一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治番茄疫霉根腐病中的应用

摘要

本发明公开了一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治番茄疫霉根腐病中的应用。本发明提供了贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.16775。本发明为防治番茄疫霉根腐病提供了一株高效的生防菌株，并对番茄病害的绿色防控技术和促进番茄产业可持续发展具有重大的生产意义。

权利要求

1.贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.16775。

2.微生物制剂，其特征在于：所述微生物制剂含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50。

3.菌悬液，其特征在于：所述菌悬液为权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50的菌悬液，其中所述贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50的含量为1.0×107 1.0×109 Cfu/mL。

~

4.根据权利要求3所述的菌悬液，其特征在于：所述贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50的含量为1×108Cfu·mL-1。

5.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50或权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3或4所述的菌悬液在如下任一中的应用：（A1）防治番茄疫霉根腐病；

（A2）制备用于防治番茄疫霉根腐病的产品。

6.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50或权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3或4所述的菌悬液在如下任一中的应用：（B1）促进植物生长发育；

（B2）制备用于促进植物生长发育的产品。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述植物为蔬菜。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述蔬菜为番茄。

9.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50或权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3或4所述的菌悬液在如下任一中的应用：（C1）抑制植物病原真菌；

（C2）制备用于抑制植物病原真菌的产品；

（C3）防治由植物病原真菌所致病害；

（C4）制备用于防治由植物病原真菌所致病害的产品。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述植物病原真菌为辣椒疫霉菌（Phytophthora capsiciLeonians）、多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、刺盘孢菌（Colletotrichum capsici）、葡柄霉菌（Stemphylium）和/或灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea Pers）。

11.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50或权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3或4所述的菌悬液在如下任一中的应用：（D1）生产IAA；

（D2）制备用于生产IAA的产品。

12.一种防治番茄疫霉根腐病的方法，包括如下步骤：将权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50或权利要求2所述微生物制剂或权利要求3或4所述菌悬液施于番茄植株的根际土壤。

13.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZF50在制备权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3或4所述的菌悬液中的应用。

说明书

一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治番茄疫霉根腐病中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及植物病害生物防治技术领域，特别涉及一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治番茄疫霉根腐病中的应用。

背景技术

[0002] 番茄疫霉根腐病是由辣椒疫霉(Phytophthora capsici Leonian)引起的一种具有毁灭性的真菌性土传病害，该病害具有发生迅猛、毁灭性强的特点，发生周期短，从发病到死亡仅7-15d，发病率为50％，甚至绝产，是许多国家保护地和露地番茄生产的重要病害之一，严重制约了番茄产业的发展。目前，对番茄疫霉根腐病的防治方法报道的较少，选用抗病品种是一种经济有效的防治措施，但是抗病育种工作难度较大，而传统的农业措施具有局限性，化学防治虽然简便、快捷、有效，但其降解性差，容易造成环境污染，并且长期单一的使用甲霜灵等同类化学药剂，使抗药性问题逐日凸显，因此，生产上急需一种绿色的防治措施以保障蔬菜产业的可持续发展。

[0003] 近年来，生物防治因对环境友好、对人畜安全，在病害防控技术中表现出良好的作用效果，因此得到广泛关注。大量时间证明，在病害防控研究中，芽孢杆菌属(Bacillus)的稳定性、相容性、一致性均优于其它生防菌。目前，我国已利用拮抗芽孢杆菌成功开发出多种生防芽孢杆菌用于防治多种病害，并取得了一定的成果。

发明内容

[0004] 为改进现有防治技术的不足，本发明的目的在于提供一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治番茄疫霉根腐病中的应用，同时对多主棒孢菌等多种病原真菌均具有较强的拮抗效果。

[0005] 第一方面，本发明要求保护一株贝莱斯芽孢杆菌。

[0006] 本发明所要求保护的贝莱斯芽孢杆菌具体为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50，其于2018年11月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.16775。

[0007] 第二方面，本发明要求保护的贝莱斯芽孢杆菌是一种微生物制剂。

[0008] 本发明所要求保护的微生物制剂含有所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50。

[0009] 进一步地，所述生防制剂可由所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50和助剂或者基质配制而成。当所述生防制剂为液体形式时，所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50的有效含量可为1.0×108cfu·mL-1。

[0010] 第三方面，本发明要求保护一种菌悬液。

[0011] 本发明所要求保护的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50菌悬液的含量7 9
为1.0×10～1.0×10cfu/mL。

[0012] 进一步地，所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50的含量为1.0×108cfu/mL。

[0013] 第四方面，本发明要求保护所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50或所述微生物制剂或所述菌悬液在如下任一中的应用：

[0014] (A1)防治番茄疫霉根腐病；

[0015] (A2)制备用于防治番茄疫霉根腐病的产品。

[0016] 第四方面，本发明要求保护所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50或所述微生物制剂或所述菌悬液在如下任一中的应用：

[0017] (B1)促进植物生长发育；

[0018] (B2)制备用于促进植物生长发育的产品；

[0019] 进一步地，所述植物为蔬菜；

[0020] 更进一步地，所述蔬菜为番茄。

[0021] 其中，所述促进植物生长发育为促进株高增高和/或鲜重增加和/或根长增长和/或根重增加。

[0022] 第五方面，本发明要求保护所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50或所述微生物制剂或所述菌悬液在如下任一中的应用：

[0023] (C1)抑制植物病原真菌；

[0024] (C2)制备用于抑制植物病原真菌的产品；

[0025] (C3)防治由植物病原真菌所致病害；

[0026] (C4)制备用于防治由植物病原真菌所致病害的产品。

[0027] 其中，所述植物病原真菌为辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)、多主棒孢菌(Corynespora cassiicola)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、刺盘孢菌(Colletotrichum capsici)、葡柄霉菌(Stemphylium)和/或灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers)。

[0028] 第六方面，本发明要求保护所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50或所述微生物制剂或所述菌悬液在如下任一中的应用：

[0029] (D1)生产IAA；

[0030] (D2)制备用于生产IAA的产品。

[0031] 进一步，所述生产IAA时，可加入色氨酸(色氨酸能够促进所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50产生IAA)。

[0032] 第七方面，本发明要求保护一种防治番茄疫霉根腐病的方法。

[0033] 本发明所要求保护的防治番茄疫霉根腐病的方法，包括如下步骤：将所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50或所述微生物制剂或所述菌悬液施于番茄植株的根际土壤(如灌根于植物根际土壤中)。

[0034] 其中，灌根时所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50的施用量可为10mL/株，10mL是指10mL含量为1.0×108cfu·mL-1的所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50的菌悬液。

[0035] 第八方面，本发明要求保护所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50在制备所述微生物制剂或所述菌悬液中的应用。

[0036] 本发明的有益效果：

[0037] (1)利用盆栽试验测定贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50不同接种量对番茄疫霉根腐病的防治效果和对番茄幼苗的促生作用，发现贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50能有效的防治番茄疫霉根腐病，在接种10mL时，对番茄疫霉根腐病的盆栽防效最好，病情指数和防效分别为6.00和60.39％。

[0038] (2)贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50对番茄幼苗具有较好的促生作用，增长率为72.83％，鲜重增长率为37.26％，根长和根重增长率分别为8.44％、22.68％。通过田间试验贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50对番茄疫霉根腐病的田间防效为87.5％，说明该菌株在番茄疫霉根腐病的防治中具有很大的开发潜力。

[0039] 本发明为防治番茄疫霉根腐病提供了一株优良的生防菌株，并对番茄病害的绿色防控技术和促进番茄产业可持续发展具有重大的生产意义。

[0040] 保藏说明

[0041] 菌株名称：贝莱斯芽孢杆菌

[0042] 拉丁名：Bacillus velezensis

[0043] 参椐的生物材料(株)：ZF50

[0044] 保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

[0045] 保藏机构简称：CGMCC

[0046] 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

[0047] 保藏日期：2018年11月26日

[0048] 保藏中心登记入册编号：CGMCC No.16775

附图说明

[0049] 图1为ZF50菌株对番茄疫霉病菌的抑制作用。左侧为对照；右侧为菌株ZF50对辣椒疫霉菌的平板抑制效果。

[0050] 图2为ZF50菌株基于16S rDNA序列的系统进化树。

[0051] 图3为ZF50菌株基于gyrB序列的系统进化树。

[0052] 图4为ZF50对6种病原真菌的抑菌效果。A：Stemphylium；B：Corynespora cassiicola；C：Colletotrichum capsici；D：Botrytis cinerea；E：Rhizoctonia solani；F：Fusarium oxysporum；

[0053] 图5为菌株ZF50IAA产量的测定结果。

具体实施方式

[0054] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

[0055] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0056] 下述实施例涉及到的各种培养基都是本领域常用的标准培养基，例如：

[0057] LB液体培养基：蛋白胨10.0g，酵母膏5.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水补足至1000mL。

[0058] 燕麦培养基：燕麦30g，葡萄糖20g，琼脂粉17～20g，蒸馏水补足至1000mL。

[0059] PDA培养基：马铃薯去皮200g，葡萄糖20g，琼脂粉20g，蒸馏水补足至1000mL。

[0060] 下述实施例涉及到的化学药品的制备都是本领域常用的药品，例如：

[0061] SolutionⅠ：10mmol-1磷酸。

[0062] SolutionⅡ：1mL 0.5mol·L-1FeCl3溶于50mL 35％HClO4。

[0063] 实施例1、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50的分离纯化和鉴定[0064] 1、芽孢杆菌的分离

[0065] 从山东寿光采集的番茄多年连作土壤称取10g土壤样品，放入盛有100mL无菌水的三角瓶中置于27℃、200r/min摇床上震荡30min，使之充分混匀。将1mL菌土悬浮液于80℃水浴处理10min后稀释成10-1，10-2，10-3，10-4的土壤悬浮液，每个梯度悬浮液吸取100μL滴到LB平板中央，用涂布器涂匀，使平板充分吸收，每个梯度重复3次，平板倒置于30℃恒温培养箱培养2d。挑取形态不同的细菌菌落经平板划线纯化后编号保存，共分离得到98株芽孢杆菌。

[0066] 2、芽孢杆菌的筛选

[0067] 用灭菌枪头在距皿中心3㎝处四个角点上接入5μL生防细菌悬液，做3个重复，设只接入液体LB培养基的空白对照，27℃下培养5d。待空白对照即将长满整个培养皿时，测量靶标菌的对照生长量(菌落半径)和处理生长量(接种细菌后的生长半径)，用抑菌率表示。

[0068] 抑制率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径×100％

[0069] 结果显示，共得到5株生防细菌对辣椒疫霉菌的抑制率均在55％以上，其中菌株ZF50的抑制率效果最好(图1)，抑制率为76％(表1)，因此选取菌株ZF50作为番茄疫霉根腐病拮抗菌。

[0070] 表1五株生防菌对番茄疫霉根腐病菌的抑制率

[0071] 处理 浓度(cfu·mL-1) 菌落直径(mm) 抑菌率(％)ZF 23 1×108 0.91±0.17 63.6±8a
ZF 26 1×108 1.0±0.15 60±6a
ZF 30 1×108 1.0±0.25 60±4a
ZF 50 1×108 0.6±0.2 76±4.8a b
ZF 53 1×108 0.93±0.1 62.8±4b
LB对照 1×108 2.5 --

[0072] 注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。

[0073] 3、菌株ZF50的鉴定

[0074] 将上述菌株ZF50菌株进行如下鉴定：

[0075] (1)菌株ZF50培养性状观察

[0076] 纯化后的菌株ZF50在LB培养基上单菌落表现为乳白色，圆形，表面褶皱，菌落中央凹陷，呈火山口状。

[0077] (2)生理生化特性分析

[0078] 参考东秀珠等的方法，对菌株ZF50的革兰氏染色、果糖、麦芽糖、纤维二糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、NaCl、肌醇、天冬氨酸等指标进行分析。结果如表2。

[0079] 表2菌株ZF50的生理生化特性

[0080]项目 反应 项目 反应
革兰氏染色 + 乳糖 -
丙三醇 - 蔗糖 +
果糖 + 4％NaCl +
麦芽糖 - 8％NaCl +
纤维二糖 w 肌醇 -
葡萄糖 + 天冬氨酸 -

[0081] 生理生化分析结果显示：菌株ZF50呈革兰氏阳性，果糖、葡萄糖、蔗糖、NaCl为阳性，纤维二糖为弱阳，其它指标为阴性，初步鉴定该菌株属贝莱斯芽孢杆菌。

[0082] (3)16s rDNA序列分析与系统发育树的建立

[0083] 用从天根生化科技有限公司购买的细菌DNA提取试剂盒，提取菌株ZF50的DNA，并以提取的DNA为模板，进行PCR扩增，扩增引物采用细菌通用引物。16rDNA引物信息为F27：5’-TACGGTACCTTGTTACGACT-3’，R1492：5’-CTGAGCCAGGATCA AACT-3’。引物由北京博迈德生物科技有限公司合成，反应体系(50μL)为：2×Taq PCR Master Mix 25μL，上下游引物各
1.25μL，DNA模板2.5μL，ddH2O补足至50μL。反应程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃补充延伸10min。使用MEGA5.0邻接法(Neighbor-Joining,NJ)构建系统进化树.

[0084] 通过PCR扩增获得菌株ZF50 16S rDNA基因部分有效序列(SEQ ID No.1)，NCBI登录号MH978894，将该序列在GenBank中与已知序列进行比对，利用MEGA5.0软件进行多重比较后采用邻接法构建菌株ZF50菌株16S rDNA基因序列系统发育树，结果显示菌株ZF50与菌株BH21(登录号为KT889364)亲缘关系最近(图2)，序列相似性为99％，只有1个碱基差别。

[0085] (4)gyrB基因序列分析鉴定及其系统发育树的构建

[0086] 采用天根生化科技有限公司细菌DNA提取试剂盒提取ZF50的DNA，以提取的DNA为模板。gyrB引物信息为UP1F：5’-GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGG NGGNAARTTYGA-3’；UP2R：5’-AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACR TCN GCRTCNGTCAT-3’；反应体系(50μL)为：2×Taq PCR Master Mix 25μL，上下游引物各1.25μL，DNA模板2.5μL，ddH2O补足至50μL。反应程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃补充延伸10min。测序工作由北京博迈德生物公司完成，测序结果通过Genbank进行Blast序列同源性比对。

[0087] gyrB序列分析与系统发育树的建立通过PCR扩增获得菌株ZF50gyrB基因部分有效序列(SEQ ID No.2)，NCBI登录号为MK238275，利用该序列在GenBank中与已知序列进行比对，使用MEGA5.0软件，采用邻接法构建菌株ZF50菌株gyrB基因序列系统发育树，可得到菌株ZF50的系统发育树，结果显示菌株ZF50与贝莱斯芽孢杆菌株JT3-1(登录号为CP032506)聚在同一分枝，序列相似性为100％，无碱基差别(图3)。

[0088] 综合上述形态学、生理生化特性，以及基因组序列测定结果，最终确定本发明的菌株ZF50为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。

[0089] 菌株ZF50已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。保藏日期2018年11月26日。保藏号为CGMCC No.16775。菌株名称：贝莱斯芽孢杆菌；拉丁名：Bacillus velezensis；参椐的生物材料(株)：ZF50。

[0090] 实施例2、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50对六种病原真菌抑菌效果的测定

[0091] 将病原真菌接种道PDA平板上24h后用灭菌枪头在距菌饼3㎝处四个角点上接入5μL贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50菌悬液(1.0×108cfu·mL-1)，做3个重复，设只接入液体LB培养基的空白对照，27℃下培养5d。待空白对照即将长满整个培养皿时，测量靶标菌的对照生长量(菌落直径)和处理生长量(接种细菌后的生长直径)，用抑菌率表示。

[0092] 抑制率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径×100％

[0093] 结果显示(图4、表3)，贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50对6种供试病原菌均有较好的抑菌效果，其中对刺盘孢菌抑菌效果最高，抑菌率为80.73％，显著高于其它5株病原菌，对灰葡萄孢的抑菌率最低，为53.88％。上述结果说明贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50具有较广谱的抑菌作用。

[0094] 表3贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50对6种病原真菌的抑菌效果[0095]处理 抑菌率(％) 处理 抑菌率(％)
尖孢镰刀菌 54.44±1.11a 多主棒孢菌 71.05±3.94c
葡柄霉菌 79.44±0.66a 立枯丝核菌 65.73±1.16d
刺盘孢菌 80.73±0.85b 灰葡萄孢菌 53.88±0.56d

[0096] 注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。

[0097] 实施例3、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50对番茄疫霉根腐病的防治效果

[0098] 1、菌株ZF50对番茄疫霉根腐病的盆栽防效

[0099] 辣椒疫霉菌的制备：将辣椒疫霉菌在燕麦培养基上活化后，将菌病接种在南瓜上进行扩繁，备用；生防芽孢杆菌的制备：在LB平板上活化菌株ZF50后，用接种针挑取单菌落接种于LB营养液中，37℃、200r/min培养12～16h，制成1×108cfu·mL-1生防菌悬液；生防芽孢杆菌栽培土准备：1000g基质土分装于穴盘(5×5cm)中，每个穴孔分别添加1mL、5mL、10mL的贝莱斯芽孢杆菌ZF50菌悬液(浓度为1×108cfu·mL-1)。吡唑醚菌酯栽培土准备：1000g基质土分装于穴盘(5×5cm)中，每个穴孔添加10mL浓度为0.25mg·kg-1的吡唑醚菌酯药液。

[0100] 将催好的番茄种子播种在每个添加好生防菌的基质土中，以不加贝莱斯芽孢杆菌ZF50菌悬液的处理为对照。待植株长至3片真叶时再移栽至拌有辣椒疫霉菌的营养钵(辣椒疫霉的含量为2×106cfu·mL-1)中，常温管理，待清水对照发病后，开始调查植株发病情况。

[0101] 病害调查采用番茄根腐病分级标准：0级：无病；1级：茎上出现些微水渍状的病斑；2级：茎上病斑扩展，但不超过株高1/4，不萎蔫；3级：病部超过整株1/4，向下延伸至根部不超过株高3/4，茎基部凹陷，萎蔫；4级：病部超过整株或蔓延至全株，包括根和叶柄，茎基部严重溢缩，叶片枯萎，已死亡。

[0102] 病情指数＝∑(各级病株数×相应级别)/(调查总株数×最大级数)×100；

[0103] 防治效果(％)＝(空白对照病情指数-处理病情指数)/空白对照病情指数×100。

[0104] 结果显示(表4)，接种10mL ZF50菌悬液防效最好，病情指数和防效分别为6和60.39％。接种5mL ZF50菌悬液的防效最差，病情指数和防效分别为14％和34.17％。

[0105] 表4菌株ZF50对番茄疫霉根腐病的盆栽防效

[0106]处理 浓度(cfu/mL) 病情指数 防效(％)
ZF50 1mL 1×108 10 47±7.52a
ZF50 5mL 1×108 14 34.17±3.29b
ZF50 10mL 1×108 6 60.39±11.37c
CK -- 21.25 --

[0107] 注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。

[0108] 2、菌株ZF50对番茄疫霉根腐病的田间防效

[0109] 本试验共设3个处理，即菌株ZF50菌悬液(1.0×108cfu·mL-1。)灌根处理、25％吡唑醚菌酯OD 0.25mg·kg-1灌根处理和清水对照，每个处理4次重复，每次重复6棵番茄幼苗。待幼苗3～4片真叶后移栽至苗圃中，将备好的ZF50菌悬液10mL/颗灌根，待对照发病后，开始调查植株发病情况。

[0110] 病害调查方法同上。

[0111] 结果显示(表5)，菌株ZF50的病情指数为和防效分别为20.83％和68.75％，对照药剂病情指数和防效分别为18和73％。

[0112] 该结果表明菌株ZF50田间防效高于对照药剂防效。

[0113] 表明贝莱斯芽孢杆菌ZF50是一株对番茄疫霉根腐病具有较强抑制活性的生防菌株。

[0114] 表5菌株ZF50对番茄疫霉根腐病田间防效

[0115] 处理 浓度 病情指数 防治效果(％)ZF50 10mL 1×108Cfu·mL-1 20.83 68.75a
吡唑醚菌酯 0.25mg·kg-1 18 73b
CK -- 66.66 --

[0116] 注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。

[0117] 实施例4、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50在番茄促生方面的应用[0118] 待番茄幼苗2叶1心时，将番茄幼苗移栽到营养钵(5cm×5cm)中，设接种15mL贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50菌悬液(1×108Cfu·mL-1)和清水两个处理，每处理3次重复，每次重复10棵幼苗，监测期为两周，之后统计幼苗地上部分株高、地上部分鲜质量、根长和根重等生物学指标以分析菌株的促生效果。

[0119] 结果显示：灌入ZF50菌悬液的番茄幼苗株高增长率为72.83％，鲜重增长率为37.26％，根长和根重增长率分别为8.44％、22.68％(表6)。

[0120] 表6菌株ZF50对番茄幼苗的促生效果

[0121]

[0122] 注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异

[0123] 实施例5、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50的IAA产量的测定[0124] 将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZF50菌悬液接种于含有1.5mL DF+(含色氨酸的DF培养基)培养基的2mL离心管中，ZF50的终浓度为1×108Cfu·mL-1。于28℃培养7d后，12000rpm离心5min，取1mL上清液于试管中，加入50μL SolutionⅠ及2mL SolutionⅡ，混匀后于室温中反应25min，而后利用分光光度计在530mm波长下检测吸光度，根据得到的OD值利用标准曲线，计算IAA产量。

[0125] 结果表明(图5)：菌株ZF50具有产IAA的能力，且色氨酸能诱导菌株ZF50产生IAA，菌株ZF50在DF+培养基上产IAA量最大，其分泌量可达9.976μg·mL-1。

[0126] 本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。