一种基于NiCo2O4纳米片的热致增敏型甲状腺球蛋白电致化学发光免疫器转让专利
申请号 : CN201910415731.5
文献号 : CN110031529A
文献日 : 2019-07-19
发明人 : 戴宏 , 房丹丹 , 李佳宁 , 高利红 , 张书培 , 衣欢 , 郑祥钦 , 颜建英
申请人 : 福建师范大学
摘要 :
权利要求 :
1.一种基于NiCo2O4纳米片的热致增敏型甲状腺球蛋白电致化学发光免疫器,其特征在于,包括以下步骤:
(1)玻碳电极(GCE)首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光,用二次水洗去表面残留粉末,再移入超声水浴中清洗,直至清洗干净,最后依次用乙醇,稀酸和水彻底洗涤;
(2)滴加3 uL 浓度为 4 mg/mL的氨基功能化的pNiCo2O4 NSs/SWCNTs 悬浮液于干净的玻碳电极表面,红外灯下烘干,冷却至室温,制得pNiCo2O4 NSs /SWCNTs修饰电极;
(3)滴加3 uL 1 wt.% 戊二醛于步骤(2)所制得的电极界面,室温下反应40 min;
(4)滴加3 uL 浓度为50 ng/mL 的甲状腺球蛋白抗体(Ab)于步骤(3)修饰电极表面,室温下孵育40 min,用去离子水洗去物理吸附,制得Ab/pNiCo2O4 NSs/SWCNTs修饰电极;
(5)滴加 3 uL 1.0 wt.%的BSA溶液到步骤(4)修饰电极界面,室温下孵育40 min,以封闭电极表面上非特异性活性位点,用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附,并保存在4°C冰箱中备用;
(6)将步骤(5)所获得的修饰电极浸入到不同浓度的甲状腺球蛋白 (Tg)标准溶液中并在室温下反应50 min,用去离子水冲洗电极表面,制得Tg/Ab/pNiCo2O4 NSs/SWCNTs修饰电极,并保存在4°C冰箱中备用。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的氨基功能化的pNiCo2O4 NSs/SWCNTs 悬浮液由下述方法制备的:1)pNiCo2O4 NSs材料由下述方法制备的:用100 mL乙醇和200 mL去离子水配制成含有10 mM的Co(NO3)2·6H2O、5 mM Ni(NO3)2·6H2O和22.5 mM六亚甲基四胺的混合溶液,接着将该混合液转入500 mL聚四氟乙烯反应釜内衬中,150 °C下磁力搅拌
12 h,冷却至室温,离心,洗涤,在烘箱中60 °C干燥一夜,最后,在空气中350 °C下煅烧2 h得到最终产物pNiCo2O4 NSs;2)200 μL 浓度为 4 mg/mL的 pNiCo2O4 NSs溶液与 200 μL浓度为 5 mg/mL 的单壁碳纳米管(SWCNTs)溶液超声混合均匀,室温下搅拌12 h,得到pNiCo2O4 NSs/SWCNTs悬浮液;接着,向该溶液中加入100 μL 浓度为 10 mM 的3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES),室温下振荡 6 h,离心、洗涤,得到氨基功能化的pNiCo2O4 NSs/SWCNTs 悬浮液并保存在4°C冰箱中备用。
3.根据权利要求1-2任一所述的方法制备的一种基于NiCo2O4纳米片的热致增敏型甲状腺球蛋白电致化学发光免疫器。
4.权利要求3所述的一种基于NiCo2O4纳米片的热致增敏型甲状腺球蛋白电致化学发光免疫器,其特征在于,用于甲状腺球蛋白(Tg)检测,检测步骤如下:(1)使用电化学工作站采用三电极体系进行测定,以权利要求3所述的一种基于NiCo2O4纳米片的热致增敏型甲状腺球蛋白电致化学发光免疫器为工作电极,Ag/AgCl为参比电极,铂丝电极为辅助电极,在0.1 mol/mL pH 9.0的 PBS缓冲溶液中进行测试;
(2)采用电位范围0 -1 V,扫描速率0.1 V/s电位窗口,电致化学发光设备光电倍增~
管800 V对不同浓度的甲状腺球蛋白(Tg)标准溶液进行检测,通过电致化学发光设备采集 -0.5 V的ECL信号强度,通过ECL信号强度与甲状腺球蛋白(Tg)标准溶液浓度之间的关系,绘制工作曲线;
(3)待测样品溶液代替甲状腺球蛋白(Tg)标准溶液进行检测,检测的结果可通过工作曲线查得。
说明书 :
一种基于NiCo2O4纳米片的热致增敏型甲状腺球蛋白电致化学
发光免疫器
技术领域
背景技术
发明内容
(1)玻碳电极(GCE)首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光,用二次水洗去表面残留粉末,再移入超声水浴中清洗,直至清洗干净,最后依次用乙醇,稀酸和水彻底洗涤;
(2)滴加3 uL 浓度为 4 mg/mL的氨基功能化的pNiCo2O4 NSs/SWCNTs 悬浮液于干净的玻碳电极表面,红外灯下烘干,冷却至室温,制得pNiCo2O4 NSs/SWCNTs修饰电极;
(3)滴加3 uL 1 wt.% 戊二醛于步骤(2)所制得的电极界面,室温下反应40 min;
(4)滴加3 uL 浓度为50 ng/mL 的甲状腺球蛋白抗体(Ab)于步骤(3)修饰电极表面,室温下孵育40 min,用去离子水洗去物理吸附,制得Ab/pNiCo2O4 NSs/SWCNTs修饰电极;
(5) 滴加 3 uL 1.0 wt.%的BSA溶液到步骤(4)修饰电极界面,室温下孵育40 min,以封闭电极表面上非特异性活性位点,用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附,并保存在4°C冰箱中备用;
(6)将步骤(5)所获得的修饰电极浸入到不同浓度的甲状腺球蛋白 (Tg)标准溶液中并在室温下反应50 min,用去离子水冲洗电极表面,制得Tg/Ab/pNiCo2O4 NSs/SWCNTs修饰电极,并保存在4°C冰箱中备用。
(2)采用电位范围0 -1 V,扫描速率0.1 V/s电位窗口,电致化学发光设备光电倍增~
管800 V对不同浓度的甲状腺球蛋白(Tg)标准溶液进行检测,通过电致化学发光设备采集-
0.5 V的ECL信号强度,通过ECL信号强度与甲状腺球蛋白(Tg)标准溶液浓度之间的关系,绘制工作曲线;
(3)待测样品溶液代替甲状腺球蛋白(Tg) 标准溶液进行检测,检测的结果可通过工作曲线查得。
(1)由于Co /Co 和Ni /Ni 氧化还原对的贡献和具有高导电性和大比表面积的SWCNTs的支撑,形成的pNiCo2O4 NSs/SWCNTs复合物对析氧反应表现出优异的催化性能,显著增强luminol的发光信号。
附图说明
具体实施方式
(1)玻碳电极(GCE)首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光,用二次水洗去表面残留粉末,再移入超声水浴中清洗,直至清洗干净,最后依次用乙醇,稀酸和水彻底洗涤;
(2)滴加3 uL 浓度为 4 mg/mL的氨基功能化的pNiCo2O4 NSs/SWCNTs 悬浮液于干净的玻碳电极表面,红外灯下烘干,冷却至室温,制得pNiCo2O4 NSs/SWCNTs修饰电极;
(3)滴加3 uL 1 wt.% 戊二醛于步骤(2)所制得的电极界面,室温下反应40 min;
(4)滴加3 uL 浓度为50 ng/mL 的甲状腺球蛋白抗体(Ab)于步骤(3)修饰电极表面,室温下孵育40 min,用去离子水洗去物理吸附,制得Ab/pNiCo2O4 NSs/SWCNTs修饰电极;
(5)滴加 3 uL 1.0 wt.%的BSA溶液到步骤(4)修饰电极界面,室温下孵育40 min,以封闭电极表面上非特异性活性位点,用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附,并保存在4°C冰箱中备用;
(6)将步骤(5)所获得的修饰电极浸入到不同浓度的甲状腺球蛋白 (Tg)标准溶液中并在室温下反应50 min,用去离子水冲洗电极表面,制得Tg/Ab/pNiCo2O4 NSs/SWCNTs修饰电极,并保存在4°C冰箱中备用。
(1)使用电化学工作站采用三电极体系进行测定,以实施例1制得的一种基于NiCo2O4纳米片的热致增敏型甲状腺球蛋白电致化学发光免疫器为工作电极,Ag/AgCl为参比电极,铂丝电极为辅助电极,在0.1 mol/mL pH 9.0的 PBS缓冲溶液中进行测试;
(2)采用电位范围0 -1 V,扫描速率0.1 V/s电位窗口,电致化学发光设备光电倍增~
管800 V对不同浓度的甲状腺球蛋白(Tg)标准溶液进行检测,通过电致化学发光设备采集-
0.5 V的ECL信号强度,通过ECL信号强度与甲状腺球蛋白(Tg)标准溶液浓度之间的关系,绘制工作曲线,见图2;
(3)待测样品溶液代替甲状腺球蛋白(Tg)标准溶液进行检测,检测的结果可通过工作曲线查得。