一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂及其制备方法，属于生物材料保存技术领域，本发明先将碳酸钾和二氧化钛经混合煅烧，酸化后制得四钛酸，再用柠檬酸和二乙烯三胺改性壳聚糖，制得改性壳聚糖，然后用环氧大豆油改性羟乙基纤维素，制得改性羟乙基纤维素，最后，将蔗糖与海藻糖混合，并加入吐温‑30，生物防腐剂Proclin 300，双蒸水，四钛酸，1改性壳聚糖和改性羟乙基纤维素，搅拌反应后，在加入催化剂，继续反应后，用银离子洗涤后，去除沉淀，得含蔗糖的生物制品稳定剂。本发明制备的含蔗糖的生物制品稳定剂具有较好的稳定性，可延长生物制品的储存时间，并减少金属离子对生物制品的影响。

权利要求

1.一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂，其特征在于，所述含蔗糖的生物制品稳定剂主要包括以下重量份数的原料组分：10～12份蔗糖，10～15份海藻糖，3～5份表面活性剂，1～3份生物防腐剂Proclin 300和120～200份双蒸水；

所述含蔗糖的生物制品稳定剂还包括以下重量份数的原料组分：4～8份四钛酸，10～

12份改性壳聚糖和8～15份改性羟乙基纤维素；

生物制品稳定剂的制备具体包括以下步骤：

(1)将碳酸钾与二氧化钛按质量比1：3～1：4混合研磨后，煅烧，得四钛酸钾，将四钛酸钾与盐酸溶液按质量比1：10～1：12混合，微波反应后，过滤，洗涤，干燥，得四钛酸；

(2)将壳聚糖与柠檬酸按质量比3：1～4：1混合于烧杯中，并向烧杯中加入壳聚糖质量

10～18倍的醋酸溶液，壳聚糖0.2～0.5倍的二乙烯三胺，超声分散后，得壳聚糖混合溶液，将壳聚糖混合溶液与石蜡按体积比3：1混合，并加入壳聚糖混合溶液体积0.02～0.10倍的司盘-80和壳聚糖混合溶液体积0.04～0.08倍的戊二醛，搅拌反应后，旋蒸浓缩，得改性壳聚糖；

(3)将羟乙基纤维素与环氧大豆油按质量比1：1混合于三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入羟乙基纤维素质量40～50倍的二甲基亚砜和羟乙基纤维素质量1～5倍的四氯化锡溶液，混合反应后，于温度为60～90℃，转速为120～140r/min，压力为500～600kPa的条件下旋蒸浓缩至含液率为0.1～0.2％，得改性羟乙基纤维素；

(4)将蔗糖与双蒸水按质量比1：10～1：15混合于反应釜中，并向反应釜中加入蔗糖质量0.2～0.3倍的吐温-30，蔗糖质量0.4～0.6倍的步骤(1)所得物质，蔗糖质量0.9～1.1倍的步骤(2)所得物质和蔗糖质量0.7～1.0倍的步骤(3)所得物质，搅拌反应后，再向反应釜中加入蔗糖质量0.1～0.2倍的催化剂，继续反应后，得预处理坯料，将预处理坯料与银离子溶液按质量比3：1混合，搅拌反应后，过滤；

(5)将步骤(4)所得物质与海藻糖按质量比15：1～20：1混合，并加入步骤(4)所得物质

0.01～0.02倍的生物防腐剂Proclin 300，搅拌混合；

(6)对步骤(5)所得物质进行指标分析；

步骤(3)所述四氯化锡溶液为将四氯化锡与二甲基亚砜按质量比1：6～1：8混合，得四氯化锡溶液；

步骤(4)所述催化剂为氯化镁或氯化锌中任意一种。

2.根据权利要求1所述的一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂，其特征在于，所述含蔗糖的生物制品稳定剂包括以下重量份数的原料组分：10份蔗糖，15份海藻糖，4份吐温-30，2份生物防腐剂Proclin 300，160份双蒸水，5份四钛酸，10份改性壳聚糖和12份改性羟乙基纤维素。

说明书

一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂及其制备

方法

技术领域

[0001] 本发明涉及生物材料保存技术领域，具体是一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 随着生物技术的不断发展，生物制品在疾病的诊断、治疗，以及人类对生命本质的追寻等领域发挥了主要作用，但是一些常规蛋白、抗原、抗体、生物检测诊断试剂盒等生物制品容易受外界因素的影响而失去活性，这就需要一种优良的保护剂降低外界环境变化对这类生物制品的影响。

[0003] 蛋白质作为“中心法则”的最后一环，是生物体最为重要的结构物质也是各种生命活动的基础。目前对于生命活动微观领域的研究，主要还是以研究蛋白质的结构和功能为主；但是有些蛋白在体外环境分子结构不稳定，容易被破坏而丧失生物活性，这就需要一种稳定剂来保持蛋白结构的稳定性，维持其原有活性。

[0004] 抗体作为医学诊断、治疗、检测领域应用最为广泛的蛋白产品，也是最具有市场价值前景的蛋白产品之一。ELISA（酶联免疫吸附试验）技术是抗体在诊断和检测领域应用最为成功的技术，目前广泛用于临床疾病的诊断以及生物学基础研究。

[0005] 目前市场上一般的ELISA试剂盒，在排除人为操作以及原材料造成的影响外，普遍存在稳定性差、检测结果不准确等问题。而造成这些问题的绝大多数原因是试剂盒中包含的抗体、抗原等物质由于受外界金属离子、pH变动、温度变化等的影响而导致的活性或者结合能力下降。稳定剂的使用可以明显提高蛋白的稳定性，从而增加ELISA试剂盒的检测稳定性。传统的ELISA试剂盒稳定剂通常包含海藻糖、BSA等物质，这些稳定剂存在价格昂贵，配制过程繁琐，并且适用范围有限等缺陷。例如：对于含有小牛血清蛋白成分的ELISA试剂盒，一方面不能用于牛以及与其亲缘关系较近物种的ELISA检测，另一方面可能存在疯牛病病原体，具有潜在的生物危险性。

[0006] 因此，需要研究和开发一种具有较好稳定性能，且价格较低的生物制品稳定剂。

发明内容

[0007] 本发明的目的在于提供一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂及其制备方法，以解决现有技术中的问题。

[0008] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

[0009] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂，所述含蔗糖的生物制品稳定剂主要包括以下重量份数的原料组分：10 12份蔗糖，10 15份海藻糖，3 5份表面活性剂和~ ~ ~120 200份双蒸水；海藻糖和双蒸水的为产品的基本配方，在加入产品中后提高产品的实用~
性。

[0010] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂，所述含蔗糖的生物制品稳定剂还包括以下重量份数的原料组分：4 8份四钛酸，10 12份改性壳聚糖和8 15份改性羟乙~ ~ ~基纤维素，四钛酸的加入，可提高产品中和金属离子的能力，提高产品的稳定性，改性壳聚糖和改性羟乙基纤维素的加入可在产品中形成微交联的网络结构，从而使产品在使用过程中形成保护网络，在提高产品对金属离子的吸附性的同时可提高从产品的抗菌性，提高产品使用后生物制品的稳定性。

[0011] 作为优化，所述表面活性剂为吐温-20或吐温-30中任意一种。

[0012] 作为优化，所述四钛酸由碳酸钾和二氧化钛经混合煅烧，酸化后制得；所述改性壳聚糖有壳聚糖经柠檬酸和二乙烯三胺改性制得；所述改性羟乙基纤维素由羟乙基纤维素经环氧大豆油改性制得。

[0013] 作为优化，所述含蔗糖的生物制品稳定剂包括以下重量份数的原料组分：10份蔗糖，15份海藻糖，4份吐温-30，2份生物防腐剂Proclin 300，160份双蒸水，5份四钛酸，10份改性壳聚糖和12份改性羟乙基纤维素。

[0014] 作为优化，一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂的制备方法主要包括以下步骤：

[0015] （1）将碳酸钾与二氧化钛混合研磨后，煅烧，再进行酸处理，过滤，洗涤，干燥；

[0016] （2）将壳聚糖与柠檬酸混合，并加入二乙烯三胺，搅拌反应后，旋蒸浓缩；

[0017] （3）将羟乙基纤维素与环氧大豆油混合反应后，旋蒸浓缩；

[0018] （4）将蔗糖与双蒸水混合，并加入表面活性剂，步骤（1）所得物质，步骤（2）所得物质和步骤（3）所得物质，搅拌反应后，再加入催化剂，继续反应后，洗涤；

[0019] （5）将步骤（4）所得物质与海藻糖混合，并加入生物防腐剂Proclin 300，搅拌混合；

[0020] （6）对步骤（5）所得物质进行指标分析。

[0021] 作为优化，一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂的制备方法主要包括以下步骤：

[0022] （1）将碳酸钾与二氧化钛按质量比1：3 1：4混合研磨10 12h后，于温度为800 1000~ ~ ~℃的条件下煅烧1 3h，得四钛酸钾，将四钛酸钾与质量分数为10 15%的盐酸溶液按质量比~ ~
1：10 1：12混合，于功率为800 1000w的微波条件下反应2 4h后，过滤，洗涤，干燥；
~ ~ ~

[0023] （2）将壳聚糖与柠檬酸按质量比3：1 4：1混合于烧杯中，并向烧杯中加入壳聚糖质~量10 18倍的质量分数为2%的醋酸溶液，壳聚糖质量0.2 0.5倍的二乙烯三胺，于频率为45~ ~ ~
55kHz的条件下超声分散20 30min后，得壳聚糖混合溶液，将壳聚糖混合溶液与石蜡按体积~
比3：1混合于烧瓶中，并向烧瓶中加入壳聚糖混合溶液体积0.02 0.10倍的司盘-80和壳聚~
糖混合溶液体积0.04 0.08倍的戊二醛，调节烧瓶内物料的pH至8.5 10.0，于温度为70 75~ ~ ~
℃，转速为250 320r/min的条件下搅拌反应2 3h后，于温度为60 90℃，转速为120 140r/~ ~ ~ ~
min，压力为500 600kPa的条件下旋蒸浓缩至含水率为0.01%；
~

[0024] （3）将羟乙基纤维素与环氧大豆油按质量比1：1混合于三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入羟乙基纤维素质量40 50倍的二甲基亚砜和羟乙基纤维素质量1 5倍的四氯化锡溶~ ~液，于温度为40 60℃，转速为300 320r/min的条件下混合反应30 40min后，于温度为60 90~ ~ ~ ~
℃，转速为120 140r/min，压力为500 600kPa的条件下旋蒸浓缩至含液率为0.1 0.2%；
~ ~ ~

[0025] （4）将蔗糖与双蒸水按质量比1：10 1：15混合于反应釜中，并向反应釜中依次加入~蔗糖质量0.2 0.3倍的吐温-30，蔗糖质量0.4 0.6倍的步骤（1）所得物质，蔗糖质量0.9 1.1~ ~ ~
倍的步骤（2）所得物质和蔗糖质量0.7 1.0倍的步骤（3）所得物质，于温度为30 45℃，转速~ ~
为300 380r/min的条件下搅拌混合30 40min后，再向反应釜中加入蔗糖质量0.1 0.2倍的~ ~ ~
催化剂，于温度为60 80℃，转速为280 350r/min的条件下，继续反应2 4h后，得预处理坯~ ~ ~
料，将预处理坯料与质量分数为5 8%的银离子溶液按质量比3：1混合，于温度为50 80℃，转~ ~
速为260 350r/min的条件下搅拌反应2 3h后，过滤，去除滤渣；
~ ~

[0026] （5）将步骤（4）所得物质与海藻糖按质量比15：1 20：1混合，并加入步骤（4）所得物~质0.01 0.02倍的生物防腐剂Proclin 300，搅拌混合；
~

[0027] （6）对步骤（5）所得物质进行指标分析。

[0028] 作为优化，步骤（3）所述四氯化锡溶液为将四氯化锡与二甲基亚砜按质量比1：6~1：8混合，得四氯化锡溶液。

[0029] 作为优化，步骤（4）所述催化剂为氯化镁或氯化锌中任意一种。

[0030] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：

[0031] （1）本发明在制备含蔗糖的生物制品稳定剂时，加入改性壳聚糖和改性羟乙基纤维素，首先，壳聚糖在经过改性后，壳聚糖分子链上接枝胺基和羧甲基，从而使改性壳聚糖具有更好的水溶性，在加入产品中后，可有效提高产品的抗菌性能，提高产品使用后，生物制品的稳定性，其次，羟乙基纤维素在经过改性后可将环氧大豆油接枝于羟乙基纤维素的分子链上，在加入产品中后，可在催化剂的作用下形成微交联的网络结构，从而提高产品的金属离子吸附性能，进一步提高产品使用后生物制品的稳定性，并且由于环氧大豆油可随羟乙基纤维素分散于产品之中，从而可对生物制品起到更好的保护作用，提高产品使用后生物制品的稳定性；

[0032] （2）本发明在制备含蔗糖的生物制品稳定剂时，加入四钛酸和蔗糖，一方面，加入的四钛酸为层状化合物，层间含有负电荷，在加入产品中后，可提高产品吸附金属离子的性能，从而提高产品使用后，生物制品的稳定性，另一方面，四钛酸可配合改性壳聚糖一同调节产品体系的pH，从而使产品使用后，生物制品的稳定性进一步提高。

具体实施方式

[0033] 面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0034] 为了更清楚的说明本发明提供的方法通过以下实施例进行详细说明，在以下实施例中制作的用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂的各指标测试方法如下：

[0035] 稳定性：从蛋白库中选取3个蛋白，分别编号为1号蛋白，2号蛋白和3号蛋白，将3个蛋白各取一半，分别以50μg/mL的浓度保存于常规蛋白冻存液A（40%甘油水溶液）和复配蛋白冻存液B（即常规蛋白冻存液加入5%各实施例和对比例所得的稳定剂）中，于温度为-20℃的条件下，保存一段时间后，测温度为4℃条件下1个月，3个月，6个月，9个月和12个月后蛋白浓度；

[0036] 金属离子稳定性：从蛋白库中选取3个蛋白，分别编号为1号蛋白，2号蛋白和3号蛋白，将3个蛋白各取一半，分别以50μg/mL的浓度保存于常规蛋白冻存液A（40%甘油水溶液）和复配蛋白冻存液B（即常规蛋白冻存液加入5%各实施例和对比例所得的稳定剂）中，并向常规蛋白冻存液A和复配蛋白冻存液B中各加入2μg/mL的铜离子，于温度为-20℃的条件下，保存一段时间后，测量温度为4℃条件下6个月后蛋白浓度；

[0037] 实施例1：

[0038] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂，按重量份数计，主要包括以下重量份数的原料组分：10份蔗糖，15份海藻糖，4份吐温-30，2份生物防腐剂Proclin 300，160份双蒸水，5份四钛酸，10份改性壳聚糖和12份改性羟乙基纤维素。

[0039] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺，所述含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺主要包括以下步骤：

[0040] （1）将碳酸钾与二氧化钛按质量比1：3 1：4混合研磨12h后，于温度为800℃的条件~下煅烧2h，得四钛酸钾，将四钛酸钾与质量分数为15%的盐酸溶液按质量比1：12混合，于功率为8000w的微波条件下反应3h后，过滤，得滤饼，将滤饼用去离子水洗涤3次后，于温度为
80℃的条件下干燥2h；

[0041] （2）将脱乙酰度70%的壳聚糖与柠檬酸按质量比4：1混合于烧杯中，并向烧杯中加入脱乙酰度70%的壳聚糖质量18倍的质量分数为2%的醋酸溶液，脱乙酰度70%的壳聚糖质量0.3倍的二乙烯三胺，于频率为55kHz的条件下超声分散30min后，得壳聚糖混合溶液，将壳聚糖混合溶液与石蜡按体积比3：1混合于烧瓶中，并向烧瓶中加入壳聚糖混合溶液体积0.1倍的司盘-80和壳聚糖混合溶液体积0.06倍的戊二醛，调节烧瓶内物料的pH至10.0，于温度为75℃，转速为300r/min的条件下搅拌反应3h后，于温度为80℃，转速为140r/min，压力为
600kPa的条件下旋蒸浓缩至含水率为0.01%；

[0042] （3）将羟乙基纤维素与环氧大豆油按质量比1：1混合于三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入羟乙基纤维素质量50倍的二甲基亚砜和羟乙基纤维素质量4倍的四氯化锡溶液，于温度为50℃，转速为320r/min的条件下混合反应40min后，于温度为80℃，转速为140r/min，压力为600kPa的条件下旋蒸浓缩至含液率为0.2%；

[0043] （4）将蔗糖与双蒸水按质量比1：15混合于反应釜中，并向反应釜中依次加入蔗糖质量0.3倍的吐温-30，蔗糖质量00.6倍的步骤（1）所得物质，蔗糖质量1.1倍的步骤（2）所得物质和蔗糖质量1.0倍的步骤（3）所得物质，于温度为45℃，转速为350r/min的条件下搅拌混合40min后，再向反应釜中加入蔗糖质量0.2倍的催化剂，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下，继续反应4h后，得预处理坯料，将预处理坯料与质量分数为6%的银离子溶液按质量比3：1混合，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下搅拌反应3h后，过滤，去除滤渣；

[0044] （5）将步骤（4）所得物质与海藻糖按质量比18：1混合，并加入步骤（4）所得物质0.02倍的生物防腐剂Proclin 300，于温度为30℃，转速为300r/min的条件下搅拌混合2h；

[0045] （6）对步骤（5）所得物质进行指标分析。

[0046] 作为优化，步骤（3）所述四氯化锡溶液为将四氯化锡与二甲基亚砜按质量比1：8混合，得四氯化锡溶液。

[0047] 作为优化，步骤（4）所述催化剂为氯化镁。

[0048] 实施例2：

[0049] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂，按重量份数计，主要包括以下重量份数的原料组分：10份蔗糖，15份海藻糖，4份吐温-30，2份生物防腐剂Proclin 300，160份双蒸水，10份改性壳聚糖和12份改性羟乙基纤维素。

[0050] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺，所述含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺主要包括以下步骤：

[0051] （1）将脱乙酰度70%的壳聚糖与柠檬酸按质量比4：1混合于烧杯中，并向烧杯中加入脱乙酰度70%的壳聚糖质量18倍的质量分数为2%的醋酸溶液，脱乙酰度70%的壳聚糖质量0.3倍的二乙烯三胺，于频率为55kHz的条件下超声分散30min后，得壳聚糖混合溶液，将壳聚糖混合溶液与石蜡按体积比3：1混合于烧瓶中，并向烧瓶中加入壳聚糖混合溶液体积0.1倍的司盘-80和壳聚糖混合溶液体积0.06倍的戊二醛，调节烧瓶内物料的pH至10.0，于温度为75℃，转速为300r/min的条件下搅拌反应3h后，于温度为80℃，转速为140r/min，压力为
600kPa的条件下旋蒸浓缩至含水率为0.01%；

[0052] （2）将羟乙基纤维素与环氧大豆油按质量比1：1混合于三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入羟乙基纤维素质量50倍的二甲基亚砜和羟乙基纤维素质量4倍的四氯化锡溶液，于温度为50℃，转速为320r/min的条件下混合反应40min后，于温度为80℃，转速为140r/min，压力为600kPa的条件下旋蒸浓缩至含液率为0.2%；

[0053] （3）将蔗糖与双蒸水按质量比1：15混合于反应釜中，并向反应釜中依次加入蔗糖质量0.3倍的吐温-30，蔗糖质量1.1倍的步骤（1）所得物质和蔗糖质量1.0倍的步骤（2）所得物质，于温度为45℃，转速为350r/min的条件下搅拌混合40min后，再向反应釜中加入蔗糖质量0.2倍的催化剂，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下，继续反应4h后，得预处理坯料，将预处理坯料与质量分数为6%的银离子溶液按质量比3：1混合，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下搅拌反应3h后，过滤，去除滤渣；

[0054] （4）将步骤（3）所得物质与海藻糖按质量比18：1混合，并加入步骤（3）所得物质0.02倍的生物防腐剂Proclin 300，于温度为30℃，转速为300r/min的条件下搅拌混合2h；

[0055] （5）对步骤（4）所得物质进行指标分析。

[0056] 作为优化，步骤（2）所述四氯化锡溶液为将四氯化锡与二甲基亚砜按质量比1：8混合，得四氯化锡溶液。

[0057] 作为优化，步骤（3）所述催化剂为氯化镁。

[0058] 实施例3：

[0059] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂，按重量份数计，主要包括以下重量份数的原料组分：10份蔗糖，15份海藻糖，4份吐温-30，2份生物防腐剂Proclin 300，160份双蒸水，5份四钛酸，10份壳聚糖和12份改性羟乙基纤维素。

[0060] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺，所述含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺主要包括以下步骤：

[0061] （1）将碳酸钾与二氧化钛按质量比1：3 1：4混合研磨12h后，于温度为800℃的条件~下煅烧2h，得四钛酸钾，将四钛酸钾与质量分数为15%的盐酸溶液按质量比1：12混合，于功率为8000w的微波条件下反应3h后，过滤，得滤饼，将滤饼用去离子水洗涤3次后，于温度为
80℃的条件下干燥2h；

[0062] （2）将羟乙基纤维素与环氧大豆油按质量比1：1混合于三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入羟乙基纤维素质量50倍的二甲基亚砜和羟乙基纤维素质量4倍的四氯化锡溶液，于温度为50℃，转速为320r/min的条件下混合反应40min后，于温度为80℃，转速为140r/min，压力为600kPa的条件下旋蒸浓缩至含液率为0.2%；

[0063] （3）将蔗糖与双蒸水按质量比1：15混合于反应釜中，并向反应釜中依次加入蔗糖质量0.3倍的吐温-30，蔗糖质量00.6倍的步骤（1）所得物质，蔗糖质量1.1倍的壳聚糖和蔗糖质量1.0倍的步骤（2）所得物质，于温度为45℃，转速为350r/min的条件下搅拌混合40min后，再向反应釜中加入蔗糖质量0.2倍的催化剂，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下，继续反应4h后，得预处理坯料，将预处理坯料与质量分数为6%的银离子溶液按质量比3：1混合，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下搅拌反应3h后，过滤，去除滤渣；

[0064] （4）将步骤（3）所得物质与海藻糖按质量比18：1混合，并加入步骤（3）所得物质0.02倍的生物防腐剂Proclin 300，于温度为30℃，转速为300r/min的条件下搅拌混合2h；

[0065] （5）对步骤（4）所得物质进行指标分析。

[0066] 作为优化，步骤（2）所述四氯化锡溶液为将四氯化锡与二甲基亚砜按质量比1：8混合，得四氯化锡溶液。

[0067] 作为优化，步骤（3）所述催化剂为氯化镁。

[0068] 实施例4：

[0069] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂，按重量份数计，主要包括以下重量份数的原料组分：10份蔗糖，15份海藻糖，4份吐温-30，2份生物防腐剂Proclin 300，160份双蒸水，5份四钛酸，10份改性壳聚糖和12份羟乙基纤维素。

[0070] 一种用于ELISA试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺，所述含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺主要包括以下步骤：

[0071] （1）将碳酸钾与二氧化钛按质量比1：3 1：4混合研磨12h后，于温度为800℃的条件~下煅烧2h，得四钛酸钾，将四钛酸钾与质量分数为15%的盐酸溶液按质量比1：12混合，于功率为8000w的微波条件下反应3h后，过滤，得滤饼，将滤饼用去离子水洗涤3次后，于温度为
80℃的条件下干燥2h；

[0072] （2）将脱乙酰度70%的壳聚糖与柠檬酸按质量比4：1混合于烧杯中，并向烧杯中加入脱乙酰度70%的壳聚糖质量18倍的质量分数为2%的醋酸溶液，脱乙酰度70%的壳聚糖质量0.3倍的二乙烯三胺，于频率为55kHz的条件下超声分散30min后，得壳聚糖混合溶液，将壳聚糖混合溶液与石蜡按体积比3：1混合于烧瓶中，并向烧瓶中加入壳聚糖混合溶液体积0.1倍的司盘-80和壳聚糖混合溶液体积0.06倍的戊二醛，调节烧瓶内物料的pH至10.0，于温度为75℃，转速为300r/min的条件下搅拌反应3h后，于温度为80℃，转速为140r/min，压力为
600kPa的条件下旋蒸浓缩至含水率为0.01%；

[0073] （3）将蔗糖与双蒸水按质量比1：15混合于反应釜中，并向反应釜中依次加入蔗糖质量0.3倍的吐温-30，蔗糖质量00.6倍的步骤（1）所得物质，蔗糖质量1.1倍的步骤（2）所得物质和蔗糖质量1.0倍的羟乙基纤维素，于温度为45℃，转速为350r/min的条件下搅拌混合40min后，再向反应釜中加入蔗糖质量0.2倍的催化剂，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下，继续反应4h后，得预处理坯料，将预处理坯料与质量分数为6%的银离子溶液按质量比
3：1混合，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下搅拌反应3h后，过滤，去除滤渣；

[0074] （4）将步骤（3）所得物质与海藻糖按质量比18：1混合，并加入步骤（3）所得物质0.02倍的生物防腐剂Proclin 300，于温度为30℃，转速为300r/min的条件下搅拌混合2h；

[0075] （5）对步骤（4）所得物质进行指标分析。

[0076] 作为优化，步骤（3）所述催化剂为氯化镁。

[0077] 对比例：

[0078] 一种含蔗糖的生物制品稳定剂，按重量份数计，主要包括以下重量份数的原料组分：10份蔗糖，15份海藻糖，4份吐温-30，2份生物防腐剂Proclin 300，160份双蒸水，10份壳聚糖和12份羟乙基纤维素。

[0079] 一种含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺，所述含蔗糖的生物制品稳定剂的制备工艺主要包括以下步骤：

[0080] （1）将蔗糖与双蒸水按质量比1：15混合于反应釜中，并向反应釜中依次加入蔗糖质量0.3倍的吐温-30，蔗糖质量1.1倍的壳聚糖和蔗糖质量1.0倍的羟乙基纤维素，于温度为45℃，转速为350r/min的条件下搅拌混合40min后，再向反应釜中加入蔗糖质量0.2倍的催化剂，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下，继续反应4h后，得预处理坯料，将预处理坯料与质量分数为6%的银离子溶液按质量比3：1混合，于温度为80℃，转速为350r/min的条件下搅拌反应3h后，过滤，去除滤渣；

[0081] （2）将步骤（1）所得物质与海藻糖按质量比18：1混合，并加入步骤（1）所得物质0.02倍的生物防腐剂Proclin 300，于温度为30℃，转速为300r/min的条件下搅拌混合2h；

[0082] （3）对步骤（2）所得物质进行指标分析。

[0083] 效果例1：

[0084] 下表1给出了采用本发明实施例1至4与对比例的含蔗糖的生物制品稳定剂及其制备工艺的蛋白储存稳定性分析结果。

[0085] 表1

[0086]

[0087] 从表1中实施例1和对照组A的比较可发现，当产品中加入稳定剂后，可有效延长蛋白的保存时间，防止蛋白在9个月后的大量降解，从实施例2与实施例1的比较可看出，当产品中不加入四钛酸时，对蛋白在12个月后蛋白的降解影响不大，从实施例1与实施例3的比较可发现，当壳聚糖未经过改性加入产品中后，产品体系中的微交联消失，从而使蛋白的降解率提高，从实施例1与实施例4的比较可得，当产品中加入的羟乙基纤维素未经过改性时，产品中缺少了环氧大豆油，从而使产品的稳定性下降，进而使蛋白的降解率提高。

[0088] 效果例2：

[0089] 下表2给出了采用本发明实施例1至4与对比例的含蔗糖的生物制品稳定剂及其制备工艺的蛋白金属离子稳定性分析结果。

[0090] 表2

[0091]

[0092] 从表2中实施例1和对照组A的比较可发现，当产品中加入稳定剂后，可有效降低金属离子对蛋白的影响，延缓蛋白的降解率，延长蛋白的储存时间，从实施例1和实施例2的比较可发现，当产品中不加入四钛酸时，产品吸附金属离子的性能降低，从而使蛋白在6个月后的蛋白浓度降低，从而实施例1与实施例3的比较可发现，当产品中加入的壳聚糖未经过改性时，在加入产品中后无法形成有效的微交联网络，同时壳聚糖的溶解性较差，影响产品对金属离子的吸附性，进而使蛋白在6个月后的蛋白浓度降低，从实施例1与实施例4的比较可发现，当产品中加入的羟乙基纤维素未经过改性时，在加入产品中后，无法与改性壳聚糖形成有效的微交联，且随着环氧大豆油的消失，影响产品对蛋白的保护性能，进而使蛋白在6个月后的蛋白浓度降低。

[0093] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。