一种用于急性胰腺炎治疗的胆红素纳米颗粒及其制备方法转让专利
申请号 : CN201910300220.9
文献号 : CN110063945B
文献日 : 2021-07-09
发明人 : 姚情 , 赵应征 , 鲁翠涛 , 徐荷林 , 寇龙发 , 江雪 , 黄志伟 , 郑雅文 , 林蒙婷
申请人 : 温州医科大学
摘要 :
权利要求 :
1.一种用于急性胰腺炎治疗的胆红素纳米颗粒,其特征在于:主要由丝素蛋白、胆红素、京尼平和神经酰胺组成;胆红素在DMSO中的浓度为5mg/ml±
20%;京尼平在DMSO中的浓度为0.5mg/ml±20%;神经酰胺在DMSO中的浓度为5mg/ml±20%;
丝素蛋白的浓度为5% 10%;
~
所述的胆红素纳米颗粒通过以下制备方法制备获得:首先,将胆红素、京尼平和神经酰胺用DMSO溶解后,再用丙酮稀释,配置成胆红素、京尼平和神经酰胺混合溶液;接着,将丝素蛋白溶解于水溶液中,配置成质量分数4% 10%的丝素~
蛋白溶液;然后将胆红素、京尼平和神经酰胺的混合溶液滴入丝素蛋白溶液,滴入过程中持续搅拌6h,透析除去有机溶剂,获得纳米颗粒混悬液,再将纳米颗粒混悬液用纯水稀释得到胆红素纳米颗粒溶液;
所述的丙酮与二甲基亚砜的体积比为7:2;
所述胆红素、京尼平和神经酰胺的混合溶液和丝素蛋白溶液的体积比为9:1;
所述搅拌温度范围为40 60℃。
~
2.根据权利要求1所述的胆红素纳米颗粒,其特征在于:所述神经酰胺为神经酰胺磷酸乙醇胺、神经酰胺磷酸胆碱的至少一种。
3.根据权利要求1所述的胆红素纳米颗粒,其特征在于:所述纳米颗粒的粒径为160 200nm。
~
4.根据权利要求1‑3任一所述胆红素纳米颗粒的制备方法,其特征在于,方法包括以下步骤:首先,将胆红素、京尼平和神经酰胺用DMSO溶解后,再用丙酮稀释,配置成胆红素、京尼平和神经酰胺混合溶液;接着,将丝素蛋白溶解于水溶液中,配置成质量分数4% 10%的丝~
素蛋白溶液;然后将胆红素、京尼平和神经酰胺的混合溶液滴入丝素蛋白溶液,滴入过程中持续搅拌6h,透析除去有机溶剂,获得纳米颗粒混悬液,再将纳米颗粒混悬液用纯水稀释得到胆红素纳米颗粒溶液;
所述的丙酮与二甲基亚砜的体积比为7:2;
所述胆红素、京尼平和神经酰胺的混合溶液和丝素蛋白溶液的体积比为9:1;
所述搅拌温度范围为40 60℃。
~
5.根据权利要求1所述的胆红素纳米颗粒或者根据权利要求4所述方法制备而成的胆红素纳米颗粒在制备治疗急性胰腺炎的药物中的应用。
说明书 :
一种用于急性胰腺炎治疗的胆红素纳米颗粒及其制备方法
技术领域
背景技术
倍。即使得到及时治疗,仍然约有75%的患者出现轻度胰腺损伤。值得强调的是,约25%的
患者可能出现严重的并发症,而50%的患者甚至死于系统性并发症。近几十年来,寻找安全
有效的手段治疗急性胰腺炎尤为紧迫,但目前临床上对于急性胰腺炎的治疗鲜有进步。调
节细胞活动重要起始的确切机制和对急性胰腺炎严重程度的准确把握极大程度地限制了
临床上对于急性胰腺炎疾病治疗的深入研究,因此提出新的治疗策略,开发新的治疗药物
以改善对该疾病的治疗迫在眉睫。
性氧相关的疾病呈负相关。由于胆红素的水溶性极差,且高浓度时具有神经毒性,因此其临
床应用受到很大限制。
潜力。
粒包载胆红素的相关报道。
发明内容
胰腺炎,可明显延缓病情进展恶化,显著降低血清中淀粉酶和脂肪酶含量,并缓解胰腺炎引
起的组织水肿,降低组织病理学评分,并且该治疗存在可操作性强,费用低等优点。
10%的丝素蛋白溶液;然后将胆红素、京尼平和神经酰胺的混合溶液缓慢滴入丝素蛋白溶
液,滴入过程中持续搅拌6h,透析除去有机溶剂,获得纳米颗粒混悬液,再将纳米颗粒混悬
液用纯水稀释得到胆红素纳米颗粒溶液。
挥包载胆红素药物,加强药物的治疗效果,解决了胆红素在纳米制剂中稳定性较差、脂溶性
强的技术问题。
延长药物的滞留时间,具有胞内长效以及靶向的优势,有利于提高胆红素的生物利用度。
机构的诊疗费用等优点。
附图说明
具体实施方式
DMSO中,再加入7ml丙酮混合,得到有机相;取50mg丝素蛋白溶解在1ml的纯水中,4000rpm离
心5min后取上清液为水相;将水相与有机相在50℃混合搅拌6h,透析除去有机溶剂;将所得
到的纳米混悬液用纯水稀释即得胆红素纳米颗粒①。
中,4000rpm离心5min后取上清液为水相;将水相与有机相在50℃混合搅拌6h,透析除去有
机溶剂;将所得到的纳米混悬液用纯水稀释即得胆红素纳米颗粒对照组①。
中,4000rpm离心5min后取上清液为水相;将水相与有机相在50℃混合搅拌6h,透析除去有
机溶剂;将所得到的纳米混悬液用纯水稀释即得胆红素纳米颗粒对照组②。
中,4000rpm离心5min后取上清液为水相;将水相与有机相在80℃混合搅拌6h,透析除去有
机溶剂;将所得到的纳米混悬液用纯水稀释即得胆红素纳米颗粒对照组③。
将胆红素纳米颗粒稀释至适宜浓度后,滴于涂有碳膜的铜网上制备样品,然后在透射电镜
下观察样品形态。
纳米粒粒径分布的均匀度,多分散系数(PDI)值越小说明纳米粒大小越均匀,表明本发明纳
米颗粒的粒径范围较小。透射电镜图如图1所示,胆红素纳米颗粒呈球状,粒径分布较均一,
密集堆积,这也是蛋白质纳米粒子的特征。该胆红素纳米颗粒①和②的Zeta电位分别为‑
18.36±1.24mV和‑19.42±2.11,带负电荷的纳米颗粒具有长循环的特点,并且其细胞毒性
较小。
于胆红素纳米颗粒的制备具有重要作用。本发明的胆红素纳米颗粒的粒径范围较小,集中
在160‑200nm之间,改变其中的处方及工艺参数,会增大其粒径及分布范围,但是Zeta电位
变化并不明显。
胆红素纳米颗粒① 184.34±10.78 0.083 ‑18.36±1.24
胆红素纳米颗粒② 176.39±8.73 0.102 ‑19.42±2.11
空白丝素蛋白纳米颗粒 169.64±7.32 0.095 ‑20.33±2.39
胆红素白蛋白纳米颗粒 167.32±8.94 0.071 ‑15.78±1.03
原花青素胆红素纳米颗粒 326.43±24.38 0.129 ‑13.64±1.20
卵磷脂胆红素纳米颗粒 194.62±17.81 0.144 ‑20.33±2.15
胆绿素纳米颗粒 174.53±9.83 0.105 ‑21.32±2.34
胆红素纳米颗粒对照组① 273.45±10.74 0.159 ‑18.33±2.37
胆红素纳米颗粒对照组② 217.36±6.39 0.097 ‑17.39±1.95
胆红素纳米颗粒对照组③ 378.32±9.83 0.274 ‑20.74±3.25
力作用下,纳米颗粒沉淀,纯水复溶后,冷冻干燥。称取冻干后纳米样品的质量,并加入二甲
基亚砜和0.1M NaOH混合溶液(1:1,v/v)破坏纳米结构,并测定纳米颗粒中的胆红素含量。
根据以下公式计算包封率:载药量(%)=纳米颗粒中的胆红素质量(mg)/纳米颗粒质量
(mg)。根据以下公式计算包封率:包封率(%)=纳米颗粒中的胆红素质量(mg)/投药量
(mg)。
制备得到的胆红素纳米颗粒①包封率为86.34%,胆红素纳米颗粒②包封率为75.28%,远
高于卵磷脂胆红素纳米颗粒的包封率(25.66%)。
包封率。
纳米颗粒①中逐渐缓慢释放,表明将药物包载于丝素蛋白纳米载体中可显著延长其在血浆
中的循环时间。在释放实验12小时后,胆红素溶液组已经完全释放,而胆红素纳米颗粒只释
放了30%左右的药物,表明其具有显著的缓慢释药特性,且无明显突释现象。本发明的胆红
素纳米颗粒可以在生理pH条件下以缓慢和持续的释放活性药物。
药),第二次给药完成之后,淀粉酶升高即为造模成功。实验结束后(即开始造模24小时后),
通过眼眶取血收集分离血清,‑80℃保存,以便后续测淀粉酶脂肪酶水平,ELISA测得血清炎
症因子TNF‑α,IL‑6水平以及抗炎因子IL‑10的水平;处死大鼠后,腹腔剖开剥离得到胰腺脏
器,称重后,常规HE染色进行双盲组织病理学评分。其中评分标准参照Schmidt胰腺组织病
理学评分标准(0~4分),分数越高表示病理恶性程度越高。
丝素蛋白纳米颗粒、胆红素白蛋白纳米颗粒、原花青素胆红素纳米颗粒、卵磷脂胆红素纳米
颗粒和胆绿素纳米颗粒显示出巨大的优势。TNF‑α以及IL‑6等炎症因子越高表示体内炎症
反应越重,常用于指示胰腺炎的恶性程度。
水平明显低于急性胰腺炎组,但胆红素纳米颗粒处理的老鼠炎症水平更接近对照组的炎症
因子的水平,空白丝素蛋白纳米颗粒和胆绿素纳米颗粒处理的实验组与单纯造模组无明显
差异。IL‑10是一种抗炎性因子,发挥下调炎症反应,拮抗炎性介质的作用。相比于给药干预
组,胆红素纳米颗粒处理之后的SD大鼠抗炎水平提高。急性胰腺炎造模大鼠胰腺组织病理
损害程度较假手术对照组明显升高,同时胆红素纳米颗粒干预治疗后,其病理评分大幅度
降低,且低于其他任何药物干预治疗组。
后,可维持小叶结构,水肿水平降低,炎性细胞浸润降低,偶见点状出血,其胰腺组织病理评
分高于模型组和其他药物干预组。但是在胆红素纳米颗粒的两个实验组中,胆红素纳米颗
粒①的综合治疗效果优于胆红素纳米颗粒②。通过改变本发明的处方及制备工艺所得到的
胆红素纳米颗粒对照组,其同样具有一定的治疗效果,但是疗效较低,可能与其粒径较大不
利于体内长循环和胰腺炎定位靶向蓄积有关。
此,胆红素纳米颗粒有望应用于胰腺炎治疗药物的制备。