蚕豆蛋白肽在制备治疗炎症的药物中的应用及药物

摘要

本发明公开了蚕豆蛋白肽在制备治疗炎症的药物中的应用，特别地，在制备治疗血管平滑肌细胞炎症的药物中的应用。所述蚕豆蛋白肽还可以用于制备治疗与所述炎症相关的疾病的药物，所述疾病包括高血压、动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死、脑卒中等。本发明还提供了一种用于治疗炎症的药物，所述药物包括蚕豆蛋白肽，以及药学上可接受的载体或辅料。本发明从蚕豆中提取生物活性肽，能够实现上述应用，具有十分重要的医学和经济学意义。

权利要求

1.蚕豆蛋白肽在制备治疗炎症的药物中的应用，其特征在于，所述炎症为VSMCs炎症，其中，所述蚕豆蛋白肽的制备方法包括如下步骤：(1)、干燥的蚕豆蛋白粉过筛备用；

(2)、称取适量步骤(1)的样品置于反应器中，加入1g:(10～30)mL的水，按照酶：底物为

3％w/w的比例加入酶进行酶解，酶解时间4h，得到酶解液；所述的酶选自Alcalase、Trypsin、Pepsin中的一种；

(3)、步骤(2)的酶解液离心，取上清液，浓缩，真空冷冻干燥，得到粉末，即为蚕豆蛋白肽。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤(3)中，在温度低于-50℃，真空度小于15Pa的条件下真空冷冻干燥。

3.一种用于治疗炎症的药物，其特征在于，所述药物包括如权利要求1所述蚕豆蛋白肽，以及药学上可接受的载体或辅料；所述炎症是VSMCs炎症。

说明书

蚕豆蛋白肽在制备治疗炎症的药物中的应用及药物

技术领域

[0001] 本发明属于药物技术领域，特别地，提供一种蚕豆蛋白肽在制备治疗炎症的药物中的应用及药物。

背景技术

[0002] 炎症是机体对于刺激包括伤害、组织损伤以及传染性病原体的一种防御反应，是一种适应性的免疫反应，其包括慢性炎症和急性炎症。机体的氧化应激和炎症相互促进，相互抑制，二者具有密不可分的内在联系。炎症信号中间体的活化是通过调节修饰ROS/GSH的硫醇(R-SH)组来实现的，过量的活性氧(ROS)的产生破坏机体氧化还原平衡，并通过核转录因子κB(NF-κB)放大了炎症反应，从而诱导促炎症细胞因子如TNF-α、IL-1、IL-6、环氧化酶2(COX2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)等的转录，进而加重炎症。

[0003] 近年来伴随生活方式的改变，心血管疾病尤其是高血压的发病率逐年上升。高血压的发病率上升也是引起其它心血管疾病发病率和死亡率增高的常见原因。利尿剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、钙离子拮抗剂(CCB)、AT1R拮抗剂(ARB)等是临床应用最多的五大类降压药，其起效快，作用明确有力，服用及携带起来便捷。但其降压幅度较大，降压不平稳，停药后血压容易反弹，得不到很好维持，容易引发脑血管疾病。

[0004] 原发性高血压的主要特征是外周血管阻力增加。外周血管阻力增加的原因一方面内皮细胞是至关重要的血管张力调节器，但高血压患者的内皮细胞功能受损，使得血管舒张减少，导致血压升高；另一方面，促炎和血栓形成的状态会让血管的张力变大，导致血压升高。因此，降低血管组织的局部炎症程度是病理、生理学重要的降压方式。又由于机体的氧化应激和炎症具有密不可分的内在联系，因此，从抑制炎症反应和氧化应激的角度研发新型的降血压药物就具有十分重要的意义。肾素-血管紧张素系统(RAS)是人体调节人体血压的重要的内分泌系统，血管紧张素II(Ang II)是RAS已知活性最强的缩血管生物活性肽，血管紧张素II-1型受体(AT1R)是RAS的主要效应器，可介导Ang II的生理学效应，从而诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)的氧化应激、炎症、细胞增殖和迁移等。Ang II目前已成为诱导各种心血管疾病病理基础的主要刺激因素之一。由此可见，抑制Ang II诱导VSMCs氧化应激、炎症及过度细胞增殖和迁移可作为一个治疗心血管疾病，特别是高血压的重要靶点。

[0005] 很多研究者从植物中提取植物蛋白肽用于治疗多种多样的疾病，不同植物蛋白质来源的肽的功能：玉米肽具有抗氧化、低过敏性、抗疲劳、促进酒精代谢的作用；小麦肽具有血管紧张素转化酶抑制、免疫调节、抗氧化作用；大米肽具有血管紧张素转化酶抑制、类阿片拮抗活性和免疫调节肽作用；花生肽具有血管紧张素转化酶抑制作用；荞麦肽具有血管紧张素转化酶抑制作用；蚕豆肽具有抑菌作用。

[0006] 目前关于蚕豆功能活性方面的研究主要集中在多酚类物质上，未见关于蚕豆肽用于制备治疗炎症的药物及治疗与炎症相关的疾病例如高血压、动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死和脑卒中的药物的相关报道。

发明内容

[0007] 本发明的发明人在长期的生产研发中，意外地发现蚕豆蛋白肽可减少COX2的转录，从而减少促炎症细胞因子的生成，减轻炎症，发挥消炎作用，因此可用于制备治疗炎症的药物。尤其是能减少VSMCs的氧化应激，可用于制备治疗VSMCs炎症的药物。

[0008] 因此，本发明的第一个方面提供了蚕豆蛋白肽在制备治疗炎症的药物中的应用。

[0009] 特别地，提供了所述蚕豆蛋白肽在制备治疗VSMCs炎症的药物中的应用。

[0010] 根据本发明，所述的蚕豆蛋白肽的制备方法包括如下步骤：

[0011] (1)、干燥的蚕豆蛋白过筛备用；

[0012] (2)、称取适量步骤(1)的样品置于反应器中，加入1g:(10～30)mL的水，按照酶：按照底物(2～4)％(w/w)的比例加入酶进行酶解，酶解时间为2～8h，得到酶解液；

[0013] (3)、步骤(2)的酶解液离心，取上清液，浓缩，真空冷冻干燥，得到粉末，即为蚕豆蛋白肽。

[0014] 本领域技术人员和内容以理解，由于上述酶在2～8h内酶解得到的蚕豆蛋白肽均具有较高的蛋白含量和蛋白回收率，因此，其性质相似。在2～8h内酶解得到的蚕豆蛋白肽均具有类似的功效。

[0015] 优选地，所述步骤(2)中，所述的酶选自Alcalase、Trypsin、Pepsin中的一种。

[0016] 优选地，所述步骤(2)中，在pH＝7.0～9.0，温度45～55℃条件下进行酶解。

[0017] 进一步优选地，所述步骤(2)中，在pH＝8.0，温度50℃条件下进行酶解。

[0018] 优选地，所述步骤(2)中，所述酶解的时间为4h。

[0019] 需要说明的是，酶解至4h时，蛋白回收率已经达到较高水平，继续酶解虽然能够一定程度上提高蛋白回收率，但提高的量不太高，经济性下降。因此，最优的酶解时间为4h。此时，蛋白肽的含量较高，游离氨基酸含量较低，活性较好保持最大。

[0020] 优选地，所述步骤(2)中，按照酶：底物为3％(w/w)的比例加入酶进行酶解。

[0021] 在上述比例条件下酶解得到的蚕豆蛋白肽具有更好的抗炎效果。

[0022] 优选地，所述步骤(3)中，在温度低于-50℃，真空度小于15Pa的条件下真空冷冻干燥。

[0023] 本发明的第二个方面是提供蚕豆蛋白肽在制备治疗与炎症相关的疾病的药物中的应用，所述疾病示例性地，但不限制地可以为高血压、动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死和脑卒中。

[0024] 本发明的第三个方面是提供一种用于治疗炎症的药物，所述药物包括蚕豆蛋白肽，以及药学上可接受的载体或辅料。

[0025] 为了使上述药物快速、连续并在很长一段时间里释放活性成分，本发明的药物可以根据本技术领域中公开的常规方法制造。

[0026] 本发明的药物的给药途径为口服、鼻吸入或肠胃外给药。

[0027] 药物的制剂可以是粉末、颗粒、乳剂、片剂、气雾剂、糖浆、软胶囊、硬胶囊、灭菌注射剂和灭菌粉等。

[0028] 较为优选的，所述药物的制剂为口服制剂。最好为片剂或胶囊。

[0029] 本领域技术人员很容易理解，所述药物可单独服用，也可与其他药物混合服用；所述药物可以为有效成分仅含有蚕豆蛋白肽的单方制剂，也可以为有效成分为蚕豆蛋白肽和其他药物的复方制剂，比如与某些抗高血压药物一起制成复方制剂。

[0030] 本发明中，术语“药学上可接受的”指当化合物给人类施用时该化合物是生理上可接受的，不包括包含胃肠道紊乱、头晕等过敏反应或者类似这些过敏反应的全身过敏反应。

[0031] 在本发明中，“药学上可接受的载体或辅料”包括但不限于：填充剂(如淀粉、蔗糖、葡萄糖和无水乳酸)、粘合剂(如微晶纤维素、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮)、润滑剂(硬脂酸镁、硬脂酸铝、滑石、聚乙二醇)、崩解剂(如交联PVP、交联羧甲基淀粉钠)、润湿剂(如甘油)、表面活性剂以及吸收促进剂、甜味剂、稀释剂、包衣剂等。

[0032] 优选地，有效剂量的药物中，所述蚕豆蛋白肽的浓度为100～300

[0033] μg/mL。

[0034] 进一步优选地，有效剂量的药物中，所述蚕豆蛋白肽的浓度为200

[0035] μg/mL。

[0036] 本发明的积极进步效果在于：

[0037] (1)、本发明的蚕豆蛋白肽可减少COX2的转录，减少促炎症细胞因子的生成，减轻炎症，发挥消炎作用，可用于制备治疗炎症的药物。

[0038] (2)、蚕豆蛋白肽通过抑制VSMCs氧化应激和COX2的表达，发挥消炎作用，能抑制Ang II引起的VSMCs炎症反应，可用于制备治疗VSMCs炎症的药物。

[0039] (3)、本发明的蚕豆蛋白肽可用于制备治疗与炎症相关的疾病(例如高血压、动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死和脑卒中)的药物，尤其是治疗高血压的药物。

附图说明

[0040] 图1对照组和每个处理组的氧化应激荧光光谱图；

[0041] 图2对照组和每个处理组的氧化应激荧光强度值(以对照组的荧光强度值为100％计算结果)；

[0042] 图3蚕豆蛋白肽对Ang II激发的COX2蛋白表达的影响。

具体实施方式

[0043] 以下实施例中，所有原料，例如蚕豆蛋白粉，酶均为市售。

[0044] 实施例1、蚕豆蛋白肽Alcalase-1的制备

[0045] 蚕豆蛋白肽Alcalase-1的制备方法包括如下步骤：

[0046] (1)、取干燥的蚕豆蛋白粉200g粉碎，过60目筛，得到样品备用；

[0047] (2)、称取5g步骤(1)的样品置于500mL锥形瓶中，加入150mL的水，按照底物4％(w/w)的比例加入酶Alcalase，在pH 7.0，45℃条件下进行酶解，酶解时间为2h，得到酶解液；

[0048] (3)、步骤(2)的酶解液离心，取上清液，浓缩至20mL左右，在温度低于-50℃，真空度小于15Pa的条件下真空冷冻干燥，得到粉末，即为蚕豆蛋白肽Alcalase-1。

[0049] 实施例2、蚕豆蛋白肽Alcalase-2的制备

[0050] 制备方法基本同实施例1，区别在于：加入100mL的水，按照底物3％(w/w)的比例加入酶Alcalase，在pH 8.0，50℃条件下进行酶解，酶解条件为4h，得到酶解液。

[0051] 经步骤(3)后，得到蚕豆蛋白肽Alcalase-2。

[0052] 实施例3、蚕豆蛋白肽Alcalase-3的制备

[0053] 制备方法基本同实施例1，区别在于：加入50mL的水，按照底物2％(w/w)的比例加入酶Alcalase，在pH 9.0，55℃条件下进行酶解，酶解条件为6h，得到酶解液。

[0054] 经步骤(3)后，得到蚕豆蛋白肽Alcalase-3。

[0055] 实施例4、蚕豆蛋白肽Alcalase-4的制备

[0056] 制备方法基本同实施例2，区别在于：酶解时间为8h，得到酶解液。

[0057] 经步骤(3)后，得到蚕豆蛋白肽Alcalase-4。

[0058] 实施例5、蚕豆蛋白肽Trypsin-1的制备

[0059] 制备方法基本同实施例1，区别在于：按照底物4％(w/w)的比例加入酶Trypsin进行酶解，酶解时间为2h，得到酶解液，得到酶解液。

[0060] 经步骤(3)后，得到蚕豆蛋白肽Trypsin-1。

[0061] 实施例6、蚕豆蛋白肽Trypsin-2的制备

[0062] 制备方法基本同实施例2，区别在于：按照底物3％(w/w)的比例加入酶Trypsin进行酶解，酶解时间为4h，得到酶解液。

[0063] 经步骤(2)后，得到蚕豆蛋白肽Trypsin-2。

[0064] 实施例7、蚕豆蛋白肽Trypsin-3的制备

[0065] 制备方法基本同实施例1，区别在于：按照底物2％(w/w)的比例加入酶Trypsin进行酶解，酶解时间为6h，得到酶解液。

[0066] 经步骤(2)后，得到蚕豆蛋白肽Trypsin-3。

[0067] 实施例8、蚕豆蛋白肽Trypsin-4的制备

[0068] 制备方法基本同实施例2，区别在于：按照底物3％(w/w)的比例加入酶Trypsin进行酶解，酶解时间为8h，得到酶解液。

[0069] 经步骤(3)后，得到蚕豆蛋白肽Trypsin-4。

[0070] 实施例9、蚕豆蛋白肽Pepsin-1的制备

[0071] 制备方法基本同实施例1，区别在于：按底物4％(w/w)的比例加入酶Pepsin进行酶解，酶解时间为2h，得到酶解液。

[0072] 经步骤(3)后，得到蚕豆蛋白肽Pepsin-1。

[0073] 实施例10、蚕豆蛋白肽Pepsin-2的制备

[0074] 制备方法基本同实施例1，区别在于：按底物3％(w/w)的比例加入酶Pepsin进行酶解，酶解时间为4h，得到酶解液。

[0075] 经步骤(3)后，得到蚕豆蛋白肽Pepsin-2。

[0076] 实施例11、蚕豆蛋白肽Pepsin-3的制备

[0077] 制备方法基本同实施例1，区别在于：按照底物2％(w/w)的比例加入酶Pepsin进行酶解，酶解时间为6h，得到酶解液。

[0078] 经步骤(3)后，得到蚕豆蛋白肽Pepsin-3。

[0079] 实施例12、蚕豆蛋白肽Pepsin-4的制备

[0080] 制备方法基本同实施例1，区别在于：按照底物3％(w/w)的比例加入酶Pepsin进行酶解，酶解时间为8h，得到酶解液。

[0081] 经步骤(3)后，得到蚕豆蛋白肽Pepsin-4。

[0082] 检测上述实施例1-12制备的酶解液的蛋白回收率。总氮的测定方法采用凯氏定氮法，参照国标GB5009.5-85，分别测定原料蚕豆的蛋白质含量和酶解液的蛋白质含量，按以下公式计算蛋白质回收率，结果统计如表1所示。

[0083]

[0084] 表1不同酶解条件制备的蚕豆蛋白肽的蛋白含量和蛋白回收率

[0085] 蚕豆蛋白肽型号 酶解时间(h) 蛋白含量(％) 蛋白回收率(％)市售蚕豆蛋白 — 91.08±0.02 —
Alcalase-1 2 90.74±0.44 37.66±0.17
Alcalase-2 4 91.32±0.86 40.26±0.18
Alcalase-3 6 87.47±2.07 42.33±0.60
Alcalase-4 8 86.32±1.16 44.42±0.45
Trypsin-1 2 85.28±2.13 18.57±0.21
Trypsin-2 4 88.42±1.30 36.92±0.38
Trypsin-3 6 85.40±0.51 36.13±0.32
Trypsin-4 8 91.34±0.11 40.64±0.19
Pepsin-1 2 95.09±3.25 24.15±0.80
Pepsin-2 4 91.96±2.54 30.56±0.20
Pepsin-3 6 94.00±1.83 37.42±0.31
Pepsin-4 8 91.70±0.85 38.25±0.39

[0086] 由表1的结果可知，Alcalase、Trypsin和Pepsin均能够酶解得到蛋白含量和蛋白回收率均较高的酶解液。同等条件下，不同蛋白酶酶解得到的酶解产物的蛋白含量和蛋白回收率有一定的差异，其中Alcalase酶解得到的酶解液的蛋白含量和蛋白回收率均更高。

[0087] 当酶解时间达到4h时，Alcalase和Trypsin酶解得到的酶解液的蛋白含量达到最高。

[0088] 当酶解时间达到8h时，Alcalase、Trypsin、Pepsin酶解得到的酶解液的蛋白回收率均达到最高。但酶解至4h时，蛋白回收率已经达到较高水平，继续酶解虽然能够一定程度上提高蛋白回收率，但提高的量不太高，经济性下降。因此，最优的酶解时间为4h。此时，蚕豆蛋白肽的含量较高，游离氨基酸含量较低，活性较好。

[0089] 实施例13：细胞培养

[0090] 大鼠主动脉VSMC细胞系A7r5购自ATCC(cat#ATCC CRL-1444，弗吉尼亚州马纳萨斯)。

[0091] A7r5细胞在添加10％FBS和1％抗生素(青霉素-链霉素和庆大霉素)的DMEM培养基中生长，直到细胞的汇合度达到80％，此时A7r5细胞可用于后续实验分析。所有实验采用的A7r5细胞为在第4代和第11代之间的细胞。

[0092] 实施例14、蚕豆蛋白肽对Ang II引起的VSMCs中氧化应激的影响

[0093] 用二氢乙二胺(DHE)染色法检测细胞内超氧化物的产生，活性氧(ROS)可与DHE反应生成乙啡啶，然后与DNA结合并释放细胞核荧光。可参考下列文献：

[0094] (1)、Huang,W.；Chakrabarti,S.；Majumder,K.；Jiang,Y.；Davidge,S.T.；Wu,J.Egg-derived peptide IRW Inhibits TNF-α-induced inflammatory response and oxidative stress in endothelial cells.J.Agric.Food Chem.2010,58,10840-10846[0095] (2)、Peshavariya,H.M.；Dusting,G.J.；Selemidis,S.Analysis of dihydroethidium fluorescence for the detection of intracellular and extracellular superoxide produced by NADPH oxidase.Free Radical Res.2007,41,699-712

[0096] 采用如下对比试验检测蚕豆蛋白肽对Ang II引起的VSMCs中氧化应激的影响：

[0097] (一)蚕豆蛋白肽+Ang II处理组

[0098] 分别以实施例2、6、10制备的蚕豆蛋白肽Alcalase-2、Trypsin-2和Pepsin-2为研究对象，考察蚕豆蛋白肽对Ang II引起的VSMCs中氧化应激的影响，具体方法如下：

[0099] (1)、将A7r5细胞接种到48孔板中，加入含有10％FBS的DMEM培养基后培养细胞到80％汇合度，接着用静默培养基替换掉48孔板中的DMEM培养基，然后加入适量蚕豆蛋白肽(使体系中蚕豆蛋白肽的终浓度为200.0μg/mL)处理1h后，接着加入适量Ang II(使体系中Ang II的终浓度为1.0μmol/L)共同处理30min，然后用20μmol/L DHE在黑暗中培养30min，结束后用PBS清洗细胞三次。

[0100] (2)、用Olympus IX 81荧光显微镜(卡森科学成像组)检测细胞的荧光信号。每一个数据点的图像取自3个随机场。每个图像的平均荧光强度(MFI)由ImageJ量化软件进行定量(参考http://imagej.net/Welcome)，以MFI/cell计算每张图片中每个细胞的平均荧光强度。

[0101] (二)、对照组

[0102] 方法同(一)，区别在于：A7r5细胞不采用蚕豆蛋白肽预处理和AngII处理。

[0103] (三)、Ang II处理组

[0104] 方法同(一)，区别在于：步骤(1)中，A7r5细胞不采用蚕豆蛋白肽预处理，仅加入Ang II(使体系中Ang II的终浓度为1.0μmol/L)处理30min。

[0105] 上述处理结果如图1所示。由图1可以看出，与对照组相比，Ang II处理组的荧光信号值明显升高(p<0.01)，说明Ang II可促进VSMCs胞内超氧化物的生成。使用Ang II建立VSMCs氧化应激模型建立成功。

[0106] 与Ang II处理组相比，蚕豆蛋白肽+Ang II处理组细胞的荧光信号值明显降低(p<0.05)，说明Ang II处理导致的荧光信号值的升高可以被蚕豆白肽的预处理消除，蚕豆蛋白肽在VSMCs细胞内具有较好的抗氧化活性。

[0107] 采用上述BrDU法检测蚕豆蛋白肽对VSMCs细胞内超氧化物生成的影响。结果如表2所示。

[0108] 表2蚕豆蛋白肽对VSMCs细胞内超氧化物生成的影响

[0109]组别 超氧化物生成(％)
对照组 100
Ang II处理组 132.8
Alcalase-2+Ang II处理组 91.5
Trypsin-2+Ang II处理组 98.5
Pepsin-2+Ang II处理组 95.5

[0110] 对照组、Ang II处理组、Alcalase-2+Ang II处理组(简称Alc 4h)、Trypsin-2+AngII处理组(简称Try 4h)和Pepsin-2+Ang II处理组(简称Pep 4h)的超氧化物生成柱形图如图2所示。

[0111] 由表2和图2可以看出，本发明的三种酶酶解得到的蚕豆蛋白肽预处理后，再加入Ang II进行处理，能够显著抑制VSMCs细胞中超氧化物的生成。Ang II处理导致的超氧化物含量的升高可以被蚕豆白肽预处理消除，说明蚕豆蛋白肽在VSMCs细胞内具有很好的抗氧化活性，可用于制备治疗炎症的药物，或用于治疗与炎症相关的疾病的药物。

[0112] 其中，Alcalase-2+Ang II处理组的超氧化物生成量最少，说明Alcalase-2蚕豆蛋白肽具有最好的抗氧化效果。

[0113] 实施例15：Western Blot

[0114] 通过检测细胞内促炎分子COX2的表达，研究蚕豆蛋白肽对Ang II引起的炎症的影响。

[0115] (一)、蚕豆蛋白肽+Ang II处理组

[0116] (1)、A7r5细胞被置于静息培养基中(DMEM+1％胎牛血清+1％抗生素)，然后加入适量实施例2、6、10制备的蚕豆蛋白肽(使体系中蚕豆蛋白肽的终浓度为200.0μg/mL)处理1h，再加入适量Ang II(使体系中Ang II的终浓度为1.0μmol/L)处理23h，然后将A7r5细胞在50μL热的Laemmle缓冲液(含有50mmol/L的还原剂二硫苏糖醇(DTT)和0.2％(v/v)的Triton-X-100)中裂解，再用细胞刮刀刮下细胞，收集细胞裂解液即得Western-blot样品。

[0117] (2)、在9％(v/v)十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中跑细胞裂解液，然后转膜到硝化纤维素膜上，与COX2、α-tubulin的抗体进行免疫印迹反应，α-tubulin抗体浓度为0.4μg/mL，COX2抗体浓度为1.0μg/mL。使用山羊抗兔IRDye 680RD或者驴抗小鼠800CW作为二抗。使用Licor  Odyssey生物成像仪检测蛋白质条带，并利用Image StudioLite 5.2进行密度测定。

[0118] (二)、Ang II处理组

[0119] 基本步骤与处理组(一)相同，区别在于，步骤(1)中不使用蚕豆蛋白肽预处理，仅用Ang II对A7r5细胞进行处理。

[0120] (三)、对照组

[0121] 基本步骤与(一)相同，区别在于，步骤(1)中A7r5细胞不采用蚕豆蛋白肽和Ang II处理，得到的Western-blot样品按照步骤(2)的方法在每块凝胶上上样，并进行后续检测分析。

[0122] 以对照组的COX2表达为1个单位，所有数据均用对照组的倍数表示。结果如表3所示。

[0123] 表3蚕豆蛋白肽对VSMCs细胞内促炎分子COX2表达的影响

[0124]组别 COX2表达量
对照组 1
Ang II处理组 1.31
Alcalase-2+Ang II处理组 1.01
Trypsin-2+Ang II处理组 1.14
Pepsin-2+Ang II处理组 1.21

[0125] 对照组、Ang II处理组、Alcalase-2+Ang II处理组(简称Alc 4h)、Trypsin-2+Ang II处理组(简称Try 4h)和Pepsin-2+Ang II处理组(简称Pep 4h)的COX2表达量柱形图如图3所示。

[0126] 由表3和图3可以看出，Ang II处理后COX2表达明显增高(p<0.05)，蚕豆蛋白肽+Ang II处理组可以显著抑制Ang II对促炎分子COX2的上调，说明蚕豆蛋白肽具有一定的抗炎活性。Ang II处理导致的COX2表达的升高可以被蚕豆白肽预处理消除，说明蚕豆蛋白肽在VSMCs细胞内具有很好的抗炎活性，可用于制备治疗炎症的药物，或用于治疗与炎症相关的疾病的药物。

[0127] 其中，Alcalase-2+Ang II处理组的COX2表达量最低，说明Alcalase-2蚕豆蛋白肽具有最好的抑制Ang II对促炎分子COX2的上调作用，即具有最好的抗炎效果。

[0128] 实施例16动物实验

[0129] 选择雄性自发性高血压大鼠60只，鼠龄6周，将大鼠随机分为4个组，每组15只。四组大鼠分别为：(1)对照组；(2)实施例2制备的蚕豆蛋白肽处理组；(3)实施例6制备的蚕豆蛋白肽处理组；(4)实施例10制备的蚕豆蛋白肽处理组。其中处理组(2)、(3)和(4)的蛋白肽浓度为35mg/mL，按照350mg/(kg*d)的剂量进行灌胃，对照组(1)采用同等体积的蒸馏水灌胃。上述处理一共持续14周，在第7周和14周时测量大鼠收缩压。

[0130] 收缩压的测量：采用大小鼠无创血压计(Mouse and Rat Tail Cuff Blood)检测大鼠尾根部的收缩压。为了检测大鼠尾动脉的搏动，测量前需将大鼠置于32℃的环境中约30min。在没有外界干扰的情况下连续测量三次，平均值即为收缩压。测定结果如表4所示。

[0131] 表4：蚕豆蛋白肽对大鼠收缩压的影响

[0132]

[0133] 备注：字母a、b、c表示在同一时间点，若组间字母不同表示在水平p<0.05时，具有统计学上的显著差异，若组间字母相同，表示无显著性差异。

[0134] 表4的数据表明，蚕豆肽处理组(2)、(3)、(4)大鼠收缩压在第7和14周时明显低于对照组(1)。说明采用本发明的蚕豆蛋白肽可显著降低大鼠的收缩压，从而降低高血压大鼠血管组织的局部损伤，可以达到减轻炎症的效果。同时可以减小相关心血管疾病发生的可能性。因此本发明的蚕豆蛋白肽具有良好的治疗高血压的作用，本发明的蚕豆蛋白肽可用于制备治疗高血压的药物。

[0135] 类似地，本发明的蚕豆蛋白肽还可用于制备治疗与血管组织的局部炎症相关的其他心血管疾病例如动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死和脑卒中等。