依达拉奉与(+)-2-莰醇的舌下用药物组合物

摘要

本发明公开了一种依达拉奉与(+)‑2‑莰醇组合物舌下给药制剂及其制备方法，其中舌下给药制剂包括依达拉奉、(+)2‑莰醇、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。舌下给药制剂，可以避免肝脏首过效应，样品稳定性好、便于运输、使用方便等优点。

权利要求

1.一种含有依达拉奉与(+)-2-莰醇的舌下片用药物组合物，其包含药学上可接受的辅料，所述的药学上的辅料包括赋形剂，其中所述赋形剂包含选自甘露醇和共聚维酮的赋形剂。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其包含质量比为1:5～5:1的甘露醇和共聚维酮作为赋形剂。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中甘露醇和共聚维酮的质量比为1:1～5:1。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中以游离碱计的依达拉奉和(+)-

2-莰醇的质量比大于4小于10或大于0.1小于1。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中以游离碱计的依达拉奉和(+)-

2-莰醇的质量比为5:1。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述(+)-2-莰醇和赋形剂的重量比为0.1:1～1:1。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述(+)-2-莰醇和赋形剂的重量比为0.3:1～1:1。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物为舌下片的形式。

9.制备根据权利要求8所述的药物组合物的方法，包括如下步骤：将(+)-2-莰醇溶于有机溶液中，将赋形剂溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂混合均匀，压片。

10.根据权利要求8所述的药物组合物，其中在每单位舌下片给予患者后的0.1到10小时内，依达拉奉血药浓度达到10～8000ng/mL，(+)-2-莰醇血药浓度达到1～200ng/mL。

11.根据权利要求8所述的药物组合物，其中在每单位舌下片给药后的0.1到6小时内，依达拉奉血药浓度达到50～5000ng/mL，(+)-2-莰醇血药浓度达到2～150ng/mL。

说明书

依达拉奉与(+)-2-莰醇的舌下用药物组合物

技术领域

[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及一种依达拉奉与(+)-2-莰醇的舌下用药物组合物及其制备方法。

背景技术

[0002] 依达拉奉(化学名：3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮)是已上市脑神经保护剂(Yakugaku Zasshi.2004,124(3):99-111)。研究表明，依达拉奉具有抗氧化活性，能够显著地改善脑缺血再灌注动物的神经缺陷症状，缩小梗死面积，降低脑损伤程度，减轻脑水肿，抑制受损脑组织的脂质过氧化。

[0003]

[0004] 依达拉奉

[0005] (分子式C10H10N2O，分子量174.20)

[0006] (+)-2-莰醇是一味常用中药天然冰片的主要成分，冰片具有“回苏开窍”、“芳香走帘”、“引药上行”之功，常作“引药”，以增加其他药物的治疗效果；《本草衍义》指出冰片“独行则势弱，佐使则有功”。动物实验及离体实验表明：冰片具有促进药物透过血脑屏障的作用。

[0007]

[0008] (+)-2-莰醇

[0009] (分子式C10H18O；分子量154.25)

[0010] 脑血管病，特别是缺血性脑血管疾病属于急性疾病，需迅速解除病症，因此注射给药是急救的首选方法。名称为“一种药物组合物及其在制备治疗脑血管病药物中的应用”的发明专利(CN101848711A)，公开了依达拉奉和(+)-2-莰醇注射液特定比例组合物在制备治疗脑血管病，特别是缺血性脑血管病药物中的应用，该组合物相比依达拉奉注射液表现出了更好的药效结果。

[0011] 然而，肌肉注射或静脉注射可以引起注射部位疼痛及剌激，需要有医护人员操作，还需注射用品等，应用上受到一定的医疗限制，并不适于院外发病的患者。

[0012] 舌下用制剂是由舌下粘膜直接吸收，舌下粘膜表面积大，渗透能力强，且粘膜下有大量毛细血管汇总至颈内静脉，经上腔静脉直接进入血液循环，给药后药物迅速吸收，起效快、定量准确、使用方便，可避免口服药物的首过效应。相较于注射剂，舌下片剂可以极大提高用药的方便性和临床病人的依从性。

[0013] 不过，包含依达拉奉和(+)-2-莰醇的舌下用药物组合物并不易于制得。本发明人发现，常见的赋形剂并不能制得合格的舌下片，或者所制得舌下片的性能(稳定性、释放速度等)并不令人满意。

[0014] 因此，现有技术仍迫切需要一种包含依达拉奉和(+)-2-莰醇的具有满意的稳定性和释放速度的舌下用药物组合物。

发明内容

[0015] 本发明的目的在于提供一种舌下用药物组合物，包括依达拉奉或其盐及(+)-2-莰醇。

[0016] (+)-2-莰醇的挥发性，使得(+)-2-莰醇在固体制剂中含量很难稳定，同时，舌下片的药物必须能快速释放，达到一定的血药浓度，才能发挥治疗效果。本发明人出乎意料地发现：采用包含甘露醇和共聚维酮组合的赋形剂，可以有效地解决上述问题。基于此发现，本发明提供了一种包含依达拉奉或其盐和(+)-2-莰醇的舌下用药物组合物，其中(+)-2-莰醇含量稳定，并且药物活性成分在舌下能快速释放并被吸收。

[0017] 为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

[0018] 一种含有依达拉奉与(+)-2-莰醇的组合物的舌下片，其特征在于含有活性成分依达拉奉或其盐与(+)-2-莰醇，以及药学上可接受的辅料，所述的药学上的辅料包括赋形剂，所述的赋形剂选自甘露醇、乳糖、右旋糖酐、半胱氨酸、甘氨酸、共聚维酮和倍他环糊精中的一种或几种，优选地，所述赋形剂包含甘露醇和共聚维酮的组合。

[0019] 在本发明的优选的舌下给药组合物中，包含甘露醇和共聚维酮作为赋形剂，其质量比为1:5～5:1；优选为1:1～5:1。

[0020] 在本发明的一些优选的实施方案中，所述赋形剂包含甘露醇、共聚维酮和微晶纤维素的组合。优选地，所述甘露醇、共聚维酮和微晶纤维素的质量比为(5～10)：(1～5)：(10～20)。

[0021] 在本发明的另外一些优选的实施方案中，所述赋形剂包含甘露醇、共聚维酮和乳糖的组合。优选地，所述甘露醇、共聚维酮和乳糖的质量比为(1～10)：(1～5)：(10～30)。

[0022] 上述舌下给药组合物中，以游离碱计的依达拉奉和(+)-2-莰醇的质量比大于4或小于1，优选的，以游离碱计的依达拉奉和(+)-2-莰醇的质量比大于4小于10或大于0.1小于1，再优选的，以游离碱计的依达拉奉和(+)-2-莰醇的质量比为5。

[0023] 上述舌下给药组合物，所述的(+)-2-莰醇和赋形剂的重量比为0.1～1，优选的，重量比为0.3～1，再优选的，(+)-2-莰醇和赋形剂的重量比为0.3～0.5。

[0024] 上述舌下给药组合物的制备方法含有如下步骤：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，赋形剂溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉和其他辅料，混合均匀，压片。

[0025] 上述舌下给药组合物，在每单位制剂给药后的大约0.1到10小时内，依达拉奉血药浓度达到10～8000ng/mL，(+)-2-莰醇血药浓度达到1～200ng/mL，优选的，在每单位制剂给药后的大约0.1到6小时内，依达拉奉血药浓度达到50～5000ng/mL，(+)-2-莰醇血药浓度达到2～150ng/mL。

附图说明

[0026] 附图1是实施例1至5的溶出曲线。

[0027] 附图2是实施例6至11的溶出曲线。

[0028] 附图3是实施例8、12至14的溶出曲线。

具体实施方式

[0029] 本发明公开了依达拉奉及(+)-2-莰醇的舌下给药制剂，本领域技术人员可以借鉴本发明的内容，结合药剂学原理，适当改进工艺参数或处方配比来实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明范围内。本发明的应用己经通过较好的实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

[0030] 实施例中提及的依达拉奉是3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮。

[0031] 以下通过实施例来进一步阐述本发明，但实施例不对本发明做任何限定。

[0032] 实施例1

[0033]物料名称 用量(g)
依达拉奉 30
(+)-2-莰醇 1.5
乳糖 39.7
羟丙甲纤 4
维素交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0034] 制备方法：将(+)-2-莰醇、依达拉奉、乳糖、羟丙甲纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0035] 实施例2

[0036]物料名称 用量(g)
依达拉奉 30
(+)-2-莰醇 2
乳糖 39.2
羟丙甲纤 4
维素交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0037] 制备方法：将(+)-2-莰醇、依达拉奉、乳糖、羟丙甲纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0038] 实施例3

[0039]物料名称 用量(g)
依达拉奉 1.5
(+)-2-莰醇 30
乳糖 39.7
羟丙甲纤 4
维素交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0040] 制备方法：将(+)-2-莰醇、依达拉奉、乳糖、羟丙甲纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0041] 实施例4

[0042]物料名称 用量(g)
依达拉奉 6
(+)-2-莰醇 30
倍他环糊 35.2
精乳糖 10
羟丙甲纤 4
维素交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0043] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，倍他环糊精溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、乳糖、羟丙甲纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0044] 实施例5

[0045] 物料名称 用量(g)依达拉奉 40
(+)-2-莰醇 8
倍他环糊 23.2
精乳糖 10
羟丙甲纤 4
维素交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0046] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，倍他环糊精溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、乳糖、羟丙甲纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0047] 实施例6

[0048]

[0049]

[0050] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，(+)-2-莰醇重量5倍量的甘露醇，少量共聚维酮溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、剩余甘露醇、共聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0051] 实施例7

[0052]物料名称 用量(g)
依达拉奉 50
(+)-2-莰醇 5
甘露醇 16.2
共聚维酮 4
交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0053] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，(+)-2-莰醇重量3倍量的甘露醇，少量共聚维酮溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、剩余甘露醇、共聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0054] 实施例8

[0055] 物料名称 用量(g)依达拉奉 30
(+)-2-莰醇 6
甘露醇 14
乳糖 22.2
共聚维酮 3
交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0056] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，甘露醇，少量共聚维酮溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、乳糖、共聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0057] 实施例9

[0058]物料名称 用量(g)
依达拉奉 30
(+)-2-莰醇 6
甘露醇 6
乳糖 29.2
共聚维酮 4
交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0059] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，甘露醇，少量共聚维酮溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、乳糖、共聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0060] 实施例10

[0061]物料名称 用量(g)
依达拉奉 30
(+)-2-莰醇 6
乳糖 31.2
共聚维酮 8
交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0062] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，(+)-2-莰醇重量5倍量的乳糖，少量共聚维酮溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、剩余乳糖、共聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0063] 实施例11

[0064]

[0065]

[0066] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，(+)-2-莰醇重量1.25倍量的乳糖，少量共聚维酮溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、剩余乳糖、共聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0067] 实施例12

[0068] 物料名称 用量(g)依达拉奉 30
(+)-2-莰醇 6
甘露醇 14
微晶纤维 22.2
素共聚维酮 3
交联羧甲 4
基纤硬维素脂钠酸镁 0.8

[0069] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，甘露醇，少量共聚维酮溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、微晶纤维素、共聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0070] 实施例13

[0071]

[0072]

[0073] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，甘露醇，共聚维酮溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0074] 实施例14

[0075] 物料名称 用量(g)依达拉奉 30
(+)-2-莰醇 6
甘露醇 14
微晶纤维 11.2
素共聚维酮 3
交联羧甲 4
基纤二维素氧钠化硅 1.1
硬脂酸镁 0.7

[0076] 制备方法：将(+)-2-莰醇溶于乙醇溶液，甘露醇，少量共聚维酮溶于水溶液中，两者合并搅拌静置，冷冻干燥，过筛，加入依达拉奉、微晶纤维素、共聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅、硬脂酸镁混合均匀，压片。

[0077] 实施例15

[0078] 稳定性试验结果：取实施例1-14样品适量，模拟上市包装，在温度40℃和60℃条件下放置10天、30天、90天取样，对其性状、含量、有关物质进行了测定，结果见下表：

[0079]

[0080]

[0081]

[0082]

[0083]

[0084]

[0085] 上述数据表明，实施例定性试验结果表明，各实施例4至14高温放置30天，稳定性均良好。其中，实施例8、12、13、14高温放置90天，稳定性较好。

[0086] 实施例16

[0087] 溶出度测定试验方法：取供试品，照溶出度与释放度测定法《中国药典》2015版(第四部0931，第二法)，以900ml水为溶出介质(其中实施例3、4采用250ml水为溶出介质)，转速50rpm，依法操作，于不同的时间点分别取样，经0.8μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；
取依达拉奉对照品适量，加20mmol/L醋酸铵/乙腈(80:20)溶解并稀释至约0.02mg/ml，备用。于254nm条件下测定供试液紫外吸收度，计算样品溶出度，结果见附图1、2、3。

[0088] 实施例17

[0089] 依达拉奉舌下片在SD大鼠血浆和脑组织分布研究：

[0090] 1.材料与方法

[0091] 1.1实验动物

[0092] Sprague-Dawley(SD)大鼠，SPF级，雄性，体重180-200g。

[0093] 来源：北京维通利华实验动物技术有限公司。

[0094] 合格证编号：11400700138404。

[0095] 许可证号：SCXK(京)2012-0001。

[0096] 食物、给水：试验前禁食12h，给药后4h后提供食物，整个实验过程不禁水。给药及样品采集过程中观察并记录动物异常反应。

[0097] 1.2受试药品

[0098] 复方依达拉奉注射液：规格12.5mg/5mL(依达拉奉和(+)-2-莰醇分别为10mg/5mL，2.5mg/5mL)。

[0099] 按实施例8处方比例制备舌下片剂，每片含依达拉奉5mg和莰醇1mg。

[0100] 1.3方法

[0101] 组1：静注给予复方依达拉奉注射液(N＝4)

[0102] 给药剂量：16mg/kg依达拉奉，4mg/kg(+)-2-莰醇，给药体积8mL/kg。血浆和脑组织样品采样时间点：2min，15min，30min，1h，2.5h，5h。在各时间点，同时采集全血和脑组织。

[0103] 组2：舌下给予1片舌下片(N＝6)。

[0104] 腹腔注射水合氯醛，使SD大鼠处于浅度麻醉状态，用50μL水润湿大鼠口腔，将药片塞入大鼠舌下，1片/只鼠，固定鼠嘴30min防止片剂掉出或滑入胃肠道。以塞入片剂到舌下的时间为0min时间点，之后分别在5min，15min，30min，1h，2.5h，5h采集全血和脑组织。

[0105] 2.实验结果

[0106] SD大鼠静脉给予复方依达拉奉注射液和舌下片后血浆中依达拉奉各项平均药代参数。

[0107]  静注 舌下
Tmax(h) 0.033 2.5
Cmax(ng/mL) 58550 4793
AUC0-5h(h*ng/mL) 18179 15638
MRTlast(h) 0.59 2.06
F(％) / 62.6

[0108] SD大鼠静脉给予复方依达拉奉注射液和舌下片后脑匀浆中依达拉奉各项平均药代参数。

[0109]   静注 舌下Tmax(h) 0.033 0.25
Cmax(ng/mL) 1405 55.3
AUC0-5h(h*ng/mL) 270 106
MRTlast(h) 0.20 1.18
F(％) / 28.5

[0110] SD大鼠静脉给予复方依达拉奉注射液和舌下片后血浆中莰醇各项平均药代参数。

[0111]  静注 舌下
Tmax(h) 0.033 1.00
Cmax(ng/mL) 1611 105
AUC0-5h(h*ng/mL) 622 353
MRTlast(h) 0.64 1.86
F(％) / 51.6

[0112] SD大鼠静脉给予复方依达拉奉注射液和舌下给予舌下片后脑匀浆中莰醇各项平均药代参数。

[0113]   静注 舌下Tmax(h) 0.033 0.5
Cmax(ng/mL) 5726 260
AUC0-5h(h*ng/mL) 1686 529
MRTlast(h) 0.34 1.31
F(％) / 28.5

[0114] 该舌下片在SD大鼠血浆和脑组织分布研究结果显示：依达拉奉与(+)-2-莰醇舌下制剂，生物利用度约(62.6％，依达拉奉；51.6％，(+)-2-莰醇)，脑内生物利用度约(28.5％，依达拉奉；28.5％，(+)-2-莰醇)，表明舌下给药依达拉奉和莰醇生物利用度均较高，满足舌下给药条件。

[0115] 依达拉奉和(+)-2-莰醇的舌下片具有较好的药代动力学性质，生物利用度高，脑通透率高；同时具有舌下片使用方便等优点。

[0116] 实施例18

[0117] 舌下片给药对局灶性脑缺血再灌损伤的保护作用

[0118] 1材料和方法

[0119] 1.1实验动物

[0120] Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清洁级，体重260-280g

[0121] 1.2受试药品

[0122] 按实施例8处方比例制备舌下片剂，共三个规格，分别含依达拉奉0.67mg和莰醇0.13mg(3mg/kg剂量组用药)；依达拉奉2.01mg和莰醇0.39mg(9mg/kg剂量组用药)；依达拉奉6mg和莰醇1.2mg(27mg/kg剂量组用药)。

[0123] 复方依达拉奉注射液，规格：5mL:12.5mg，南京先声东元制药有限公司生产[0124] 1.3实验方法

[0125] 1.3.1局灶性脑缺血再灌模型的制备

[0126] 采用颈内动脉线栓法制备大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)脑缺血再灌注模型。动物用7％水合三氯乙醛(6ml/kg)麻醉后，俯卧位固定于手术台上，消毒皮肤，颈部正中切开，分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，轻轻剥离迷走神经，结扎并剪断颈外动脉，循颈内动脉向前，结扎翼腭动脉。夹闭颈总动脉近心端，从颈外动脉的结扎线的远端作一切口，插入外径为0.285mm的尼龙线，进过颈总动脉分叉进入颈内动脉，然后徐徐插入至有轻微阻力为止(自分叉处约20mm)，阻断大脑中动脉的所有血供，右侧脑缺血2.0h后，轻轻拔出尼龙线，恢复血供进行再灌注，缝合皮肤，消毒[0127] 1.3.2动物分组与给药

[0128] 实验动物分为组合物舌下片3个剂量组(3mg/kg、9mg/kg、27mg/kg)、阳性药复方依达拉奉组(3mg/kg)及模型组，共5组。制备脑缺血模型后，将动物机率均等单盲分配至各组。组合物组动物于再灌注即时舌下给于相应规格舌下片，每鼠1片，固定鼠嘴，防止片剂掉出或滑入胃肠道，待药片完全被吸收为止；阳性药组动物于再灌注后立即尾静脉给药1次，模型组动物给于等体积的生理盐水。脑缺血后24小时评价神经缺陷症状，而后处死动物，取脑，染色，拍照测定脑梗死面积。

[0129] 1.3.3神经缺陷症状评分及脑梗死面积的测定

[0130] 采用改良Bederson 5分制法进行神经缺陷症状评价。采用单盲法评价脑缺血后大鼠的神经缺陷症状，即由试验设计者将动物按组标记，对神经缺陷症状进行评分的试验者不知道动物的分组情况，评分结束后，评分者将各种标记的评分结果呈交设计者，由设计者揭盲，获得各试验组每只动物的评分。

[0131]

[0132] 脑梗死程度的测定，动物处死后，断头取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，用生理盐水冲洗大脑表面血迹，吸去表面残留水迹，于－20℃放置20min，取出后立即于视线交叉平面垂直向下作冠状切面，并向后每隔2mm切一片，将脑片置于2％TTC染液中孵育(37℃90min)，正常脑组织染成深红色，缺血脑组织则呈苍白色，用生理盐水冲洗后，迅速将脑片从前向后按顺序排成一排，吸干表面残留水迹，拍照。

[0133] 照片用图像分析软件处理，根据公式计算左脑相应的体积以及梗死灶体积，求出梗死灶百分比。

[0134] 梗死体积计算法：

[0135] V＝t(A1+A2+A3+………+An)

[0136] t为切片厚度，A为梗死面积。

[0137] ％I＝100％×(VC-VL)/VC

[0138] ％I为梗死体积百分比，VC为对照侧(左脑半球)脑体积，VL为梗死侧(右脑半球)非梗死区域体积。

[0139] 2实验结果

[0140] 2.1对神经缺陷症状的影响

[0141] 各组动物神经缺陷症状的程度见表1，与模型组相比，组合物舌下3个剂量(3、9、27mg/kg)及阳性药复方依达拉奉(3mg/kg)均能显著改善神经缺陷症状。

[0142] 表1.依达拉奉与(+)-2-莰醇复方舌下用药对神经缺陷症状的影响

[0143] 组别 动物数 神经缺陷症状评分模型组 12 2.58±0.51
复方依达拉奉组 13 1.77±0.93*
舌下片(0.8mg) 14 2.00±0.68*
舌下片(2.4mg) 12 1.75±0.75**
舌下片(7.2mg) 13 1.54±1.05**

[0144] X±SD。与模型组相比，*p<0.05，**p<0.01

[0145] 2.2对脑梗塞面积的影响

[0146] 对脑梗塞面积的影响见表2，与模型组相比，组合物舌下3个剂量(3、9、27mg/kg)及阳性药复方依达拉奉均能显著减小动物缺血再灌后脑梗塞面积。

[0147] 表2依达拉奉与(+)-2-莰醇复方舌下用药对脑梗面积的影响

[0148]组别 动物数 脑梗面积(％)
模型组 12 35.1±11.5
复方依达拉奉组 13 22.9±13.0*
舌下片(0.8mg) 14 24.0±10.0*
舌下片(2.4mg) 12 22.0±11.4*
舌下片(7.2mg) 13 20.7±13.1**

[0149] X±SD，与模型组相比，*p<0.05，**p<0.01

[0150] 实施例19

[0151] 依达拉奉舌下片在SD大鼠血浆和脑组织分布研究：

[0152] 3.材料与方法

[0153] 1.4实验动物

[0154] Sprague-Dawley(SD)大鼠，SPF级，雄性，体重180-200g。

[0155] 来源：北京维通利华实验动物技术有限公司。

[0156] 合格证编号：11400700138404。

[0157] 许可证号：SCXK(京)2012-0001。

[0158] 食物、给水：试验前禁食12h，给药后4h后提供食物，整个实验过程不禁水。给药及样品采集过程中观察并记录动物异常反应。

[0159] 1.5受试药品

[0160] 复方依达拉奉注射液：规格12.5mg/5mL(依达拉奉和(+)-2-莰醇分别为10mg/5mL，2.5mg/5mL)。

[0161] 按实施例13处方比例制备舌下片剂，每片含依达拉奉5mg和莰醇1mg。

[0162] 1.6方法

[0163] 组1：静注给予复方依达拉奉注射液(N＝4)

[0164] 给药剂量：16mg/kg依达拉奉，4mg/kg(+)-2-莰醇，给药体积8mL/kg。血浆和脑组织样品采样时间点：2min，15min，30min，1h，2.5h，5h。在各时间点，同时采集全血和脑组织。

[0165] 组2：舌下给予1片舌下片(N＝6)。

[0166] 腹腔注射水合氯醛，使SD大鼠处于浅度麻醉状态，用50μL水润湿大鼠口腔，将药片塞入大鼠舌下，1片/只鼠，固定鼠嘴30min防止片剂掉出或滑入胃肠道。以塞入片剂到舌下的时间为0min时间点，之后分别在5min，15min，30min，1h，2.5h，5h采集全血和脑组织。

[0167] 4.实验结果

[0168] SD大鼠静脉给予复方依达拉奉注射液和舌下片后血浆中依达拉奉各项平均药代参数。

[0169]   静注 舌下Tmax(h) 0.032 0.5
Cmax(ng/mL) 56370 5875
AUC0-5h(h*ng/mL) 16038 17427
MRTlast(h) 0.59 2.63
F(％) / 79.9

[0170] SD大鼠静脉给予复方依达拉奉注射液和舌下片后脑匀浆中依达拉奉各项平均药代参数。

[0171]   静注 舌下Tmax(h) 0.032 0.25
Cmax(ng/mL) 1398 59.2
AUC0-5h(h*ng/mL) 255 110
MRTlast(h) 0.20 1.16
F(％) / 30.1

[0172] SD大鼠静脉给予复方依达拉奉注射液和舌下片后血浆中莰醇各项平均药代参数。

[0173]  静注 舌下
Tmax(h) 0.032 1.00
Cmax(ng/mL) 1571 114
AUC0-5h(h*ng/mL) 593 392
MRTlast(h) 0.63 1.93
F(％) / 60.1

[0174] SD大鼠静脉给予复方依达拉奉注射液和舌下给予舌下片后脑匀浆中莰醇各项平均药代参数。

[0175]   静注 舌下Tmax(h) 0.032 0.5
Cmax(ng/mL) 5430 273
AUC0-5h(h*ng/mL) 1729 541
MRTlast(h) 0.34 1.30
F(％) / 29.6

[0176] 该舌下片在SD大鼠血浆和脑组织分布研究结果显示：依达拉奉与(+)-2-莰醇舌下制剂，生物利用度约(79.9％，依达拉奉；60.1％，(+)-2-莰醇)，脑内生物利用度约(30.1％，依达拉奉；29.6％，(+)-2-莰醇)，表明舌下给药依达拉奉和莰醇生物利用度均较高，满足舌下给药条件。

[0177] 依达拉奉和(+)-2-莰醇的舌下片具有较好的药代动力学性质，生物利用度高，脑通透率高；同时具有舌下片使用方便等优点。

[0178] 实施例20

[0179] 舌下片给药对局灶性脑缺血再灌损伤的保护作用

[0180] 1材料和方法

[0181] 1.1实验动物

[0182] Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清洁级，体重260-280g

[0183] 1.2受试药品

[0184] 按实施例13处方比例制备舌下片剂，共三个规格，分别含依达拉奉0.67mg和莰醇0.13mg(3mg/kg剂量组用药)；依达拉奉2.01mg和莰醇0.39mg(9mg/kg剂量组用药)；依达拉奉6mg和莰醇1.2mg(27mg/kg剂量组用药)。

[0185] 复方依达拉奉注射液，规格：5mL:12.5mg，南京先声东元制药有限公司生产[0186] 1.3实验方法

[0187] 1.3.1局灶性脑缺血再灌模型的制备

[0188] 采用颈内动脉线栓法制备大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)脑缺血再灌注模型。动物用7％水合三氯乙醛(6ml/kg)麻醉后，俯卧位固定于手术台上，消毒皮肤，颈部正中切开，分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，轻轻剥离迷走神经，结扎并剪断颈外动脉，循颈内动脉向前，结扎翼腭动脉。夹闭颈总动脉近心端，从颈外动脉的结扎线的远端作一切口，插入外径为0.285mm的尼龙线，进过颈总动脉分叉进入颈内动脉，然后徐徐插入至有轻微阻力为止(自分叉处约20mm)，阻断大脑中动脉的所有血供，右侧脑缺血2.0h后，轻轻拔出尼龙线，恢复血供进行再灌注，缝合皮肤，消毒[0189] 1.3.2动物分组与给药

[0190] 实验动物分为组合物舌下片3个剂量组(3mg/kg、9mg/kg、27mg/kg)、阳性药复方依达拉奉组(3mg/kg)及模型组，共5组。制备脑缺血模型后，将动物机率均等单盲分配至各组。组合物组动物于再灌注即时舌下给于相应规格舌下片，每鼠1片，固定鼠嘴，防止片剂掉出或滑入胃肠道，待药片完全被吸收为止；阳性药组动物于再灌注后立即尾静脉给药1次，模型组动物给于等体积的生理盐水。脑缺血后24小时评价神经缺陷症状，而后处死动物，取脑，染色，拍照测定脑梗死面积。

[0191] 1.3.3神经缺陷症状评分及脑梗死面积的测定

[0192] 采用改良Bederson 5分制法进行神经缺陷症状评价。采用单盲法评价脑缺血后大鼠的神经缺陷症状，即由试验设计者将动物按组标记，对神经缺陷症状进行评分的试验者不知道动物的分组情况，评分结束后，评分者将各种标记的评分结果呈交设计者，由设计者揭盲，获得各试验组每只动物的评分。

[0193]

[0194] 脑梗死程度的测定，动物处死后，断头取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，用生理盐水冲洗大脑表面血迹，吸去表面残留水迹，于－20℃放置20min，取出后立即于视线交叉平面垂直向下作冠状切面，并向后每隔2mm切一片，将脑片置于2％TTC染液中孵育(37℃90min)，正常脑组织染成深红色，缺血脑组织则呈苍白色，用生理盐水冲洗后，迅速将脑片从前向后按顺序排成一排，吸干表面残留水迹，拍照。

[0195] 照片用图像分析软件处理，根据公式计算左脑相应的体积以及梗死灶体积，求出梗死灶百分比。

[0196] 梗死体积计算法：

[0197] V＝t(A1+A2+A3+………+An)

[0198] t为切片厚度，A为梗死面积。

[0199] ％I＝100％×(VC-VL)/VC

[0200] ％I为梗死体积百分比，VC为对照侧(左脑半球)脑体积，VL为梗死侧(右脑半球)非梗死区域体积。

[0201] 2实验结果

[0202] 2.1对神经缺陷症状的影响

[0203] 各组动物神经缺陷症状的程度见表3，与模型组相比，组合物舌下3个剂量(3、9、27mg/kg)及阳性药复方依达拉奉(3mg/kg)均能显著改善神经缺陷症状。

[0204] 表3.依达拉奉与(+)-2-莰醇复方舌下用药对神经缺陷症状的影响

[0205]

[0206]

[0207] X±SD。与模型组相比，*p<0.05，**p<0.01

[0208] 2.2对脑梗塞面积的影响

[0209] 对脑梗塞面积的影响见表4，与模型组相比，组合物舌下3个剂量(3、9、27mg/kg)及阳性药复方依达拉奉均能显著减小动物缺血再灌后脑梗塞面积。

[0210] 表4依达拉奉与(+)-2-莰醇复方舌下用药对脑梗面积的影响

[0211] 组别 动物数 脑梗面积(％)模型组 11 37.2±12.3
复方依达拉奉组 12 21.6±12.5*
舌下片(0.8mg) 14 23.4±9.3*
舌下片(2.4mg) 14 21.3±8.5*
舌下片(7.2mg) 13 19.8±10.1**

[0212] X±SD，与模型组相比，*p<0.05，**p<0.01

[0213] 实验数据表明，本发明的舌下片能达到与注射剂相当的药效。