蛋白试剂的保存或者对C反应蛋白的保存效果不理想。如中国专利文献CN 101324589公开了一种由化学合成得到的高效蛋白稳定剂，用于保持免疫诊断试剂的稳定性，该稳定剂配制的水溶液用于稀释蛋白，在4℃条件下10天能保存蛋白活性80％以上，该活性保持时间仍不理想。因此，有必要开发一种更好的保存C反应蛋白的保存液。

发明内容

[0006] 针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种C反应蛋白保存液、校准品、质控品和检测试剂盒。

[0007] 本发明所采取的技术方案是：

[0008] 作为本发明的一个目的，本发明提供一种C反应蛋白保存液，包括缓冲液、0.9～9.0wt％氯化钠、10～30wt％山梨醇、0.5～5wt％蔗糖、0.05～0.2wt％表面活性剂、0.05～
0.1wt％防腐剂和0.5～5wt％蛋白保护剂。

[0009] C反应蛋白保存液中缓冲液为维持C反应蛋白活性和结构稳定提供了必要的条件，其加入量可以根据实际需求做出调整。

[0010] 优选地，所述蛋白保护剂为复合蛋白保护剂HPD。

[0011] 进一步优选地，所述蛋白保护剂的含量为2～5wt％。

[0012] 优选地，所述缓冲液的pH为7.5～9.0。

[0013] 进一步地，所述缓冲液为10～50mmol/L的Tris缓冲液、0.05‑0.2mol/L的磷酸盐缓冲液中的一种。

[0014] 优选地，所述表面活性剂为Triton X‑405、吐温20、十六烷基溴化铵、十六烷基‑3‑甲基氯化铵中的一种或多种组合。

[0015] 优选地，所述防腐剂为KroVin400、叠氮钠、Proclin‑300中的一种。

[0016] 作为本发明的另一目的，本发明还提供一种C反应蛋白校准品，包括上述的C反应蛋白保存液和校准所需浓度的C反应蛋白。

[0017] 作为本发明的另一目的，本发明还提供一种C反应蛋白质控品，包括上述的C反应蛋白保存液和质控所需浓度的C反应蛋白。

[0018] 本发明的C反应蛋白校准品和C反应蛋白质控品可以通过在制备好的C反应蛋白保存液中加入校准品或质控品需求浓度的C反应蛋白获得。制备好的C反应蛋白校准品和C反应蛋白质控品一般经过过滤和无菌环境下封装步骤，可在低温和常温下进行保存，优选低温保存温度为2～8℃。

[0019] 作为本发明的另一目的，本发明还提供一种C反应蛋白检测试剂盒，包括上述的C反应蛋白校准品和/或上述的C反应蛋白质控品。

[0020] 配制多个浓度梯度的C反应蛋白校准品可用于C反应蛋白检测试剂盒的校准，例如可配制C反应蛋白浓度为0mg/L、5mg/L、20mg/L、45mg/L、90mg/L、180mg/L的C反应蛋白校准品用于校准。配制单个或两个浓度梯度的C反应蛋白质控品用于C反应蛋白检测试剂盒的室内质控，例如可配制C反应蛋白浓度为10mg/L、50mg/L的C反应蛋白质控品用于质控。

[0021] 本发明的有益效果是：

[0022] 本发明针对现有技术中C反应蛋白保存效果不理想的问题，根据C反应蛋白的结构特性针对性地提供了一种C反应蛋白保存液。该C反应蛋白保存液通过加入蛋白保护剂、山梨醇、蔗糖等组分，延长了C反应蛋白低温保存的有效期并且通过各组分之间的共同作用达到了可以常温保存的效果，使用本发明的C反应蛋白保存液能够避免因低温保存不当导致的浪费，降低了检测成本。

附图说明

[0023] 图1为实施例3中C反应蛋白校准品与CRP(Ⅱ)标准液定标比较图。

具体实施方式

[0024] 以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。

[0025] 以下实施例中C反应蛋白浓度的检测采用C反应蛋白测定试剂盒(乳胶增强免疫比浊法)，检测设备采用深圳开立生物医疗科技股份有限公司的SC‑5280CRP系列全自动血液细胞分析仪，C反应蛋白项目的定标采用日本生研株社生产的CRP(Ⅱ)标准液，产品号为612014。

[0026] 实施例1

[0027] 以20mmoL/L、pH 8.0Tris缓冲液、0.9％NaCl、15％山梨醇、3％蔗糖、0.1％Triton X‑405和0.1％KroVin400作为基础配方A，在基础配方A的基础上加入稳定剂配制得到C反应蛋白保存液。

[0028] 在上述配制的C反应蛋白保存液中加入C反应蛋白配制成蛋白浓度为5mg/L、20mg/L、80mg/L和180mg/L的待测样本，分别编号为样本1、2、3和4，考察在常温条件下保存6个月各样本中C反应蛋白浓度测定值与原始待测样本C反应蛋白浓度值的变化情况，实验结果如表1所示。

[0029] 表1在常温条件下C反应蛋白保存液中C反应蛋白保存1个月、2个月、4个月及6个月的稳定性状况

[0030]

[0031]

[0032] 本实施例中考察了使用PMSF、苄脒、EDTA、TPCK和蛋白保护剂(本实施例中使用的是复合蛋白保护剂HPD)作为稳定剂对C反应蛋白稳定性的影响。PMSF(苯甲酰磺酰氟)是一种很常见的蛋白酶抑制剂，可不可逆抑制丝氨酸水解酶和一些半胱氨酸水解酶，苄脒(Benzamidine)是一种丝氨酸抑制剂，EDTA是一种金属蛋白酶抑制剂，TPCK常被用作抑制丝氨酸水解酶和胱氨酸水解酶，但这些抑制剂对C反应蛋白的保存效果并不太理想且处理起来颇为麻烦。而本实施例中通过使用复合蛋白保护剂HPD与基础配方A中各组分相互配合作用，使得C反应蛋白能够在常温下保存较长的时间，尤其是在复合蛋白保护剂HPD添加量为2％和5％的情况下，C反应蛋白能够在常温下稳定保存6个月，表明了本发明C反应蛋白保存液能够增强C反应蛋白的稳定性。

[0033] 实施例2

[0034] 以20mmoL/L、pH 8.0Tris缓冲液、0.9％NaCl、15％山梨醇、3％蔗糖、0.1％Triton X‑405、0.1％KroVin400和2％的复合蛋白保护剂HPD配制成C反应蛋白保存液。

[0035] 对比溶液：日本生研株社生产的CRP(Ⅱ)标准液。

[0036] 取上述配制的C反应蛋白保存液，并根据待测样本浓度范围配制成5mg/L、20mg/L、80mg/L和180mg/L的C反应蛋白待测样本1、2、3、4，同时取上述对比溶液配制对应上述C反应蛋白浓度的溶液作为对比例，考察两组C反应蛋白溶液的开瓶稳定性和长期稳定性，具体实验操作为：将两组C反应蛋白溶液分别分装成8份，其中三份开瓶4h后，再盖上置于2‑8℃保存，用于做开瓶稳定性试验，分别于第1个月、第2个月时将两组溶液取出并进行测量C反应蛋白浓度。另外5份置于2‑8℃保存用于做长期稳定性试验，分别于第6个月、第12个月、第18个月、第24个月和第30个月将两组溶液取出并进行测量C反应蛋白浓度。每份样本测量10次，取平均值，计算相对偏差，开瓶稳定性的检测结果如表2所示，长期稳定性的检测结果如表3所示。

[0037] 表2开瓶稳定性检测结果

[0038]

[0039] 表2结果显示，保存在对比溶液中的C反应蛋白浓度在开瓶1个月后就开始下降，而C反应蛋白保存在本实施例的C反应蛋白保存液中，在开瓶2个月后每份样本的多次测量值中无论5mg/L、20mg/L、80mg/L和180mg/L的浓度值都依然保持稳定，相对偏差较小且准确性良好。

[0040] 表3长期稳定性检测结果

[0041]

[0042]

[0043] 表3结果显示，经本实施例C反应蛋白保存液保存的C反应蛋白在两年内表现出良好的稳定性，无论5mg/L、20mg/L、80mg/L和180mg/L浓度值的样本的相对偏差均满足C反应蛋白测定试剂盒的技术要求(准确度要求相对偏差±8％)。

[0044] 实施例3：C反应蛋白校准品的准确度分析

[0045] 取20mmoL/L pH 8.0 Tris缓冲液、0.9％NaCl、15％山梨醇、3％蔗糖、0.1％Triton X‑405、0.1％KroVin400和2％的复合蛋白保护剂HPD配制成C反应蛋白保存液配制成C反应蛋白保存液，在所述C反应蛋白保存液中加入校准所需浓度的C反应蛋白配制成C反应蛋白校准品。使用上述C反应蛋白校准品为检测体系定标，测试100例临床样本，再以日本生研株社生产的CRP(Ⅱ)标准液对检测体系定标，测试该100例样本。两组结果进行比对，比对结果如图1所示。实验结果表明本发明C反应蛋白校准品与日本生研株社生产的CRP(Ⅱ)标准液具有相同的准确性。

[0046] 在本发明制备的C反应蛋白保存液中加入质控或校准所需浓度的C反应蛋白可配制成C反应蛋白质控品或校准品。