一种用于治疗肠易激综合征的复合益生菌乳酸菌粉剂及其用途转让专利
申请号 : CN201910452986.9
文献号 : CN110169983B
文献日 : 2021-07-09
发明人 : 马杰 , 张凌宇 , 杨慧娟 , 张建军 , 宋继宏
申请人 : 北京科拓恒通生物技术股份有限公司
摘要 :
权利要求 :
1.一种用于治疗肠易激综合征的复合益生菌粉剂,其特征在于,所述复合益生菌粉剂由干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang、动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)V9和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P‑8复配而成,其中,干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang的保藏号为CGMCC No.5469,动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)V9的保藏号为CGMCC No.5470,植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P‑8的保藏号为CGMCC No.6312,所述复合益生菌粉剂中干酪乳杆菌Zhang为干酪乳杆菌Zhang冻干菌粉,所述动物双歧杆菌乳亚种V9为动物双歧杆菌乳亚种V9冻干菌粉,所述植物乳杆菌P‑8为植物乳杆菌P‑8冻干菌粉,所述干酪乳杆菌Zhang冻干菌粉、动物双歧杆菌乳亚种V9冻干菌粉以及植物乳杆菌P‑8冻干菌粉由包括以下步骤的方法制备:步骤1,将各益生菌原菌种分别活化及纯化;
步骤2,将步骤1获得的纯化后的益生菌菌种连续传2代后接种于液体培养基中,恒温培养,加入灭菌PBS悬浮菌体,离心洗涤,收集菌泥;
步骤3,在步骤2所收集的菌泥中加入菌体保护剂,进行冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的复合益生菌粉剂,其特征在于,所述复合益生菌粉剂中干酪乳
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杆菌Zhang活菌数量≥3.0×10 CFU/g,动物双歧杆菌乳亚种V9活菌数量≥4.0×10 CFU/9
g,植物乳杆菌P‑8活菌数量≥3.0×10 CFU/g。
3.根据权利要求1所述的复合益生菌粉剂,其特征在于,所述复合益生菌粉剂还包括益生元和果蔬粉,其中,
所述益生元包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、低聚乳糖、低聚壳聚糖、大豆低聚糖、菊粉和/或聚葡萄糖;
所述果蔬粉包括蓝莓粉、草莓粉、蔓越莓粉、樱桃粉、苹果粉、香蕉粉、木瓜粉、芒果粉、火龙果粉、南瓜粉、胡萝卜粉、葡萄粉、石榴粉、哈密瓜粉、枸杞粉、红枣粉和/或猕猴桃粉。
4.根据权利要求3所述的复合益生菌粉剂,其特征在于,所述复合益生菌粉剂由以下重量比的组分制成:
干酪乳杆菌Zhang菌粉 0.1‑8重量份,动物双歧杆菌乳亚种V9菌粉 0.1‑8重量份,植物乳杆菌P‑8菌粉 0.1‑6重量份,益生元 30‑75重量份,果蔬粉 5‑35重量份,其中,基于1kg计为1重量份。
5.权利要求1至4任一项所述复合益生菌粉剂用于制备治疗肠易激综合征药物的用途。
6.根据权利要求5所述的用途,其特征在于,所述复合益生菌粉剂的用量为每日1g 5g。
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7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于,所述复合益生菌粉剂的用量为每日2g。
8.根据权利要求5或6所述的用途,其特征在于,所述复合益生菌粉剂溶于温水或牛奶中饭后口服,1次/日。
说明书 :
一种用于治疗肠易激综合征的复合益生菌乳酸菌粉剂及其
用途
技术领域
背景技术
“被遗忘的器官”,已成为与人体健康相关的重要名词。肠道菌群不仅参与宿主体内的能量
代谢调控、异源物质代谢、细胞修复和认知系统等机体功能的形成,更为重要的是肠道菌群
与免疫系统存在一定相互作用,使得肠道菌群与宿主健康息息相关。肠道菌群的构成在宿
主幼儿期就已经稳定,与宿主健康维持动态平衡。通常情况下,肠道正常菌群与人体内外环
境始终维持着动态平衡,但由于不均衡饮食、病原菌入侵、抗生素滥用和机体病变等都会诱
发肠道微生态系统失衡。一旦平衡被打破,将发生肠道微生态失调,进而影响宿主健康。消
极的肠道微生物可以对组织损伤、局面及全身免疫、代谢产生负面影响,比如诱发炎症性肠
病、自身免疫关节炎、肥胖和代谢综合征等疾病。
反复的特点。目前肠易激综合征的发病原因和疾病发生机制尚不十分清楚,缺乏形态学和
生物化学改变的生物学标志,肠道运动紊乱和内脏感觉过敏被认为是其重要的病理生理原
因。我国的IBS患病率约为5.6%‑11.5%,约占消化科门诊人数的10.7%‑34.3%。由于该病
反复发作,不仅给患者带来极大痛苦,影响患者生活质量,而且会消耗大量医疗资源,带来
沉重负担。目前治疗IBS 大体上可以分为药物治疗、饮食干预和益生菌/粪菌移植三大类方
法。药物治疗(如利福昔明等) 虽拥有良好的疗效,但因其较高昂的价格及其副作用很难大
规模推广应用。低可发酵性碳水化合物(FOODMAP)饮食疗法虽然得到了医学界广泛赞扬,但
其对不同个体疗效差异较大、严格限制饮食成分也难以实施。粪菌移植虽在部分患者上取
得一定效果,但其存在一定安全隐患。从调节肠道菌群这一角度出发,采用益生菌来治疗肠
易激综合征(IBS)可以取得显著成效,但由于益生菌菌株与含量不同而致使疗效各异。因
此,亟需一种高效、安全的治疗方案,缓解患者症状。
发明内容
及益生元,其中,益生菌活菌数量高,并且所含益生菌均具有良好的耐酸性、人工胃肠液耐
受性及胆盐耐受性,不携带耐药性质粒,3株益生菌菌株均具有较高的安全性。所述益生菌
和益生元具有协同增效的功能,可以增强益生菌的益生功能。所述复合益生菌粉剂具有可
以有效治疗肠易激综合征(IBS),改善症状、降低炎症反应、调节肠道菌群的益生功能,并且
治疗肠易激综合征(IBS)的方法简单、有效、无毒副作用、成本低。
animalis subsp.lactis V9)和植物乳杆菌P‑8(Lactobacillus plantarum P‑8),均在中
国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心(国家专利局指定专利微生物保藏
中心)保藏,地址:中国北京。其中,干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)的保藏
号为CGMCC No.5469,保藏日期为2011 年11月18日。动物双歧杆菌乳亚种V9
(Bifidobacterium animalis subsp.lactis V9)的保藏号为CGMCC No.5470,保藏日期为
2011年11月18日。植物乳杆菌P‑8的保藏号为(Lactobacillus plantarum P‑8)CGMCC
No.6312,保藏日期为2012年06月28日。
×10 CFU/g,动物双歧杆菌乳亚种V9活菌数量≥4.0×10CFU/g,植物乳杆菌P‑8≥3.0×
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10 CFU/g,本申请人发现,所述复合益生菌粉剂中的活菌数含量在上述范围内能够保证复
合益生乳酸菌粉剂充分发挥益生功效。
物乳杆菌P‑8冻干菌粉。
基因组 DNA提取、目的片段扩增、建库及测序,从扩增后的体系中提取高质量DNA序列纳入
生物信息学分析,计算获得菌种在种水平归属,鉴定结果与模式菌株序列相符后进行后续
操作。
恒温培养至生长对数期末期离心,所述离心条件可以为3000rpm,10min,4℃,弃掉上清液,
加入灭菌PBS悬浮菌体,按照上述方法离心洗涤2次,弃掉上清液,收集菌泥。
℃保存,其中,保护剂可以按照以下方法制备:在10%(m/m)脱脂乳中加入0.1%(m/m)谷氨
酸钠,混合体系于121℃下灭菌7min,然后冰水浴急冷至25℃。
粉、石榴粉、哈密瓜粉、枸杞粉、红枣粉和/或猕猴桃粉等。
中,所述PBS缓冲液可按照如下配比制备:
分混匀得到复合益生菌预混合粉;
生菌粉剂能够调节肠道菌群,有效治疗肠易激综合征(IBS),能够明显改善症状,降低炎症
反应,从而解决了现有复合益生乳酸菌粉剂菌群组成单一、活菌数低、益生菌安全性差、缺
乏有效治疗肠易激综合征的益生菌制剂等问题,具有广阔的市场前景。
歧杆菌乳亚种V9(Bifidobacterium animalis subsp.lactis V9)和植物乳杆菌P‑8
(Lactobacillus plantarum P‑8)。
附图说明
具体实施方式
道致病菌、调节肠道菌群,提高机体免疫力及抗氧化能力,调节血脂代谢、保护肝脏,降低肠
道细菌内毒素,降低肿瘤和结肠癌发生风险以及干预修复雷帕霉素造成的肠道损伤和炎症
等益生特性。
抗肠道致病菌、调节肠道菌群、提高腹泻康复率、有效治疗腹泻等益生特性。该菌株在临床
治疗便秘、急性腹泻和慢性腹泻有效率分别为95.3%、95.4%和89.9%。
氧化能力及免疫力、抑制腐败真菌生长、延长发酵乳制品货架期等益生特性。
菌,尤其是动物双歧杆菌的增殖效果明显。在增殖肠道有益菌的同时,还能促进肠道蠕动,
平衡肠道水分,促进肠道健康。
点。
并促进营养物质的吸收。
而肠道菌群健康化、调节肠道菌群。
提高外源性益生菌在肠道内膜上的定植率和存活率,改善肠道菌群平衡系统,提高人体免
疫力,促进机体修复各项机能,从而起到治疗肠易激综合征,调节肠道菌群。
肠道菌群的特点。这些试验例为本发明所述的临床疗效观察试验。
声、胸部平片、胃肠镜、胶囊内镜检查,未发现明显器质性改变。排除标准:伴有其它消化道
病变、心肝肾功能不全、恶性肿瘤、糖尿病、既往有腹部手术史者、妊娠或哺乳期妇女、试验
前4周内曾服用影响本试验观察的药物(抗生素、中药等)、自身免疫性疾病及不能按期复诊
及随访者。
肠或蛇一样,且表面很光滑;第五型:断边光滑的柔软块状(容易通过);第六型:粗边蓬松
块,糊状大便;第七型:水状,无固体块(完全液体);第一型和第二型表示有便秘,分别记2分
及1分;第三型和第四型是理想的便形,记为0分;第五至第七型则代表可能有腹泻,分别记
为1分、2分及3分。
重比例。按照表1的评分准则,计算各症状的积分总和,每周统计一次。
≥2 个等级;有效:各项症状轻度减轻(服用后症状总评分较服用前减少20%~50%),大便
性状评分下降1个等级;无效:各项症状无明显减轻(服用后症状总评分较服用前减少
20%),大便性状评分等级无下降。
剂治疗14天后患者的症状得到了显著改善。上述结果表明,复合益生乳酸菌粉剂对肠易激
综合征有非常好的疗效。
著低于治疗前。
著低于治疗前。
含量显著低于治疗前。
显著低于治疗前。
低患者血液中炎症因子的含量。
样性与治疗前差异不大。
的物种数与治疗前差异不大。
著的变化,而患者肠道菌群多样性在治疗过程中呈现略微上升的趋势。上述结果表明,复合
益生乳酸菌粉剂能够调节患者肠道菌群多样性。
多样性。
(Lactobacillus plantarum P‑8)复配的益生乳酸菌粉剂对肠易激综合征有明显治疗效
果。因此本发明提供的一种治疗溃疡性结肠炎的复合益生乳酸菌粉剂,其具有可以有效治
疗肠易激综合征(IBS),改善症状、降低炎症反应、调节肠道菌群的特点。
可以对本申请技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进,这些均落入本申请
的范围内。本申请的保护范围以所附权利要求为准。