一种红豆杉天然提取产物的纯化方法转让专利
申请号 : CN201910730267.9
文献号 : CN110317183B
文献日 : 2021-03-12
发明人 : 陆叶梦 , 黄春 , 陆蒙晨
申请人 : 无锡紫杉药业有限公司
摘要 :
本发明公开了一种红豆杉天然提取产物的纯化方法，所述提取产物为19‑羟基‑10‑去乙酰基巴卡亭III，包括以下步骤：S1，以红豆杉枝叶提取物为原料，加入二氯甲烷和吡啶溶解，滴加氯甲酸‑2,2,2‑三氯乙酯，反应完成后，经处理得到产物I；S2，将产物I进行柱层析纯化，收集极性最小的主要产物，得到产物II；S3，将产物II以甲醇和乙酸溶解，加入锌粉，反应完成后，经处理得到目标产物。本发明纯化步骤简单，纯化难度小，收率高，产品纯度高。
权利要求 :
1.一种红豆杉天然提取产物的纯化方法，所述提取产物为19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，其结构如式(1)所示，
其特征在于，所述纯化方法包括如下步骤：S1，以红豆杉枝叶提取物为原料，加入二氯甲烷和吡啶溶解，滴加氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯，反应完成后，经处理得到产物I；
S2，将产物I进行柱层析纯化，收集极性最小的主要产物，得到产物II；
S3，将产物II以甲醇和乙酸溶解，加入锌粉，反应完成后，经处理得到目标产物。
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述红豆杉枝叶提取物中19-羟基-
10-去乙酰基巴卡亭III含量为30％～50％。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，在步骤S1中，所述二氯甲烷的用量与红豆杉枝叶提取物的比例为6～20V/W，所述吡啶的用量与红豆杉枝叶提取物的比例为10～
20V/W，所述氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯的用量与红豆杉枝叶提取物的比例为2～4W/W。
4.根据权利要求1或2或3所述的纯化方法，其特征在于，在步骤S1中，反应温度为0～10℃，反应时间1～2h。
5.根据权利要求1或2或3所述的纯化方法，其特征在于，在步骤S1中，待反应物被加入后，置于冰浴下待反应完全，加少量水淬灭反应，再加入稀盐酸萃取，水相反萃后，合并有机相，浓缩得到产物I。
6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，在步骤S2中，所述柱层析纯化填料为
200～300目硅胶。
7.根据权利要求1或2或3或6所述的纯化方法，其特征在于，在步骤S2中，所述柱层析流动相为乙酸乙酯和正庚烷，或者，乙酸乙酯和石油醚。
8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，在步骤S3中，所述甲醇的用量与产物II的比例为6～20V/W，所述乙酸的用量与产物II的比例为4～10V/W，所述锌粉的用量与产物II的比例为1.0～1.5W/W。
9.根据权利要求1或2或6或8所述的纯化方法，其特征在于，在步骤S3中，待反应完成后，将反应液抽滤，滤液用二氯甲烷稀释，加碳酸氢钠溶液中和至无气泡，分液收集有机相，将该有机相水洗、浓缩后，加少量甲醇溶清，搅拌下滴加纯化水，析出大量固体，抽滤并干燥得19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III；
在步骤S3中，反应温度为15～25℃，反应时间为1～2h。
10.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III的纯度大于等于97.3％。
说明书 :
一种红豆杉天然提取产物的纯化方法
技术领域
[0001] 本发明涉及药物制备技术领域，尤其是涉及一种红豆杉天然提取产物(19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III)的纯化方法。
背景技术
[0002] 红豆杉枝叶提取物中主要成分为10-去乙酰基巴卡亭III，经过分离纯化可以获得主成分为10-去乙酰基巴卡亭III和19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III的混合物，当然该混合
物中还有较多类似结构的天然产物。现有也多公开红豆杉枝叶提取物(10-去乙酰基巴卡亭
III)的提取或纯化方法。
物中还有较多类似结构的天然产物。现有也多公开红豆杉枝叶提取物(10-去乙酰基巴卡亭
III)的提取或纯化方法。
[0003] 如，国际公布号为WO94/07882的专利文献中公开了用甲醇浸提红豆杉组织，得到浸提液用水稀释，去除不溶物，除尽甲醇后得到的溶液用合适的有机溶剂萃取，结晶得到
10-去乙酰基巴卡亭III，纯度为95.8％。公开号为CN1616441A的中国发明专利，公开了用连
续渗漉提取红豆杉枝叶中的紫杉烷类化合物，经过硅胶柱层析，得到10-去乙酰基巴卡亭
III。公开号为CN1660827A的中国发明专利公开了采用70～80％乙醇提取红豆杉枝叶，浓缩
浸提液，去除沉淀物，用大孔吸附树脂吸附滤液中10-去乙酰基巴卡亭III，乙醇洗脱，得到
10-去乙酰基巴卡亭III粗品。
10-去乙酰基巴卡亭III，纯度为95.8％。公开号为CN1616441A的中国发明专利，公开了用连
续渗漉提取红豆杉枝叶中的紫杉烷类化合物，经过硅胶柱层析，得到10-去乙酰基巴卡亭
III。公开号为CN1660827A的中国发明专利公开了采用70～80％乙醇提取红豆杉枝叶，浓缩
浸提液，去除沉淀物，用大孔吸附树脂吸附滤液中10-去乙酰基巴卡亭III，乙醇洗脱，得到
10-去乙酰基巴卡亭III粗品。
[0004] 上述方法主要采用醇类溶剂提取红豆杉枝叶中的10-去乙酰基巴卡亭III，如CN1660827A提到的方法中，大孔吸附树脂洗脱过程中可以收集到19-羟基-10-去乙酰基巴
卡亭III含量较高的提取物组分(40％左右)。由于10-去乙酰基巴卡亭III和19-羟基-10-去
乙酰基巴卡亭III及其他类似物的结构较为类似，现有的常规分离纯化手段很难获取高纯
度的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III。现有技术鲜有公开19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III
的进一步纯化方法。
卡亭III含量较高的提取物组分(40％左右)。由于10-去乙酰基巴卡亭III和19-羟基-10-去
乙酰基巴卡亭III及其他类似物的结构较为类似，现有的常规分离纯化手段很难获取高纯
度的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III。现有技术鲜有公开19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III
的进一步纯化方法。
发明内容
[0005] 针对现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种红豆杉天然提取产物的纯化方法。
[0006] 本发明的技术方案如下：
[0007] 一种红豆杉天然提取产物的纯化方法，所述提取产物为19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，其结构如式(1)所示，
[0008]
[0009] 所述纯化方法包括如下步骤：
[0010] S1，以红豆杉枝叶提取物为原料，加入二氯甲烷和吡啶溶解，滴加氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯，反应完成后，经处理得到产物I；
[0011] S2，将产物I进行柱层析纯化，收集极性最小的主要产物，得到产物II；
[0012] S3，将产物II以甲醇和乙酸溶解，加入锌粉，反应完成后，经处理得到目标产物。
[0013] 进一步地，上述的纯化方法，其中，所述红豆杉枝叶提取物中19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III含量为30％～50％。
[0014] 进一步地，上述的纯化方法，其中，在步骤S1中，所述二氯甲烷的用量与红豆杉枝叶提取物的比例为6～20(V/W)，所述吡啶的用量与红豆杉枝叶提取物的比例为10～20(V/
W)，所述氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯的用量与红豆杉枝叶提取物的比例为2～4(W/W)。
W)，所述氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯的用量与红豆杉枝叶提取物的比例为2～4(W/W)。
[0015] 进一步地，上述的纯化方法，其中，在步骤S1中，反应温度为0～10℃，反应时间1～2h。
[0016] 进一步地，上述的纯化方法，其中，在步骤S1中，待反应物被加入后，置于冰浴下待反应完全，加少量水淬灭反应，再加入稀盐酸萃取，水相反萃后，合并有机相，浓缩得到产物
I。
I。
[0017] 进一步地，上述的纯化方法，其中，在步骤S2中，所述柱层析纯化填料为200～300目硅胶。
[0018] 进一步地，上述的纯化方法，其中，在步骤S2中，所述柱层析流动相为乙酸乙酯和正庚烷，或者，乙酸乙酯和石油醚。
[0019] 进一步地，上述的纯化方法，其中，在步骤S3中，所述甲醇的用量与产物II的比例为6～20(V/W)，所述乙酸的用量与产物II的比例为4～10(V/W)，所述锌粉的用量与产物II
的比例为1.0～1.5(W/W)。
的比例为1.0～1.5(W/W)。
[0020] 进一步地，上述的纯化方法，其中，在步骤S3中，待反应完成后，将反应液抽滤，滤液用二氯甲烷稀释，加碳酸氢钠溶液中和至无气泡，分液收集有机相，将该有机相水洗、浓
缩后，加少量甲醇溶清，搅拌下滴加纯化水，析出大量固体，抽滤并干燥得19-羟基-10-去乙
酰基巴卡亭III。
缩后，加少量甲醇溶清，搅拌下滴加纯化水，析出大量固体，抽滤并干燥得19-羟基-10-去乙
酰基巴卡亭III。
[0021] 进一步地，上述的纯化方法，其中，在步骤S3中，反应温度为15～25℃，反应时间为1～2h。
[0022] 进一步地，上述的纯化方法，其中，所述19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III的纯度大于等于97.3％。
[0023] 本发明有益的技术效果在于：
[0024] 本发明红豆杉枝叶提取物中存在大量的类似物，由于大部分类似物与目标产物19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III结构类似，直接分离纯化的难度就很大；本发明通过反应，
将19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III及其他大部分类似物(如，10-去乙酰基巴卡亭III等)都
反应生成对应的衍生物，19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III的衍生物极性最小，可以很简单
进行分离，再通过脱去保护基团，即可获得高纯度的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，本发
明得到的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III的纯度高，其大于等于95％。
将19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III及其他大部分类似物(如，10-去乙酰基巴卡亭III等)都
反应生成对应的衍生物，19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III的衍生物极性最小，可以很简单
进行分离，再通过脱去保护基团，即可获得高纯度的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，本发
明得到的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III的纯度高，其大于等于95％。
附图说明
[0025] 图1为本发明红豆杉天然提取产物的纯化方法流程图。
[0026] 图2为本发明其中一实施方式中的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III MS图谱。
[0027] 图3为本发明其中一实施方式中的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III 1H NMR图谱。
[0028] 图4为本发明其中一实施方式中的10-去乙酰基巴卡亭III 1H NMR图谱。
[0029] 图5为本发明其中一实施方式中的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III 13C NMR图谱。
[0030] 图6为本发明其中一实施方式中的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III的HPLC图谱。
[0031] 图7为本发明其中一实施方式中的19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III C原子序号参照图。
具体实施方式
[0032] 下面结合附图和实施例，对本发明进行具体描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在
没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0033] 下面结合实施例和图1，对本发明进行具体描述。
[0034] 实施例一
[0035] 步骤一：将3g红豆杉枝叶提取物(19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III含量43.3％)溶于18ml二氯甲烷和60ml吡啶中，置于冰浴下搅拌，滴加氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯6g，继续冰
浴下(0℃)反应2h后，加少量水淬灭反应，再加入1mol/L稀盐酸萃取，水相反萃后，合并有机
相，浓缩得到4.8g产物I。
浴下(0℃)反应2h后，加少量水淬灭反应，再加入1mol/L稀盐酸萃取，水相反萃后，合并有机
相，浓缩得到4.8g产物I。
[0036] 步骤二：将产物I(4.8g)进行柱层析纯化，填料为200～300目硅胶，流动相为乙酸乙酯和正庚烷(1：10，V/V)，收集极性最小的主要产物，浓缩得1.6g产物II。
[0037] 步骤三：将产物II(1.6g)溶于10ml甲醇和13ml乙酸中，加入1.6g锌粉，于室温(15℃)反应2h，反应液抽滤，滤液用50ml二氯甲烷稀释，加碳酸氢钠溶液中和至无气泡，分液收
集有机相，有机相再水洗2次，浓缩有机相，加少量甲醇溶清，搅拌下滴加纯化水，析出大量
固体，抽滤并干燥得0.6g19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，纯度96.4％(HPLC图谱见图2)。
集有机相，有机相再水洗2次，浓缩有机相，加少量甲醇溶清，搅拌下滴加纯化水，析出大量
固体，抽滤并干燥得0.6g19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，纯度96.4％(HPLC图谱见图2)。
[0038] 如图3所示，本实施例中19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III MS图谱，其中，其质荷比m/z＝583.2[M+Na]+，可以推断分子量为560.2，与目标化合物一致。
[0039] 如图4所示，本实施例19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III 1H NMR图谱，其中，1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.04(2H,d,J＝7.5Hz,ArH),7.64(1H,t,J＝7.3Hz,ArH),7.55(2H,t,J
＝7.8Hz,ArH),6.47(1H,d,J＝7Hz,H2),5.11(1H,d,-OH),5.05(1H,d,-OH),4.95(2H,o,H5,-
OH),4.66(1H,d,-OH),4.59(2H,o,H13,-OH),4.50(2H,m,H19),4.33(1H,d,H20),4.06(2H,o,
H20,H7,solvent methanol),3.86(1H,s,H10),3.78(1H,d,J＝7Hz,H3)，3.29(H2O),3.17
(solvent methanol),2.21(4H,o,H6,3H27),2.10(2H,m,2H14),1.88(1H,s,H18),1.53(1H,m,
H6),1.13(3H,s,3H16/H17),0.94(3H,s,3H16/H17)。其中H19的信号为比较特征的CH2信号，与
10-去乙酰基巴卡亭III对应信号区分明显(10-去乙酰基巴卡亭III氢谱信号参见图5)，10-
去乙酰基巴卡亭III有5组CH3信号，19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III有4组CH3信号。
＝7.8Hz,ArH),6.47(1H,d,J＝7Hz,H2),5.11(1H,d,-OH),5.05(1H,d,-OH),4.95(2H,o,H5,-
OH),4.66(1H,d,-OH),4.59(2H,o,H13,-OH),4.50(2H,m,H19),4.33(1H,d,H20),4.06(2H,o,
H20,H7,solvent methanol),3.86(1H,s,H10),3.78(1H,d,J＝7Hz,H3)，3.29(H2O),3.17
(solvent methanol),2.21(4H,o,H6,3H27),2.10(2H,m,2H14),1.88(1H,s,H18),1.53(1H,m,
H6),1.13(3H,s,3H16/H17),0.94(3H,s,3H16/H17)。其中H19的信号为比较特征的CH2信号，与
10-去乙酰基巴卡亭III对应信号区分明显(10-去乙酰基巴卡亭III氢谱信号参见图5)，10-
去乙酰基巴卡亭III有5组CH3信号，19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III有4组CH3信号。
[0040] 如图6所示，本实施例19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III 13C NMR图谱，其中，13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ：207.9,169.5,164.4,141.3,134.9,132.8,130.9,129.4,128.5,
83.8,80.2,77.7,76.6,75.2,74.4,70.6,66.0,59.9,57.3,48.5,46.7,42.4,36.5,26.5,
22.1,20.2,14.6。
83.8,80.2,77.7,76.6,75.2,74.4,70.6,66.0,59.9,57.3,48.5,46.7,42.4,36.5,26.5,
22.1,20.2,14.6。
[0041] 本实施例19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III分子是为C29H36O11，其碳原子序号参照图7所示。
[0042] 实施例二
[0043] 步骤一：将3g红豆杉枝叶提取物(19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III含量30.5％)溶于60ml二氯甲烷和30ml吡啶中，置于冰浴下搅拌，滴加氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯12g，继续
(10℃)反应1h后，加少量水淬灭反应，再加入1mol/L稀盐酸萃取，水相反萃后，合并有机相，
浓缩得到4.5g产物I。
(10℃)反应1h后，加少量水淬灭反应，再加入1mol/L稀盐酸萃取，水相反萃后，合并有机相，
浓缩得到4.5g产物I。
[0044] 步骤二：将产物I(4.5g)进行柱层析纯化，填料为200～300目硅胶，流动相为乙酸乙酯和石油醚(1：10，V/V)，收集极性最小的主要产物，浓缩得1.2g产物II。
[0045] 步骤三：将产物II(1.2g)溶于24ml甲醇和12ml乙酸中，加入1.8g锌粉，于室温(25℃)反应1h，反应液抽滤，滤液用50ml二氯甲烷稀释，加碳酸氢钠溶液中和至无气泡，分液收
集有机相，有机相再水洗2次，浓缩有机相，加少量甲醇溶清，搅拌下滴加纯化水，析出大量
固体，抽滤并干燥得0.4g19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，纯度97.3％(HPLC)。
集有机相，有机相再水洗2次，浓缩有机相，加少量甲醇溶清，搅拌下滴加纯化水，析出大量
固体，抽滤并干燥得0.4g19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，纯度97.3％(HPLC)。
[0046] 实施例三
[0047] 步骤一：将3g红豆杉枝叶提取物(19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III含量48.7％)溶于30ml二氯甲烷和45ml吡啶中，置于冰浴下搅拌，滴加氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯9g，继续(10
℃)反应1.5h后，加少量水淬灭反应，再加入1mol/L稀盐酸萃取，水相反萃后，合并有机相，
浓缩得到4.8g产物I。
℃)反应1.5h后，加少量水淬灭反应，再加入1mol/L稀盐酸萃取，水相反萃后，合并有机相，
浓缩得到4.8g产物I。
[0048] 步骤二：将产物I(4.8g)进行柱层析纯化，填料为200～300目硅胶，流动相为乙酸乙酯和正庚烷(1：10，V/V)，收集极性最小的主要产物，浓缩得1.7g产物II。
[0049] 步骤三：将产物II(1.7g)溶于17ml甲醇和7ml乙酸中，加入2.2g锌粉，于室温(20℃)反应1.5h，反应液抽滤，滤液用50ml二氯甲烷稀释，加碳酸氢钠溶液中和至无气泡，分液
收集有机相，有机相再水洗2次，浓缩有机相，加少量甲醇溶清，搅拌下滴加纯化水，析出大
量固体，抽滤并干燥得0.8g19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，纯度97.5％(HPLC)。
收集有机相，有机相再水洗2次，浓缩有机相，加少量甲醇溶清，搅拌下滴加纯化水，析出大
量固体，抽滤并干燥得0.8g19-羟基-10-去乙酰基巴卡亭III，纯度97.5％(HPLC)。
[0050] 尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，对于本领
域的普通技术人员而言，在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多
种变化、修改、替换和变型，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发
明并不限于特定的细节。
域的普通技术人员而言，在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多
种变化、修改、替换和变型，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发
明并不限于特定的细节。