一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法

摘要

本发明涉及一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，包括以下步骤：将蜜蜂腹部粉末用含有PMSF的次氯酸钠溶液处理，离心，磁吸附，获得磁颗粒。本发明分离出的磁颗粒具有粒径均匀、分散性好、纯度高、磁性强、提取率高等特征。本发明所述方法，具有实验原料易获得，具体实施过程简单，对设备要求低，成本较低且有助于保护环境等优点。

权利要求

1.一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：将蜜蜂腹部粉末用含有PMSF的次氯酸钠溶液处理，离心，磁吸附，获得磁颗粒;蜜蜂腹部粉末与含有PMSF的次氯酸钠溶液的质量比为（2‑3）：5；次氯酸钠的质量分数为4.2‑6.3%；PMSF的浓度为7‑9 mg/L；离心速度为7000‑10000 rpm，离心时间为4‑10 分钟；将蜜蜂腹部粉末用含有PMSF的次氯酸钠溶液处理的方法为：将蜜蜂腹部粉末用含有PMSF的次氯酸钠溶液浸泡处理，浸泡时间为24‑

96小时，温度为4℃;蜜蜂腹部粉末的制备方法包括以下步骤：将蜜蜂腹部采用液氮研磨至粉末状态;在制备蜜蜂腹部粉末前对蜜蜂进行预处理，预处理的方法包括以下步骤：蜜蜂经乙醇溶液洗涤后晾干；提取得到的磁颗粒表面生物膜完整。

2.根据权利要求1所述一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，次氯酸钠的质量分数为6.3%。

3.根据权利要求1所述一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，将蜜蜂腹部粉末用次氯酸钠溶液处理的方法为：浸泡时间为48‑84小时。

4.根据权利要求3所述一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，将蜜蜂腹部粉末用次氯酸钠溶液处理的方法为：浸泡时间为72小时。

5.根据权利要求1所述一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，离心速度为8000‑

10000 rpm，离心时间为6‑10 分钟。

6.根据权利要求5所述一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，离心速度为9000 rpm，离心时间为8 分钟。

7.根据权利要求1所述一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，磁吸附的操作方法包括以下步骤：将离心得到的沉淀加入蒸馏水，将其底部固定磁铁进行吸附；磁吸附的时间为8‑12分钟。

8.根据权利要求1‑7任一项所述一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，蜜蜂腹部粉末的制备方法包括以下步骤：将蜜蜂腹部采用液氮研磨至粉末状态，研磨时间为4‑6分钟。

9.根据权利要求8所述一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，在制备蜜蜂腹部粉末前对蜜蜂进行预处理，预处理的方法包括以下步骤：蜜蜂经乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去除，取腹部；乙醇溶液中乙醇的体积分数为70‑90%。

10.根据权利要求1‑7任一项所述一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，其特征在于，在获得磁颗粒后，还包括将磁颗粒经蒸馏水洗涤，加入生理盐水保存的步骤；和/或在第一次离心后，倾去上清，补加含有PMSF的次氯酸钠溶液至原体积，再次离心，重复此步骤多次。

说明书

一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法

技术领域

[0001] 本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法。

背景技术

[0002] 磁颗粒具有良好的磁性能、大的比表面积、表面易于功能化等优异的物理化学性质。使用物理或化学方法便可人工合成，但其尺寸范围分布较广，表面不具生物膜，易发生
聚集，失去了磁性材料特有的性质。而生物体内合成的磁颗粒，是在生物体囊泡中矿化而
成，表面有生物膜的存在，使其具有生物相容性好、成分纯、磁性高、分散性好、晶型独特等
特点。由于其不易发生聚集、不具细胞毒性、拥有巨大的比表面积、颗粒均匀和其独特的生
物特性，极大的促进了磁颗粒的生物利用度，使得该磁颗粒在医药卫生、电子通讯、化工、生
物工程、磁记忆材料以及环境保护等方面具有广阔的应用前景。

[0003] 目前磁颗粒主要分离自趋磁细菌，面临的主要问题如下：一方面，趋磁细菌对培养基营养的质量和对氧分压要求十分严格，在大规模培养条件下，找到性状优良的菌种和高
效、高质量的提取方法，仍是待解决的难题。另一方面提取方法较少，付刚等人在“磁螺菌磁
小体形成的电镜观察及其纯化”中提到超声破碎、蔗糖梯度离心的方法，但此方法表明经过
超声打击后可能使磁颗粒膜上的结合蛋白脱落。Noriyuki Nakamura等人在“Immunoassay 
Method for the Determination of Immunoglobulin G Using Bacterial Magnetic 
Particles Anal”中提到溶菌酶或NaOH溶解破壁法，但此方法会使外膜受到破坏，容易引起
团聚。安学勤等(CN103449533B)提到超临界二氧化碳法，但此方法工艺复杂且对设备要求
高。

[0004] 因此，同样能够利用磁场来辨别方位以及方向的生物，将是作为磁颗粒提取的更好来源。早在1978年Gould等人就提出蜜蜂体内存在磁颗粒，随后很多科学家对其研究，先
后多次发现蜜蜂体内磁颗粒的存在。同时蜜蜂的养殖技术现已成熟，合理的养殖条件下，蜜
蜂生长快且可大量繁殖，养殖成本相对较低。另外，作为产蜜的工蜂，生命周期仅六个月，如
果大量的蜜蜂死亡后得到合理的利用，不仅可创造经济效益，同时对环境保护也具有重要
的意义。因此，设计一种环保、高效的从蜜蜂中提取磁颗粒的方法十分必要。但目前，尚未有
对蜜蜂中磁颗粒提取剂纯化方法的报导，而本发明对其进行了详细阐述，有效的改进了现
有技术中磁颗粒提取率低，操作复杂等问题，为最终实现磁颗粒的大量应用具有重要意义。

发明内容

[0005] 鉴于现有技术所存在的问题，本发明提供一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，采用此方法萃取分离获得的磁颗粒具有粒径小、粒径均匀、生物膜完整、单分散性好、纯度高、提取
率高、饱和磁化强度高、实验原料易获得，具体实施过程简单，对设备要求低，成本较低且有
助于保护环境等优点。

[0006] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

[0007] 一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，包括以下步骤：将蜜蜂腹部粉末用含有PMSF的次氯酸钠溶液处理，离心，磁吸附，获得磁颗粒。

[0008] 本发明的有益效果是：本发明利用次氯酸钠具有高的溶解蛋白的能力，将蜜蜂腹部的滋养细胞溶解，提高了磁颗粒的回收率，从而实现了磁颗粒的高效回收。PMSF为化学物
质苯甲基磺酰氟的英文简称，PMSF对磁颗粒表面的生物膜具有保护作用。之后再进行离心
能够更好地使蜜蜂腹部组织的内含物释放出来，并充分溶解蜜蜂腹部有机物，达到分离磁
颗粒的目的。采用磁性吸附得到的磁颗粒仍保持高的饱和磁化强度且更接近超顺磁性。本
发明采用次氯酸钠溶液处理之后离心处理相结合的方法，克服了单纯化学试剂溶解，使磁
颗粒提取不完全；也克服了传统生物方法提取的磁颗粒提取周期长、产量低的不足，为从蜜
蜂中提取磁颗粒的工业化生产奠定了实验基础。

[0009] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

[0010] 进一步，次氯酸钠溶液中，次氯酸钠的质量分数为2.1‑8.4％；优选地，次氯酸钠的质量分数为4.2‑6.3％,最优地，次氯酸钠的质量分数为6.3％。

[0011] 采用上述进一步方案的有益效果是：采用合适的次氯酸钠的浓度有利于溶解蛋白；如果浓度过高，容易导致磁颗粒表面膜被破坏；如果浓度过低，容易导致细胞破碎不完
全。

[0012] 进一步，蜜蜂腹部粉末与次氯酸钠溶液的质量比为(2‑3)：5。

[0013] 采用上述进一步方案的有益效果是：采用上述比例，有利于细胞破碎完全和保护磁颗粒膜的完整性。

[0014] 进一步，次氯酸钠溶液中，PMSF的浓度为7‑9mg/L。

[0015] 采用上述进一步方案的有益效果是：采用浓度为7‑9mg/L的PMSF有利于对磁颗粒膜的保护，如果浓度过高会造成浪费，如果浓度过低容易导致磁颗粒膜被破坏。

[0016] 进一步，将蜜蜂腹部粉末用次氯酸钠溶液处理的方法为：将蜜蜂腹部粉末用次氯酸钠溶液浸泡处理，浸泡时间为24‑96小时，温度为4℃；优选地，浸泡时间为48‑84小时,最
优地，浸泡时间为72小时。

[0017] 进一步，离心速度为7000‑10000rpm，离心时间为4‑10分钟；优选地，离心速度为8000‑10000rpm，离心时间为6‑10分钟；最优地，离心速度为9000rpm，离心时间为8分钟。

[0018] 采用上述方案的有益效果是：通过控制浸泡与离心的条件，使蜜蜂腹部内细胞外膜去除，而保持磁颗粒表面膜，克服了膜上蛋白容易脱落的不足。避免了团聚造成的粒径
大、单分散性差、粒径大小不一等问题。从而使获得的磁小体单分散性好的优点。

[0019] 优选地，在第一次离心后，倾去上清，补加含有PMSF的次氯酸钠溶液至原体积，再次离心，重复此步骤多次，例如3‑5次。

[0020] 采用上述方案的有益效果是：多次离心能够更好地使蜜蜂腹部组织的内含物释放出来，并充分溶解蜜蜂腹部有机物，达到分离磁颗粒的目的。

[0021] 进一步，磁吸附的操作方法包括以下步骤：将离心得到的沉淀加入蒸馏水，将其底部固定磁铁进行吸附；磁吸附的时间为8‑12分钟。

[0022] 采用上述进一步方案的有益效果是：合适的磁吸附时间有利于保证将磁颗粒完全吸附，提高提取效率。

[0023] 进一步，蜜蜂腹部粉末的制备方法包括以下步骤：将蜜蜂腹部采用液氮研磨至粉末状态，研磨时间为4‑6分钟。

[0024] 采用上述进一步方案的有益效果是：本发明将液氮研磨处理以及次氯酸钠溶液浸泡相结合，实现了高效离心分离。采用液氮研磨的方法，使液氮持续速冻蜜蜂腹部，有助于
充分研磨。合适的研磨时间有利于提高磁颗粒提取率，若研磨时间过长容易导致磁颗粒被
破坏，若研磨时间过短容易导致蜜蜂腹部破碎不完全，磁颗粒提取率降低。之后再进行离心
能够更好地使蜜蜂腹部组织的内含物释放出来，并充分溶解蜜蜂腹部有机物，达到分离磁
颗粒的目的。

[0025] 进一步，在制备蜜蜂腹部粉末前对蜜蜂进行预处理，预处理的方法包括以下步骤：蜜蜂经乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去除，取腹部；乙醇溶液的体积分数为70‑90％。

[0026] 采用上述进一步方案的有益效果是：采用乙醇溶液进行清洗，有利于消除蜜蜂身体表面细菌以及花粉等物质对实验结果造成的影响，乙醇溶液的体积分数为70‑90％可以
避免消毒不彻底等问题。

[0027] 进一步，在获得磁颗粒后，还包括将磁颗粒经蒸馏水洗涤，加入生理盐水保存的步骤。

[0028] 采用上述进一步方案的有益效果是：采用蒸馏水洗涤磁颗粒，有利于除去磁颗粒表面所吸附的物质，如细胞碎片等。

附图说明

[0029] 图1为实施例2提取出的磁颗粒形貌图(透射电子显微镜)。

[0030] 图2为实施例2提取出的磁颗粒红外光谱分析图。

[0031] 图3为实施例2提取出的磁颗粒在300K下的磁滞回线图。

具体实施方式

[0032] 以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

[0033] 本发明提供的一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，该方法主要包括蜜蜂预处理、液氮研磨处理、次氯酸钠溶液处理、高速离心提取磁颗粒和磁性吸附过程。该方法在最佳溶液浓
度、浸泡时间、离心速度和时间条件下从蜜蜂中分离了磁颗粒，分离出的磁颗粒具有粒径均
匀、分散性好、纯度高、磁性强、提取率高等特征。本发明所述方法，具有实验原料易获得，具
体实施过程简单，对设备要求低，成本较低且有助于保护环境等优点。

[0034] 本发明提供一种蜜蜂中磁颗粒的提取方法，包括以下步骤：

[0035] 1)蜜蜂的预处理：蜜蜂经70‑90％(v/v)乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去除，取腹部。

[0036] 2)液氮研磨处理：将步骤1)中获得的蜜蜂腹部，置于研钵中持续添加液氮，研磨4‑6min至完全呈粉末状态。

[0037] 3)次氯酸钠溶液处理：将步骤2)中获得的蜜蜂腹部粉末分别与次氯酸钠溶液按质量比为2：5至3：5，置于2ml离心管中，在4℃下浸泡24‑96h。次氯酸钠溶液中，次氯酸钠的质
量分数为2.1‑8.4％。

[0038] 4)高速离心提取磁颗粒：将3)中处理后的蜜蜂腹部粉末，在速度为7000‑10000rpm下离心4‑10min，倾去上清，分别补加质量分数为2.1‑8.4％的次氯酸钠溶液至2ml刻线处，
再次离心，重复此步骤3‑5次。

[0039] 5)将上述离心得到的沉淀中，加入蒸馏水至2ml刻线处，将底部固定一块磁铁，磁吸附8‑12min，倾去杂质，用蒸馏水反复吹洗聚集在离心管底部的磁颗粒，后用蒸馏水清洗
磁颗粒8‑10次，加入生理盐水4℃保存。

[0040] 步骤3)和步骤4)中，次氯酸钠溶液中，含有浓度为7‑9mg/L的PMSF，优点在于PMSF对磁颗粒表面的生物膜具有保护作用。

[0041] 步骤5)所述的磁颗粒经透射电子显微镜观察(放大12000倍)发现粒径为2‑5μm。

[0042] 优选的，步骤3)所述次氯酸钠溶液中，次氯酸钠的质量分数为4.2‑8.4％；浸泡时间为48‑84h；

[0043] 优选的，步骤4)所述离心速度为8000‑10000rpm；离心时间为6‑10min。

[0044] 最优地，步骤3)所述次氯酸钠溶液中，次氯酸钠的质量分数为6.3％，浸泡时间为72h；

[0045] 最优地，步骤4)所述离心速度为9000rpm；离心时间为8min。

[0046] 下面通过具体实施例进行介绍。

[0047] 实施例1

[0048] 1)蜜蜂预处理：蜜蜂经80％(v/v)乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去除，取腹部。

[0049] 2)液氮研磨处理：将步骤1)中获得的蜜蜂腹部，置于研钵中持续添加液氮，研磨4‑6min至完全呈粉末状态。

[0050] 3)次氯酸钠溶液处理：将步骤2)中获得的蜜蜂腹部粉末与含有PMSF的次氯酸钠溶液按质量比为1：2置于2ml离心管中，在4℃下浸泡48h。次氯酸钠溶液中，次氯酸钠的质量分
数为4.2％。PMSF的浓度为8mg/L。

[0051] 4)高速离心提取磁颗粒：将3)中处理后的蜜蜂腹部粉末，在速度为7000rpm下离心6min，倾去上清，补加质量分数为4.2％的次氯酸钠溶液(其中含有PMSF 8mg/L)至2ml刻线
处，再次离心，重复此过程3‑5次。

[0052] 5)将上述离心得到的沉淀中，加入蒸馏水至2ml刻线处，将底部固定一块磁铁，磁吸附10min，倾去杂质，用蒸馏水反复吹洗聚集在离心管底部的磁颗粒，后用蒸馏水清洗磁
颗粒8‑10次，加入生理盐水4℃保存。

[0053] 6)最后得到磁颗粒产率(即100只蜜蜂产生的磁颗粒的)为1.9mg(即0.0019g)。

[0054] 实施例2

[0055] 1)蜜蜂预处理：蜜蜂经80％(v/v)乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去除，取腹部。

[0056] 2)液氮研磨处理：将步骤1)中获得的蜜蜂腹部，置于研钵中持续添加液氮，研磨4‑6min至完全呈粉末状态。

[0057] 3)次氯酸钠溶液处理：将步骤2)中获得的蜜蜂腹部粉末与含有PMSF的次氯酸钠溶液按质量比为1：2置于2ml离心管中，在4℃下浸泡72h。次氯酸钠溶液中，次氯酸钠的质量分
数为6.3％，PMSF的浓度为8mg/L。

[0058] 4)高速离心提取磁颗粒：将3)中处理后的蜜蜂腹部粉末，在速度为9000rpm下离心8min，倾去上清，补加质量分数为6.3％的次氯酸钠溶液(其中含有PMSF 8mg/L)至2mL刻线
处，再次离心，重复此过程3‑5次。

[0059] 5)将上述离心得到的沉淀中，加入蒸馏水至2ml刻线处，将底部固定一块磁铁，磁吸附10min，倾去杂质，用蒸馏水反复吹洗聚集在离心管底部的磁颗粒，后用蒸馏水清洗磁
颗粒8‑10次，加入生理盐水4℃保存。

[0060] 6)最后得到磁颗粒产率(即100只蜜蜂产生的磁颗粒的克数)为2.9mg(即0.0029g)。

[0061] 实施例3

[0062] 1)蜜蜂预处理：蜜蜂经80％(v/v)乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去除，取腹部。

[0063] 2)液氮研磨处理：将步骤1)中获得的蜜蜂腹部，置于研钵中持续添加液氮，研磨4‑6min至完全呈粉末状态。

[0064] 3)次氯酸钠溶液处理：将步骤2)中获得的蜜蜂腹部粉末与含有PMSF的次氯酸钠溶液按质量比为1：2置于2mL离心管中，在4℃下浸泡96h。次氯酸钠溶液中，次氯酸钠的质量分
数为8.4％，PMSF的浓度为8mg/L。

[0065] 4)高速离心提取磁颗粒：将3)中处理后的蜜蜂腹部粉末，在速度为10000rpm下离心10min，倾去上清，补加质量分数为8.4％的次氯酸钠溶液(其中含有PMSF 8mg/L)至2mL刻
线处，再次离心，重复此过程3‑5次。

[0066] 5)将上述离心得到的沉淀中，加入蒸馏水至2mL刻线处，将底部固定一块磁铁，磁吸附10min，倾去杂质，用蒸馏水反复吹洗聚集在离心管底部的磁颗粒，后用蒸馏水清洗磁
颗粒8‑10次，加入生理盐水4℃保存。

[0067] 6)最后得到磁颗粒产率(即100只蜜蜂产生的磁颗粒的克数)为2.6mg(即0.0026g)。

[0068] 实施例4

[0069] 1)蜜蜂预处理：蜜蜂经80％(v/v)乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去除，取腹部。

[0070] 2)液氮研磨处理：将步骤1)中获得的蜜蜂腹部，置于研钵中持续添加液氮，研磨4‑6min至完全呈粉末状态。

[0071] 3)次氯酸钠溶液处理：将步骤2)中获得的蜜蜂腹部粉末与含有PMSF的次氯酸钠溶液按质量比为1：2置于2mL离心管中，在4℃下浸泡96h。次氯酸钠溶液中，次氯酸钠的质量分
数为4.2％，PMSF的浓度为8mg/L。

[0072] 4)高速离心提取磁颗粒：将3)中处理后的蜜蜂腹部粉末，在速度为8000rpm下离心8min，倾去上清，补加质量分数为4.2％的次氯酸钠溶液(其中含有PMSF 8mg/L)至2mL刻线
处，再次离心，重复此过程3‑5次。

[0073] 5)将上述离心得到的沉淀中，加入蒸馏水至2mL刻线处，将底部固定一块磁铁，磁吸附10min，倾去杂质，用蒸馏水反复吹洗聚集在离心管底部的磁颗粒，后用蒸馏水清洗磁
颗粒8‑10次，加入生理盐水4℃保存。

[0074] 6)最后得到磁颗粒产率(即100只蜜蜂产生的磁颗粒的克数)为2.2mg(即0.0022g)。

[0075] 实施例5

[0076] 1)蜜蜂预处理：蜜蜂经80％(v/v)乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去除，取腹部。

[0077] 2)液氮研磨处理：将步骤1)中获得的蜜蜂腹部，置于研钵中持续添加液氮，研磨4‑6min至完全呈粉末状态。

[0078] 3)次氯酸钠溶液处理：将步骤2)中获得的蜜蜂腹部粉末与含有PMSF的次氯酸钠溶液按质量比为1：2置于2mL离心管中，在4℃下浸泡24h。次氯酸钠溶液中，次氯酸钠的质量分
数为8.4％，PMSF的浓度为8mg/L。

[0079] 4)高速离心提取磁颗粒：将3)中处理后的蜜蜂腹部粉末，在速度为10000rpm下离心8min，倾去上清，补加质量分数为8.4％的次氯酸钠溶液(其中含有PMSF 8mg/L)至2mL刻
线处，再次离心，重复此过程3‑5次。

[0080] 5)将上述离心得到的沉淀中，加入蒸馏水至2mL刻线处，将底部固定一块磁铁，磁吸附10min，倾去杂质，用蒸馏水反复吹洗聚集在离心管底部的磁颗粒，后用蒸馏水清洗磁
颗粒8‑10次，加入生理盐水4℃保存。

[0081] 6)最后得到磁颗粒产率(即100只蜜蜂产生的磁颗粒的克数)为2.4mg(即0.0024g)。

[0082] 实施效果例、获得的磁颗粒性能测定

[0083] 如图1所示，此方法获得的磁颗粒经透射电子显微镜观察，具有形貌完整、粒径均匀、分散性好、晶型独特等特点。

[0084] 如图2所示，此方法获得的磁颗粒经红外光谱分析发现，在3440、2920、1630、1430、‑1
622、490cm 处有伸缩振动峰，表明磁颗粒表面有‑OH、‑NH、‑CH2、‑CH、‑FeO等官能团的存在。

[0085] 如图3所示，此方法获得的磁颗粒300K下的磁滞回线图，在室温条件下，磁颗粒的饱和磁化强度为0.3238emu/g；固有矫顽力大约是100‑150高斯。结果表明用此方法提取的
磁颗粒具有超顺磁性。

[0086] 将实施例2中的PMSF的浓度调整为7mg/L，蜜蜂腹部粉末与次氯酸钠溶液的质量比调整为2:5，磁吸附时间调整为8min,其余均与实施例2相同。

[0087] 将实施例2中的PMSF的浓度调整为9mg/L，蜜蜂腹部粉末与次氯酸钠溶液的质量比调整为3:5，磁吸附时间调整为12min,其余均与实施例2相同。

[0088] 经检测，也能得到与上述实施例一致的结论。进一步说明，本发明提供的蜜蜂中磁颗粒的提取方法，分离出的磁颗粒具有粒径均匀、分散性好、纯度高、磁性强、提取率高等优
点。

[0089] 对比例1

[0090] 1)蜜蜂预处理：蜜蜂经80％(v/v)乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去掉，取腹部。

[0091] 2)液氮研磨处理：将步骤1)中获得的蜜蜂腹部，置于研钵中持续添加液氮，研磨4‑6min至完全呈粉末状态。

[0092] 3)氯仿溶液处理：将步骤2)中获得的蜜蜂腹部粉末与氯仿溶液按质量比为1：2置于2mL离心管中，在4℃下浸泡72h。

[0093] 4)高速离心提取磁颗粒：将3)中处理后的蜜蜂腹部粉末，在速度为9000rpm下离心8min，倾去上清，补加氯仿溶液(其中含有PMSF 8mg/L)至2mL刻线处，再次离心，重复此过程
3‑5次。

[0094] 5)将上述离心得到的沉淀中，加入蒸馏水至2mL刻线处，将底部固定一块磁铁，磁吸附10min，倾去杂质，用蒸馏水反复吹洗聚集在离心管底部的磁颗粒，后用蒸馏水清洗磁
颗粒8‑10次，加入生理盐水4℃保存。

[0095] 6)最后得到磁颗粒产率(即100只蜜蜂产生的磁颗粒的克数)为2.0mg。

[0096] 对比例2

[0097] 1)蜜蜂预处理：蜜蜂经80％(v/v)乙醇溶液洗涤后晾干，将头部、胸部去掉，取腹部。

[0098] 2)液氮研磨处理：将步骤1)中获得的蜜蜂腹部，置于研钵中持续添加液氮，研磨4‑6min至完全呈粉末状态。

[0099] 3)硫酸钠溶液处理：将步骤2)中获得的蜜蜂腹部粉末与质量分数为6.3％的硫酸钠溶液按质量比为1：2置于2mL离心管中，在4℃下浸泡72h。

[0100] 4)高速离心提取磁颗粒：将3)中处理后的蜜蜂腹部粉末，在速度为9000rpm下离心8min，倾去上清，补加质量分数为6.3％的硫酸钠溶液(其中含有PMSF 8mg/L)至2mL刻线处，
再次离心，重复此过程3‑5次。

[0101] 5)将上述离心得到的沉淀中，加入蒸馏水至2mL刻线处，将底部固定一块磁铁，磁吸附10min，倾去杂质，用蒸馏水反复吹洗聚集在离心管底部的磁颗粒，后用蒸馏水清洗磁
颗粒8‑10次，加入生理盐水4℃保存。

[0102] 6)最后得到磁颗粒产率(即100只蜜蜂产生的磁颗粒的克数)为2.1mg。

[0103] 通过对比例1、对比例2和实施例2的对比可以看出，在其他条件相同的情况下，本发明实施例2采用次氯酸钠溶液进行提取，可以显著提高磁颗粒产率，远远高于对比例1和
对比例2中磁颗粒产率。另外，在研究中，还发现，实施例2中提取的磁颗粒的分散性，远远优
于对比例1和对比例2中提取的磁颗粒。

[0104] 对比例3

[0105] 在实施例2的基础上，调整次氯酸钠溶液的浓度，其余均与实施例2相同。实验结果如表1所示。

[0106] 在实施例2的基础上，调整次氯酸钠溶液浸泡的时间，其余均与实施例2相同。实验结果如表2所示。

[0107] 在实施例2的基础上，调整离心的转速，其余均与实施例2相同。实验结果如表3所示。

[0108] 在实施例2的基础上，调整离心的时间，其余均与实施例2相同。实验结果如表4所示。

[0109] 表1

[0110]

[0111] 根据表1可以看出，当次氯酸钠的质量分数在2.1‑12.6％之间时，磁颗粒产率较高，可以达到2.1‑2.9mg；综合磁颗粒产率和成本等考量，选择次氯酸钠的质量分数为2.1‑
8.4％；优选地，次氯酸钠的质量分数为4.2‑6.3％，磁颗粒产率可以达到2.6mg以上；最优
地，当次氯酸钠溶液的质量分数为6.30％时，磁颗粒产率最佳可以达到2.9mg。

[0112] 表2

[0113]

[0114] 根据表2可以看出，当次氯酸钠溶液浸泡时间为24‑96h之间，磁颗粒产率为1.5‑2.9mg；优选地，次氯酸钠溶液浸泡时间为48‑84h，磁颗粒产率为2.4mg以上；当次氯酸钠溶
液浸泡时间达到72h，磁颗粒产率最佳为2.9mg。

[0115] 表3

[0116]

[0117] 根据表3可以看出，离心转速为5000‑12000rpm时，磁颗粒产率可以达到2.3‑2.9mg；当离心转速为7000‑10000rpm时，磁颗粒产率可以达到2.6mg以上；优选地，离心转速
为8000‑10000rpm时，磁颗粒产率可以达到2.8mg以上；当离心的转速为9000‑10000rpm时，
磁颗粒产率最佳为2.9mg。

[0118] 表4

[0119]离心时间(min) 2 4 6 8 10 12 14
磁颗粒产率(mg) 1.2 2.2 2.6 2.9 2.8 2.8 2.6

[0120] 根据表4可以看出，当离心时间为4‑14min时，磁颗粒产率可以达到2.2mg以上，当离心时间为10min后，磁颗粒产率不再增长，12min后，磁颗粒产率略有下降；优选地，离心时
间为6‑10min时，磁颗粒产率可以达到2.6mg以上；当离心时间为8min时，磁颗粒产率最佳为
2.9mg。

[0121] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进和润饰也应视为本发明
的保护范围。