急性胰腺炎特异性代谢物及其应用

摘要

本发明公开了急性胰腺炎特异性代谢物及其应用，具体的涉及代谢物为(+)‑S,S‑乙胺丁醇。本发明公开了(+)‑S,S‑乙胺丁醇在急性胰腺炎诊断和治疗中的应用。本发明同时公开了(+)‑S,S‑乙胺丁醇在筛选治疗急性胰腺炎的药物中的应用。

权利要求

1.检测(+)-S,S-乙胺丁醇的试剂在制备诊断小鼠急性胰腺炎的试剂盒中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括通过色谱、光谱或质谱法进行检测的试剂。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述色谱包括GC，CE，LC；光谱包括UV/ Vis，IR，NIR和NMR；质谱仪包括ESI、四极质谱仪、离子阱质谱仪、TOF(飞行时间)质谱仪、Orbitrap质谱仪、扇形磁场质谱仪、扇形静电场质谱仪、离子回旋共振(ICR)以及它们的组合，所述组合包括单级四极杆(Q)和三级四极杆(QqQ)，QqTOF，TOF-TOF，Q-Orbitrap，APCI-QqQ， APCI-QqTOF，MALDI-QqQ，MALDI-QqTOF和MALDI-TOF-TOF。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，LC包括HPLC、UHPLC。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括内标。

6.(+)-S,S-乙胺丁醇在筛选治疗小鼠急性胰腺炎的候选药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括步骤：

将待筛选物质加入含有(+)-S,S-乙胺丁醇的培养体系，和检测所述体系中(+)-S,S-乙胺丁醇的含量，

若待筛选物质可减少(+)-S,S-乙胺丁醇的含量，则表明该待筛选物质是治疗小鼠急性胰腺炎的候选药物。

8.(+)-S,S-乙胺丁醇的抑制剂在制备治疗小鼠急性胰腺炎的药物组合物中的应用。

说明书

急性胰腺炎特异性代谢物及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于生物技术领域，涉及急性胰腺炎特异性代谢物及其应用。

背景技术

[0002] 急性胰腺炎(Acute pancreatitis，AP)是一种因胰腺局部损伤，胰腺腺泡内胰酶被激活，进而通过激活全身细胞因子发生级联反应，导致胰腺及周围组织出现自身消化、水肿、出血甚至坏死的炎症反应疾病(Spanier B,Bruno MJ,Dijkgraaf MG.Incidence and mortality of acute and chronic pancreatitis in the Netherlands:a nation wide record-linked cihort study for the years 1995-2005[J].World J Fastroentero,2013,19:3018-3026.)。多数患者以上腹部疼痛为首发症状就诊，随着病情进展，严重者可放射至背部，伴腹胀、恶心、呕吐，根据病情严重程度，可将AP分为三种类型，轻症急性胰腺炎(Mild acute pancreatitis，MAP)，中度重症急性胰腺炎(Moderately severe acute pancreatitis，MSAP)及重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis，SAP)。轻症急性胰腺炎患者病情较轻，不伴有器官功能衰竭，局部或者全身并发症及死亡率低，一般1-2周内可恢复。中重症急性胰腺炎患者发生短暂性器官功能障碍并产生局部或全身并发症的可能性低，不伴有持续性器官功能障碍或衰竭，死亡率低于重度急性胰腺炎。重症急性胰腺炎患者病情进展迅速，大多数患者会发生全身炎症性反应、多器官功能衰竭，甚至死亡。临床上急性胰腺炎的病死率达5％-10％，重症患者病死率高达36％～50％(Lankisch PG,Apte M,Banks PA.Acute pancreatitis[J].Lancet,2015,386(9988):85-96.DOI:10.101 6/s0140-673 6.(14)60649-8.)。因此尽早判断急性胰腺炎患者的病情严重程度，鉴别病情变化，尤其是及时对重症患者早期诊断，严密监测病情变化，并积极治疗，对减少并发症、提高患者生存率、改善预后、减少住院天数、减轻经济压力等至关重要。

[0003] 代谢组学是一门新兴发展的学科，作为系统生物学的最下游，是基因组学、转录组学和蛋白质组学之后系统生物学的重要组成部分。代谢组学整体的研究模式可以帮助更加全面的理解代谢物质在疾病发生、发展过程中的变化规律，因此被普遍应用于疾病的诊断、治疗和疗效评估等方面。作为基因组学和蛋白质组学的延伸，代谢组学比前两者更能说明确实已经发生了的事情，反映的是基因、环境、致病因素、营养、药物等诸多因素综合作用于机体后的总的反应，是基因表达的终产物，分析结果提供的信息也较基因组学和蛋白组学更为全面。通过一系列的数据采集手段得到包含全部代谢产物信息的指纹图谱，并利用化学计量学对这些信息进行提取，找出有用的信息，通过对上述小分子代谢产物的分析给出最终的、整体的结果。因此研究急性胰腺炎的代谢组学，对于发病机制的揭示以及疾病的诊断、治疗和疗效评估具有重要的意义。

发明内容

[0004] 为了弥补现有诊治技术的不足，本发明的目的在于提供一种与急性胰腺炎相关的代谢生物标志物，通过检测该代谢生物标志物的水平，可以判断患者是否患有急性胰腺炎，以及采用药物治疗后，急性胰腺炎是否有所好转，从而为急性胰腺炎的个性化诊治提供指导。

[0005] 本发明提供了(+)-S,S-乙胺丁醇((+)-S,S-Ethambutol)在制备诊断急性胰腺炎的试剂盒中的应用。

[0006] 进一步，所述试剂盒包括通过色谱、光谱或质谱仪/光谱法进行检测代谢物含量的试剂。

[0007] 进一步，所述色谱包括GC，CE,LC,HPLC和UHPLC；光谱包括UV/Vis，IR，NIR和NMR；质谱仪/光谱法包括ESI、四极质谱仪、离子阱质谱仪、TOF(飞行时间)质谱仪、Orbitrap质谱仪、扇形磁场质谱仪、扇形静电场质谱仪、离子回旋共振(ICR)以及它们的组合，包括单级四极杆(Q)和三级四极杆((QqQ)，QqTOF，TOF-TOF，Q-Orbitrap，APCI-QqQ，APCI-QqTOF，MALDI-QqQ，MALDI-QqTOF和MALDI-TOF-TOF。

[0008] 本发明提供了一种诊断急性胰腺炎的试剂盒，所述试剂盒包括检测(+)-S,S-乙胺丁醇的试剂。

[0009] 进一步，所述试剂盒还包括内标。所述内标包括但不限于：D5-色氨酸、D3-肉碱、D5-甘氨胆酸、D8-缬氨酸、LPC19:0和D3-脂肪酸18:0。

[0010] 进一步，所述试剂盒利用基于液相色谱质谱联用技术来检测代谢物(+)-S,S-乙胺丁醇的浓度。

[0011] 本发明提供了(+)-S,S-乙胺丁醇在筛选治疗急性胰腺炎的候选药物中的应用。

[0012] 进一步，筛选步骤如下：

[0013] 将待筛选物质加入含有(+)-S,S-乙胺丁醇的培养体系，和

[0014] 检测所述体系中(+)-S,S-乙胺丁醇的含量，

[0015] 若待筛选物质可减少(+)-S,S-乙胺丁醇的含量，则表明该待筛选物质是治疗急性胰腺炎的候选药物。

[0016] 本发明提供了(+)-S,S-乙胺丁醇的抑制剂在制备治疗急性胰腺炎的药物组合物中的应用。

[0017] 本发明提供了(+)-S,S-乙胺丁醇在构建预测急性胰腺炎的计算模型中的应用。

[0018] 本发明提供了(+)-S,S-乙胺丁醇在制备预测药物治疗急性胰腺炎的治疗应答产品中的应用。

[0019] 进一步，所述产品包括检测(+)-S,S-乙胺丁醇含量的试剂。

[0020] 本发明的优点和有益效果：

[0021] 本发明首次发现了与急性胰腺炎相关的代谢物-(+)-S,S-乙胺丁醇，通过检测(+)-S,S-乙胺丁醇的水平，可以判断受试者是否患有急性胰腺炎。

[0022] 本发明首次发现了药物治疗可以改变代谢物-(+)-S,S-乙胺丁醇的水平，通过检测(+)-S,S-乙胺丁醇的水平，可以判断受试者对药物的治疗应答反应。

附图说明

[0023] 图1是小鼠血清淀粉酶含量图。

[0024] 图2是小鼠胰腺组织图。

[0025] 图3是小鼠胰腺组织病理改变图。

[0026] 图4是QC样本正负离子(ES+/-)模式BPI和TIC图，其中，图A是正离子(ES+)模式BPI图，图B是正离子(ES+)模式TIC图，图C是负离子(ES-)模式BPI图，图D是负离子(ES-)模式TIC图。

[0027] 图5是OPLS-DA分析图。

具体实施方式

[0028] 为了评估代谢物与急性胰腺炎之间的相关性，本发明通过收集正常与急性胰腺炎，以及药物治疗急性胰腺炎的样本，综合分析样品的代谢组学，首次发现了与急性胰腺炎相关的代谢物(+)-S,S-乙胺丁醇，将代谢物与胰腺炎信息整合，从而实现急性胰腺炎患者的个性化诊治。

[0029] (+)-S,S-乙胺丁醇((+)-S,S-Ethambutol)，化合物ID为CSID13433，分子式为C10H24N2O2，在胰腺炎样本中的含量增加，使用药物治疗后，该化合物的水平显著下调，且与正常对照无显著差异。

[0030] 本文使用的术语“代谢生物标志物”或短的“生物标志物”被定义为适合作为急性胰腺炎存在和状态的指标化合物，这种化合物是哺乳动物体内的代谢过程中出现的代谢物或代谢化合物。术语“生物标志物”和“代谢生物标志物”通常在本发明的上下文中同义使用，并且通常是指一种代谢物的量或两种或更多种代谢物的含量或比率。因此，术语“代谢生物标志物”或“生物标志物”也包括两种或更多种代谢物之间的含量或比率。

[0031] 术语代谢物的“差异水平”可包括任何升高或降低的水平。作为可选择的实施方案，差异水平意指提高了以下数值的水平：至少5％；至少10％；至少20％；至少30％；至少40％；至少50％；至少60％；至少70％；至少80％；至少90％；至少100％；至少110％；至少
120％；至少130％；至少140％；至少150％；或更高的水平。作为另外一种可选择的实施方案，差异水平意指降低了以下数值的水平：至少5％；至少10％；至少20％；至少30％；至少
40％；至少50％；至少60％；至少70％；至少80％；至少90％；至少100％(即无代谢物)。以具有统计学意义(即如由采用或者Student T-检验、Welch′s T-检验或者Wilcoxon′s秩和检验(rank-sum Test)确定的、小于0.05的p值和/或小于0.10的q-值)的差异水平表达代谢物。

[0032] 术语“代谢物”意指由代谢产生的或必需用于或参与具体代谢过程的任何物质。该术语不包括大的巨大分子，诸如大的蛋白质(如分子量超过2,000、3,000、4,000、5,000、6,000、7,000、8,000、9,000或10,000的蛋白质)；大的核酸(如分子量超过2,000、3,000、4,
000、5,000、6,000、7,000、8,000、9,000或10,000的核酸)；或大的多糖(如分子量超过2,
000、3,000、4,000、5,000、6,000、7,000、8,000、9,000或10,000的多糖)。本术语代谢物包括在化学反应中的信号转导分子和中间体，所述反应将源于食物的能量转换为可用的形式，包括，但不限于：糖、脂肪酸、氨基酸、核苷、抗氧化剂、维生素、辅助因子、脂质、在细胞过程(cellular processes)中形成的中间体和其它小分子。

[0033] 在本发明中，代谢物的水平或含量可为以下的一个或多个：代谢物的绝对或相对量或浓度；代谢物的存在或缺乏；代谢物的量或浓度的范围；代谢物的最小和/或最大量或浓度；代谢物的平均量或浓度；和/或代谢物的中位数量或浓度。作为一种可选择的实施方案，对于代谢物的组合的水平也可为相关彼此的两个或更多个代谢物的绝对或相对量或浓度的比值。可通过检测在一个或多个适当的患者中所需代谢物的水平，确定对于特定疾病状态、其显型或缺乏的适当代谢物的阳性和阴性参考水平，且这样的参考水平可被修改使之适合于特殊的患者群体(如，参考水平可为年龄相匹配的，以便可在得自某个年龄的患者样品中的代谢物水平与在某个年龄组中的具体疾病状态、其显型或缺乏的参考水平之间进行比较)。作为另外一种可选择的实施方式，参考水平可被修改使之适合于特殊的技术，所述技术可被用于检测生物样品中的代谢物水平(如LC-MS、GC-MS等)，在那里代谢物水平基于所用的特殊技术可不同。

[0034] 生物样本取自哺乳动物，优选为小鼠，大鼠，豚鼠，狗，小型猪或人，最优选为人。任何含有目标代谢物的生物样品在本文中是有用的。实例包括，但不限于，血液(血清/血浆)、脑脊髓液(CSF)、尿液、粪便、呼气、唾液或任何组织的活检样品。

[0035] 对于测定生物样品中代谢物浓度，使用定量分析方法，例如色谱法、光谱法和质谱法，而质谱法是特别优选的。色谱可以包括GC，LC，HPLC和UHPLC；光谱可包括UV/Vis，IR和NMR；质谱分析器/光谱可以包括ESI-QqQ，ESI-QqTOF，MALDI-QqQ，MALDI-QqTOF和MALDI-TOF-TOF。更优选地，质量分析器/光谱分析包括四极杆质量分析器，离子阱质谱分析器，TOF(飞行时间)质量分析器、轨道阱质量分析器、磁式扇形质量分析器、静电场扇形质量分析器(Electrostatic Sector Mass Analyzer)、离子回旋共振(ICR)以及质量分析器的组合(包括单四极杆(Q)和三重四极杆(QqQ)，QqTOF，TOF-TOF，Q轨道阱)。优选是使用FLA-和HPLC-串联质谱法。

[0036] 其中，GC＝气相色谱，CE＝毛细管电泳，LC＝液相色谱，HPLC＝高度液相色谱，UHPLC＝超高效液相色谱，UV-Vis＝紫外可见，IR＝红外，NIR＝近红外，NMR＝核磁共振，ESI＝电子喷雾电离，MALDI＝基质辅助激光解吸/电离，TOF＝飞行时间，APCI＝大气压化学电离，QqQ＝三重四极杆配置(也称为Qlq2Q3(Q1和Q3四极杆是质量过滤器，q2是无质量分辨四极杆(no mass-resolving quadrupole)))。

[0037] 尽管使用一种代谢物对于诊断急性胰腺炎疾病就足够了，但使用一种或多种，两种或多种，三种或多种，或四种或多种这样的代谢物包括在本发明内，并且在许多情况中，这是优选的。可以分析代谢物，并且以任意组合用于诊断。

[0038] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。

[0039] 实施例1中药对急性胰腺炎的治疗

[0040] 1、实验材料

[0041] 1.1实验主要材料

[0042] 表1使用材料清单

[0043]

[0044]

[0045] 1.2实验主要器材

[0046] 手术器械：无菌显微弯镊2把，眼科剪2把，持针钳1把，手术刀1把。

[0047] 其他：干棉球，医用棉签，缝合线，手术灯，手术板，固定橡皮筋，酒精棉，无菌纱布，无菌培养皿，生理盐水，10mL注射器，1mL注射器，4号缝合针。

[0048] 2、实验方法

[0049] 2.1动物分组

[0050] 30只SPF级C57BL/6小鼠，雄性，8周龄，20g左右，适应性饲养1周后随机分为五组，每组6只，分组情况如表2所示：

[0051] 表2小鼠分组情况

[0052]

[0053] 2.2药物配制

[0054] 表3药物配制

[0055]

[0056] 2.3动物模型构建及药物处理

[0057] 实验小鼠制模前禁食12h，不禁水。对照组注射等体积生理盐水，其余各组接受7次腹腔注射雨蛙肽(50μg/kg，每次间隔1h)，最后一次注射完后，腹腔注射30mg/kg剂量的LPS，制备AP模型。大黄酸治疗组、和厚朴酚治疗组、大黄酸+和厚朴酚治疗组于首次注射雨蛙肽后1h、5h、9h分别尾静脉注射0.2％大黄酸4mg/kg，腹腔注射和厚朴酚5mg/kg。

[0058] 2.4血清和胰腺的收集

[0059] 模型构建完成后，即首次注射雨蛙肽7h后，小鼠眼眶采血。于首次腹腔注射雨蛙肽12h后在无菌状态下进行小鼠眼球取血，全血室温放置2h或4℃过夜后，6000r/min，离心
5min，收集血清，-80℃保存备用。同时取胰腺组织，拍照，在同样的位置将胰腺组织分为2份，1份用福尔马林溶液固定，1份直接液氮速冻后放-80℃冻存备用。

[0060] 2.5血清淀粉酶的检测

[0061] 采用上海酶联生物科技有限公司的小鼠淀粉酶(AMS)试剂盒(ELISA)检测血清淀粉酶含量。

[0062] 1)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条。

[0063] 2)加样：每孔各加入标准品或待测样品50μL，加酶标抗体工作液50μL。将反应板充分混匀后置37℃恒温箱温育60min。

[0064] 3)洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。

[0065] 4)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

[0066] 5)每孔加入50μL终止液，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

[0067] 6)以标准品为横坐标，OD值为纵坐标，画出标准曲线。根据样品OD值在该曲线图上查出相应样本中待测因子蛋白含量。

[0068] 2.6胰腺组织的HE染色

[0069] 1)石蜡切片制作

[0070] ①切片：包埋后的组织块经修整后，用切片机切成5μm的石蜡带。

[0071] ②贴片：将组织石蜡块在50℃温水中展片，然后用处理干净的载玻片捞片，组织带可黏在载玻片上。

[0072] ③烤片：60℃恒温箱内烤片2h。

[0073] 2)脱蜡和水化

[0074] ①60℃恒温箱中烘烤20min。

[0075] ②二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min；

[0076] ③无水乙醇中浸泡5min；

[0077] ④95％乙醇中浸泡5min；

[0078] ⑤70％乙醇中浸泡5min；

[0079] ⑥50％乙醇中浸泡5min；

[0080] ⑦纯水中浸泡5min；

[0081] 3)苏木素染色5min；盐酸乙醇分化5s；

[0082] 4)自来水返蓝15min。

[0083] 5)伊红染色5min。

[0084] 6)95％乙醇快速清洗2次。

[0085] 7)无水乙醇2min快速脱水，二甲苯透明5min*3。

[0086] 8)树胶封片，镜检拍照。

[0087] 3、实验结果

[0088] 3.1小鼠血清淀粉酶含量

[0089] 7h，12h小鼠血清淀粉酶含量如图1所示(*：与对照组相比，p<0.05，**：与对照组相比，p<0.01，#：与模型组相比，p<0.05，##：与模型组相比，p<0.01)，首次腹腔注射雨蛙肽7h后，测得胰腺炎小鼠模型中血清淀粉酶含量显著高于空白对照组和给药治疗组，说明小鼠胰腺炎模型构建成功，而大黄酸和厚朴酚力联合用药组的效果显著优于单独用药的效果。

[0090] 3.2小鼠胰腺组织图片

[0091] 首次注射雨蛙肽12h后，取胰腺组织拍照，结果如图2所示，相较空白对照组，模型组动物的胰腺组织有明显的水肿，大黄酸+和厚朴酚联合用药比单独使用这两种药物效果好，能够缓解胰腺炎模型小鼠的胰腺组织水肿现象。

[0092] 3.3HE染色结果

[0093] HE染色结果如图3所示，与空白对照组相比，胰腺炎模型组的细胞间间隙较大，且细胞核较多，说明炎症模型会导致巨噬细胞等聚集在炎症周围。大黄酸治疗组、和厚朴酚治疗组相对胰腺炎模型组，细胞间间隙有所减小，细胞核数目也减少了。大黄酸+和厚朴酚联合用药组相对胰腺炎模型组，能明显减少细胞核的数目，细胞间间隙也有所减小，说明联合用药能够缓解胰腺炎炎症。

[0094] 实施例2筛选与影响急性胰腺炎的相关的代谢物

[0095] 1、样本的收集

[0096] 本实验收集实施例中空白对照组、模型组以及大黄酸+和厚朴酚联合治疗组的小鼠组织样本各10例。

[0097] 2、实验信息

[0098] 2.1仪器及试剂

[0099] 表4试剂

[0100]

[0101] 表5仪器

[0102]

[0103] 2.2实验方法

[0104] 2.2.1代谢物提取

[0105] 1)取100mg组织，加入500μL的裂解液(MeOH：H2O＝1:1)；

[0106] 2)在组织破碎仪中打碎，6,500MHz，1min，振荡3次；

[0107] 3)涡旋混匀后，在-20℃冰箱中放置过夜；

[0108] 4)离心：4℃，13,000rpm，20min；

[0109] 5)取相同体积上清液冻干；

[0110] 6)加入100μL裂解液复溶，超声5min；

[0111] 7)离心：4℃，13,000rpm，20min；

[0112] 8)取上清液上机。

[0113] 2.2.2仪器参数

[0114] 1)液相条件

[0115] 柱温(℃):45

[0116] 样品温度(℃):4

[0117] 液相流速:0.35ml/min

[0118] A相:水+0.1％甲酸

[0119] B相:乙腈+0.1％甲酸

[0120] 表6液相条件

[0121]

[0122] 2)质谱条件

[0123] 在正离子采集模式下，Masslynx软件基于MSE功能对样品进行一级、二级质谱数据采集。毛细管电压：2.5kV，锥孔电压24V，离子源温度100℃，去溶剂气流速800L/h，锥孔气流速50L/h，14min内对m/z为50-1500Da的离子进行扫描，0.2s/循环。

[0124] 在负离子采集模式下，Masslynx软件基于MSE功能对样品进行一级、二级质谱数据采集。毛细管电压：2.5kV，锥孔电压25V，离子源温度100℃，去溶剂气流速600L/h，锥孔气流速10L/h，14min内对m/z为50-1500Da的离子进行扫描，0.2s/循环。

[0125] 2.2.3上机检测

[0126] 为了更好地采集数据，确保仪器的最佳状态，在正式样品上机前需要用QC样本做稳定性测试，一般将同一个QC样本重复进样10针左右，此样本为condition QC，待仪器稳定方可进样。每10针样本中间插入一个QC，确保仪器进样过程中的稳定性。

[0127] 3、实验结果

[0128] 3.1数据结果

[0129] 在本次实验中正离子共检出了15013个features、负离子共检出了10431个features。其中QC样本的BPI(base peak intensity,基峰图)和TIC(total ion Chromatogram，总离子流色谱图)如图4所示，图右上角表示峰强度，左上角标明样品名称。BPI图中的峰型比较窄、数量多，表明色谱分离效果好。

[0130] 3.2数据质控

[0131] 在仪器进行数据采集的过程中，将插在样品中间的QC样品做overlay，确定保留时间和峰强度基本保持不变；对QC样本进行PCA分析，主要是对数据进行降维分析，检测实验组间的差异性及组内的重复性，对QC样本的相关性进行分析，考察研究样本多次生物学实验的重复性，结果显示，在数据采集过程中，时间和峰强度基本保持不变；且QC样本相对集中在一起，不存在随时间变动的情况，任意两组重复实验共定量多肽强度值的Pearson相关系数均大于0.9，具有较好的一致性，说明实验仪器具有较好的稳定性。

[0132] 4、数据分析

[0133] 4.1PCA分析

[0134] 将获得的原始数据导入Progenesis QI(Waters)软件进行统计分析，首先对数据进行Lockmass的质量分数校正和保留时间的峰对齐，然后对样本进行分组，导入EZinfo软件进行差异代谢物的筛选。PCA分析是EZinfo软件分析的第一步，主要是对数据进行降维分析，可以检测实验组间的差异性及组内的重复性。在二维图中，取前两个主成分PC1，PC2来表示样本，空间分布差异越小，表示两个样本的数据越接近。重复性较好的实验，同一组内的不同样本应该聚集在一个相对集中的范围内，并可以与其他组的数据聚集区域区分开。

[0135] 4.2OPLS-DA(正交偏最小二乘法-判别分析)

[0136] 为了消除与分类不相关的噪音信息，同时也为了筛选导致分类差异的可信代谢物，选取OPLS-DA分析过滤与分类不相关的信号，即正交信号，获得OPLS-DA模型，对模型的质量用交叉验证法进行检验(即用一部分样本数据制作分组模型，另外一部分数据用来测试已分组的模型)，得到的R2X和Q2分别代表模型可解释的变量和可预测度，可对模型的优劣进行判别(详见图5)，实验中的OPLS-DA模型的R2Y和Q2分别是99％和98％，表示模型有良好的可解释能力和可预测分组能力。通过模型分析对代谢物进行VIP打分筛选，VIP分数越高的代谢物，对分组的贡献越大，本实验选取VIP>1、P value<0.05的代谢物为差异代谢物。

[0137] 5、结果

[0138] 经过数据分析发现，代谢物(+)-S,S-乙胺丁醇(Sanguisorbic acid dilactone)在空白对照组和模型组、治疗组和模型组间存在显著性差异，而在空白对照组和治疗组之间则无显著性差异，，相比空白对照组，模型组中的(+)-S,S-乙胺丁醇的含量显著增加，约增加2.98倍，相比模型组，治疗组中的(+)-S,S-乙胺丁醇的含量显著降低，约降低2.19倍，说明(+)-S,S-乙胺丁醇可作为标志物指示胰腺炎的发生，同时可以作为药物治疗有效性的监测指标，应用于药物治疗胰腺炎的效果判断。

[0139] 上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。