一种可逆共价布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂、药物组合物及其应用

摘要

本发明公开了一种可逆共价的布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂化合物、药物组合物及及其在制备治疗从布鲁顿酪氨酸激酶活性的抑制中获益的疾病、障碍或病症药物中的应用。本发明化合物具有强效的体外BTK激酶抑制活性，可应用于在单独或与其他药物联合应用治疗从布鲁顿酪氨酸激酶活性的抑制中获益的疾病、障碍或病症，包括B细胞淋巴瘤、自身免疫性疾病、炎性疾病等。

权利要求

1.一种化合物，其特征在于，具有通式II的结构：

或其药学上可接受的盐；

其中：

A选自CH、CF、CCl或N；

每一个R2独立地是氢、卤素、C1‑C6烷基、C1‑C6卤代烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6卤代羟烷基、C1‑C6烷氧基、C1‑C6卤代烷氧基或氰基；

R1选自取代或非取代的C1‑C6烷基，取代基为3至10元杂环基、C1‑C6烷氧基、取代氨基，其中氨基的取代基为C1‑C6烷基、3至10元杂环基；

C1‑C6烷氧基；

取代或非取代的C3‑C10环烷基，取代基为氨基；

取代或非取代的3至10元杂环基；其取代基可选自C1‑C6烷基；n选自0、1、2；

Y1，Y2，Y3，Y4独立选自C(Rd)、N，且至少有一个为N，Rd选自氢、卤素、C1‑C6烷基、C1‑C6卤代烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6卤代羟烷基、C1‑C6烷氧基、C1‑C6卤代烷氧基或氰基。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，具有通式III‑A、III‑B、III‑C或III‑D的结构：R3选自氢、卤素、C1‑C6烷基、C1‑C6卤代烷基、C1‑C6羟烷基、CC1‑C6卤代羟烷基、C1‑C6烷氧基、C1‑C6卤代烷氧基或氰基。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，式II中*标注的C为R构型或S构型。

4.根据权利要求1～3任一项所述的化合物，其特征在于，具有如下结构之一：或其立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐。

5.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1至4中任意一项所述的化合物中的一种或多种。

6.一种如权利要求1至4任意一项所述化合物在制备单独或与其他药物联合应用治疗从布鲁顿酪氨酸激酶活性的抑制中获益的疾病、障碍或病症药物中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述疾病选自套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤/瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、纵膈大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病或淋巴瘤样肉芽肿病。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述疾病选自异种免疫学疾病或移植物抗宿主疾病、多发性硬化症、强直性脊柱炎、自主神经功能异常、重症肌无力、炎性肠病、血管炎、狼疮、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、骨关节炎、天疱疮、荨麻疹、哮喘、斯蒂尔病、青少年关节炎、糖尿病、桥本甲状腺炎、奥德甲状腺炎、格雷夫斯氏病、类风湿性关节炎综合征、传染性神经元炎、急性播散性脑脊髓炎、阿狄森病、视性眼阵挛‑肌阵挛综合征、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、自身免疫性肝炎、乳糜泻、古德帕斯彻综合征、特发性血小板减少性紫癜、视神经炎、原发性胆汁性肝硬化、莱特尔综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、温型自身免疫性溶血性贫血、韦格纳肉芽肿病、银屑病、全身脱毛、贝赫切特病、慢性疲劳、子宫内膜异位、间质性膀胱炎、硬皮病或外阴痛、休格兰氏干眼症、非休格兰氏干眼症。

说明书

一种可逆共价布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂、药物组合物及其

应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，具体是涉及一种可逆共价布鲁顿酪氨酸激酶抑制化合物、药物组合物及其应用。

背景技术

[0002] 布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase,Btk)，一种非受体酪氨酸激酶Tec家族的成员，是在除了T淋巴细胞和自然杀伤细胞之外的所有造血细胞类型中表达的关键信号酶。Btk在连接细胞表面B细胞受体(B‑cell receptor，BCR)刺激至下游细胞内应答的B细胞信号传导途径中扮演至关重要的角色。Btk是B细胞发育、激活、信号传导和存活的关键调节物。另外，Btk在众多其他造血细胞信号传导途径中起作用，例如在巨噬细胞中的Toll样受体(Toll likereceptor，TLR)和细胞因子受体介导的TNF‑α产生、在肥大细胞中的免疫球蛋白E受体(FcεR1)信号传导、在B‑谱系淋巴样细胞中抑制Fas/APO‑1细胞凋亡的信号传导以及胶原刺激的血小板聚集，参见例如J.Bio.Chem.,2003,278:26258‑26264、J.Exp.Med.,2003,197:1603‑1611。近年来研究显示，Btk信号通路是目前非霍奇金淋巴瘤(NHL)，特别是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞淋巴瘤及自身免疫疾病临床治疗研究中的新热点。除此之外，BTK信号通路还参与了类风湿性关节炎及如系统性红斑狼疮的其他自身免疫性疾病。

[0003] Btk抑制剂伊布替尼的上市，被FDA定为“突破性”新药，研究开发前景广阔，其获批的适应症包括套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症、慢性移植物宿主病，并在近期获得了胃癌的孤儿药地位。但近年来的治疗中逐步发现伊布替尼具有出血相关的副作用，文献研究认为其可能与伊布替尼的激酶选择性不佳有关，特别是对TEC激酶的选择性较差。此外，伊布替尼的FDA申报资料中，有审评专家提出，其hERG通道阻滞活性的IC50较低(IC50＝1μM左右)，存在心脏毒副作用的风险。因此，亟需发展发展一类选择性更为高效的BTK抑制剂用于相关疾病的治疗。

[0004] 研究表明，小分子可逆共价抑制剂(reversible covalent inhibitors)可以与靶蛋白的非活化区巯基残基形成可逆的共价键，提高化合物与靶蛋白的停留时间，并在BTK抑制剂的研发上显示出一定的进展，参见Nat Chem Biol.,2015,11(7):525–531。专利CN103534258B、CN104822681B等中的研究及披露也进一步证明了该类化合物开发的重要性。小分子共价抑制剂(covalent inhibitors)，也称不可逆抑制剂(irreversible inhibitors)，是通过共价键与靶蛋白残基发生不可逆结合，从而发挥其生物学功能的一类抑制剂。但是，不可逆共价抑制剂可以与非靶蛋白(如具有同源巯基残基高度相关的非靶蛋白)以及具有活性较高巯基的非相关靶蛋白发生能共价加成，发生一些不可预期的副作用。而共价可逆抑制剂可以降低与非靶蛋白的不可逆结合，并降低其安全风险，同时可以与BTK持续结合，提高与靶蛋白的停留时间，并具有良好的激酶选择性，可应用范围较广。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种新颖的、未见文献报道的具有高效BTK抑制活性，特异性高(激酶选择性佳)的可逆共价BTK抑制化合物及其立体异构体或立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

[0006] 本发明还提供了一种包括上述化合物及其立体异构体或立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物。

[0007] 本发明同时提供了一种上述化合物及其立体异构体或立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物用于制备治疗从布鲁顿酪氨酸激酶活性的抑制中获益的疾病、障碍或病症药物中的应用。

[0008] 本发明采用如下的技术方案：

[0009] 本发明所提供的布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂，其具有通式I的结构：

[0010]

[0011] 或其立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物；

[0012] 其中：

[0013] A选自CRa或N，其中Ra选自氢、卤素、取代或未取代的烷基；

[0014] B选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基；

[0015] R1选自取代或非取代的烷基、取代或非取代的烷氧基、取代或非取代的环烷基、取代或非取代的杂环基；n选自0、1、2；

[0016] X选自O、S、‑S(＝O)、‑S(＝O)2、NH、C(＝O)、CH2、‑NHC(＝O)O、‑NHC(＝O)或‑C(＝O)NH；

[0017] Y1，Y2，Y3，Y4独立选自C(Rd)、N，且至少有一个为N，Rd选氢、卤素、烷基、卤代烷基、羟烷基、卤代羟烷基、烷氧基、卤代烷氧基或氰基；

[0018] Z选自C(＝O)、‑S(＝O)2、‑S(＝O)。

[0019] 进一步地，其中A选自CH、CF、CCl或N。

[0020] 更进一步地，本发明优选的化合物具有通式II的结构：

[0021]

[0022] 或其立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物；

[0023] 其中：A、R1、n、Y1、Y2、Y3、Y4的定义如通式I中所定义；

[0024] 通式II中，多个R2可以相同，也可以不同；每一个R2独立地是氢、卤素、烷基、卤代烷基、羟烷基、卤代羟烷基、烷氧基、卤代烷氧基或氰基。

[0025] 更进一步地，本发明优选的化合物具有通式III‑A、III‑B、III‑C或III‑D的结构：

[0026]

[0027] 或其立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物；

[0028] 其中：R1、n、Y1、Y2、Y3、Y4、R2的定义如式(II)中所定义；R3选自氢、卤素、烷基、卤代烷基、羟烷基、卤代羟烷基、烷氧基、卤代烷氧基或氰基。

[0029] 作为优选，所述R1优选为：环丙基、 丙基、2‑丙基、等。

[0030] 作为优选，所述R2优选为H，或者一个、两个、三个相互独立卤素、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基。

[0031] 作为优选，所述R3优选为H、卤素、甲基等。

[0032] 作为优选，所述布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂优选为以下具体化合物：

[0033]

[0034]

[0035]

[0036]

[0037]

[0038] 及上式化合物的立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。作为优选，所述化合物为如下化合物：

[0039] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈20a

[0040] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑(4‑氟苯氧基)吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈20b

[0041] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑(2‑氟苯氧基)吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈20c

[0042] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑(3,4‑二氟苯氧基)吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈20d

[0043] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑(2,6‑二氟苯氧基)吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈20e

[0044] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑(4‑氯苯氧基)吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈20f

[0045] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑(对甲苯氧基)吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈20g

[0046] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑(4‑甲氧基苯氧基)吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈20h

[0047] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑(4‑(三氟甲基)苯氧基)吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈20i

[0048] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑(3‑甲基氧杂环丁‑3‑基)丙烯腈21a

[0049] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑(4‑甲基哌嗪‑1‑基)‑戊‑2‑烯腈21b

[0050] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(5‑氟‑6‑苯氧吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈22a

[0051] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(4‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈22b

[0052] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(4‑甲基‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈22c

[0053] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑甲基‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈22d

[0054] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈23a

[0055] (R,E)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈(E)‑23a

[0056] (R,Z)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈(Z)‑23a

[0057] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑(4‑氟苯氧基)吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈23b

[0058] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(6‑(2,3‑二氟苯氧基)‑2‑氟吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈23c

[0059] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑甲基戊‑2‑烯腈23d

[0060] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑5‑甲基己‑2‑烯腈23e

[0061] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑5,5‑二甲基己‑2‑烯腈23f

[0062] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4,4‑二甲基戊‑2‑烯腈24a

[0063] (R,E)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4,4‑二甲基戊‑2‑烯腈(E)‑24a

[0064] (R,Z)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4,4‑二甲基戊‑2‑烯腈(Z)‑24a

[0065] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑(3‑甲基氧杂环丁‑3‑基)丙烯腈24b

[0066] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑(氮杂环丁‑1‑基)‑4‑甲基戊‑2‑烯腈24c

[0067] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑乙氧基‑4‑甲基戊‑2‑烯腈24d

[0068] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑吗啉‑戊‑2‑烯腈24e

[0069] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑(甲基(氧杂环丁‑3‑基)氨基)戊‑2‑烯腈24f

[0070] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑(2‑氧杂‑6‑氮杂螺[3.3]庚‑6‑基)戊‑2‑烯腈24g[0071] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑(4‑(氧杂环丁‑3‑基)哌嗪‑1‑基)戊‑2‑烯腈24h[0072] (R,E)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑(4‑(氧杂环丁‑3‑基)哌嗪‑1‑基)戊‑2‑烯腈(E)‑24h[0073] (R,Z)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑(4‑(氧杂环丁‑3‑基)哌嗪‑1‑基)戊‑2‑烯腈(Z)‑24h[0074] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑苯氧基嘧啶‑5‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈25a

[0075] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(5‑苯氧基吡啶‑2‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基)‑3‑环丙基丙烯腈25b

[0076] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)吡咯‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑(4‑(氧杂环丁‑3‑基)哌嗪‑1‑基)戊‑2‑烯腈26a[0077] (R,E)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)吡咯‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑(4‑(氧杂环丁‑3‑基)哌嗪‑1‑基)戊‑2‑烯腈(E)‑26a[0078] (R,Z)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)吡咯‑1‑羰基)‑4‑甲基‑4‑(4‑(氧杂环丁‑3‑基)哌嗪‑1‑基)戊‑2‑烯腈(Z)‑26a[0079] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)吡咯‑1‑羰基)‑4,4‑二甲基戊‑2‑烯腈26b

[0080] (R)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)吡咯‑1‑羰基)‑3‑(1‑氨基环丙基)丙烯腈26c

[0081] (S)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)哌啶‑1‑羰基‑3‑环丙基丙烯腈27

[0082] (S)‑2‑(3‑(4‑氨基‑3‑(2‑氟‑6‑苯氧基吡啶‑3‑基)‑1H‑吡唑[3,4‑d]嘧啶‑1‑基)吡咯‑1‑羰基)‑4,4‑二甲基戊‑2‑烯腈28

[0083] 及上式化合物的立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

[0084] 术语说明：

[0085] 本发明所用术语“芳基”是由芳环去掉一个H得到，所述芳环是指5到12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。芳环的非限制性实例有：苯环、萘环和蒽环。芳环可以是无取代或取代的。芳环的取代基选自卤素(优选为氟、氯、溴、碘)、硝基、氨基、羟基、C1‑C6烷基(优选为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基等)、C1‑C6羟烷基(优选为羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟异丙基等)、C1‑C6烷氧基(优选为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙基氧基、丁氧基、异丁基氧基、仲丁基氧基、叔丁基氧基等)、卤代C1‑C6烷基(优选为卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代异丙基、卤代丁基、卤代异丁基、卤代仲丁基、卤代叔丁基等)、卤代C1‑C6羟烷基(优选为卤代羟甲基、卤代羟乙基、卤代羟丙基、卤代羟异丙基等)、卤代C1‑C6烷氧(优选为卤代甲氧基、卤代乙氧基、卤代丙氧基、卤代异丙基氧基、卤代丁氧基、卤代异丁基氧基、卤代仲丁基氧基、卤代叔丁基氧基等)基、C3‑C6环烷基(优选为环丙基、环戊基、环己基等)、卤代C3‑C6环烷基(优选为卤代环丙基、卤代环戊基、卤代环己基等)；芳环的取代，可以是单取代(比如邻位、间位、对位取代)，也可以是双取代或者三取代等。

[0086] 本发明所用术语“杂芳基”指5到12个环原子的不饱和的环基团，具有完全共轭的π电子系统，相当于上述“芳基”中一个或多个碳被杂原子例如氧、氮、硫等置换。杂芳环可以是单环，也可以是双环，即通过两个环稠合而成。具体的杂环芳基(杂芳基)可以是：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、异恶唑基、异噻唑基、吡唑基、噻唑基、恶唑基和咪唑基等。杂环芳基可以是无取代或取代的。杂环芳基的取代基选自卤素、硝基、氨基、羟基、C1‑C6烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6烷氧基、卤代C1‑C6烷基、卤代C1‑C6羟烷基、卤代C1‑C6烷氧基、C3‑C6环烷基、卤代C3‑C6环烷基。

[0087] 本发明所用术语“烷基”是指一个具有一至六个碳原子的直链饱和单价烃基或一个具有三至六个碳原子的支链饱和的单价烃基，优选为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基等。烷基可以是无取代或单取代或多取代，多取代时取代基可以相同也可以不同；烷基的取代基选自卤素、硝基、羟基、C1‑C6烷基、C1‑C6烷氧基、C3‑C10环烷基、烷氧基羰基、烷硫基、烷基磺酰基、烷基酰胺基、羟烷基酰胺基、磺酰胺基、3至10元杂环基，或者氨基或单取代或多取代氨基，其中氨基的取代基可以相同也可以不同，选自氢、C1‑C6烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6烷氧基、C3‑C10环烷基、3至10元杂环基。

[0088] 本发明所用术语“羟烷基”是指‑烷基‑OH，其中烷基如上所定义。本发明所用“羟烷基”的实例包括但不限于羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟异丙基等。“羟烷基”还包括取代羟烷基，其取代基可为卤素、氨基、羟基、C1‑C6烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6烷氧基、C1‑C6环烷基。

[0089] 本发明所用术语“烷氧基”是指‑O‑烷基基团，其中烷基如上所定义。本发明所用“烷氧基”的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和叔丁氧基。“烷氧基”还包括取代烷氧基，其取代基可为卤素、氨基、羟基、C1‑C6烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6烷氧基、C1‑C6环烷基。

[0090] 本发明所用术语“环烷基”是指具有三个至十个碳原子的环饱和单价烃基，优选为环丙基、环丁基、环戊基、环己基等，其中一个或两个碳原子可以由一个氧代基团替代。该环烷基可以是无取代或取代的，其取代基选自卤素、硝基、羟基、C1‑C6烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6烷氧基、卤代C1‑C6烷基、卤代C1‑C6羟烷基、卤代C1‑C6烷氧基、C3‑C6环烷基、卤代C3‑C6环烷基、烷氧基羰基、烷硫基、烷基磺酰基、烷基酰胺基、羟烷基酰胺基、磺酰胺基、3至10元杂环基，或者氨基或单取代或多取代氨基，其中氨基的取代基可以相同也可以不同，选自氢、C1‑C6烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6烷氧基、C3‑C10环烷基、3至10元杂环基。

[0091] 本发明所用术语“杂环基”是指具有三个至十个环原子的单环或多环(两个单环之间用化学键连接或桥环或螺环或稠合)的环基，具有一个及以上的选自N、O、S的杂原子，包括但不仅限于该杂环基可以是无取代或取代的，其取代基选自卤素、硝基、羟
基、C1‑C6烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6烷氧基、卤代C1‑C6烷基、卤代C1‑C6羟烷基、卤代C1‑C6烷氧基、C3‑C6环烷基、卤代C3‑C6环烷基、烷氧基羰基、烷硫基、烷基磺酰基、烷基酰胺基、羟烷基酰胺基、磺酰胺基、3至10元杂环基，或者氨基或单取代或多取代氨基，其中氨基的取代基可以相同也可以不同，选自氢、C1‑C6烷基、C1‑C6羟烷基、C1‑C6烷氧基、C3‑C10环烷基、3至10元杂环基。

[0092] 本发明所用术语“卤素”指氟、氯、溴、碘，优选氟、氯或溴。

[0093] 本发明所用术语“卤代”指被同一个原子或不同原子被卤素取代，可以取代一次也可以取代多次，如二取代或三取代。

[0094] 本发明所用术语“卤代烷基”是指被卤素(优选为氟、氯、溴、碘)取代的烷基基团，其中烷基如上所定义。“卤代烷基”可被卤素取代一次或多次。

[0095] 本发明所用术语“卤代羟烷基”是指被卤素(优选为氟、氯、溴、碘)取代的羟烷基基团，其中羟烷基如上所定义。“卤代羟烷基”可被卤素取代一次或多次。

[0096] 本发明所用术语“卤代烷氧基”是指被卤素(优选为氟、氯、溴、碘)取代的烷氧基基团，其中烷氧基如上所定义。“卤代烷氧基”可被卤素取代一次或多次。

[0097] 本发明所用术语“卤代环烷基”是指被卤素(优选为氟、氯、溴、碘)取代的环烷基基团，其中环烷基如上所定义。“卤代环烷基”可被卤素取代一次或多次。

[0098] 本发明所用术语“n”优选1、2。

[0099] 本发明式I、式II、式IIIA～IIID所述化合物，*C具有手性，其构型是R‑构型或S‑构型，或者R‑构型和S‑构型的混合物。作为进一步优选，其构型为R型。

[0100] 本发明式I、式II、式IIIA～IIID或者或者式20a～28所述化合物，双键上的 表示这些化合物可以为单独的E型异构体或Z型异构体，或E型异构体和Z型同分异构体的混合物。

[0101] 本发明所用术语“溶剂合物”是指由溶质(例如：本发明的通式I～通式III化合物)和溶剂形成的可变化学计量的复合物。为了本发明的目的，所述溶剂不能干扰溶质的生物学活性。合适的溶剂的实例包括但不限于水、甲醇、乙醇和乙酸。优选使用的溶剂为药学可接受溶剂。合适的药学可接受溶剂包括但不限于水、乙醇和乙酸。更优选地，所用溶剂为水。

[0102] 本发明采用本领域技术人员所熟知的方法可以制备本发明所述化合物的盐。所述的盐可以是有机酸盐、无机酸盐等，所述的有机酸盐包括枸橼酸盐、富马酸盐、草酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、樟脑磺酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐等；所述的无机酸盐包括氢卤酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐等。例如，与低级烷基磺酸，如甲磺酸，三氟甲磺酸等可形成甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐；与芳基磺酸，如苯磺酸或对甲苯磺酸等可形成对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐；与有机羧酸，如乙酸，富马酸，酒石酸，草酸，马来酸，苹果酸，琥珀酸或柠檬酸等可形成相应的盐；与氨基酸，如谷氨酸或天冬氨酸可形成谷氨酸盐或天冬氨酸盐。与无机酸，如氢卤酸(如氢氟酸、氢溴酸、氢碘酸、氢氯酸)，硝酸，碳酸，硫酸或磷酸等也可形成相应的盐。

[0103] 本发明的第二个目的是提供一种药物组合物，包括上述任意一项技术方案所述的化合物中的一种或多种。本发明所述的药物组合物可以是上述任意一项技术方案所述的化合物中的一种或多种与其他化合物组成，或者上述任意一项技术方案所述的化合物中的一种或多种组成。

[0104] 另一方面，本发明提供的是使用本文公开的通式I～通式III‑A～D或者式20a～28所述的化合物及其立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物来抑制布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)活性或者治疗从布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)活性的抑制中获益的疾病、障碍或病症。

[0105] 在进一步优选的方案中，本发明提供的是通过给予有需要的治疗者一种含有治疗有效量的至少一种化合物的组合物、从而抑制所述受治疗者的布鲁顿酪氨酸激酶活性的方法，其中所述化合物的结构式为通式I～通式III‑A～D。在一些实施方式中，有需要的受治疗者罹患癌症，所述癌症是B细胞增生性疾病，例如弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤/瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症( macroglobulinemia)、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、纵膈(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkittlymphoma)/白血病或淋巴瘤样肉芽肿病。

[0106] 在进一步的实施方式中，有需要的受治疗者罹患自身免疫性疾病和炎性疾病，例如炎性肠病、关节炎、狼疮、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、骨关节炎、斯蒂尔病(Still’s disease)、青少年关节炎、糖尿病、重症肌无力症、桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis)、奥德甲状腺炎(Ord’s thyroiditis)、格雷夫斯氏病(Graves’disease)、类风湿性关节炎综合征( syndrome)、多发性硬化症、传染性神经元炎(Guillain‑Barrésyndrome)、急性播散性脑脊髓炎、阿狄森病(Addison’s disease)、视性眼阵挛‑肌阵挛综合征、强制性脊椎炎、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、自身免疫性肝炎、乳糜泻(coeliac disease)、古德帕斯彻综合征(Goodpasture’ssyndrome)、特发性血小板减少性紫癜、视神经炎、硬皮病、原发性胆汁性肝硬化、莱特尔综合征(Reiter’s syndrome)、高安动脉炎(Takayasu’s arteritis)、颞动脉炎、温型自身免疫性溶血性贫血、韦格纳肉芽肿病(Wegener’s granulomatosis)、银屑病、全身脱毛、贝赫切特病( disease)、慢性疲劳、家族性自主神经功能异常、子宫内膜异位、间质性膀胱炎、神经肌强直、硬皮病或外阴痛、多发性硬化症和慢性移植物抗宿主病。

[0107] 本发明还提供本发明所述的化合物或其可药用盐在制备BTK抑制剂中的应用，特别是在制备治疗细胞增生疾病中的应用。所述的细胞增生疾病包括癌症。换言之，本发明还提供通式通式I～通式III‑A～D所述的化合物、立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物单独或和其他药物联合使用在治疗增生类疾病(如癌症)中的应用。能和本发明所提供的化合物或其可药用盐联合使用的抗肿瘤药包括但并非限定至少一种以下种类：有丝分裂抑制剂(如长春碱、长春地辛和长春瑞宾)；微管蛋白分解抑制剂(如泰素))；烷基化试剂(如顺铂、卡铂和环磷酰胺)；抗代谢物(如5‑氟尿嘧啶、替加氟、甲氨蝶呤、阿糖胞苷和羟基脲)；可插入抗生素(如阿雷素、丝裂霉素和争光霉素))；酶(如天门冬氨酶)；拓朴异构酶抑制剂(如依托伯苷和喜树碱)；生物反应调节剂(如干扰素)。

[0108] 本发明发明人通过实验证实，本发明化合物具有强效的体外BTK激酶抑制活性，可应用于在单独或与其他药物联合应用治疗从布鲁顿酪氨酸激酶活性的抑制中获益的疾病、障碍或病症，包括B细胞淋巴瘤、自身免疫性疾病、炎性疾病等。

[0109] 本发明发明人通过实验证实，本发明化合物为可逆共价抑制剂，有望降低不可逆抑制剂的安全风险。

[0110] 因此，本发明的可逆共价的BTK抑制剂将适用于治疗B细胞淋巴瘤、自身免疫型疾病和炎性疾病，有望降低不可逆抑制剂的安全风险。

具体实施方式

[0111] 下面通过实施例来说明本发明的可实施性，本领域的技术人员应当理解，根据现有技术的教导，对相应的技术特征进行修改或替换，仍然属于本发明要求保护的范围。在以下化合物，双键碳上的 表示这些化合物被分离为(E)和(Z)同分异构体的不明确混合物。

[0112] 实施例1.中间体1a的制备

[0113]

[0114] 操作步骤：3‑碘‑4‑氨基‑1H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶(6.45g，24.7mmol)，(S)‑1‑Boc‑3‑羟基哌啶(9.93g，49.4mmol)，三苯基磷PPh3(9.73g，37.1mmol)置于250mL圆底烧瓶中，放入磁子，加入130mL THF，在氮气保护下在室温下搅拌；取偶氮二甲酸二异丙酯DIAD(7.5g，
37.1mmol)溶于约30mLTHF，并缓慢滴加至反应体系中，滴加完成后继续反应约12小时，根据TLC(薄层色谱法)结果，停止反应，减压浓缩，采用硅胶柱层析，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂进行纯化得白色固体1a，收率70％，1H NMR(δ,CDCl3):1.45(s,9H),1.54～1.76(m,1H),
181～1.97(m,1H),2.05～2.26(m,1H),2.75～2.96(m,1H),3.48～3.61(m,1H),4.13(q,J＝
7.0Hz,2H),4.65～4.88(m,1H),6.45(brs,2H),8.31(s,1H).LC‑ESI‑MS:445[M+H].Chiral HPLC:99％ee。

[0115] 实施例2.中间体1b的制备

[0116]

[0117] 操作步骤：3‑碘‑4‑氨基‑1H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶(6.45g，24.7mmol)，(R)‑1‑Boc‑3‑羟基哌啶(9.93g，49.4mmol)，三苯基磷PPh3(9.73g，37.1mmol)置于250mL圆底烧瓶中，放入磁子，加入130mL THF，在氮气保护下在室温下搅拌；取偶氮二甲酸二异丙酯DIAD(7.5g，
37.1mmol)溶于约30mLTHF，并缓慢滴加至反应体系中，滴加完成后继续反应约12小时，根据TLC(薄层色谱法)结果，停止反应，减压浓缩，采用硅胶柱层析，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂进行纯化得白色固体1b，收率68％。LC‑ESI‑MS:445[M+H].Chiral HPLC:99％ee。

[0118] 实施例3.中间体2a的制备

[0119]

[0120] 操作步骤：3‑碘‑4‑氨基‑1H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶(5.1g，19.5mmol)，(S)‑1‑Boc‑3‑羟基四氢吡咯(7.3g，39mmol)，三苯基磷PPh3(7.7g，29.3mmol)置于250mL圆底烧瓶中，放入磁子，加入100mL THF，在氮气保护下在室温下搅拌；取偶氮二甲酸二异丙酯DIAD(5.9g，29.3mmol)溶于约25mL THF，并缓慢滴加至反应体系中，滴加完成后继续反应约12小时，根据TLC结果，停止反应，减压浓缩，采用硅胶柱层析，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂进行纯化得白色固体，2a，收率35％，LC‑ESI‑MS:431[M+H].Chiral HPLC:98％ee。

[0121] 实施例4.中间体2b的制备

[0122]

[0123] 操作步骤：3‑碘‑4‑氨基‑1H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶(5.1g，19.5mmol)，(R)‑1‑Boc‑3‑羟基四氢吡咯(7.3g，39mmol)，三苯基磷PPh3(7.7g，29.3mmol)置于250mL圆底烧瓶中，放入磁子，加入100mL THF，在氮气保护下在室温下搅拌；取偶氮二甲酸二异丙酯DIAD(5.9g，29.3mmol)溶于约25mL THF，并缓慢滴加至反应体系中，滴加完成后继续反应约12小时，根据TLC结果，停止反应，减压浓缩，采用硅胶柱层析，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂进行纯化得白色固体2b，收率32％，LC‑ESI‑MS:431[M+H].Chiral HPLC:98％ee。

[0124] 实施例5.关键中间体3a～3i的制备

[0125]

[0126] 操作步骤(以中间体3a为例)：2,5‑二溴吡啶(61.5mmol),苯酚(64.6mmol)，碘化亚铜(6.15mmol)，Cs2CO3(92mmol)置于250mL干燥过的烧瓶中，加入150mL DMSO，然后在加入TMEDA(6.15mmol)(四甲基乙二胺)，在Ar保护下加热至110度(在没有特殊说明的情况下，本发明中温度的单位均为摄氏度℃)，反应约20小时，TLC监控转化完全。降至室温，加入大量乙酸乙酯，水洗4次，乙酸乙酯萃取2次，合并EA(乙酸乙酯)相用饱和食盐水洗，干燥有机相，过滤，旋蒸干，得到棕色油状产物。

[0127] 中间体5‑溴‑2‑苯氧基吡啶3a(R1＝H)，收率92％，1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.22(d,J＝2.4Hz,1H),7.76(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),7.41(t,J＝7.9Hz,2H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.12(d,J＝7.7Hz,2H),6.83(d,J＝8.7Hz,1H).LC‑ESI‑MS:251[M+H]。

[0128] 中间体3b(5‑溴‑2‑(4‑氟‑苯氧基)吡啶，R1＝4‑氟)：试剂：2,5‑二溴吡啶(6.15mmol)，4‑氟苯酚(6.46mmol)，碘化亚铜(0.62mmol)，Cs2CO3(9.2mmol)，TMEDA(0.62mmol)，收率82％，LC‑ESI‑MS:269[M+H]。

[0129] 中间体3c(5‑溴‑2‑(2‑氟‑苯氧基)吡啶，R1＝2‑氟)：试剂：2,5‑二溴吡啶(6.15mmol)，2‑氟苯酚(6.46mmol)，碘化亚铜(0.61mmol)，Cs2CO3(9.2mmol)，TMEDA(0.62mmol)，收率65％，LC‑ESI‑MS:269[M+H]。

[0130] 中间体3d(5‑溴‑2‑(3,4‑二氟‑苯氧基)吡啶，R1＝3,4‑二氟)：试剂：2,5‑二溴吡啶(6.15mmol)，3,4‑二氟苯酚(6.46mmol)，碘化亚铜(0.61mmol)，Cs2CO3(9.2mmol)，TMEDA(0.62mmol)，收率82％，LC‑ESI‑MS:287[M+H]。

[0131] 中间体3e(5‑溴‑(2,6‑二氟‑苯氧基)吡啶，R1＝2,6‑二氟)：试剂：2,5‑二溴吡啶(6.15mmol)，2,6‑二氟苯酚(6.46mmol)，碘化亚铜(0.61mmol)，Cs2CO3(9.2mmol)，TMEDA(0.62mmol)，收率82％，LC‑ESI‑MS:287[M+H]。

[0132] 中间体3f(5‑溴‑(4‑氯‑苯氧基)吡啶，R1＝4‑氯)：试剂：2,5‑二溴吡啶(6.15mmol)，4‑氯苯酚(6.46mmol)，碘化亚铜(0.61mmol)，Cs2CO3(9.2mmol)，TMEDA1
(0.62mmol)，收率72％.H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.25(d,J＝2.5Hz,1H),7.79(dd,J＝8.7,
2.5Hz,1H),7.35(d,J＝9.2Hz,2H),7.08(d,J＝9.2Hz,2H),6.85(d,J＝8.5Hz,1H).LC‑ESI‑MS:285[M+H]。

[0133] 中间体3g(5‑溴‑(4‑甲基‑苯氧基)吡啶，R1＝4‑甲基)：试剂：2,5‑二溴吡啶(6.15mmol)，4‑甲基苯酚(6.46mmol)，碘化亚铜(0.61mmol)，Cs2CO3(9.2mmol)，TMEDA(0.62mmol)，收率61％，LC‑ESI‑MS:265[M+H]。

[0134] 中间体3h(5‑溴‑(4‑甲氧基‑苯氧基)吡啶，R1＝4‑甲氧基)：试剂：2,5‑二溴吡啶(6.15mmol)，4‑甲氧基苯酚(6.46mmol)，碘化亚铜(0.61mmol)，Cs2CO3(9.2mmol)，TMEDA1
(0.62mmol)，收率59％，H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.22(d,J＝2.4Hz,1H),7.76(dd,J＝8.4,
2.4Hz,1H),6.93(d,J＝8.4Hz,1H),6.75(m,4H),3.68(s,3H).LC‑ESI‑MS:281[M+H]。

[0135] 中间体3i(5‑溴‑(4‑三氟甲基‑苯氧基)吡啶，R1＝4‑三氟甲基)：试剂：2,5‑二溴吡啶(6.15mmol)，4‑三氟甲基苯酚((6.46mmol)，碘化亚铜(0.61mmol)，Cs2CO3(9.2mmol)，TMEDA(0.62mmol)，收率66％，LC‑ESI‑MS:319[M+H]。

[0136] 实施例6.中间体4a～4d的制备

[0137]

[0138] 操作步骤：取代的2,5‑二溴吡啶(6.15mmol)，苯酚(6.46mmol)，碘化亚铜CuI(0.62mmol)，Cs2CO3(9.2mmol)置于25mL干燥过的烧瓶中，加入15mL DMSO，然后在加入TMEDA(0.62mmol)，在Ar保护下加热至110度，反应约20小时，TLC转化完全。降至室温，加入大量乙酸乙酯，水洗4次，乙酸乙酯萃取2次，合并EA相用饱和食盐水洗，干燥有机相，过滤，旋蒸干,得到棕色油状产物。

[0139] 中间体5‑溴‑4‑氟‑2‑苯氧基吡啶4a(R2＝4‑氟)，试剂：2,5‑二溴‑4‑氟吡啶(6.15mmol)，苯酚(6.46mmol)，其余试剂和用量同上，收率78％，LC‑ESI‑MS:269[M+H]。

[0140] 中间体5‑溴‑3‑氟‑2‑苯氧基吡啶4b(R2＝3‑氟)，试剂：2,5‑二溴‑3‑氟吡啶(6.15mmol)，苯酚(6.46mmol)，其余试剂和用量同上，收率80％，LC‑ESI‑MS:269[M+H]。

[0141] 中间体5‑溴‑4‑甲基‑2‑苯氧基吡啶4c(R2＝4‑甲基)，试剂：2,5‑二溴‑4‑甲基吡啶(6.15mmol)，苯酚(6.46mmol)，其余试剂和用量同上，收率85％，LC‑ESI‑MS:265[M+H]。

[0142] 中间体5‑溴‑6‑甲基‑2‑苯氧基吡啶4d(R2＝6‑甲基)，试剂：2,5‑二溴‑6‑甲基吡啶(6.15mmol)，苯酚(6.46mmol)，其余试剂和用量同上，收率51％，LC‑ESI‑MS:265[M+H]。

[0143] 实施例7.中间体5a～5h的制备

[0144]

[0145] 操作步骤：2,6‑二氟吡啶(6.15mmol)，取代的苯酚(6.46mmol)置于25mL干燥过的烧瓶中，加入15mL DMSO，然后加入NaH(6.77mmol)，在Ar保护下加热至30度，反应约20小时，TLC转化完全。降至室温，加入大量乙酸乙酯，水洗4次，乙酸乙酯萃取2次，合并EA相用饱和食盐水洗，干燥有机相，过滤，旋蒸干，得到棕色油状产物。

[0146] 中间体2‑氟‑6‑苯氧吡啶5a(R1＝H)，试剂：2,6‑二氟‑吡啶(6.15mmol)，苯酚(6.46mmol)，其余试剂和用量同上，收率65％，LC‑ESI‑MS:190[M+H]。

[0147] 中间体2‑氟‑6‑(2‑氟苯氧吡啶)5b(R1＝4‑氟)，试剂：2,6‑二氟‑吡啶(6.15mmol)，4‑氟苯酚(6.46mmol)，其余试剂和用量同上，收率55％，LC‑ESI‑MS:208[M+H]。

[0148] 中间体2‑(2,3‑二氟苯氧)‑6‑氟吡啶5c(R1＝2,3‑二氟)，试剂：2,6‑二氟‑吡啶(6.15mmol)，2,3‑二氟基苯酚(6.46mmol)，其余试剂和用量同上，收率52％，LC‑ESI‑MS:226[M+H]。

[0149] 实施例8.中间体6的制备

[0150]

[0151] 操作步骤：5‑溴‑2‑碘嘧啶(3mmol)，苯酚(3.2mmol)，2‑吡啶甲酸(0.3mmol)，碘化亚铜CuI(0.3mmol)，磷酸钾(4.5mmol)置于25mL干燥过的烧瓶中，加入15mL DMSO，在Ar保护下加热至100度，反应约20小时，TLC转化完全。降至室温，加入大量乙酸乙酯，水洗4次，乙酸乙酯萃取2次，合并EA相，用饱和食盐水洗，干燥有机相，过滤，旋蒸干，硅胶柱层析纯化得白1
色产品1.1g，收率87％。H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.56(s,2H),7.48–7.39(m,2H),7.31–7.25(m,1H),7.22–7.14(m,2H).LC‑ESI‑MS:251[M+H]。

[0152] 实施例9.中间体7的制备

[0153]

[0154] 操作步骤：在Ar保护下，15mL DMF溶液中放置于冰水浴中，小心加入氢化钠(5.1mmol)，苯酚(4.6mmol)。加完之后在室温下搅拌约1小时，然后加入2‑溴‑5‑氟吡啶(4.6mmol)，继续在室温下反应过夜。TLC检测反应完成之后用饱和氯化铵水溶液萃灭反应，乙酸乙酯萃取3次。合并有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得油状产物，直接用于下一步。LC‑ESI‑MS:251[M+H]。

[0155] 实施例10.中间体8的制备

[0156]

[0157] 操作步骤：

[0158] 第一步：相应的化合物3a～3i溶于干燥过的四氢呋喃中，在Ar保护下冷却至‑78度，逐步滴加正丁基锂。反应体系在此温度下继续搅拌反应1小时，然后加入硼酸三异丙酯，加完之后在‑78度反应1小时，然后让其缓慢升温至室温，用氯化铵水溶液萃灭反应。用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用水洗和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤之后减压浓缩。乙酸乙酯和石油醚重结晶得到白色固体硼酸产物，直接用于下一步反应。

[0159] 第二步：在刚刚用Ar鼓泡过的70mL DMF中加入上一步的硼酸产物，化合物1a、四三苯基磷钯在Ar保护下搅拌，然后加入2N aq.K2CO3水溶液。反应体系在Ar保护下加热到85度，反应过夜，TLC跟踪反应完全。降至室温，用硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤几次。水洗3次，饱和食盐水洗，干燥，过滤，减压浓缩，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂，进行硅胶柱层析纯化。

[0160] 化学试剂以及数据表征：

[0161] 中间体8a(R1＝H)，试剂：化合物3a(30mmol)，正丁基锂(33.3mmol)，硼酸三异丙酯(39.4mmol)，化合物1a(17.3mmol)，四三苯基磷钯(0.78mmol)，2N aq.K2CO3(26mL)，产物为白色固体，收率60％(两步)，1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.51(d,J＝2.1Hz,1H),8.37(s,1H),8.04(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.29–7.22(m,1H),7.19(d,J＝7.7Hz,
2H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),5.75(brs,2H),4.91–4.82(m,1H),4.25(brs,1H),4.12(dd,J＝
14.2,7.0Hz,1H),3.43(brs,1H),2.87(dd,J＝13.0,10.0Hz,1H),2.33–2.10(m,2H),1.90(brs,1H),1.76–1.66(m,1H),1.44(s,9H).LC‑ESI‑MS:488[M+H]。

[0162] 中间体8b(R1＝4‑氟)，试剂：化合物3b(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)，产物为白色固体，收率45％(两步)，LC‑ESI‑MS:506[M+H]。

[0163] 中间体8c(R1＝2‑氟)，试剂:化合物3c(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)，产物为白色固体，收率52％(两步)，LC‑ESI‑MS:506[M+H]。

[0164] 中间体8d(R1＝3,4‑二氟)，试剂:化合物3d(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)，产物为白色固体，收率26％(两步)，LC‑ESI‑MS:524[M+H]。

[0165] 中间体8e(R1＝2,6‑二氟)，试剂：化合物3e(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)，产物为白色固体，36％(两步)，LC‑ESI‑MS:524[M+H]。

[0166] 中间体8f(R1＝4‑氯)，试剂:化合物3f(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)，产物为白色固体，收率41％(两步)，LC‑ESI‑MS:523[M+H]。

[0167] 中间体8g(R1＝4‑甲基)，试剂:化合物3g(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)，1
产物为白色固体，收率57％(两步)，H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.48(d,J＝2.3Hz,1H),8.33(s,1H),8.02(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.15–7.03(m,3H),6.96–6.90(m,2H),5.71(brs,2H),
4.92–4.80(m,1H),4.19(brs,1H),4.08(dd,J＝13.9,6.9Hz,1H),3.41(brs,1H),2.90–2.81(m,1H),2.32–2.11(m,2H),2.27(s,3H),1.88(brs,1H),1.77–1.65(m,1H),1.45(s,9H).LC‑ESI‑MS:502[M+H]。

[0168] 中间体8h(R1＝4‑甲氧基)，试剂:化合物3h(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)，产物为白色固体，38％(两步)，LC‑ESI‑MS:518[M+H]。

[0169] 中间体8i(R1＝4‑三氟甲基)，试剂：化合物3i(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)，产物为白色固体，35％(两步)，LC‑ESI‑MS:556[M+H]。

[0170] 实施例11.中间体9的制备

[0171]

[0172] 操作步骤：

[0173] 第一步：相应的化合物4a～4d溶于15mL干燥过的四氢呋喃中，在Ar保护下冷却至‑78度，逐步滴加正丁基锂。反应体系在此温度下继续搅拌反应1小时，然后加入硼酸三异丙酯，加完之后在‑78度反应1小时，然后让其缓慢升温至室温，用氯化铵水溶液萃灭反应。用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用水洗和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤之后减压浓缩。乙酸乙酯和石油醚重结晶得到白色固体硼酸产物，直接用于下一步反应。

[0174] 第二步：在刚刚用Ar鼓泡过的7mL DMF中加入上一步的硼酸产物，化合物1a，四三苯基磷钯,在Ar保护下搅拌，然后加入2N aq.K2CO3水溶液。反应体系在Ar保护下加热到85度，反应过夜，TLC跟踪反应完全。降至室温，用硅藻土过滤，EA洗涤几次。然后用乙酸乙酯萃取，水洗3次，饱和食盐水洗，干燥，过滤，减压浓缩，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂，进行硅胶柱层析纯化。

[0175] 化学试剂以及数据表征：

[0176] 中间体9a(R2＝4‑氟)，试剂:化合物4a(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)，产物为白色固体，产率33％(两步)，LC‑ESI‑MS:506[M+H]。

[0177] 中间体9b(R2＝3‑氟)，试剂:化合物4b(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)产物为白色固体，产率52％(两步)，LC‑ESI‑MS:506[M+H]。

[0178] 中间体9c(R2＝4‑甲基)，试剂:化合物4c(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)产物为白色固体，产率45％(两步)，LC‑ESI‑MS:502[M+H]。

[0179] 中间体9d(R2＝6‑甲基)，试剂:化合物4d(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)产物为白色固体，产率66％(两步)，LC‑ESI‑MS:502[M+H]。

[0180] 实施例12.中间体10a～10c的制备

[0181]

[0182] 操作步骤：

[0183] 第一步：化合物5a～5c中对应的化合物溶于干燥过的四氢呋喃中，在Ar保护下冷却至‑78度，逐步滴加正丁基锂。反应体系在此温度下继续搅拌反应1小时，然后加入硼酸三异丙酯，加完之后在‑78度反应1小时，然后让其缓慢升温至室温，用氯化铵水溶液萃灭反应。用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用水洗和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤之后减压浓缩。乙酸乙酯和石油醚重结晶得到白色固体硼酸产物，直接用于下一步反应。

[0184] 第二步：在刚刚用Ar鼓泡过的70mL DMF中加入上一步的硼酸产物，化合物1a、四三苯基磷钯在Ar保护下搅拌，然后加入2N aq.K2CO3水溶液。反应体系在Ar保护下加热到85度，反应过夜，TLC跟踪反应完全。降至室温，用硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤几次。水洗3次，饱和食盐水洗，干燥，过滤，减压浓缩，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂，进行硅胶柱层析纯化，得到白色固体。

[0185] 中间体10a(R1＝H)，试剂：化合物5a(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)产物为1
白色固体，产率30％(两步)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),7.97(t,J＝8.8Hz,1H),
7.38(t,J＝7.8Hz,2H),7.25–7.17(m,1H),7.12(d,J＝8.5Hz,2H),6.85(d,J＝8.1Hz,1H),
5.56(brs,2H),4.78(ddd,J＝14.9,10.2,4.6Hz,1H),4.46–4.09(m,1H),4.03(d,J＝
11.2Hz,1H),3.47–3.15(m,1H),2.87–2.75(m,1H),2.22–2.06(m,2H),1.96–1.77(m,1H),
1.69–1.59(m,1H),1.36(s,9H).LC‑ESI‑MS:506[M+H]。

[0186] 中间体10b(R1＝4‑氟)，试剂：化合物5b(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)产物为白色固体，产率25％(两步)，LC‑ESI‑MS:524[M+H]。

[0187] 中间体10c(R1＝2,3‑二氟)，试剂：化合物5c(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物1a(1.73mmol)，四三苯基磷钯(0.078mmol)，2N aq.K2CO3(2.6mL)产物为白色固体，产率21％(两步)，LC‑ESI‑MS:542[M+H]。

[0188] 实施例13.中间体10d的制备

[0189]

[0190] 操作步骤：

[0191] 第一步：化合物5a(3mmol)溶于干燥过的四氢呋喃中，在Ar保护下冷却至‑78度，逐步滴加正丁基锂(3.33mmol)。反应体系在此温度下继续搅拌反应1小时，然后加入硼酸三异丙酯(3.94mmol)，加完之后在‑78度反应1小时，然后让其缓慢升温至室温，用氯化铵水溶液萃灭反应。用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用水洗和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤之后减压浓缩。乙酸乙酯和石油醚重结晶得到白色固体硼酸产物，直接用于下一步反应。

[0192] 第二步：在刚刚用Ar鼓泡过的70mL DMF中加入上一步的硼酸产物，化合物1b(1.73mmol)、四三苯基磷钯(0.078mmol)在Ar保护下搅拌，然后加入2N aq.K2CO3水溶液(2.6mL)。反应体系在Ar保护下加热到85度，反应过夜，TLC跟踪反应完全。降至室温，用硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤几次。水洗3次，饱和食盐水洗，干燥，过滤，减压浓缩，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂，进行硅胶柱层析纯化，得到白色固体10d(R1＝H)，产率28％(两步)，LC‑ESI‑MS:506[M+H]。

[0193] 实施例14.中间体11的制备

[0194]

[0195] 操作步骤：

[0196] 第一步：化合物6(3mmol)溶于15mL干燥过的四氢呋喃中，在Ar保护下冷却至‑78度，逐步滴加正丁基锂(1.3mL，3.3mmol，2.5M in THF)。反应体系在此温度下继续搅拌反应1小时，然后加入硼酸三异丙酯(0.74g，3.94mmol)，加完之后在‑78度反应1小时，然后让其缓慢升温至室温，用氯化铵水溶液萃灭反应。用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用水洗和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤之后减压浓缩。乙酸乙酯和石油醚重结晶得到白色固体硼酸产物，直接用于下一步反应。

[0197] 第二步：在刚刚用Ar鼓泡过的7mL DMF中加入上一步的硼酸产物(2.3mmol)，化合物1a(1.73mmol)四三苯基磷钯(0.078mmol),在Ar保护下搅拌，然后加入2.6mL 2N aq.K2CO3水溶液。反应体系在Ar保护下加热到85度，反应过夜，TLC跟踪反应完全。降至室温，用硅藻土过滤，EA洗涤几次。然后用乙酸乙酯萃取，水洗3次，饱和食盐水洗，干燥，过滤，减压浓缩，1
以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂，进行硅胶柱层析纯化得白色固体11，收率25％，HNMR(400MHz,CDCl3)：δ8.90(s,2H),8.38(s,1H),7.46(dd,J＝10.8,5.1Hz,2H),7.29(dd,J＝
10.1,4.7Hz,1H),7.26–7.18(m,2H),5.91(brs,2H),4.94–4.77(m,1H),4.29(brs,1H),
4.18–4.04(m,1H),3.53–3.22(m,1H),2.88(t,J＝11.7Hz,1H),2.33–2.13(m,2H),1.97–
1.84(m,1H),1.77–1.64(m,1H),1.44(s,9H).LC‑ESI‑MS:489[M+H]。

[0198] 实施例15.中间体12的制备

[0199]

[0200] 操作步骤：

[0201] 第一步：化合物7(3mmol)溶于15mL干燥过的四氢呋喃中，在Ar保护下冷却至‑78度，逐步滴加正丁基锂(1.3mL，3.3mmol，2.5M in THF)。反应体系在此温度下继续搅拌反应1小时，然后加入硼酸三异丙酯(0.74g，3.94mmol)，加完之后在‑78度反应1小时，然后让其缓慢升温至室温，用氯化铵水溶液萃灭反应。用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用水洗和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤之后减压浓缩。乙酸乙酯和石油醚重结晶得到白色固体硼酸产物，直接用于下一步反应。

[0202] 第二步：在刚刚用Ar鼓泡过的5mL DMF中加入上一步的硼酸产物(1.5mmol)，化合物1a(1.1mmol)四三苯基磷钯(0.06mmol)，在Ar保护下搅拌，然后加入1.5mL 2N aq.K2CO3水溶液。反应体系在Ar保护下加热到85度，反应过夜，TLC跟踪反应完全。降至室温，用硅藻土过滤，EA洗涤几次。然后用乙酸乙酯萃取，水洗3次，饱和食盐水洗，干燥，过滤，减压浓缩，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂，进行硅胶柱层析纯化得白色固体12，收率15％，LC‑ESI‑MS:488[M+H]。

[0203] 实施例16.中间体13a的制备

[0204]

[0205] 操作步骤：

[0206] 第一步：化合物5a溶于干燥过的四氢呋喃中，在Ar保护下冷却至‑78度，逐步滴加正丁基锂。反应体系在此温度下继续搅拌反应1小时，然后加入硼酸三异丙酯，加完之后在‑78度反应1小时，然后让其缓慢升温至室温，用氯化铵水溶液萃灭反应。用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用水洗和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤之后减压浓缩。乙酸乙酯和石油醚重结晶得到白色固体硼酸产物，直接用于下一步反应。

[0207] 第二步：在刚刚用Ar鼓泡过的70mL DMF中加入上一步的硼酸产物，化合物2a、四三苯基磷钯在Ar保护下搅拌，然后加入2N aq.K2CO3水溶液。反应体系在Ar保护下加热到85度，反应过夜，TLC跟踪反应完全。降至室温，用硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤几次。水洗3次，饱和食盐水洗，干燥，过滤，减压浓缩，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂，进行硅胶柱层析纯化，得到白色固体13a：试剂：化合物5a(3mmol)，正丁基锂(3.33mmol)，硼酸三异丙酯(3.94mmol)，化合物2a(3mmol)，四三苯基磷钯(0.15mmol)，2N aq.K2CO3(4.5mL)，产物为白色固体，产率1
24％(两步)。H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.06‑8.02(m,1H),7.45(t,J＝7.6Hz,
2H),7.30‑7.27(m,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,2H),6.92(d,J＝8.0Hz,1H),5.69(s,2H),5.54‑
5.50(m,1H),3.89(brs,1H),3.79‑3.75(m,2H),3.59‑3.52(m,1H),2.59‑2.52(m,1H),2.43‑
2.38(1,1H),1.48‑1.45(m,9H).LC‑ESI‑MS:492[M+H]。

[0208] 实施例17.中间体13b的制备

[0209]

[0210] 操作步骤：

[0211] 第一步：化合物5a(3mmol)溶于干燥过的四氢呋喃中，在Ar保护下冷却至‑78度，逐步滴加正丁基锂(3.33mmol)。反应体系在此温度下继续搅拌反应1小时，然后加入硼酸三异丙酯(3.94mmol)，加完之后在‑78度反应1小时，然后让其缓慢升温至室温，用氯化铵水溶液萃灭反应。用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相用水洗和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤之后减压浓缩。乙酸乙酯和石油醚重结晶得到白色固体硼酸产物，直接用于下一步反应。

[0212] 第二步：在刚刚用Ar鼓泡过的70mL DMF中加入上一步的硼酸产物，化合物2b(3mmol)、四三苯基磷钯(0.15mmol)在Ar保护下搅拌，然后加入2N aq.K2CO3水溶液(4.5mL)。反应体系在Ar保护下加热到85度，反应过夜，TLC跟踪反应完全。降至室温，用硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤几次。水洗3次，饱和食盐水洗，干燥，过滤，减压浓缩，以石油醚‑乙酸乙酯为洗脱剂，进行硅胶柱层析纯化，得到白色固体13b，产率22％(两步)，LC‑ESI‑MS:492[M+H]。

[0213] 实施例18.中间体14a～14i的制备

[0214]

[0215] 操作步骤：

[0216] 1)取化合物8a～8i(1.3mmol)中对应的化合物溶解于15mL1,4‑二氧六环，于冰浴条件下，滴加5mL 2N HCl，室温搅拌过夜。减压回收溶剂得到的粗品，用甲醇重结晶，得到类白色固体，直接用于下一步反应。

[0217] 2)将所得固体溶于10mLN,N‑二甲基乙酰胺(DMF)，加入2‑氰基乙酸(1.3mmol)、缩合剂HATU(1.95mmol)和三乙胺(TEA，3.9mmol)，室温下反应1小时，然后用水淬灭反应，使用乙酸乙酯萃取多次并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤有机层，无水硫酸钠干燥后有机层浓缩，残余物以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂，采用柱层析分离得中间体14。

[0218] 化学试剂以及数据表征：

[0219] 中间体14a(R1＝H)，试剂：化合物8a(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU1
(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率56％(两步)，H NMR(400MHz,CDCl3)δ
8.50‑8.49(m,1H),8.35(d,J＝8.4Hz,1H),8.05‑8.01(m,1H),7.44(t,J＝7.6Hz,2H),7.26‑
7.24(m,1H),7.19(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(dd,J＝5.6Hz,8.4Hz,1H),5.78(s,2H),4.94‑
5.87(m,1H),4.67(dd,J＝4.0Hz,12.8Hz,0.5H),4.31‑4.27(m,0.5H),3.91‑3.81(m,1H),
3.76‑3.73(m,0.5H),3.64‑3.55(m,2H),3.52‑3.45(m,0.5H),3.37‑3.31(m,0.5H),3.18‑
3.12(m,0.5H),3.35‑3.25(m,2H),2.01‑1.95(m,1H),1.88‑1.70(m,1H).LC‑ESI‑MS:455[M+H]。

[0220] 中间体14b(R1＝4‑氟)，试剂：化合物8b(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率60％(两步)，LC‑ESI‑MS:473[M+H]。

[0221] 中间体14c(R1＝2‑氟)，试剂:化合物8c(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率58％(两步)，LC‑ESI‑MS:473[M+H]。

[0222] 中间体14d(R1＝3,4‑二氟)，试剂:化合物8d(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率50％(两步)，LC‑ESI‑MS:491[M+H]。

[0223] 中间体14e(R1＝2,6‑二氟)，试剂：化合物8e(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，48％(两步)，LC‑ESI‑MS:491[M+H]。

[0224] 中间体14f(R1＝4‑氯)，试剂:化合物8f(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率41％(两步)，LC‑ESI‑MS:489[M+H]。

[0225] 中间体14g(R1＝4‑甲基)，试剂:化合物8g(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率42％(两步)，LC‑ESI‑MS:469[M+H]。

[0226] 中间体14h(R1＝4‑甲氧基)，试剂:化合物8h(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，40％(两步)，LC‑ESI‑MS:485[M+H]。

[0227] 中间体14i(R1＝4‑三氟甲基)，试剂：化合物8i(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，45％(两步)，LC‑ESI‑MS:523[M+H]。

[0228] 实施例19.中间体15a～15d的制备

[0229]

[0230] 操作步骤：

[0231] 1)取化合物9a～9d(1.3mmol)中对应的化合物溶解于15mL1,4‑二氧六环，于冰浴条件下，滴加5mL 2N HCl，室温搅拌过夜。减压回收溶剂得到的粗品，用甲醇重结晶，得到类白色固体，直接用于下一步反应。

[0232] 2)将所得固体溶于10mL N,N‑二甲基乙酰胺(DMF)，加入2‑氰基乙酸(1.3mmol)、缩合剂HATU(1.95mmol)和三乙胺(TEA，3.9mmol)，室温下反应1小时，然后用水淬灭反应，使用乙酸乙酯萃取多次并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤有机层，无水硫酸钠干燥后有机层浓缩，残余物以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂，采用柱层析分离得中间体15。

[0233] 化学试剂以及数据表征：

[0234] 中间体15a(R2＝4‑氟)，试剂：化合物9a(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率42％(两步)，LC‑ESI‑MS:473[M+H]。

[0235] 中间体15b(R2＝3‑氟)，试剂：化合物9b(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率45％(两步)，LC‑ESI‑MS:473[M+H]。

[0236] 中间体15c(R2＝4‑甲基)，试剂：化合物9c(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率38％(两步)，LC‑ESI‑MS:469[M+H]。

[0237] 中间体15d(R2＝6‑甲基)，试剂：化合物9d(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率40％(两步)，LC‑ESI‑MS:469[M+H]。

[0238] 实施例20.中间体16a～16c的制备

[0239]

[0240] 操作步骤：

[0241] 1)取化合物10a～10c(1.3mmol)中对应的化合物溶解于15mL1,4‑二氧六环，于冰浴条件下，滴加5mL 2N HCl，室温搅拌过夜。减压回收溶剂得到的粗品，用甲醇重结晶，得到类白色固体，直接用于下一步反应。

[0242] 2)将所得固体溶于10mL N,N‑二甲基乙酰胺(DMF)，加入2‑氰基乙酸(1.3mmol)、缩合剂HATU(1.95mmol)和三乙胺(TEA，3.9mmol)，室温下反应1小时，然后用水淬灭反应，使用乙酸乙酯萃取多次并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤有机层，无水硫酸钠干燥后有机层浓缩，残余物以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂，采用柱层析分离得中间体16a～16c。

[0243] 化学试剂以及数据表征：

[0244] 中间体16a(R1＝H)，试剂：化合物10a(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU1
(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率50％(两步)。H NMR(400MHz,DMSO)δ
8.27(d,J＝7.2Hz,1H),8.15‑8.08(m,1H),7.52(t,J＝7.6Hz,2H),7.34‑7.28(m,3H),7.10‑
7.07(m,1H),4.92‑4.85(m,0.5H),4.76‑4.68(m,0.5H),4.49‑4.45(m,0.5H),4.14‑4.12(m,
2H),4.09‑4.01(m,1H),3.96‑3.91(m,0.5H),3.76‑3.69(m,1H),3.25‑3.16(m,1H),2.28‑
2.13(m,2H),1.93‑1.56(m,2H).LC‑ESI‑MS:473[M+H]。

[0245] 中间体16b(R1＝4‑氟)，试剂：化合物10b(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率48％(两步)，LC‑ESI‑MS:491[M+H]。

[0246] 中间体16c(R1＝2,3‑二氟)，试剂：化合物10c(1.3mmol)，2‑氰基乙酸(1.3mmol)，HATU(1.95mmol)，TEA(3.9mmol)，产物为白色固体，收率45％(两步)，LC‑ESI‑MS:509[M+H]。

[0247] 实施例21.中间体16d的制备

[0248]

[0249] 操作步骤：

[0250] 1)取化合物10d(1.3mmol)中对应的化合物溶解于15mL1,4‑二氧六环，于冰浴条件下，滴加5mL 2N HCl，室温搅拌过夜。减压回收溶剂得到的粗品，用甲醇重结晶，得到类白色固体，直接用于下一步反应。

[0251] 2)将所得固体溶于10mL N,N‑二甲基乙酰胺(DMF)，加入2‑氰基乙酸(1.3mmol)、缩合剂HATU(1.95mmol)和三乙胺(TEA，3.9mmol)，室温下反应1小时，然后用水淬灭反应，使用乙酸乙酯萃取多次并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤有机层，无水硫酸钠干燥后有机层浓缩，残余物以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂，采用柱层析分离得白色固体16d，收率50％(两步)，LC‑ESI‑MS:473[M+H]。

[0252] 实施例22.中间体17的制备

[0253]

[0254] 操作步骤：

[0255] 1)取化合物11(1.3mmol)中对应的化合物溶解于15mL1,4‑二氧六环，于冰浴条件下，滴加5mL 2N HCl，室温搅拌过夜。减压回收溶剂得到的粗品，用甲醇重结晶，得到类白色固体，直接用于下一步反应。

[0256] 2)将所得固体溶于10mL N,N‑二甲基乙酰胺(DMF)，加入2‑氰基乙酸(1.3mmol)、缩合剂HATU(1.95mmol)和三乙胺(TEA，3.9mmol)，室温下反应1小时，然后用水淬灭反应，使用乙酸乙酯萃取多次并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤有机层，无水硫酸钠干燥后有机层浓缩，残余物以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂，采用柱层析分离得白色固体17，收率43％(两步)，LC‑ESI‑MS:456[M+H]。

[0257] 实施例23.中间体18的制备

[0258]

[0259] 操作步骤：

[0260] 1)取化合物12(1.3mmol)中对应的化合物溶解于15mL1,4‑二氧六环，于冰浴条件下，滴加5mL 2N HCl，室温搅拌过夜。减压回收溶剂得到的粗品，用甲醇重结晶，得到类白色固体，直接用于下一步反应。

[0261] 2)将所得固体溶于10mL N,N‑二甲基乙酰胺(DMF)，加入2‑氰基乙酸(1.3mmol)、缩合剂HATU(1.95mmol)和三乙胺(TEA，3.9mmol)，室温下反应1小时，然后用水淬灭反应，使用乙酸乙酯萃取多次并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤有机层，无水硫酸钠干燥后有机层浓缩，残余物以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂，采用柱层析分离得白色固体18，收率32％(两步)，LC‑ESI‑MS:455[M+H]。

[0262] 实施例24.中间体19a的制备

[0263]

[0264] 操作步骤：

[0265] 1)取化合物13a(1.3mmol)中对应的化合物溶解于15mL1,4‑二氧六环，于冰浴条件下，滴加5mL 2N HCl，室温搅拌过夜。减压回收溶剂得到的粗品，用甲醇重结晶，得到类白色固体，直接用于下一步反应。

[0266] 2)将所得固体溶于10mL N,N‑二甲基乙酰胺(DMF)，加入2‑氰基乙酸(1.3mmol)、缩合剂HATU(1.95mmol)和三乙胺(TEA，3.9mmol)，室温下反应1小时，然后用水淬灭反应，使用乙酸乙酯萃取多次并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤有机层，无水硫酸钠干燥后有机层浓缩，残余物以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂，采用柱层析分离得白色固体19a，收率50％(两步)，LC‑ESI‑MS:459[M+H]。

[0267] 实施例25.中间体19b的制备

[0268]

[0269] 操作步骤：

[0270] 1)取化合物13b(1.3mmol)中对应的化合物溶解于15mL1,4‑二氧六环，于冰浴条件下，滴加5mL 2N HCl，室温搅拌过夜。减压回收溶剂得到的粗品，用甲醇重结晶，得到类白色固体，直接用于下一步反应。

[0271] 2)将所得固体溶于10mL N,N‑二甲基乙酰胺(DMF)，加入2‑氰基乙酸(1.3mmol)、缩合剂HATU(1.95mmol)和三乙胺(TEA，3.9mmol)，室温下反应1小时，然后用水淬灭反应，使用乙酸乙酯萃取多次并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤有机层，无水硫酸钠干燥后有机层浓缩，残余物以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂，采用柱层析分离得白色固体19b，收率50％(两步)，LC‑ESI‑MS:459[M+H]。

[0272] 实施例25.目标化合物20a～20i的制备

[0273]

[0274] 操作步骤：将化合物14a～14i(0.5mmol)中对应的化合物、四氢吡咯(2.5mmol)和环丙基甲醛(1.5mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌10分钟，冷却至零度后加入TMS‑Cl(2.5mmol)，然后室温下反应2小时，溶液分别用水洗和饱和食盐水洗涤，有机层合并后无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后柱层析得到白色固体20a～20i。

[0275] 化学试剂以及数据表征：

[0276] 目标化合物20a(R1＝H)，试剂：化合物14a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基1
甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率70％，H NMR(400MHz,CDCl3)δ
8.50(d,J＝2.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.04(dd,J＝2.4Hz,8.4Hz,1H),7.45(t,J＝7.6Hz,
2H),7.28‑7.24(m,1H),7.19(d,J＝8.0Hz,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,1H),6.57(d,J＝8.8Hz,
1H),5.67(s,2H),4.98‑4.92(m,1H),4.32‑4.14(m,1H),3.62‑3.10(m,1H),2.34‑2.27(m,
2H),2.06‑2.03(m,2H),1.90‑1.76(m,3H),1.24‑1.22(m,2H),0.88‑0.79(m,2H).LC‑ESI‑MS:507[M+H]。

[0277] 目标化合物20b(R1＝4‑氟)，试剂：化合物14b(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率68％，LC‑ESI‑MS:525[M+H]。

[0278] 目标化合物20c(R1＝2‑氟)，试剂:化合物14c(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率65％，LC‑ESI‑MS:525[M+H]。

[0279] 目标化合物20d(R1＝3,4‑二氟)，试剂:化合物14d(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率68％，LC‑ESI‑MS:543[M+H]。

[0280] 目标化合物20e(R1＝3,4‑二氟)，试剂:化合物14e(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率65％，LC‑ESI‑MS:543[M+H]。

[0281] 目标化合物20f(R1＝4‑氯)，试剂:化合物14f(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率64％，LC‑ESI‑MS:541[M+H]。

[0282] 目标化合物20g(R1＝4‑甲基)，试剂:化合物14g(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率60％，LC‑ESI‑MS:521[M+H]。

[0283] 目标化合物20h(R1＝4‑甲氧基)，试剂:化合物14h(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率57％，LC‑ESI‑MS:537[M+H]。

[0284] 目标化合物20i(R1＝4‑三氟甲基)，试剂:化合物14i(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率60％，LC‑ESI‑MS:575[M+H]。

[0285] 实施例26.目标化合物21a和21b的制备

[0286]

[0287] 操作步骤：将化合物14a(0.5mmol)、四氢吡咯(2.5mmol)和取代的醛(1.5mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌10分钟，冷却至零度后加入TMS‑Cl(2.5mmol)，然后室温下反应2小时，溶液分别用水洗和饱和食盐水洗涤，有机层合并后无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后柱层析得到白色固体21a～21b。

[0288] 目标化合物21a：化合物14a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，3‑甲基氧杂环丁‑3‑甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率20％，LC‑ESI‑MS:537[M+H]。

[0289] 目标化合物21b：化合物14a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，2‑甲基‑2‑(4‑甲基哌嗪‑1‑基)丙醛(2.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率15％，LC‑ESI‑MS:607[M+H]。

[0290] 实施例27.目标化合物22a～22d的制备

[0291]

[0292] 操作步骤：将化合物15a～15d(0.5mmol)中对应的化合物、四氢吡咯(2.5mmol)和环丙基甲醛(1.5mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌10分钟，冷却至零度后加入TMS‑Cl(2.5mmol)，然后室温下反应2小时，溶液分别用水洗和饱和食盐水洗涤，有机层合并后无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后柱层析得到白色固体22a～22d。

[0293] 化学试剂以及数据表征：

[0294] 目标化合物22a(R2＝4‑氟)，试剂：化合物15a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率45％，LC‑ESI‑MS:525[M+H]。

[0295] 目标化合物22b(R2＝3‑氟)，试剂：化合物15b(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率48％，LC‑ESI‑MS:525[M+H]。

[0296] 目标化合物22c(R2＝4‑甲基)，试剂：化合物15c(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率47％，LC‑ESI‑MS:521[M+H]。

[0297] 目标化合物22d(R2＝6‑甲基)，试剂：化合物15d(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率45％，LC‑ESI‑MS:521[M+H]。

[0298] 实施例28.目标化合物23a～23f的制备

[0299]

[0300] 操作步骤：将化合物16a～16c(0.5mmol)中对应的化合物、四氢吡咯(2.5mmol)和取代的醛(1.5mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌10分钟，冷却至零度后加入TMS‑Cl(2.5mmol)，然后室温下反应2小时，溶液分别用水洗和饱和食盐水洗涤，有机层合并后无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后柱层析或反相HPLC纯化可得白色固体23a～23f。

[0301] 化学试剂以及数据表征：

[0302] 目标化合物23a(R1＝H)：试剂：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基1
甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析后可得白色固体23a，收率45％，H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),8.04(m,1H),7.45(t,J＝8.0Hz,2H),7.30‑7.26(m,1H),7.19(d,J＝
8.0Hz,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,1H),6.66(brs,1H),5.76(s,2H),4.97‑4.92(m,1H),4.51‑
4.74(m,0.5H),4.26‑4.17(m,1H),3.98‑3.93(m,0.5H),3.34‑3.06(m,1H),2.35‑2.24(m,
2H),2.09‑2.03(m,3H),1.83‑1.74(m,1H),1.28‑1.21(m,2H),0.88‑0.79(m,2H).LC‑ESI‑MS:525[M+H]。化合物23a经过反相制备HPLC纯化，可得目标化合物(E)‑23a：收率35％，LC‑ESI‑MS:525[M+H]；(Z)‑23a：收率7％，LC‑ESI‑MS:525[M+H]。

[0303] 目标化合物23b(R1＝4‑氟)：试剂：化合物16b(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析可得目标化合物23b，收率54％，LC‑ESI‑MS:543[M+H]。

[0304] 目标化合物23c(R1＝2,3‑二氟)：试剂：化合物16c(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析可得目标化合物23c，收率49％，LC‑ESI‑MS:561[M+H]。

[0305] 目标化合物23d(R1＝H)：试剂：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，异丁醛1
(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析可得目标化合物23d：收率54％，H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(s,1H),8.06‑8.02(m,1H),7.74‑7.71(m,0.5H),7.55‑7.52(0.5H),7.45(t,J＝7.6Hz,2H),7.30‑7.26(m,1H),7.19(d,J＝7.6Hz,2H),6.93(d,J＝8.0Hz,1H),5.82(brs,
2H),4.98‑4.93(m,1H),4.59‑4.49(m,0.5H),4.30‑4.26(m,0.5H),4.04‑3.91(m,0.5H),
3.84‑3.74(m,0.5H),3.00‑3.13(m,1H),2.95‑2.88(m,1H),2.34‑2.24(m,3H),2.05‑2.01(m,1H),1.83‑1.78(m,1H),1.13(d,J＝5.2Hz,6H).LC‑ESI‑MS:527[M+H]。

[0306] 目标化合物23e(R1＝H)：试剂：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，3‑甲基丁醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析可得目标化合物23e：收率56％，LC‑ESI‑MS:541[M+H]。

[0307] 目标化合物23f(R1＝H)：试剂：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，3,3‑二甲基丁醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析可得目标化合物23f：收率54％，LC‑ESI‑MS:555[M+H]。

[0308] 实施例29.目标化合物24a～24h的制备

[0309]

[0310] 操作步骤：将化合物16a(0.5mmol)、四氢吡咯(2.5mmol)和取代的醛(1.5mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌10分钟，冷却至零度后加入TMS‑Cl(2.5mmol)，然后室温下反应2小时，溶液分别用水洗和饱和食盐水洗涤，有机层合并后无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后柱层析或反相HPLC纯化可得白色固体24a～24h。

[0311] 目标化合物24a：试剂：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，三甲基乙醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析后可得白色固体24a，收率31％，LC‑ESI‑MS:541[M+H]。化合物24a经过反相制备HPLC纯化，可得目标化合物(E)‑24a：收率25％，LC‑ESI‑MS:541[M+H]；(Z)‑24a：收率5％，LC‑ESI‑MS:541[M+H]。

[0312] 目标化合物24b：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，3‑甲基氧杂环丁‑3‑甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率18％，LC‑ESI‑MS:555[M+H]。

[0313] 目标化合物24c：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，2‑(氮杂环丁‑1‑基)‑2‑甲基丙醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率15％，LC‑ESI‑MS:582[M+H]。

[0314] 目标化合物24d：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，2‑乙氧基‑2‑甲基丙醛(1.5mmol)，产物为白色固体，收率12％，LC‑ESI‑MS:571[M+H]。

[0315] 目标化合物24e：化合物16a(0.5mmol)，哌啶(1.0mmol)，2‑甲基‑2‑吗啉丙醛(1.0mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率20％，LC‑ESI‑MS:612[M+H]。

[0316] 目标化合物24f：试剂：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，2‑甲基‑2‑(甲基(氧杂环丁‑3‑基)氨基)丙醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析可得目标化合物24f，收率60％，LC‑ESI‑MS:612[M+H]。

[0317] 目标化合物24g：试剂：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，2‑甲基‑2‑(6‑氧杂‑2‑氮杂螺[3.3]庚‑2‑基)丙醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析可得目标化合物24g，收率52％，LC‑ESI‑MS:624[M+H]。

[0318] 目标化合物24h：试剂：化合物16a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，2‑甲基‑2‑(4‑(氧杂环丁‑3‑基)哌嗪‑1‑基)丙醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析后可得白色固体24h，收率29％，LC‑ESI‑MS:667[M+H]。化合物24h经过反相制备HPLC纯化，可得目标化合物(E)‑24h：收率24％，LC‑ESI‑MS:667[M+H]；(Z)‑24h：收率4％，LC‑ESI‑MS:667[M+H]。

[0319] 实施例30.目标化合物25a～25b的制备

[0320]

[0321] 操作步骤：将化合物17或18(0.5mmol)中对应的化合物、四氢吡咯(2.5mmol)和环丙基甲醛(1.5mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌10分钟，冷却至零度后加入TMS‑Cl(2.5mmol)，然后室温下反应2小时，溶液分别用水洗和饱和食盐水洗涤，有机层合并后无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后柱层析得到白色固体25。

[0322] 化学试剂以及数据表征：

[0323] 目标化合物25a(Y1＝N，Y2＝N，Y3＝CH)：试剂：化合物17(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率35％，LC‑ESI‑MS:508[M+H]。

[0324] 目标化合物25b(Y1＝CH，Y2＝CH，Y3＝N)：试剂：化合物18(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，环丙基甲醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)，产物为白色固体，收率38％，LC‑ESI‑MS:507[M+H]。

[0325] 实施例31.目标化合物26a～26b的制备

[0326]

[0327] 操作步骤：将化合物19a(0.5mmol)、四氢吡咯(2.5mmol)和取代的醛(1.5mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌10分钟，冷却至零度后加入TMS‑Cl(2.5mmol)，然后室温下反应2小时，溶液分别用水洗和饱和食盐水洗涤，有机层合并后无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后柱层析或反相HPLC得到白色固体26a～26b。

[0328] 目标化合物26a：试剂：化合物19a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，2‑甲基‑2‑(4‑(氧杂环丁‑3‑基)哌嗪‑1‑基)丙醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析后可得白色固体26a，收率25％，LC‑ESI‑MS:653[M+H]。化合物26a经过反相制备HPLC纯化，可得目标化合物(E)‑26a：收率20％，LC‑ESI‑MS:653[M+H]；(Z)‑26a：收率4％，LC‑ESI‑MS:653[M+H]。

[0329] 目标化合物26b：化合物19a(0.5mmol)，四氢吡咯(2.5mmol)，三甲基乙醛(1.5mmol)，TMS‑Cl(2.5mmol)；柱层析后可得白色固体26b，收率32％，LC‑ESI‑MS:527[M+H]。

[0330] 实施例32.目标化合物26c的制备

[0331]

[0332] 操作步骤：

[0333] 第一步：将化合物19a(0.5mmol)溶解在甲醇(4mL)和二氯甲烷(4mL)的混合溶剂中，加入哌啶(2.0mmol)和N‑(1‑甲酰基环丙基)‑氨基甲酸叔丁酯(0.75mmol)，加热回流反应6小时后冷却浓缩，残余物溶于乙酸乙酯中先后用水和饱和食盐水洗涤，有机层无水硫酸钠干燥后过滤浓缩，柱纯化后的产物直接用于下一步。

[0334] 第二步：将上一步得到的产物溶于二氯甲烷(5mL)，加入TFA(2mL)，室温下反应5小时后，浓缩，残余物经柱纯化后得到白色固体产物26c，收率13％，LC‑ESI‑MS:526[M+H]。

[0335] 实施例33.目标化合物27的制备

[0336]

[0337] 操作步骤：将化合物16d(0.5mmol)、四氢吡咯(2.5mmol)和环丙基甲醛(1.5mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌10分钟，冷却至零度后加入TMS‑Cl(2.5mmol)，然后室温下反应2小时，溶液分别用水洗和饱和食盐水洗涤，有机层合并后无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后柱层析可得白色固体27，收率15％，LC‑ESI‑MS:525[M+H]。

[0338] 实施例34.目标化合物28的制备

[0339]

[0340] 操作步骤：将化合物19b(0.5mmol)、四氢吡咯(2.5mmol)和三甲基乙醛(1.5mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌10分钟，冷却至零度后加入TMS‑Cl(2.5mmol)，然后室温下反应2小时，溶液分别用水洗和饱和食盐水洗涤，有机层合并后无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后柱层析可得白色固体28，收率33％，LC‑ESI‑MS:527[M+H]。

[0341] 实施例35.体外Btk激酶抑制活性测试

[0342] 本发明化合物的体外Btk激酶抑制活性测定方法：

[0343] 将药物溶于DMSO中制成10mM(mmol/L)的储备液，并稀释至50×的测试浓度药液备用，测试浓度以3倍梯度稀释，分别为25nM(nmol/L)，8.33nM，2.78nM，0.93nM，0.31nM，0.10nM。在96孔板里加入10μL 50×药物备用液，再加入90μL 1×激酶缓冲液，在振荡器上震荡10分钟。从96孔板各孔取5μL转移至384孔板，384孔板里设2复孔。

[0344] 激酶反应：准备2.5×激酶缓冲液：将酶加入1×激酶基础缓冲液中；准备2.5×短肽溶液：将FAM标记的短肽和ATP加入1×激酶基础缓冲液中。在加有5μL药液384孔板中，加入10μL 2.5×激酶缓冲液，室温孵育10分钟。在384孔板中加入10μL 2.5×短肽溶液，28℃孵育1小时。加入25μL终止液停止反应。读数，计算化合物对酶的抑制率，拟合计算出BTK激酶的IC50，测试结果见表1。

[0345] 表1部分化合物对BTK激酶抑制活性

[0346]化合物 BTK(IC50,μM) 化合物 BTK(IC50,μM)
伊布替尼 +++ 24a +++
20a +++ 24d +++
20b +++ 24e +++
21a +++ 24f +++
21b +++ 24g +++
22a ++ 24h +++
22b ++ 25a ++
22c ++ 25b ++
22d ++ 26a ++
23a +++ 26b ++
23d +++ 26c ++
23e +++ 27 ++
23f +++ 28 +

[0347] 注：“+”：1μM≤IC50≤100μM；“++”：0.01μM≤IC50≤1μM；“+++”：IC50≤0.01μM；

[0348] 实施例36.激酶选择性实验

[0349] 按要求准备实验中检测各自激酶的1×激酶基础缓冲液和反应停止缓冲液。

[0350] 待测化合物配置：

[0351] 1)DMSO配置50×化合物储备液待用；

[0352] 2)在96孔板中按5倍浓度梯度稀释的方法每个化合物，至6到7个浓度保证每孔中药物体积为10μl，同时加入100μlDMSO作为空白对照组，以及不加酶底物的阴性对照组；

[0353] 3)再另外准备一块96孔板，取10μl上述化合物加入90μl 1×激酶基础缓冲液，混匀10min。

[0354] 待测板准备：

[0355] 1)取上述配置的96孔板中混合液5μl至384孔板，每个化合物两个复孔。

[0356] 激酶反应：

[0357] 1)配置2.5×激酶溶液，加入相应1×激酶基础缓冲液；

[0358] 2)配置2.5×多肽溶液，在1×激酶基础缓冲液中加入FAM标记的多肽和ATP；

[0359] 3)在待测384孔板中加入10μl的2.5×激酶溶液，室温放置10min，继而加入10μl的2.5×多肽溶液，28℃下反应1h后加入25μl反应停止缓冲液。

[0360] Caliper程序读板，并利用数据获得相应化合物抑制激酶的IC50值，测试结果见表2。

[0361] 表2部分化合物对多种激酶的抑制活性

[0362]激酶 伊布替尼 20a 21b 23a 24f 24h
ITK ++ + + + + +
EGFR +++ + + + + +
BLK +++ ++ ++ ++ ++ ++
CSK ++ + + + + +
FGR + + + + + +
HCK ++ + + + + +
JAK3 ++ + + + + +
FLT3 ++ + + + + +

[0363] 注：“+”：1μM≤IC50≤100μM；“++”：0.01μM≤IC50≤1μM；“+++”：IC50≤0.01μM[0364] 表2的测试结果表明，本发明设计的化合物对激酶的选择性优势明显，对ITK、CSK、FGR、HCK、JAK3、FLT3等激酶的抑制活性很弱，大多数激酶的活性均大于1000nM，因此，其对BTK的激酶选择性明显优于伊布替尼，因而，该类化合物在因选择性不佳引起的副作用方面将具有明显的优势。

[0365] 实施例37.溶解度试验

[0366] 称取研成细粉的受试化合物10mg，分别于25℃±2℃在一定量的水(1mL,10mL,100mL)中，每隔5分钟强力振摇30秒钟，观察30分钟内的溶解情况，如无可见溶质，视为完全溶解。本发明部分化合物的溶解性见表3。

[0367] 表3部分化合物的溶解性

[0368]化合物 溶解情况 现象
伊布替尼 几乎不溶 在100mL溶剂中不能溶解
20a 极微溶 10～100mL溶剂中溶解
21b 极微溶 10～100mL溶剂中溶解
23a 极微溶 10～100mL溶剂中溶解
24f 极微溶 10～100mL溶剂中溶解
24h 微溶 1～10mL溶剂中溶解
25a 极微溶 10～100mL溶剂中溶解
26a 极微溶 10～100mL溶剂中溶解

[0369] 实施例38.结合可逆性试验

[0370] 以下方法可以区别与其靶点形成不可逆共价键的化合物(例如，不含氰基的丙烯酰胺化合物)与形成可逆共价键的化合物(即，本发明的化合物或其立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物)：当蛋白靶标的浓度高于化合物浓度时，不可逆共价化合物和可逆共价化合物都可以与其蛋白靶标全部结合，然后采用扰动处理这些反应来扰动该靶标的折叠，这些扰动包括5M的盐酸胍变性和用胰蛋白酶消化。由于从靶标解离，可逆共价化合物将返回到溶液，而不可逆共价化合物则仍与靶标结合。使用串联质谱法耦合的高效液相色谱法，通过检测评估扰动前后溶液中化合物的浓度，检测结果见表4。

[0371] 表4结合可逆性试验

[0372]

[0373] 表4的检测结果证明在天然和扰动状态下，不可逆共价化合物都从溶液中耗尽，而本发明的化合物在天然状态下耗尽，而变性或消化状态下则返回到溶液中，表明本发明的化合物或其立体异构体或其立体异构体混合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物形成的是可逆的共价键。