一种血叶兰组培快速繁殖方法转让专利
申请号 : CN201910299596.2
文献号 : CN110036910B
文献日 : 2021-03-12
发明人 : 郑希龙 , 张雯 , 李伟杰 , 崔馨云
申请人 : 中国医学科学院药用植物研究所海南分所
摘要 :
本发明公开了一种血叶兰组培快速繁殖方法。本发明通过外植体选取及消毒、诱导培养、增殖培养、壮苗生根和移栽，获得了大量优质的血叶兰种苗。通过本发明能对血叶兰进行快速培养繁殖，并且壮苗生根阶段无需添加植物生长调节剂，培养后的血叶兰苗株成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，作为药用植物安全环保，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养血叶兰提供了技术支持。同时本组培繁殖方法消毒效果好、培养繁殖快、步骤精炼，培养周期短，约198天，降低了血叶兰在组培过程中的污染率，从而大大提高了成苗率及工作效率，节约了资源。
权利要求 :
1.一种血叶兰组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：a、外植体选取及消毒：从血叶兰母株上切取新发生的血叶兰幼苗，切除叶片后进行消毒处理，然后切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体；
b、诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基中进行培养，先进行弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为500-700lx，然后再进行常规光照培养，培养温度为(25±
1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，直至诱导出不定芽；所述的诱导培养基为：每升含有花宝1号1-2g、花宝4号0.5-1.5g、6BA 0.6-1mg、NAA 0.03-0.06mg、椰汁100-
150mL、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖28-33g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.5-5.8；
c、增殖培养：将不定芽转移至增殖培养基中进行不定芽的增殖，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1-
2g、花宝4号0.5-1.5g、6BA 1-3mg、NAA 0.4-0.6mg、椰汁100-150mL、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-
0.15g、蔗糖28-33g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.5-5.8；
d、壮苗生根：将增殖培养获得的不定芽转入壮苗生根培养基中进行培养，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，获得生根的试管苗；所述的壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号2-4g、香蕉90-140g、土豆40-80g、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-
0.15g、蔗糖10-15g、琼脂5-7g和活性炭1-2g，其余为水，pH值为5.5-5.8；
e、移栽：将试管苗在自然光下炼苗6-9天，然后取出试管苗并洗净附着在根部的培养基，移栽至培养基质中培养获得血叶兰种苗。
2.根据权利要求1所述的血叶兰组培快速繁殖方法，其特征在于，所述的从血叶兰母株上切取新发生的血叶兰幼苗，切除叶片后进行消毒处理具体为：从血叶兰母株上切取新发生的血叶兰幼苗，切除叶片，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗
30min，在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲洗5-8次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分。
3.根据权利要求1或2所述的血叶兰组培快速繁殖方法，其特征在于，所述的诱导培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1g、6BA 0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇
0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
4.根据权利要求1或2所述的血叶兰组培快速繁殖方法，其特征在于，所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇
0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
5.根据权利要求1或2所述的血叶兰组培快速繁殖方法，其特征在于，所述的壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6。
6.根据权利要求1所述的血叶兰组培快速繁殖方法，其特征在于，所述的培养基质为椰块。
说明书 :
一种血叶兰组培快速繁殖方法
技术领域：
[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种血叶兰组培快速繁殖方法。背景技术：
[0002] 血叶兰(Ludisia discolor)又名石蚕，属兰科(Orchidaceae)血叶兰属多年生草本植物。血叶兰是高档的观叶观花植物，同时还是名贵药用植物。我国医学书籍《中华本
草》、《全国中草药汇编》等均有记载，最早记载于慈济宫保生大帝药签，而今，是海南黎族医
生处方的重要药材，药用历史悠久，民间应用广泛。
草》、《全国中草药汇编》等均有记载，最早记载于慈济宫保生大帝药签，而今，是海南黎族医
生处方的重要药材，药用历史悠久，民间应用广泛。
[0003] 由于血叶兰具有很好的药用价值，而其种子在自然条件下难以萌发，资源再生慢，加上长期无节制的采挖，资源濒临枯竭。为了更好的保护血叶兰野生资源，应大力发展人工
栽培，满足市场需求，保障血叶兰资源的可持续利用。然而关于血叶兰组织培养的快繁技术
研究仍然处于初级阶段，在很大程度上阻碍了血叶兰的规模化生产。并且现有的其他兰花
品种的组织培养不能直接运用到血叶兰培养上，所以目前急需一种血叶兰组培快速繁殖方
法。
发明内容：
栽培，满足市场需求，保障血叶兰资源的可持续利用。然而关于血叶兰组织培养的快繁技术
研究仍然处于初级阶段，在很大程度上阻碍了血叶兰的规模化生产。并且现有的其他兰花
品种的组织培养不能直接运用到血叶兰培养上，所以目前急需一种血叶兰组培快速繁殖方
法。
发明内容：
[0004] 本发明的目的在于提供一种培养繁殖快，效率高的血叶兰组培快速繁殖方法。
[0005] 为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
[0006] 本发明的血叶兰组培快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0007] a、外植体选取及消毒：从血叶兰母株上切取新发生的血叶兰幼苗，切除叶片后进行消毒处理，然后切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体；
[0008] b、诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基中进行培养，先进行弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为500-700lx，然后再进行常规光照培养，培养温度为
(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，直至诱导出不定芽；所述的诱导培
养基为：每升含有花宝1号1-2g、花宝4号0.5-1.5g、6BA 0.6-1mg、NAA 0.03-0.06mg、椰汁
100-150mL、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖28-33g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.5-
5.8；
(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，直至诱导出不定芽；所述的诱导培
养基为：每升含有花宝1号1-2g、花宝4号0.5-1.5g、6BA 0.6-1mg、NAA 0.03-0.06mg、椰汁
100-150mL、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖28-33g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.5-
5.8；
[0009] c、增殖培养：将不定芽转移至增殖培养基中进行不定芽的增殖，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号
1-2g、花宝4号0.5-1.5g、6BA 1-3mg、NAA 0.4-0.6mg、椰汁100-150mL、蛋白胨1-3g、肌醇
0.05-0.15g、蔗糖28-33g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.5-5.8；
1-2g、花宝4号0.5-1.5g、6BA 1-3mg、NAA 0.4-0.6mg、椰汁100-150mL、蛋白胨1-3g、肌醇
0.05-0.15g、蔗糖28-33g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.5-5.8；
[0010] d、壮苗生根：将增殖培养获得的不定芽转入壮苗生根培养基中进行培养，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，获得生根的试管苗；所述的壮苗
生根培养基为：每升含有花宝1号2-4g、香蕉90-140g、土豆40-80g、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-
0.15g、蔗糖10-15g、琼脂5-7g和活性炭1-2g，其余为水，pH值为5.5-5.8；
生根培养基为：每升含有花宝1号2-4g、香蕉90-140g、土豆40-80g、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-
0.15g、蔗糖10-15g、琼脂5-7g和活性炭1-2g，其余为水，pH值为5.5-5.8；
[0011] e、移栽：将试管苗在自然光下炼苗6-9天，然后取出试管苗并洗净附着在根部的培养基，移栽至培养基质中培养获得血叶兰种苗。
[0012] 选用无病虫害长势良好的血叶兰植株能降低苗株的发病率，保证在组培过程中不受其他因素的干扰，增加外植体成活率。外植体的诱导培养时先进行一段时间的弱光照培
养，能够使外植体在培养过程中逐渐适应培养条件，有利于存活，同时抑制褐变的发生。
养，能够使外植体在培养过程中逐渐适应培养条件，有利于存活，同时抑制褐变的发生。
[0013] 所述的从血叶兰母株上切取新发生的血叶兰幼苗，切除叶片后进行消毒处理具体为：从血叶兰母株上切取新发生的血叶兰幼苗，切除叶片，去除表面泥沙，然后用洗洁精清
洗干净，置于流水下冲洗30min，在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸
泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无
菌水冲洗5-8次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分。
洗干净，置于流水下冲洗30min，在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸
泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无
菌水冲洗5-8次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分。
[0014] 所述的诱导培养基优选为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1g、6BA 0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
[0015] 所述的增殖培养基优选为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
[0016] 所述的壮苗生根培养基优选为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6。
[0017] 所述的培养基质优选为椰块。
[0018] 本发明的有益效果是：通过本发明能对血叶兰进行快速培养繁殖，并且壮苗生根阶段无需添加植物生长调节剂，培养后的血叶兰苗株成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性
强，作为药用植物安全环保，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为
企业规模化、产业化培养血叶兰提供了技术支持。同时本组培繁殖方法消毒效果好、培养繁
殖快、步骤精炼，培养周期短，约198天，降低了血叶兰在组培过程中的污染率，从而大大提
高了成苗率及工作效率，节约了资源。
附图说明：
强，作为药用植物安全环保，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为
企业规模化、产业化培养血叶兰提供了技术支持。同时本组培繁殖方法消毒效果好、培养繁
殖快、步骤精炼，培养周期短，约198天，降低了血叶兰在组培过程中的污染率，从而大大提
高了成苗率及工作效率，节约了资源。
附图说明：
[0019] 图1为本发明的血叶兰组培快速繁殖的流程示意图。具体实施方式：
[0020] 以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0021] 实施例1：
[0022] (1)材料选取：选取无病虫害长势良好的血叶兰植株作为母株，从母株上切取新发生的血叶兰幼苗；
[0023] (2)外植体预处理：将幼苗的叶片切除，用软刷毛在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
[0024] (3)外植体消毒：在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
[0025] (4)诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基上进行培养(接种数60个)，先进行8d的弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为600lx，然后再进行常规光照培养
60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率5％，接种后30天存活率96％；诱导培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1g、6BA
0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为
5.6；
60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率5％，接种后30天存活率96％；诱导培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1g、6BA
0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为
5.6；
[0026] (5)增殖培养：将诱导出的不定芽转移至增殖培养基中增殖培养70d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、
花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.6；
花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.6；
[0027] (6)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上的不定芽转入壮苗生根培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至4-5cm高，根
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆
50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6；
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆
50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6；
[0028] (7)移栽：当试管苗生长至4-5cm高，根2-4条，叶2-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为97％。
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为97％。
[0029] 实施例2：
[0030] (1)材料选取：选取无病虫害长势良好的血叶兰植株作为母株，从母株上切取新发生的血叶兰幼苗；
[0031] (2)外植体预处理：将幼苗的叶片切除，用软刷毛在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
[0032] (3)外植体消毒：在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
[0033] (4)诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基上进行培养(接种数60个)，先进行8d的弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为600lx，然后再进行常规光照培养
60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率6％，接种后30天存活率93％；诱导培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号
0.5g、6BA 0.7mg、NAA 0.04mg、椰汁120mL、蛋白胨2g、肌醇0.15g、蔗糖28g和琼脂5g，其余为
水，pH值为5.6；
60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率6％，接种后30天存活率93％；诱导培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号
0.5g、6BA 0.7mg、NAA 0.04mg、椰汁120mL、蛋白胨2g、肌醇0.15g、蔗糖28g和琼脂5g，其余为
水，pH值为5.6；
[0034] (5)增殖培养：将诱导出的不定芽转移至增殖培养基中增殖培养70d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；增殖培养基为：每升含有花宝1号2g、花
宝4号0.5g、6BA 3mg、NAA0.4mg、椰汁120mL、蛋白胨1g、肌醇0.15g、蔗糖28g和琼脂5g，其余
为水，pH值为5.6；
宝4号0.5g、6BA 3mg、NAA0.4mg、椰汁120mL、蛋白胨1g、肌醇0.15g、蔗糖28g和琼脂5g，其余
为水，pH值为5.6；
[0035] (6)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上的不定芽转入壮苗生根培养基中培养65d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至4-5cm高，根
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号4g、香蕉110g、土豆
40g、蛋白胨3g、肌醇0.05g、蔗糖14g、琼脂5g和活性炭1.8g，其余为水，pH值为5.6；
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号4g、香蕉110g、土豆
40g、蛋白胨3g、肌醇0.05g、蔗糖14g、琼脂5g和活性炭1.8g，其余为水，pH值为5.6；
[0036] (7)移栽：当试管苗生长至4-5cm高，根2-4条，叶2-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为96％。
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为96％。
[0037] 实施例3：
[0038] (1)材料选取：选取无病虫害长势良好的血叶兰植株作为母株，从母株上切取新发生的血叶兰幼苗；
[0039] (2)外植体预处理：将幼苗的叶片切除，用软刷毛在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
[0040] (3)外植体消毒：在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
[0041] (4)诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基上进行培养(接种数60个)，先进行8d的弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为600lx，然后再进行常规光照培养
60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率7％，接种后30天存活率94％；诱导培养基为：每升含有花宝1号1g、花宝4号1.5g、
6BA0.6mg、NAA 0.06mg、椰汁150mL、蛋白胨3g、肌醇0.05g、蔗糖29g和琼脂7g，其余为水，pH
值为5.6；
60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率7％，接种后30天存活率94％；诱导培养基为：每升含有花宝1号1g、花宝4号1.5g、
6BA0.6mg、NAA 0.06mg、椰汁150mL、蛋白胨3g、肌醇0.05g、蔗糖29g和琼脂7g，其余为水，pH
值为5.6；
[0042] (5)增殖培养：将诱导出的不定芽转移至增殖培养基中增殖培养70d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；增殖培养基为：每升含有花宝1号1g、花
宝4号1.5g、6BA 3mg、NAA 0.6mg、椰汁150mL、蛋白胨3g、肌醇0.05g、蔗糖29g和琼脂7g，其余
为水，pH值为5.6；
宝4号1.5g、6BA 3mg、NAA 0.6mg、椰汁150mL、蛋白胨3g、肌醇0.05g、蔗糖29g和琼脂7g，其余
为水，pH值为5.6；
[0043] (6)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上的不定芽转入壮苗生根培养基中培养68d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至4-5cm高，根
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉140g、土豆
60g、蛋白胨1g、肌醇0.08g、蔗糖12g、琼脂7g和活性炭1.3g，其余为水，pH值为5.6；
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉140g、土豆
60g、蛋白胨1g、肌醇0.08g、蔗糖12g、琼脂7g和活性炭1.3g，其余为水，pH值为5.6；
[0044] (7)移栽：当试管苗生长至4-5cm高，根2-4条，叶2-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为95％。
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为95％。
[0045] 实施例4：
[0046] (1)材料选取：选取无病虫害长势良好的血叶兰植株作为母株，从母株上切取新发生的血叶兰幼苗；
[0047] (2)外植体预处理：将幼苗的叶片切除，用软刷毛在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
[0048] (3)外植体消毒：在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
[0049] (4)诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基上进行培养(接种数60个)，先进行8d的弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为600lx，然后再进行常规光照培养
60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率8％，接种后30天存活率95％；诱导培养基为：每升含有花宝1号1g、花宝4号0.5g、
6BA 1mg、NAA 0.03mg、椰汁140mL、蛋白胨3g、肌醇0.1g、蔗糖32g和琼脂5g，其余为水，pH值
为5.6；
60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率8％，接种后30天存活率95％；诱导培养基为：每升含有花宝1号1g、花宝4号0.5g、
6BA 1mg、NAA 0.03mg、椰汁140mL、蛋白胨3g、肌醇0.1g、蔗糖32g和琼脂5g，其余为水，pH值
为5.6；
[0050] (5)增殖培养：将诱导出的不定芽转移至增殖培养基中增殖培养70d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；增殖培养基为：每升含有花宝1号1g、花
宝4号0.5g、6BA 2mg、NAA 0.6mg、椰汁140mL、蛋白胨3g、肌醇0.1g、蔗糖32g和琼脂5g，其余
为水，pH值为5.6；
宝4号0.5g、6BA 2mg、NAA 0.6mg、椰汁140mL、蛋白胨3g、肌醇0.1g、蔗糖32g和琼脂5g，其余
为水，pH值为5.6；
[0051] (6)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上的不定芽转入壮苗生根培养基中培养68d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至4-5cm高，根
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉100g、土豆
50g、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖15g、琼脂7g和活性炭1g，其余为水，pH值为5.6；
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉100g、土豆
50g、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖15g、琼脂7g和活性炭1g，其余为水，pH值为5.6；
[0052] (7)移栽：当试管苗生长至4-5cm高，根2-4条，叶2-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为94％。
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为94％。
[0053] 实施例5：
[0054] (1)材料选取：选取无病虫害长势良好的血叶兰植株作为母株，从母株上切取新发生的血叶兰幼苗；
[0055] (2)外植体预处理：将幼苗的叶片切除，用软刷毛在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
[0056] (3)外植体消毒：在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
[0057] (4)诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基上进行培养(接种数60个)，先进行8d的弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为600lx，然后再进行常规光照培养
65d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率9％，接种后30天存活率92％；诱导培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、
6BA 0.9mg、NAA 0.05mg、椰汁100mL、蛋白胨2g、肌醇0.15g、蔗糖33g和琼脂6g，其余为水，pH
值为5.6；
65d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率9％，接种后30天存活率92％；诱导培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、
6BA 0.9mg、NAA 0.05mg、椰汁100mL、蛋白胨2g、肌醇0.15g、蔗糖33g和琼脂6g，其余为水，pH
值为5.6；
[0058] (5)增殖培养：将诱导出的不定芽转移至增殖培养基中增殖培养70d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、
花宝4号1g、6BA 1mg、NAA 0.5mg、椰汁100mL、蛋白胨2g、肌醇0.15g、蔗糖33g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.6；
花宝4号1g、6BA 1mg、NAA 0.5mg、椰汁100mL、蛋白胨2g、肌醇0.15g、蔗糖33g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.6；
[0059] (6)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上的不定芽转入壮苗生根培养基中培养62d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至4-5cm高，根
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉90g、土豆
80g、蛋白胨3g、肌醇0.13g、蔗糖11g、琼脂6g和活性炭2g，其余为水，pH值为5.6；
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉90g、土豆
80g、蛋白胨3g、肌醇0.13g、蔗糖11g、琼脂6g和活性炭2g，其余为水，pH值为5.6；
[0060] (7)移栽：当试管苗生长至4-5cm高，根2-4条，叶2-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为93％。
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为93％。
[0061] 实施例6：
[0062] (1)材料选取：选取无病虫害长势良好的血叶兰植株作为母株，从母株上切取新发生的血叶兰幼苗；
[0063] (2)外植体预处理：将幼苗的叶片切除，用软刷毛在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
[0064] (3)外植体消毒：在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
[0065] (4)诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基上进行培养(接种数60个)，先进行8d的弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为600lx，然后再进行常规光照培养
65d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率7％，接种后30天存活率93％；诱导培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1.5g、
6BA 0.8mg、NAA 0.04mg、椰汁110mL、蛋白胨1g、肌醇0.05g、蔗糖31g和琼脂7g，其余为水，pH
值为5.6；
65d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率7％，接种后30天存活率93％；诱导培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1.5g、
6BA 0.8mg、NAA 0.04mg、椰汁110mL、蛋白胨1g、肌醇0.05g、蔗糖31g和琼脂7g，其余为水，pH
值为5.6；
[0066] (5)增殖培养：将诱导出的不定芽转移至增殖培养基中增殖培养70d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；增殖培养基为：每升含有花宝1号2g、花
宝4号1.5g、6BA 1mg、NAA 0.4mg、椰汁110mL、蛋白胨1g、肌醇0.05g、蔗糖31g和琼脂7g，其余
为水，pH值为5.6；
宝4号1.5g、6BA 1mg、NAA 0.4mg、椰汁110mL、蛋白胨1g、肌醇0.05g、蔗糖31g和琼脂7g，其余
为水，pH值为5.6；
[0067] (6)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上的不定芽转入壮苗生根培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至4-5cm高，根
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号4g、香蕉130g、土豆
70g、蛋白胨2g、肌醇0.15g、蔗糖10g、琼脂5g和活性炭1.8g，其余为水，pH值为5.6；
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号4g、香蕉130g、土豆
70g、蛋白胨2g、肌醇0.15g、蔗糖10g、琼脂5g和活性炭1.8g，其余为水，pH值为5.6；
[0068] (7)移栽：当试管苗生长至4-5cm高，根2-4条，叶2-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为95％。
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为95％。
[0069] 实施例7：
[0070] (1)材料选取：选取无病虫害长势良好的血叶兰植株作为母株，从母株上切取新发生的血叶兰幼苗；
[0071] (2)外植体预处理：将幼苗的叶片切除，用软刷毛在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
[0072] (3)外植体消毒：在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
[0073] (4)诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基上进行培养(接种数60个)，进行常规光照培养78d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，诱导出
不定芽，接种后7天褐变率12％，接种后30天存活率88％；诱导培养基为：每升含有花宝1号
2g、花宝4号1g、6BA 0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂
6g，其余为水，pH值为5.6；
不定芽，接种后7天褐变率12％，接种后30天存活率88％；诱导培养基为：每升含有花宝1号
2g、花宝4号1g、6BA 0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂
6g，其余为水，pH值为5.6；
[0074] (5)增殖培养：将诱导出的不定芽转移至增殖培养基中增殖培养70d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、
花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.6；
花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.6；
[0075] (6)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上的不定芽转入壮苗生根培养基中培养65d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至4-5cm高，根
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆
50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6；
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆
50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6；
[0076] (7)移栽：当试管苗生长至4-5cm高，根2-4条，叶2-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为90％。
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为90％。
[0077] 实施例8：
[0078] (1)材料选取：选取无病虫害长势良好的血叶兰植株作为母株，从母株上切取新发生的血叶兰幼苗；
[0079] (2)外植体预处理：将幼苗的叶片切除，用软刷毛在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
[0080] (3)外植体消毒：在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲
洗8次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
洗8次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
[0081] (4)诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基上进行培养(接种数60个)，先进行7d的弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为700lx，然后再进行常规光照培养
75d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率9％，接种后30天存活率93％；诱导培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1g、6BA
0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为
5.8；
75d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500lx，诱导出不定芽，接种后7
天褐变率9％，接种后30天存活率93％；诱导培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1g、6BA
0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为
5.8；
[0082] (5)增殖培养：将诱导出的不定芽转移至增殖培养基中增殖培养90d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500lx；增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、
花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.8；
花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.8；
[0083] (6)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上的不定芽转入壮苗生根培养基中培养61d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500lx，试管苗生长至4-5cm高，根
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆
50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.8；
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆
50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.8；
[0084] (7)移栽：当试管苗生长至4-5cm高，根2-4条，叶2-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为75％，温度为22
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为92％。
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为75％，温度为22
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为92％。
[0085] 实施例9：
[0086] (1)材料选取：选取无病虫害长势良好的血叶兰植株作为母株，从母株上切取新发生的血叶兰幼苗；
[0087] (2)外植体预处理：将幼苗的叶片切除，用软刷毛在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
[0088] (3)外植体消毒：在超净工作台上，将幼苗用体积分数75％的酒精水溶液浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.1％的升汞水溶液中消毒8min，消毒后，用无菌水冲
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
洗5次，用无菌滤纸吸干幼苗表面水分，切成带有1-2个茎节的茎段，得到消毒后的外植体，
放置于培养皿中备用；
[0089] (4)诱导培养：将消毒后的外植体接种在诱导培养基上进行培养(接种数60个)，先进行10d的弱光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照强度为500lx，然后再进行常规光照培
养60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000lx，诱导出不定芽，接种
后7天褐变率8％，接种后30天存活率94％；诱导培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1g、
6BA 0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH
值为5.5；
养60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000lx，诱导出不定芽，接种
后7天褐变率8％，接种后30天存活率94％；诱导培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1g、
6BA 0.8mg、NAA 0.05mg、椰汁130mL、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH
值为5.5；
[0090] (5)增殖培养：将诱导出的不定芽转移至增殖培养基中增殖培养70d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000lx；增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、
花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.5；
花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余
为水，pH值为5.5；
[0091] (6)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上的不定芽转入壮苗生根培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000lx，试管苗生长至4-5cm高，根
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆
50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.5；
2-4条，叶2-4片，生根率为100％；壮苗生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉120g、土豆
50g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.5；
[0092] (7)移栽：当试管苗生长至4-5cm高，根2-4条，叶2-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为85％，温度为28
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为93％。
洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为85％，温度为28
℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为93％。