本发明提供一类吡唑[1,5‑a]吡啶衍生物的盐及其用途。本发明还涉及包含所述盐或其药物组合物，以及所述盐或所述药物组合物在制备用于治疗和预防高增殖性疾病的药物中的用途。
吡唑[1,5-a]吡啶衍生物的盐及其用途
发明领域
[0001] 本发明属于药物领域，涉及吡唑[1,5-a]吡啶衍生物的盐及其用途，具体涉及N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(式(I)所示化合物)的盐及其用途，进一步涉及包含所述盐的药物组合物。所述的盐或所述药物组合物可以用于在生物标本内抑制或调节蛋白激酶活性，可以用来防护、处理、治疗或减轻患者的增殖性疾病或肺纤维化。
[0002] 发明背景
[0003] 磷酸肌醇3-激酶(PI3激酶或PI3K)，作为脂质激酶的一个家族，在许多细胞进程，如细胞的存活，繁殖和分化中发挥着重要的调节作用。作为受体酪氨酸激酶和G蛋白-偶联受体下游传导中的主要影响因素，通过产生磷脂，PI3K将来自各类生长因素和因子的信号传导到细胞内，激活丝-苏氨酸蛋白激酶AKT(也称为蛋白激酶B(PKB))和其它下游通路。抑癌基因或者PTEN(同源性磷酸酶-张力蛋白)是PI3K信号通路中最重要的反向调节剂(“Small-molecule inhibitors of the PI3K signaling network.”Future Med Chem.2011,3(5),549-565)。
[0004] 根据结构和性质，PI3K可以分为三类，其中，I类又可分为Ia和Ib两种亚型。II类PI3K是一类大分子量(170-210kDa)蛋白，蛋白的催化区域可以介导经典蛋白激酶C亚型的钙/脂键合。III类PI3K，以由VSP34基因编码的酵母蛋白为代表，仅磷酸化PtdIns，促使产生PtdIns(3)P；他们被当做是囊泡运输的调节者(“Targeting PI3K signaling in cancer:opportunities,challenges and limitations.”Nature Review Cancer,2009,9,550)。
[0005] Ia型PI3K(PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kγ和PI3Kδ)是由催化亚单位p110(分别是p110α，p110β，p110γ和p110δ)和调节亚单位p85(例如：p85α，p85β，p55δ，p55α和p50α)组成的二聚体蛋白。具有催化活性的p110亚单位使用ATP磷酸化Ptdlns,PtdIns4P和PtdIns(4,5)P2。PI3K催化亚单位α-亚型基因(PIK3CA)的发现，证实了Ia型PI3K在癌症中的重要作用。该基因由p110α编码，常常在人类肿瘤中发生突变和扩增，例如卵巢癌(Campbell et al,Cancer Res 2004,64,7678-7681；Levine et al.,Clin Cancer Res 2005,11,2875-2878；Wang et al.,Hum Mutat 2005,25,322；Lee et al.,Gynecol Oncol 2005,97,26-34)，子宫颈癌、乳癌(Bachman,et al.Cancer Biol Ther 2004,3,772-775；Levine,et al.,supra；Li et al.,Breast Cancer Res Treat2006,96,91-95；Saal et al.,Cancer Res 2005,65,2554-
2559；Samuels and Velculescu,Cell Cycle 2004,3,1221-1224)，结直肠癌(Samuels,et al.Science 2004,304,554；Velho et al.Eur J Cancer 2005,41,1649-1654)，子宫内膜癌(Oda et al.Cancer Res.2005,65,10669-10673)，胃癌(Byun et al.,M J Cancer
2003,104,318-327；Li et al.,supra；Velho et al.,supra；Lee et al.,Oncogene 2005,
24,1477-1480)，肝癌(Lee et al.,id)，小细胞和非小细胞肺癌(Tang et al.,Lung Cancer 2006,Jl,181-191；Massion et al.,Am J Respir Crit Care Meaf 2004,170,
1088-1094)，甲状腺癌(Wu et al,J Clin Endocrinol Metαb 2005,90,4688-4693)，急性髓细胞白血病(AML)(Sujobert et al.,Blood 1997,106,1063-1066)，慢性髓细胞白血病(CML)(Hickey and Cotter J Biol Chem 2006,281,2441-2450)，以及胶质母细胞瘤(Hartmann et al.Acta Neuropαthol(Berl)2005,109,639-642；Samuels et al.,supra)。
[0006] mTOR是高度保守的丝-苏氨酸激酶，具有脂质激酶活性，是PI3K/AKT通路的影响因素之一。mTOR存在两种截然不同的复合物，mTORC1和mTORC2，并通过调节营养供应和细胞能量水平，发挥其在细胞增殖中的重要作用。mTORC1的下游靶标是核糖体蛋白S6激酶1和真核生物翻译起始因子4E结合蛋白1，两者都对蛋白合成具有重要的作用(“Present and future of PI3K pathway inhibition in cancer:perspectives and limitations.”Current Med.Chem.2011,18,2647-2685)。
[0007] mTOR信号传导失调诱发癌症的结论来自于药理干扰mTOR的研究，研究的药物包括雷帕霉素，其同系物有西罗莫司脂化物(CCI-779)和依维莫司(RAD001)。雷帕霉素是mTOR抑制剂，诱导G1期阻滞和细胞凋亡。雷帕霉素与FK-结合蛋白12(FKBP-12)复合物的形成，被认为与雷帕霉素生长抑制机制相关。这些复合物特异性结合mTOR，抑制其活性，阻止蛋白翻译和细胞生长。mTOR抑制剂的细胞作用还表现在含有伴随性失活的PTEN的细胞中。因此，雷帕霉素的抗癌活性是得到认同的，而一系列雷帕霉素同系物，比如西罗莫司脂化物和依维莫司，也被美国食品和药品管理局批准用于治疗一些类型的癌症。
[0008] 纤维化是器官或组织在修复或反应过程中形成的多余的纤维结缔组织。纤维化包含但不限于肺纤维化、肝纤维化、皮肤纤维化和肾纤维化。肺纤维化，又称特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)、间质性弥漫性肺纤维化、炎性肺纤维化或纤维化性肺泡炎，属于肺脏疾病，是一种以肺泡间纤维组织异常生成为特征的异质型组合症，其由肺泡炎引起，细胞浸润到肺泡中，从而导致纤维化。特发性肺纤维化的影响是慢性的、渐进性的且常常是致命性的。
[0009] 特发性肺纤维化的临床病程是可变的而且很大程度上是不可预测的。特发性肺纤维化最终是致命的，历史数据表明从诊断开始计算，其中位生存期为2到3年。最大肺活量的下降可说明特发性纤维化患者病情的进展。最大肺活量的变化是临床试验中使用最普遍的终点。最大肺活量在6-12个月内的预测值下降5％或10％被认为与IPF患者死亡率的增加有关。
[0010] 我们对于IPF发病机理的了解，开始主要认为其属于炎性疾病，后来认为其为一种由反复的上皮细胞损伤和异常的伤口愈合的复杂相互作用引起的疾病，包括纤维细胞的招募、增殖和分化，最后是细胞外基质的过量沉积。这种认知上的改变促进了作为潜在疗法的化合物类型的改变，从而使得靶向纤维化发生发展过程中特定通路的化合物成为焦点。
[0011] 在IPF患者上，PI3K/mTOR抑制剂通过抑制激酶，例如PI3Ks和mTOR发挥作用。这导致参与调节肺纤维化发展过程中的细胞受体的失活。肺成纤维细胞的增殖受到抑制，细胞外基质沉积减少("Update on diagnosis and treatment of idiopathic pulmonary fibrosis",J Bras Pneumol.2015,41(5),454-466)。
[0012] CN 103965199A、WO 2014130375A1和US 20140234254A1公开了可以用来防护、处理、治疗或减轻患者增殖性疾病的化合物，其中，化合物N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(式(I)所示化合物)能有效抑制相关蛋白激酶活性并抑制肿瘤的发生发展。
[0013] 然而，药物活性成分的不同盐和固体形态可能具有不同的性质。不同盐或固体形态所导致的性质改变也可以改进最终的剂型，例如，如果这种改变可以提高生物利用度。同时，药物活性成分的不同盐和固体形态还可以产生多晶或其他晶型。
[0014] 本发明描述了N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺的不同盐、固体形态及不同盐的晶型。
发明内容
[0015] 本发明提供式(I)所示化合物的碱加成盐，可以用来抑制、控制和/或PI3K和/或mTOR，也可以用来治疗人类增殖性疾病，比如癌症。本发明还提供制备这类碱加成盐的方法。本发明的碱加成盐可以为晶型、部分晶型、多晶型或无定形形式，本发明的碱加成盐还可以为溶剂化物形式，例如水合物形式。
[0016] 一方面，本发明提供了一种如式(I)所示的化合物的药学上可接受的碱加成盐，[0017]
[0018] 在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为无机碱盐和有机碱盐。
[0019] 在另一些实施方案中，本发明所述的无机碱盐为锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或它们的任意组合。
[0020] 还在一些实施方案中，本发明所述的有机碱盐为铵盐、胆碱盐、赖氨酸盐、精氨酸盐、氨基乙醇盐、氨基丁三醇盐、N-甲基葡糖胺盐、吗啉盐、哌嗪盐、叔丁胺盐、二环己胺盐或它们的任意组合。
[0021] 在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单锂盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：9.98°±0.2°、13.82°±0.2°、21.74°±0.2°、23.70°±0.2°、25.03°±0.2°、26.82°±0.2°和32.96°±0.2°。
[0022] 在另一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单锂盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：9.98°±0.2°、13.82°±0.2°、15.83°±0.2°、16.25°±0.2°、19.64°±0.2°、20.02°±0.2°、21.74°±0.2°、22.16°±0.2°、23.70°±0.2°、25.03°±0.2°、26.38°±0.2°、26.82°±0.2°、30.27°±0.2°和32.96°±0.2°。
[0023] 还在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单锂盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：3.60°±0.2°、8.33°±0.2°、8.97°±0.2°、9.58°±0.2°、9.98°±0.2°、11.25°±0.2°、12.24°±0.2°、13.26°±0.2°、13.82°±
0.2°、15.34°±0.2°、15.83°±0.2°、16.25°±0.2°、16.61°±0.2°、17.31°±0.2°、18.06°±0.2°、18.90°±0.2°、19.64°±0.2°、20.02°±0.2°、21.02°±0.2°、21.28°±0.2°、
21.74°±0.2°、22.16°±0.2°、23.70°±0.2°、24.37°±0.2°、25.03°±0.2°、25.52°±
0.2°、26.38°±0.2°、26.82°±0.2°、27.59°±0.2°、28.15°±0.2°、28.74°±0.2°、29.30°±0.2°、29.69°±0.2°、30.27°±0.2°、30.82°±0.2°、31.45°±0.2°、32.60°±0.2°、
32.96°±0.2°、33.96°±0.2°、36.26°±0.2°、37.86°±0.2°、38.76°±0.2°、39.40°±
0.2°、41.02°±0.2°、41.98°±0.2°、42.73°±0.2°和43.64°±0.2°。
[0024] 再在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单锂盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱基本上如图1所示。
[0025] 在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单钾盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：11.04°±0.2°、16.29°±0.2°、19.75°±0.2°、21.26°±0.2°、22.22°±0.2°和23.33°±0.2°。
[0026] 在另一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单钾盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：11.04°±0.2°、14.28°±0.2°、16.29°±0.2°、19.75°±0.2°、20.01°±0.2°、21.26°±0.2°、22.22°±0.2°、23.33°±0.2°、24.02°±0.2°、25.87°±0.2°、27.83°±0.2°和32.47°±0.2°。
[0027] 还在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单钾盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：5.53°±0.2°、11.04°±0.2°、14.28°±0.2°、14.67°±0.2°、16.29°±0.2°、17.19°±0.2°、19.18°±0.2°、19.75°±0.2°、20.01°±0.2°、21.26°±0.2°、21.61°±0.2°、22.22°±0.2°、23.33°±0.2°、24.02°±0.2°、
25.47°±0.2°、25.87°±0.2°、26.46°±0.2°、27.07°±0.2°、27.83°±0.2°、28.76°±
0.2°、29.49°±0.2°、30.37°±0.2°、31.01°±0.2°、32.47°±0.2°、32.96°±0.2°、33.64°±0.2°、33.98°±0.2°、36.27°±0.2°、38.87°±0.2°、39.22°±0.2°、40.59°±0.2°、
41.36°±0.2°、41.77°±0.2°、43.03°±0.2°、44.51°±0.2°、46.39°±0.2°、47.48°±
0.2°、48.26°±0.2°、50.58°±0.2°、51.71°±0.2°和54.23°±0.2°。
[0028] 再在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单钾盐晶型A，其特X射线粉末衍射图谱基本上如图2所示。
[0029] 在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单胆碱盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：8.31°±0.2°、16.94°±0.2°、19.82°±0.2°、22.20°±0.2°、22.63°±0.2°和22.85°±0.2°。
[0030] 在另一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单胆碱盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：5.65°±0.2°、8.31°±0.2°、10.31°±0.2°、16.53°±0.2°、16.94°±0.2°、17.27°±0.2°、19.82°±0.2°、22.20°±0.2°、22.63°±0.2°、22.85°±0.2°、23.97°±0.2°、24.81°±0.2°和29.07°±0.2°。
[0031] 还在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单胆碱盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：5.65°±0.2°、7.12°±0.2°、7.52°±0.2°、8.31°±0.2°、9.40°±0.2°、10.31°±0.2°、11.29°±0.2°、13.51°±0.2°、14.92°±
0.2°、15.29°±0.2°、16.53°±0.2°、16.94°±0.2°、17.27°±0.2°、17.50°±0.2°、18.80°±0.2°、19.82°±0.2°、22.20°±0.2°、22.63°±0.2°、22.85°±0.2°、23.42°±0.2°、
23.97°±0.2°、24.39°±0.2°、24.81°±0.2°、25.11°±0.2°、25.45°±0.2°、26.19°±
0.2°、26.95°±0.2°、27.70°±0.2°、28.52°±0.2°、29.07°±0.2°、30.15°±0.2°、31.21°±0.2°、32.12°±0.2°、32.95°±0.2°、33.33°±0.2°、34.15°±0.2°、35.49°±0.2°、
36.11°±0.2°、38.57°±0.2°、40.18°±0.2°、41.92°±0.2°和42.99°±0.2°。
[0032] 再在一些实施方案中，本发明所述的碱加成盐为式(I)所示化合物的单胆碱盐晶型A，其X射线粉末衍射图谱基本上如图3所示。
[0033] 另一方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含本发明上述任意一项的碱加成盐，以及药学上可接受的载体，赋形剂，稀释剂，辅剂，或媒介物，或它们的任意组合。
[0034] 在一些实施方案中，本发明所述的药物组合物，更进一步地包含附加治疗剂，所述附加治疗剂选自化学治疗药物，抗增殖剂，用于治疗动脉粥样硬化的药物，或用于治疗肺纤维化的药物，或它们的组合。
[0035] 在一些实施方案中，本发明所述药物组合物中的碱加成盐可以为所述盐的任意一种结晶形式，具体可以为所述盐的任意一种晶型、无定形或它们的任意组合。
[0036] 在另外一些实施方案中，本发明所述的药物组合物，其中所涉及的附加治疗剂是苯丁酸氮芥(chlorambucil)，美法仑(melphalan)，环磷酰胺(cyclophosphamide)，异环磷酰胺(ifosfamide)，白消安(busulfan)，卡莫司汀(carmustine)，洛莫司汀(lomustine)，链脲佐菌素(streptozocin)，顺铂(cisplatin)，卡铂(carboplatin)，奥沙利铂(oxaliplatin)，达卡巴嗪(dacarbazine)，替莫唑胺(temozolomide)，丙卡巴肼
(procarbazine)，甲氨蝶呤(methotrexate)，氟尿嘧啶(fluorouracil)，阿糖胞苷(cytarabine)，吉西他滨(gemcitabine)，巯基嘌呤(mercaptopurine)，氟达拉滨(fludarabine)，长春碱(vinblastine)，长春新碱(vincristine)，长春瑞滨
(vinorelbine)，紫杉醇(paclitaxel)，多西紫杉醇(docetaxel)，拓扑替康(topotecan)，伊立替康(irinotecan)，依托泊苷(etoposide)，曲贝替定(trabectedin)，更生霉素(dactinomycin)，多柔比星(doxorubicin)，表柔比星(epirubicin)，道诺霉素
(daunorubicin)，米托蒽醌(mitoxantrone)，博来霉素(bleomycin)，丝裂霉素C
(mitomycin)，伊沙匹隆(ixabepilone)，他莫昔芬(tamoxifen)，氟他胺(flutamide)，戈那瑞林类似物(gonadorelin analogues)，甲地孕酮(megestrol)，强的松(prednidone)，地塞米松(dexamethasone)，甲泼尼龙(methylprednisolone)，沙利度胺(thalidomide)，干扰素α(interferon alfa)，亚叶酸钙(leucovorin)，西罗莫司(sirolimus)，西罗莫司脂化物(temsirolimus)，依维莫司(everolimus)，阿法替尼(afatinib)，alisertib，amuvatinib，阿帕替尼(apatinib)，阿西替尼(axitinib)，硼替佐米(bortezomib)，博舒替尼
(bosutinib)，brivanib，cabozantinib，西地尼布(cediranib)，crenolanib，克卓替尼(crizotinib)，dabrafenib，dacomitinib，danusertib，达沙替尼(dasatinib)，厄洛替尼(erlotinib)，ganetespib，吉非替尼(gefitinib)，ibrutinib，埃克替尼(icotinib)，伊马替尼(imatinib)，iniparib，拉帕替尼(lapatinib)，lenvatinib，马赛替尼(masitinib)，莫特塞尼(motesanib)，来那替尼(neratinib)，尼罗替尼(nilotinib)，niraparib，oprozomib，奥拉帕尼(olaparib)，帕唑帕尼(pazopanib)，ponatinib，quizartinib，regorafenib，rigosertib，rucaparib，ruxolitinib，塞卡替尼(saracatinib)，saridegib，索拉非尼(sorafenib)，舒尼替尼(sunitinib)，tasocitinib，替拉替尼(telatinib)，tivozanib，tofacitinib，trametinib，凡德他尼(vandetanib)，veliparib，威罗菲尼(vemurafenib)，vismodegib，阿仑单抗(alemtuzumab)，贝伐单抗(bevacizumab)，brentuximab vedotin，卡妥索单抗(catumaxomab)，西妥昔单抗(cetuximab)，地诺单抗(denosumab)，吉妥珠单抗(gemtuzumab)，伊匹单抗(ipilimumab)，尼妥珠单抗
(nimotuzumab)，奥法木单抗(ofatumumab)，帕尼单抗(panitumumab)，利妥昔单抗(rituximab)，或曲妥珠单抗(trastuzumab)，或它们的组合。
[0037] 另一方面，本发明碱加成盐或包含本发明碱加成盐的药物组合物可用于制备用于预防、治疗或减轻患者增殖性疾病、动脉粥样硬化或肺纤维化的药品。
[0038] 在一些实施方案中，本发明所述的增殖性疾病是转移癌，结肠癌，胃腺癌，膀胱癌，乳腺癌，肾癌，肝癌，肺癌，皮肤癌，甲状腺癌，头颈癌，前列腺癌，胰腺癌，中枢神经系统的癌症，恶性胶质瘤或骨髓增生病。
[0039] 另一方面，本发明涉及使用本发明碱加成盐或本发明碱加成盐的药物组合物制备用于抑制或调节蛋白激酶活性的药品的用途。
[0040] 在一些实施方案中，本发明所述的蛋白激酶为磷酸肌醇3-激酶(PI3激酶或PI3K)和/或mTOR。
[0041] 另一方面，本发明涉及式(I)所示化合物的碱加成盐的制备方法。
[0042] 本发明所述的碱加成盐的晶型可以通过常规的制备方法制备得到，其中，本发明中某些晶型还可以通过晶型转变的方法制备得到。
[0043] 本发明所述的盐的制备方法中所使用的溶剂没有特别限制，任何在一定程度上能溶解起始原料并且不影响其性质的溶剂均包含在本发明中。另外，本领域的许多类似改动，等同替换，或等同于本发明所描述的溶剂，溶剂组合，及溶剂组合的不同比例，均视为本发明的包含范围。本发明给出了各反应步骤所使用的较佳的溶剂。
[0044] 本发明所述的盐的制备实验将在实施例部分进行了详细描述。同时，本发明提供了所述盐的活性测试实验(如药代动力学实验)、溶解度实验、稳定性实验(包括高温、高湿和光照实验)和引湿性实验等。由实验结果可知，本发明所述的盐具有较好生物活性，且溶解性好，稳定性高，适合制药用途。
[0045] 本发明所述盐的引湿性实验按照常规实验方法进行测试，其中，关于引湿性特征描述与引湿性增重的界定(中国药典2015年版附录9103药物引湿性试验指导原则，实验条件：25℃±1℃，80％±2％相对湿度)如下表所述。
[0046] 引湿性特征描述与引湿性增重的界定
[0047]
[0048] 本发明所述的盐不易受高湿度影响而潮解，方便长期贮存放置。
[0049] 定义和一般术语
[0050] 现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式和化学式说明。本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术，等等)，以本申请为准。
[0051] 除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。
[0052] 术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
[0053] 晶型在本发明中可认为是由图表“描绘”的图形数据表征。这些数据包括，例如X-射线单晶衍射图谱、X-射线粉末衍射图谱、拉曼光谱、傅立叶变换-红外光谱、DSC曲线和固态NMR光谱。技术人员将理解，这类数据的图形表示可发生小的变化(例如峰相对强度和峰位置)，原因是诸如仪器响应变化和样品浓度及纯度变化的因素，这对于技术人员是公知的。尽管如此，技术人员能够比较本文图中的图形数据和对未知晶形产生的图形数据，并可确认两组图形数据是否表征相同的晶形。
[0054] “XRD”指X-射线衍射。
[0055] 本发明所使用的术语“无定形”或者“无定形形式”意在表示所讨论的物质、组分或产物，缺少特征性的晶体形状或结晶结构，当例如通过XRPD(X射线粉末衍射)测定时基本上不是晶体或者所讨论的物质、组分或产物，例如当使用偏振光显微镜观看时不是双折射的或者立方体的，或者X射线粉末衍射图不具尖峰。在某些实施方案中，包含物质的无定形形式的样品可基本上不含其它无定形形式和/或结晶形式。
[0056] 术语“基本上纯的”是指一种晶型基本上不含另外一种或多种晶型，即晶型的纯度至少60％，或至少70％，或至少80％，或至少85％，或至少90％，或至少93％，或至少95％，或至少98％，或至少99％，或至少99.5％，或至少99.6％，或至少99.7％，或至少99.8％，或至少99.9％，或晶型中含有其它晶型，所述其它晶型在晶型的总体积或总重量中的百分比少于20％，或少于10％，或少于5％，或少于3％，或少于1％，或少于0.5％，或少于0.1％，或少于0.01％。X-射线粉末衍射(XRPD)、差式扫描量热曲线(DSC)或热重分析曲线(TGA)“实质上相同”是指X-射线粉末衍射图、差式扫描量热曲线(DSC)或热重分析曲线(TGA)至少有50％，或至少60％，或至少70％，或至少80％，或至少90％，或至少95％，或至少99％的峰显示在图中。
[0057] 术语“2θ数值”或“2θ”是指基于X-射线衍射实验的实验装置的以度计的峰位置且是衍射图谱的常见横坐标单位。所述试验设置要求如果在入射光束与某一晶面形成角θ(θ)时反射被衍射，则以角2θ(2θ)记录反射的光束。应理解，本文所提及具体多晶型的具体2θ数值意欲指使用本文所述的X-射线衍射实验条件测量的2θ数值(以度计)。举例而言，如本文所述，使用辐射源(Cu，kα，Kα1 1.540598；Kα2 1.544426；Kα2/Kα1强度比例：0.50)。
[0058] 术语“X-射线粉末衍射图谱”或“XRPD图谱”是指实验观测到的衍射图或源自其的参数。通过峰位置(横坐标)及峰强度(纵坐标)表征粉末X-射线衍射图谱。XRPD图谱的相对峰高取决于与样品制备和仪器几何形状有关的许多因素，而峰位置对实验细节相对不敏感。因此，在一些实施方案中，本发明的结晶化合物的特征在于具有某些峰位置的XRPD图，具有与本发明附图中提供的XRPD图实质上相同的特征。根据本试验所用仪器状况，衍射峰存在±0.1°、±0.2°、±0.3°、±0.4°或±0.5°的误差容限；在一些实施方案中衍射峰存在±0.2°的误差容限。
[0059] DSC曲线的熔融峰高取决于与样品制备和仪器几何形状有关的许多因素，而峰位置对实验细节相对不敏感。因此，在一些实施方案中，本发明的结晶化合物的特征在于具有特征峰位置的DSC图，具有与本发明附图中提供的DSC图实质上相同的性质。根据本试验所用仪器状况，熔融峰存在±1°、±2°、±3°、±4°或±5°的误差容限。在一些实施方案中熔融峰存在±3℃的误差容限。
[0060] 术语“相对强度”是指X-射线粉末衍射图(XRPD)的所有衍射峰中第一强峰的强度为100％时，其它峰的强度与第一强峰的强度的比值。
[0061] 当提及谱图或/和出现在图中的数据时，“峰”指本领域技术人员能够识别的不会归属于背景噪音的一个特征。
[0062] 在本发明的上下文中，当使用或者无论是否使用“大约”或“约”等字眼时，表示每一个数字的数值有可能会出现1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％等差异。
[0063] 结晶型的一般制备方法
[0064] 结晶型可通过多种方法制备，包括但不限于例如从适合的溶剂混合物结晶或重结晶；升华；从另一相固态转化；从超临界流体结晶；和喷雾。用于溶剂混合物的结晶型的结晶或重结晶的技术包括但不限于例如溶剂蒸发；降低溶剂混合物的温度；化合物和/或其盐的过饱和溶剂混合物的引晶(crystal seeding)；溶剂混合物冷冻干燥；和抗溶剂(反溶剂)加到溶剂混合物。可用高产量结晶技术制备结晶型，包括多晶型体。
[0065] 药物的晶体(包括多晶型体)、制备方法和药物晶体的表征讨论于Solid-State Chemistry of Drugs,S.R.Byrn,R.R.Pfeiffer和J.G.Stowell,第二版,SSCI,West Lafayette,Indiana(1999)。
[0066] 在其中利用溶剂的结晶技术中，溶剂一般根据一个或多个因素选择，所述因素包括但不限于例如化合物的溶解度、所用的结晶技术和溶剂的蒸气压。可利用溶剂的组合。例如，可使化合物在第一溶剂中增溶以得到溶液，然后加入抗溶剂以减小溶液中化合物的溶解度，并沉淀晶体形成物。抗溶剂为其中化合物具有低溶解度的溶剂。
[0067] 可将晶种加到任何结晶混合物以促进结晶。可用引晶控制特定多晶型体的生长，和/或控制结晶产物的晶粒尺寸分布。因此，所需晶种的量的计算取决于可用晶种的尺寸和平均产物颗粒的期望尺寸，如“Programmed Cooling Batch Crystallizers”，J.W.Mullin和J.Nyvlt,Chemical Engineering Science,1971,26,369-377所述。一般需要小尺寸的晶种，以有效控制批料中的晶体生长。通过大晶体过筛、研磨或微粉化，或者通过溶液微晶化，可产生小尺寸的晶种。在晶体研磨或微粉化中，应注意避免结晶性从期望的结晶型改变(即，变成非晶型或其它多晶型)。
[0068] 可在真空下过滤经冷却的结晶混合物，经分离的固体产物用适合溶剂(例如，冷的重结晶溶剂)洗涤。洗涤后，产物可在氮吹扫下干燥以得到所需的结晶型。产物可通过适合的光谱或分析技术分析，包括但不限于例如差示扫描量热法(DSC)、X-射线粉末衍射(XRPD)和热重分析(TGA)，以保证化合物的结晶型已经形成。所得的结晶型可按基于结晶过程中初始使用化合物重量的大于约70％重量的分离产率的量生成，优选大于约90％重量分离产率。可任选通过共研磨或通过网筛使产物去块。
[0069] X-射线粉末衍射(XRPD)研究：在装配有自动化3*15零背景样品架的透射反射样品台的荷兰PANalytical Empyrean X-射线衍射仪上收集X-射线粉末衍射(XRPD)图案。所用辐射源为(Cu，kα，Kα1 1.540598；Kα2 1.544426；Kα2/Kα1强度比例：0.50)，其中电压设定在45KV，电流设定在40mA，X-射线的束发散度，即样品上X-射线约束的有效尺寸，为10mm，采用θ-θ连续扫描模式，得到3°～40°的有效2θ范围。取适量样品在环境条件下(约18℃～32℃)于零背景样品架圆形凹槽处，用洁净的载玻片轻压，得到一个平整的平面，并将零背景样品架固定。将样品(通常为1～2mg)以0.0167°的扫描步长在3～40°2θ±0.2°范围内扫描。用于数据收集的软件为Data Collector，数据用Data Viewer和HighScore Plus分析和展示。
[0070] 差示扫描量热法(DSC)分析：DSC测量在TA InstrumentsTM型号Q2000中用密封盘装置进行。将样品(约2～6mg)在铝盘中称量，用Tzero压盖，精密记录到百分之一毫克，并将样品转移至仪器中进行测量。仪器用氮气以50mL/min吹扫。在室温到300℃之间以10℃/min的加热速率收集数据。以吸热峰向下进行绘图,数据用TA Universal Analysis分析和展示。
[0071] 热重分析(TGA)：TGA测量在TA InstrumentsTM型号Q500中用敞口装置进行。将样品(约10mg～30mg)放入预先去皮的铂坩埚。仪器精密称量样品的重量，并由仪器记录到千分之一毫克。天平用氮气以40mL/min吹扫，样品用氮气以60mL/min吹扫。在室温到300℃之间以10℃/min的加热速率收集数据,数据用TA Universal Analysis分析和展示。
[0072] 1H NMR谱使用Bruker 400MHz或600MHz核磁共振谱仪记录。固态13C NMR谱使用Bruker 100MHz核磁在常温(从21～25℃)。1H NMR谱以CDC13、DMSO-d6、CD3OD或丙酮-d6为溶剂(以ppm为单位)，用TMS(0ppm)或氯仿(7.25ppm)作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s(singlet，单峰)、d(doublet，双峰)、t(triplet，三重峰)、m(multiplet，多重峰)、br(broadened，宽峰)、dd(doublet of doublets，双二重峰)、dt(doublet of triplets，双三重峰)。偶合常数J，单位用赫兹(Hz)表示。
[0073] 低分辨率质谱(MS)数据的测定条件是：Agilent 6120四级杆HPLC-MS(柱子型号：Zorbax SB-C18,2.1×30mm,3.5微米,6min,流速为0.6mL/min。流动相：5％～95％(含0.1％甲酸的CH3CN)在(含0.1％甲酸的H2O)中的比例)，采用电喷雾电离(ESI)，在210nm/254nm下，用UV检测。
[0074] 本发明采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析并确定式(I)所示化合物与无机碱的成盐比例。测定条件为：Agilent 7800ICP-MS系统，采用He模式，Sc45作为内标元素。
附图说明
[0075] 图1为式(I)所示化合物的单锂盐晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图。
[0076] 图2为式(I)所示化合物的单钾盐晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图。
[0077] 图3为式(I)所示化合物的单胆碱盐晶型A的X-射线粉末衍射(XRPD)图。
[0078] 图4为式(I)所示化合物的单锂盐晶型A的差示扫描量热(DSC)曲线。
[0079] 图5为式(I)所示化合物的单钾盐晶型A的差示扫描量热(DSC)曲线。
[0080] 图6为式(I)所示化合物的单胆碱盐晶型A的差示扫描量热(DSC)曲线。
具体实施方式
[0081] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
[0082] 具体实施方法
[0083] 化合物N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺的具体合成方法参照专利CN 103965199A中的实施例3，并且将其中的内容整体并入本发明中。
[0084] 实施例
[0085] 实施例1 N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺的单锂盐晶型A
[0086] 1.题述单锂盐晶型A的制备
[0087] 向反应瓶中加入乙醇(30mL)和N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(2.00g，4.53mmol)，室温搅拌，加入氢氧化锂(141mg，5.89mmol)的乙醇(10mL)溶液，升温至回流搅拌1小时，降温至室温，搅拌半小时，抽滤，滤饼
60℃干燥24h，得到浅黄色固体(1.84g，90.8％)。
[0088] 2.题述单锂盐晶型A的鉴定
[0089] (1)通过电感耦合等离子体质谱分析，所述式(I)化合物与氢氧化锂的成盐比例为1：1。
[0090] (2)通过Empyrean X射线粉末衍射(XRPD)分析，题述单锂盐晶型A的X-射线粉末衍射图如图1所示，可存在±0.2°的误差容限。
[0091] (3)通过TA Q2000差示扫描量热(DSC)分析，题述单锂盐晶型A的差示扫描量热曲线如图4所示，其包含209.24℃的吸热峰，存在±3℃的误差容限。
[0092] 实施例2 N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺的单钾盐晶型A
[0093] 1.题述单钾盐晶型A的制备
[0094] 向反应瓶中加入乙醇(30mL)、N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(2.00g，4.53mmol)，室温搅拌，加入氢氧化钾(280mg，4.99mmol)的乙醇(10mL)溶液，升温至回流搅拌1小时，降温至室温，搅拌半小时，抽滤，滤饼
60℃干燥24h，得到浅黄色固体(2.11g，97.1％)。
[0095] 2.题述单钾盐晶型A的鉴定
[0096] (1)通过电感耦合等离子体质谱分析，所述式(I)化合物与氢氧化钾的成盐比例为1：1。
[0097] (2)通过Empyrean X射线粉末衍射(XRPD)分析，题述单钾盐晶型A的X-射线粉末衍射图如图2所示，可存在±0.2°的误差容限。
[0098] (3)通过TA Q2000差示扫描量热(DSC)分析，题述单钾盐晶型A的差示扫描量热曲线如图5所示，其包含301.12℃的吸热峰，存在±3℃的误差容限。
[0099] 实施例3 N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺的单胆碱盐晶型A
[0100] 1.题述单胆碱盐晶型A的制备
[0101] 向反应瓶中加入乙醇(40mL)和N-(5-(3-氰基吡唑[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(2.00g，4.53mmol)，室温搅拌，加入胆碱水溶液(1.56g，46％w/w，5.89mmol)，升温至回流搅拌1小时，降温至室温，搅拌半小时，抽滤，滤饼60℃干燥
24h，得到黄色固体(1.91g，77.4％)。
[0102] 2.题述单胆碱盐晶型A的鉴定
[0103] (1)通过氢谱核磁检测分析，所述式(I)化合物与胆碱的成盐比例为1：1。
[0104] (2)通过Empyrean X射线粉末衍射(XRPD)分析，题述单胆碱盐晶型A的X-射线粉末衍射图如图3所示，可存在±0.2°的误差容限。
[0105] (3)通过TA Q2000差示扫描量热(DSC)分析，题述单胆碱盐晶型A的差示扫描量热曲线如图6所示，其包含215.43℃的吸热峰，存在±3℃的误差容限。
[0106] 实施例4药代动力学实验
[0107] 分析用的LC/MS/MS系统包括Agilent 1200系列真空脱气炉，二元注射泵，孔板自动采样器，柱恒温箱，带电喷雾电离(ESI)源的Agilent G6430三级四级杆质谱仪。定量分析在MRM模式下进行，MRM转换的参数如表A所示：
[0108] 表A：
[0109]多反应检测扫描 490.2→383.1
碎裂电压 230V
毛细管电压 55V
干燥气温度 350℃
雾化器 40psi
干燥气流速 10L/min
[0110] 分析使用Agilent XDB-C18，2.1×30mm，3.5μM柱，注入5μL样品。分析条件：流动相为0.1％的甲酸水溶液(A)和0.1％的甲酸甲醇溶液(B)。流速为0.4mL/min。流动相梯度如表B所示：
[0111] 表B：
[0112]时间 流动相B的梯度
0.5min 5％
1.0min 95％
2.2min 95％
2.3min 5％
5.0min 终止
[0113] 此外，用于分析的还有Agilent 6330系列LC/MS/MS光谱仪，配备有G1312A二元注射泵，G1367A自动采样器和G1314C UV检测器；LC/MS/MS光谱仪采用ESI放射源。使用标准液对每一个分析物进行合适的阳离子模型处理和MRM转换进行最佳的分析。在分析期间使用Capcell MP-C18柱，规格为：100×4.6mm I.D.，5μM(Phenomenex,Torrance,California,USA)。流动相是5mM醋酸铵，0.1％甲醇水溶液(A)：5mM醋酸铵，0.1％甲醇乙腈溶液(B)(70/30，v/v)；流速为0.6mL/min；柱温保持在室温；注入20μL样品。
[0114] 将制备的各盐型的晶型分别与制剂辅料混合后灌入胶囊中，分别以约为2.5mg/kg、5.0mg/kg、7mg/kg或10mg/kg灌胃给予比格犬后，在时间点为0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12和24小时取血(0.3mL)，制备含药血浆，并在3,000或4,000rpm下离心2～10分钟。用LC-MS/MS分析(采用Agilent 1200或Agilent G6430系列LC/MS/MS光谱仪)血浆中的药物浓度，采用WinNonlin软件非房室模型法计算药动学参数。具体参数见表1。
[0115] 表1：本发明制备的各盐型的晶型在比格犬内的药代动力学数据
[0116]
[0117]
[0118] 结论：从表1结果可见，本发明单锂盐晶型A、单钾盐晶型A和单胆碱盐晶型A的Cmax、AUClast均比式(I)所示化合物的大，表明单锂盐晶型A、单钾盐晶型A和单胆碱盐晶型A在比格犬体内的暴露量大，吸收良好，其药代动力学性质显著优于式(I)所示化合物。
[0119] 实施例5稳定性试验
[0120] 取样品适量(100～200mg)，平铺于洁净培养皿中，摊成厚度≤5mm的薄层，分别在高温(60±2℃)、高湿(25±2℃,90％±5％相对湿度)、光照(可见光4500lx±500lx，紫外光不低于0.7W·h/m2，25±2℃，60％±5％相对湿度)和常温(25±2℃，65％±5％相对湿度)条件下进行稳定性试验(高温、高湿光照和常温条件放置10天)，分别于第5天、10天取样进行检验，采用HPLC仪通过峰面积归一化法计算杂质含量，仪器和测试条件见表2。
[0121] 表2：仪器和测试条件
[0122]
[0123] 实验结论：实验结果表明，本发明制备的各盐型的晶型在高温(60℃)、高湿(25℃,RH 90％±5％)条件下，外观和纯度均无明显变化，稳定性效果好，适合制药用途。
[0124] 实施例6引湿性试验
[0125] 取本发明制备的各盐型的晶型供试样品适量，采用动态水分吸附仪测试其引湿性。实验结果证明，本发明所述的盐不易受高湿度影响而潮解。
[0126] 实施例7溶解度实验
[0127] 称取本测试样品(本发明所述单锂盐晶型A、单钾盐晶型A或单胆碱盐晶型A)约5mg，置于30mL西林瓶中，加入15mL纯化水，于37℃水浴震荡槽中振摇，观察西林瓶中溶解情况，若溶解完全，可分多次少量加入测试样品至溶液饱和，无法继续溶解。继续震荡24h/48h后，取西林瓶中37℃饱和溶液适量，用滤膜(聚醚砜，0.45μm，13mm，津腾)过滤，弃初滤液
2mL，并分别迅速精密量取600μL续滤液与600μL乙腈混合均匀，即得平衡溶解度供试品溶液，使用外标法检测得到测试样品的溶解度。
[0128] 分析使用Agilent ZORBAX SB-C18，4.6×50mm，5μM柱(或其他适用的色谱柱)，检测器为UV检测器，检测波长264nm，流速为1.0mL/min，柱温35℃，进样量为10μL，流动相为10mM磷酸二氢钠缓冲液(pH 3.0):乙腈＝50:50，运行时间为7min。
[0129] 结论：本发明所述的各盐型的溶解度均较好。
[0130] 出于清楚和理解的目的，前面公开的已通过说明和实施例在一些细节上作了描述。本发明已参考不同的具体及优选的实施方案和技术作了描述。然而，应了解，在保持在本发明精神和范围之内的同时，可进行许多变化和修改。在权利要求范围内可实施变化和修改对于本领域技术人员而言是显而易见的。因此，应了解，以上描述旨在说明性的，不为限制性的。因此，本发明的范围不应参考以上描述而确定，而应参考权利要求连同这些权利要求的等价的完全范围而确定。
