复方龙脑抗菌剂转让专利
申请号 : CN201910716008.0
文献号 : CN110227071B
文献日 : 2019-11-22
发明人 : 熊振宇 , 徐旭 , 杨海宽
申请人 : 江西省林业科学院
摘要 :
本发明提供了一种复方龙脑抗菌剂，属于医药制剂技术领域。一种复方龙脑抗菌剂，按质量百分比计算，包括如下组分及配比：乙酸龙脑酯85‑90%、柠檬烯2.5‑5%、龙脑5‑10%、水杨酸甲酯1‑1.5%。本发明提供的抗菌剂，抑菌和杀菌效果显著，能够用于抑制和杀灭金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌，具有抗菌广谱性，适用性广。本发明的抗菌剂可以治疗多种真菌或细菌等引起的感染性皮肤病，缓解伤口感染，且对皮肤无毒性、无刺激性，安全有效。
权利要求 :
1.复方龙脑抗菌剂，按质量百分比计算，包括如下组分及配比：乙酸龙脑酯85-90%、柠檬烯2.5-5%、龙脑5-10%、水杨酸甲酯1-1.5%。
2.根据权利要求1所述的复方龙脑抗菌剂，按质量百分比计算，包括如下组分及配比：乙酸龙脑酯88%、柠檬烯2.5%、龙脑8%、水杨酸甲酯1.5%。
3.根据权利要求1所述的复方龙脑抗菌剂，所述龙脑选自天然龙脑。
4.根据权利要求1所述的复方龙脑抗菌剂，可根据实际需要加入医药制剂上允许加入的辅料制成任意一种外用医药制剂剂型。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的复方龙脑抗菌剂， 其剂型为软膏剂、洗剂。
说明书 :
复方龙脑抗菌剂
技术领域
[0001] 本发明属于医药制剂技术领域，具体涉及一种复方龙脑抗菌剂。
背景技术
[0002] 龙脑（Borneol），亦称冰片，包括右旋龙脑、左旋龙脑与异龙脑三种异构体。龙脑作为芳香开窍药的代表药，发挥着重要的独行与佐使作用。目前，国内外对于冰片的抗菌已有不少研究报道，在对14种常见致病菌株进行体外的抑菌实验，发现龙脑对金黄色葡萄球菌、耐药金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌有明显的抑菌作用，在较低浓度时有抑菌作用，高浓度时有杀菌作用，抑菌效果随作用时间增加而增强，随药物浓度的降低而减弱（Unlu M, Daferera D, Donmez E, Polissiou M, Tepe B, Sokmen A. Compositions and the in vitro antimicrobial activities of the essential oils of Achillea setacea and Achillea teretifolia[J].J Ethnopharmacol,2002;83:117–21； 牟家碗,杨胜华,孙玉梅等.龙脑与异龙脑的体外抗菌作用的研究[J],华西药学杂志,1989,4(l):20-22.；黄晓敏,廖玲军,曾松荣等.梅花冰片3种剂型体外抗菌活性研究[J].江西中医学院学报,2005,17(1):63-65.），同时，冰片对抗真菌表现出良好效果，从化脓性中耳炎患者外耳道分泌物中分离出黑曲菌等真菌菌株，通过电镜观察，在龙脑作用下黑曲霉细胞膜、细胞质受到破坏出现大量电子空白区（ETA），线粒体变形，菌丝皱缩，扭曲变形，导致真菌溶解死亡（常松平,李玉春等.冰片对真菌细胞超微结构的影响及治疗化脓性中耳炎的临床应用[J].中国中药杂志,2000,25(5):306-308.）。
[0003] 柠檬烯（Limonene），广泛存在于植物中的单环单萜，天然柠檬烯以D-柠檬烯、DL-柠檬烯、L-柠檬烯3种异构体的形式存在于植物挥发油中，常被用作食品添加剂。国外也有文献将柠檬烯用作食品防腐剂，并对其抑菌效果进行了研究。国内研究发现，柠檬烯对啤酒酵母、面包酵母、黑曲霉具有抑菌作用，且抑菌效果明显优于山梨酸钾和苯甲酸钠，但对金黄色葡萄球菌没有明显抑菌作用（王雪梅,谌徽，李雪姣,等.天然活性单萜-柠檬烯的抑菌性能研究[J]吉林农业大学学报,2010,32(1):24-28.）。
[0004] 乙酸龙脑酯，又称为乙酸冰片酯，为无色液体及结晶体，具有止泻、镇痛、抑制肠平滑肌痉挛等作用，其中，镇痛作用较为明显。同时，乙酸龙脑酯也是室内喷雾香料、浴用香料、爽身粉的重要组分。
[0005] 水杨酸甲酯，又称为邻羟基苯甲酸甲酯，是一种无色或浅黄色、或浅黄红色透明油状液体，有强烈的冬青油香气。
[0006] 目前，随着抗生素被广泛使用于各类细菌和致病微生物所导致的疾病方面上的治疗，病菌对于抗生素的耐药性也逐渐显现，因此，需要寻找有效、广谱的新型抗菌剂。
[0007] 至今为止，尚未出现水杨酸甲酯、冰片、柠檬烯、乙酸龙脑酯、龙脑复合的外用抗菌制剂的相关报道。
发明内容
[0008] 针对上述情况，本发明提供了一种复方龙脑抗菌剂，选用植物中存在的天然成分复配组合，组成可以抑制和杀灭病菌的抗菌剂，该抗菌剂的抗菌效果显著，具有抗菌广谱性。
[0009] 本发明的技术方案如下：
[0010] 本发明提供了一种复方龙脑抗菌剂，按质量百分比计算，包括如下组分及配比：乙酸龙脑酯85-90%、柠檬烯2.5-5%、龙脑5-10%、水杨酸甲酯1-1.5%。
[0011] 进一步的，所述复方龙脑抗菌剂，按质量百分比计算，包括如下组分及配比：乙酸龙脑酯88%、柠檬烯2.5%、龙脑8%、水杨酸甲酯1.5%。
[0012] 进一步的，所述复方龙脑抗菌剂，所述龙脑选自天然龙脑。
[0013] 进一步的，所述复方龙脑抗菌剂可根据实际需要加入医药制剂上允许加入的辅料和助剂制成任意一种外用医药制剂剂型；优选剂型为软膏剂、洗剂、乳膏。
[0014] 本发明相较于现有技术，其有益效果在于：
[0015] 1、本发明提供的抗菌剂，抑菌和杀菌效果显著，能够抑制和杀灭金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌，具有抗菌广谱性，适用性广，可以克服抗生素抗菌的耐药性。
[0016] 2、本发明的抗菌剂选用多种组分混合，可以外用治疗多种真菌或细菌等引起的感染性皮肤病，缓解伤口感染，且对皮肤无毒性、无刺激性，安全有效，其抑菌抗菌效果与龙脑单药相比，效果更佳，用量更少。
具体实施方式
[0017] 下面结合具体实施例，对本发明作进一步地说明。
[0018] 实施例一 配方及制剂制备
[0019] 制剂1 复方龙脑抗菌软膏剂
[0020] 配方：
[0021] 主药：乙酸龙脑酯8.5g、柠檬烯0.4g、龙脑1g、水杨酸甲酯0.1g；
[0022] 基质：90g凡士林、10g羊毛脂；
[0023] 软膏剂制剂制备过程：
[0024] （1）分别称取配方比的主药，并将其中的龙脑研细；
[0025] （2）各称取重量为配方一半量的凡士林和羊毛脂，并将凡士林和羊毛脂研匀制得软膏基质；
[0026] （3）将乙酸龙脑酯以等量递增地形式加入到软膏基质中，研匀，之后，再将龙脑、柠檬烯、水杨酸甲酯依次分别加入到软膏基质中，研匀；
[0027] （4）继续向其中加入剩余的凡士林和羊毛脂，研匀即得复方龙脑抗菌软膏剂，密封后于阴凉处保存或冷藏保存。
[0028] 制剂2 复方龙脑抗菌洗剂
[0029] 配方：
[0030] 主药：乙酸龙脑酯8.8g、柠檬烯0.25g、龙脑0.8g、水杨酸甲酯0.15g；
[0031] 溶剂：乙醇
[0032] 洗剂制备过程：
[0033] 称取配方比的主药后混合，并向其中加入适量乙醇溶液，配置成含药量0.1g/ml-0.2g/ml的溶液，即得复方龙脑抗菌洗剂，密封后于阴凉处保存或冷藏保存。
[0034] 制剂3 复方龙脑抗菌乳膏
[0035] 配方：
[0036] 主药：乙酸龙脑酯9g、柠檬烯0.4g、龙脑0.5g、水杨酸甲酯0.1g；
[0037] 基质：单硬脂酸甘油酯2.8g、硬脂酸9.6g、白凡士林2.4g、液体石蜡2g、甘油2.4g、蒸馏水80g、十二烷基磺酸钠0.1g、尼泊金乙酯0.01g。
[0038] 乳膏制备过程：
[0039] （1）称取各主药，并将其中的龙脑研细；
[0040] （2）将硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、液体石蜡、白凡士林共置于干燥烧杯内，水浴加热至70-80℃，使全熔；
[0041] （3）将甘油与蒸馏水共置另一烧杯中，水浴加热至80-90℃，再向其中加入十二烷基硫酸钠与尼泊金乙酯，使全熔；
[0042] （4）在等温下将水相缓缓加到油相中，边加边搅拌，直到冷凝，即得乳膏基质；
[0043] （5）分别将乙酸龙脑酯、龙脑、柠檬烯、水杨酸甲酯快速加入到基质中，搅匀，即得复方龙脑抗菌乳膏，密封后于阴凉处保存或冷藏保存。
[0044] 实施例二 体外抗菌实验
[0045] 1 实验菌种
[0046] 金黄色葡萄球菌（Staphylococusaureus,ATCC6538）、
[0047] 白色念珠菌（Candida albicans, ATCC10231）、
[0048] 大肠杆菌（Escherichia coli (Migula) Castellani et Chulmers，ATCC8099）；
[0049] 2 药品与试剂
[0050] 氯化钠（分析纯AR）、胰蛋白胨、酵母浸膏、琼脂粉、PBS 缓冲液
[0051] 培养基：牛肉膏汤液体培养基：自制-牛肉膏汤液体培养基（细菌培养基）的制备：称取牛肉浸膏2.0g、蛋白胨2.0g、氯化钠1.0g， 放入烧杯内，加少量蒸馏水加热熔化后，再加蒸馏水至200ml，然后用20g/dl 氢氧化钠溶液调节其pH值至7.4-7.6，用滤纸过滤，用三角烧瓶包装好，以103.4kPa灭菌20分钟。
[0052] 液体沙保弱氏培养基（SD）（真菌培养基）：购自广东省科学院微生物研究所，然后于115℃高压灭菌15分钟备用。
[0053] 器材：试管、移液管、试管架、小三角烧瓶、接种环、50μL 和 100μL 加样器、洁净工作台、小型电热灭菌器、生化培养箱。
[0054] 试剂：1mol/L 盐酸；200g/L 氢氧化钠溶液；甲醇。
[0055] 3 抗菌剂与阳性对照物
[0056] 龙脑(B)；
[0057] 乙酸龙脑酯（CB）；
[0058] 水杨酸甲酯（S）；
[0059] 柠檬烯（N）；
[0060] 复方龙脑抗菌剂(FB)，由乙酸龙脑酯8.8g、柠檬烯0.25g、龙脑0.8g、水杨酸甲酯0.15g混合均匀后组成；
[0061] 青霉素钠80万单位（BS）；
[0062] 酮康唑（KCZ）；
[0063] 复方倍氯米松樟脑乳膏（BZ）；
[0064] 无菌操作下，各抗菌剂与对照物分别用甲醇溶解并定容，制成含药量10mg/ml的原液，4℃冰箱避光密封保存，备用。
[0065] 4实验方法
[0066] 例1 抗金黄色葡萄球菌实验
[0067] 每排试管 12 支，编号1-12号，总共7排试管，采用试管内药液二倍稀释法稀释药液，即肉汤稀释法。将10mg/ml的龙脑原液、10mg/ml的乙酸龙脑酯原液、10mg/ml的复方龙脑抗菌剂原液、10mg/ml的青霉素钠原液、10mg/ml的水杨酸甲酯原液、10mg/ml的柠檬烯原液、10mg/ml的复方倍氯米松樟脑乳膏原液各自用牛肉膏汤液体培养基稀释后，浓度为1280μg/ml，之后在每排的1、2号试管中分别各自加入上述稀释后的含不同抗菌药液的培养液2ml，然后，2号试管混匀后再吸出2ml液体到第3号试管中，3号试管混匀后再吸出到2ml液体4号试管中，如此依次地对倍稀释至10号试管，至此，每排的1-11号各管的抗菌药液稀释成浓度为1280μg/ml、640μg/ml、320μg/ml、160μg/ml至2.5μg/ml，各排1-11号试管中加入新鲜金黄
4
色葡萄球菌菌悬液（各试管的接种菌量约为2.5×10CFU/ml），各排12号试管中加入牛肉汤培养液2ml作为空白对照，以上试管都置于恒温培养箱中 37℃下培养 18h。
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色葡萄球菌菌悬液（各试管的接种菌量约为2.5×10CFU/ml），各排12号试管中加入牛肉汤培养液2ml作为空白对照，以上试管都置于恒温培养箱中 37℃下培养 18h。
[0068] 以肉眼观察液体无浑浊或沉淀、颜色无变化的药物最高稀释度，即无肉眼可见细菌生长的最低药物浓度作为药物对该菌株的最低抑菌浓度（MIC）。
[0069] 将上述无肉眼可见细菌生长的试管中的肉汤 0.05ml 划线接种于营养琼脂平皿上，35℃孵箱内孵育24小时，将已35℃孵育24小时的营养琼脂平皿取出，以平皿上无菌落生长的最低药物浓度（最高稀释度）作为最低杀菌浓度（MBC）的终点。结果见下表1。
[0070] 例2 抗白色念珠菌实验
[0071] 除将加入的菌种金黄色葡萄球菌替换为白色念珠菌，将10mg/ml的青霉素钠原液替换为10mg/ml的酮康唑原液之外，其余与例1的抗金黄色葡萄球菌实验方法相同，结果见下表1。
[0072] 例3 抗大肠杆菌实验
[0073] 除将加入的菌种金黄色葡萄球菌替换为大肠杆菌，去除10mg/ml的青霉素钠原液、青霉素钠、复方倍氯米松樟脑乳膏抗菌性能实验，减为5排试管实验，其余与例1的抗金黄色葡萄球菌实验方法相同，结果见下表1。
[0074] 表1 抗菌测定结果
[0075]
[0076] 注：龙脑(B)、复方龙脑抗菌剂（FB）、青霉素钠（BS）、酮康唑（KCZ）、复方倍氯米松樟脑乳膏（BZ）、水杨酸甲酯（S）、柠檬烯（N）；
[0077] 从表1可以看出，本发明提供的复方龙脑抗菌剂对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及大肠杆菌均这3种常见致病菌种均有抑制和杀灭的作用，且抑菌效果与抗生素的抑制和杀灭作用相近或更优。本发明提供的组分配伍，相较于冰片、乙酸龙脑酯等其他单一组分在对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及大肠杆菌的抑菌效果上，均具有更为良好的抑菌效果，显示了本发明的复合组分在抑菌效果及抗菌广谱性上的优异性。
[0078] 实施例三 体外毒理实验
[0079] 例1 皮肤刺激性实验
[0080] 1实验动物
[0081] 大耳白兔，全雄性，体重3.0±0.2Kg，由江西省药物研究所提供。实验前于实验室内观察喂养一周。试验时按组分笼饲养，每笼1只，自由进食进水。动物饲养房温度20±4℃，相对湿度为50%±10%。
[0082] 2实验方法
[0083] 采用同体自身对照，观察复方龙脑抗菌剂对受损皮肤和完整皮肤的刺激性作用。
[0084] ① 分组：随机取12只体重相近的大耳白兔，均分为2组，每组6只，雌雄各半，分别为完整皮肤组和受损皮肤组。
[0085] ② 实验方法：于实验前1天，给大耳白兔备皮，将其背部脊柱两侧脱毛，面积占全身10%左右。实验当天，将受损皮肤组用酒精对脱毛区消毒，用盐酸利多卡因溶液在大耳白兔背部随机做2个局部麻醉部位。5分钟后，用手术刀在去毛区作2个井字划伤，以轻度渗血为标准，左右两侧皮损程度尽量一致。待血流停止后，在各组动物左侧去毛区涂上 1ml 的复方龙脑抗菌软膏剂（上述实施例一中的例1制备得到制剂1），右侧给等量基质（与上述实施例一中的例1制备得到制剂1相同，除不加入任何主药）。用无菌纱布包扎固定，分笼饲养。完整皮肤组同样的采用同体自身对照。24小时后用温水洗去药物，于去除药物后1h、 12h、
24h、48h、72h、4d、5d观察给药部位有无红斑水肿等情况。按照《中药新药研究指南（药学、药理、毒理）》中皮肤刺激反应评分标准进行评价，并计算平均值，结果见表2。
24h、48h、72h、4d、5d观察给药部位有无红斑水肿等情况。按照《中药新药研究指南（药学、药理、毒理）》中皮肤刺激反应评分标准进行评价，并计算平均值，结果见表2。
[0086] 表2复方龙脑抗菌剂对皮肤刺激性试验结果
[0087]
[0088] 观察结果表明，涂敷本发明提供的复方龙脑抗菌剂后的完整皮肤及破损皮肤组的左右侧区均未出现明显红斑及水中现象，涂药部位也无色素沉着及出血点，另外，从表2也可以看出，本发明提供的复方龙脑抗菌剂对皮肤无刺激性。
[0089] 例2 皮肤过敏性实验
[0090] ① 分组：大耳白兔，体重3.0±0.2Kg，由江西省药物研究所提供。实验前于实验室内观察喂养一周。试验时按组分笼饲养，每笼1只，自由进食进水。动物饲养房温度20±4℃，相对湿度为50%±10%。
[0091] 随机取18只体重相近的大耳白兔，均分3组，每组6只，雌雄各半，分别为：A 组-复方龙脑抗菌剂（上述实施例一中的例1制备得到制剂1），B组-基质（与上述实施例一中的例1制备得到制剂1相同，除不加入任何主药），C组-对照组（1%致敏浓度2，4-二硝基氯苯溶液）。
[0092] ② 实验方法：于给药前1天，给大耳白兔备皮，将其背部脊柱左侧脱毛，每侧3×3cm2 。实验当天，给A、B、C组动物左侧去毛区分别涂抹复方龙脑抗菌剂、基质、1%DNCB各
0.2ml，用纱布包扎固定，分笼饲养。给药6小时后，洗去相应物。于实验的第7天和第14天以同样的方法各重复1次，共计3次刺激。末次给药后14天，采用同样的方法，将各组白兔右侧脱毛并涂抹相应处理物。6小时后去除受试物，立即观察皮肤过敏情况，于去除药物后的1、
24、48、72 小时继续观察皮肤过敏情况，同时注意观察动物是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身性过敏现象。
0.2ml，用纱布包扎固定，分笼饲养。给药6小时后，洗去相应物。于实验的第7天和第14天以同样的方法各重复1次，共计3次刺激。末次给药后14天，采用同样的方法，将各组白兔右侧脱毛并涂抹相应处理物。6小时后去除受试物，立即观察皮肤过敏情况，于去除药物后的1、
24、48、72 小时继续观察皮肤过敏情况，同时注意观察动物是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身性过敏现象。
[0093] 实验结果按照《中药新药研究指南（药学、药理、毒理）》中皮肤过敏反应程度的评分标准进行评价，结果见表3。
[0094] 表3复方龙脑抗菌剂对皮肤过敏性试验结果
[0095]
[0096] 观察结果表明，涂抹本发明提供的复方龙脑抗菌剂后的白兔两侧皮肤均未出现红斑水肿现象，从表3也可以看出，本发明提供的复方龙脑抗菌剂对皮肤无致敏性。
[0097] 综上所述，本发明提供的复方龙脑抗菌剂的抗菌抑菌效果好，抗菌广谱性，可外用，对皮肤无刺激性、无过敏性，安全无毒。
[0098] 以上所述仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形、改进及替代，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。