一种噻吩类衍生物及其制备方法与应用转让专利
申请号 : CN201911107818.2
文献号 : CN110724137B
文献日 : 2021-03-30
发明人 : 陈惠雄 , 鄢龙家 , 黎永良 , 陈安超 , 邓明高
申请人 : 广东工业大学
摘要 :
权利要求 :
1.一种噻吩类衍生物或其药学上可接受的盐、其特征在于,所述噻吩类衍生物如式(Ⅰ)所示;
其中,R1选自Cl、NO2或CF3,R2选自H、Et、叔丁基或Ph,R3选自:
2.权利要求1所述的噻吩类衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1:将式(Ⅱ)化合物与式(III)化合物进行亲核取代反应后,得到式(Ⅳ)化合物;
步骤2:将所述式(Ⅳ)化合与式(Ⅴ)化合物在催化剂A的作用下发生取代反应,得到具有式(Ⅰ)所示结构的噻吩类衍生物;
所述催化剂A选自三氟乙酸、盐酸或三氟甲磺酸;
其中,
R3‑NH2式(Ⅴ)。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述式(Ⅱ)化合物与所述式(III)化合物的摩尔比为1:(1.1‑1.5);
所述式(Ⅳ)化合与所述式(Ⅴ)化合物、所述催化剂A的摩尔比为1:(1.2‑1.5):(3‑5)。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤1所述亲核取代反应的温度为70℃~80℃,时间为12h~24h;
步骤2所述取代反应的温度为70℃~80℃,时间为12h~24h。
5.权利要求1所述的噻吩类衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤a):将式(Ⅱ)化合物与式(Ⅴ)化合物在催化剂B的作用下进行亲核取代反应,得到式(Ⅵ)化合物;
步骤b):将式(Ⅵ)化合与式(III)化合物发生在催化剂A的作用下取代反应,得到具有式(Ⅰ)所示结构的噻吩类衍生物;
所述催化剂A选自三氟乙酸、盐酸或三氟甲磺酸,所述催化剂B选自氯化锌、氯化镍或氯化锡;
其中,
R3‑NH2式(Ⅴ),
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述式(Ⅱ)化合物与所述式(Ⅴ)化合物、所述催化剂B的摩尔比为1:(1‑1.5):(1.2‑1.5);
所述式(Ⅵ)化合物与所述式(III)化合物、所述催化剂A的摩尔比为1:(1.2‑1.5):(3‑
5)。
7.权利要求1所述的噻吩类衍生物或其药学上可接受的盐在制备抑制酪氨酸激酶药物中的应用。
8.权利要求1所述的噻吩类衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述抗肿瘤药物中的肿瘤为肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌或黑色素瘤。
10.一种药物组合物,其特征在于,包括权利要求1所述的噻吩类衍生物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。
说明书 :
一种噻吩类衍生物及其制备方法与应用
技术领域
背景技术
呈现年轻化、发病率和死亡率走高的趋势,并已成为人类的头号杀手。
上,使羟基磷酸化,从而传递信号。癌症临床研究表明,这些受体及其配体与很多肿瘤都有
重要联系,很多癌症出现了相关生长因子的过量表达,导致过量的酪氨酸磷酸化信号传入
细胞。非受体型的酪氨酸激酶(nrPTKs)一般没有细胞外结构,它们通常与细胞膜耦联或存
在于胞质中,包括Abl激酶、Src激酶、FAK激酶等成员。在肿瘤组织中nrPTKs常被激活,再激
活下游的信号传导途径,促进细胞增殖、抵抗细胞凋亡,促使肿瘤发生和发展。正因为酪氨
酸激酶在细胞的恶性生长和增殖中起着非常重要的作用,所以酪氨酸激酶抑制剂的合成已
成为抗肿瘤研究热点及治疗的新靶点。
酶活性的癌蛋白。Src激酶联系的受体对细胞的生长和分裂是非常重要的,它具有双重作
用,既可以作为一种受体,又可以作为一种酶(酪氨酸激酶)。在其休眠状态时,酶的活性部
位是关闭着的,但当受体被信号分子激活,其活性部位被打开,同时在细胞内部产生级联信
号,这种信号可以是基因激活,蛋白质被大量合成,细胞因此大量复制,繁殖分化。当这些受
体变的不能控制或对其表达过度时,就有可能导致肿瘤等疾病的发生。Src激酶参与细胞内
多条信号传递途径,可以调节细胞增殖,血管生成,侵袭和转移,骨代谢。它的蛋白激酶水平
以及活性变化与恶性肿瘤的程度相关联。而且,Src的恶性活化长期维持较高的蛋白酶活
性,在诸多的人类癌症中已有体现,如乳腺癌,胃癌,胰腺癌,卵巢癌,脑癌,肺癌,中性肿瘤
以及白血病,淋巴瘤和骨髓瘤。Src激酶的抑制剂能够在体外选择性地抑制急性髓性白血病
干/祖细胞的生长,并且能增强由p53介导的急性髓性白血病干细胞的消除作用,因而它作
为抗癌药应用于临床。
胞粘附关系密切的蛋白。FAK对肿瘤的增殖、凋亡、转移和血管形成等起着重要的调控作用。
研究表明,FAK异常表达和活化与人类多种恶性肿瘤的发病有关,包括肺癌、鳞状细胞喉癌、
结肠癌、乳腺癌、前列腺癌等。在肿瘤细胞中FAK过度表达并与肿瘤的浸润、转移、血管生成
相关联,这可能与FAK表达增加使细胞迁移和增殖能力增强有关。应用反义核酸技术或抑制
剂抑制FAK表达可以抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。目前有多个FAK小分子抑制剂在做
临床I期和II期的研究,已显示出很好的抗肿瘤活性和应用前景。
酶抑制剂和提高激酶选择性的问题上找到一个平衡点,这方面的研究越来越受到重视,并
为研发新的酪氨酸激酶小分子抑制剂提供一条新途径。
播以及肿瘤转移的成功治疗方法。
发明内容
式(Ⅰ)所示;
4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑5‑氯‑2‑[2‑甲氧基‑4‑(4‑甲基‑哌嗪‑1‑基)‑苯氨基]‑
嘧啶‑4‑基胺基‑噻吩‑3‑羧酸甲酰胺、2‑[5‑氯‑2‑(3,4,5‑三甲氧基‑苯氨基)‑嘧啶‑4‑基氨
基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑[5‑氯‑2‑(4‑吗啉‑4‑基‑苯氨基)‑嘧啶‑4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲
酸甲酰胺、2‑[2‑(4‑吗啉‑4‑基‑苯氨基)‑5‑硝基‑嘧啶‑4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑
[5‑三氟甲基‑2‑(3,4,5‑三甲氧基‑苯氨基)‑嘧啶‑4‑基胺基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑[2‑
(4‑甲基氨甲酰‑苯氨基)‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑[2‑(3‑吗
啉‑4‑基‑苯氨基)‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑[2‑(6‑吗啉‑4‑
基‑吡啶‑3‑基胺基)‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基胺基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑[2‑(2‑甲氧基‑
4‑吗啉‑4‑基‑苯氨基)‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑[2‑(4‑[1,
4’]联吡啶‑1’‑基苯基氨基)‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑2‑[4‑
(4‑吗啉‑4‑基‑哌啶‑1‑基)‑苯氨基]‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基氨基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑
2‑[4‑(4‑甲基‑哌嗪‑1‑基)‑苯氨基]‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基胺基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑
(2‑4‑[4‑(2‑羟基‑乙基)‑哌嗪‑1‑基]‑苯氨基]‑5‑三氟甲基嘧啶‑4‑基氨基)‑噻吩‑3‑羧酸
甲酰胺、2‑[2‑(4‑吗啉‑4‑基甲基‑苯氨基)‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲酸甲
酰胺、2‑2‑[4‑(2‑吗啉‑4‑基‑乙基)‑苯氨基]‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基胺基‑噻吩‑3‑甲酸甲
酰胺、2‑2‑[4‑(2‑吗啉‑4‑基‑乙氧基)‑苯氨基]‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基胺基‑噻吩‑3‑甲酸
甲酰胺、2‑2‑[4‑(2‑吗啉‑4‑基‑2‑氧代‑乙基)‑苯氨基]‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基氨基‑噻
吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑2‑[4‑(吗啉‑4‑磺酰甲基)‑苯氨基]‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基胺基‑噻
吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑2‑[4‑(3‑吗啉‑4‑基‑3‑氧代‑丙基)‑苯氨基]‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑基
胺基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑2‑[4‑(2‑硫吗啉‑4‑基‑乙基)‑苯氨基]‑5‑三氟甲基‑嘧啶‑4‑
基胺基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑(2‑4‑[2‑(1,1‑二氧‑硫吗啉‑4‑基)‑乙基]‑苯氨基‑5‑三氟
甲基‑嘧啶‑4‑基氨基)‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、2‑[2‑(4‑吗啉‑4‑基‑苯氨基)‑5‑三氟甲基‑嘧
啶‑4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、5‑乙基‑2‑[2‑(4‑吗啉‑4‑基‑苯氨基)‑5‑三氟甲基‑嘧
啶‑4‑基氨基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺、5‑叔‑丁基‑2‑[2‑(4‑吗啉‑4‑基‑苯基胺基)‑5‑三氟甲
基‑嘧啶‑4‑基胺基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺或2‑[2‑(4‑吗啉‑4‑基‑苯氨基)‑5‑三氟甲基‑嘧
啶‑4‑基氨基]‑5‑苯基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺。
盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、柠檬酸盐、苯磺酸盐、对甲
苯磺酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、乙酸盐、羟基乙酸盐、羟乙基磺酸盐、
马来酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、三氟乙酸盐或其组合。
方法,包括以下步骤:
条件使用的碱性剂优选为碳酸氢钠;所述亲核取代反应的温度为70℃~80℃,时间为12h~
24h,优选为70℃,12h。
优选为70℃,12h;取代反应发生在2号位上,胺取代了2号位上的氯;所述式(Ⅳ)化合与所述
式(Ⅴ)化合物、所述催化剂A的摩尔比为1:(1.2‑1.5):(3‑5),优选为1:1.2:3。
包括以下步骤:
选为0~5℃,时间优选为1~6h,更优选为0℃,1h;亲核取代发生在2号位上,噻吩类化合物
取代了2号位上的氯。所述亲核取代反应优选在0~5℃条件下进行,更优选为0℃,所述亲核
取代反应的时间为4h~12h,优选为4h;所述式(Ⅱ)化合物与所述式(Ⅴ)化合物、所述催化
剂B的摩尔比为1:(1‑1.5):(1.2‑1.5),优选为1:1:1.2;
优选为25℃,12h;取代反应发生在4号位上,胺取代了4号位上的氯;所述式(Ⅵ)化合物与式
(Ⅲ)化合物、催化剂A的摩尔比为1:(1.2‑1.5):(3‑5),优选为1:1.2:3。
酶中的应用。
药物中的应用。
及其组合和药学上可接受的辅料。
合具有较好的水溶性、对酪氨酸激酶和肿瘤细胞有较强的抑制作用。
具体实施方式
实施例,而非全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造
性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
时,然后冷却至室温。将沉淀过滤掉,用水洗涤,得到目标化合物1a。
回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合物。
有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲醇
=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2a。
507mg;42%收率;H NMR(400MHz,DMSO)δ13.27(s,1H),8.55(br,2H),7.50(d,J=6.0Hz,
13
1H),7.15(d,J=6.0Hz,1H),2.82(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.1,156.7,
+
155.77,153.7,145.3,122.9,118.3,116.2,114.7,26.3;ESI‑MS m/z:302.9[M+H]。
3‑甲酸甲酰胺(2a)黄色固体;152mg,32%收率;mp:258‑259℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ
12.58(s,1H),8.34(d,J=4.4Hz,1H),8.25(s,1H),8.15(s,1H),7.38(d,J=6.0Hz,2H),
6.86(s,1H),6.65(s,1H),6.50(s,1H),3.78–3.75(m,4H),3.16–3.09(m,4H),2.79(d,J=
13
4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.3,159.6,155.1,152.6,150.3,146.7,129.8,
122.8,120.5,116.7,115.7,114.5,107.1,103.5,100.5,66.6,55.9,49.7,26.2;ESI‑MS m/
+
z:474.9[M+H]。
物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤
混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲
烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2b。
3‑甲酸甲酰胺(2b)黄色固体;137mg,29%收率;mp:276‑277℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ
12.67(s,1H),8.37(d,J=4.4Hz,1H),8.24(s,1H),8.21(s,1H),7.49(s,1H),7.40(d,J=
6.0Hz,1H),6.96–6.92(m,2H),6.71–6.68(m,1H),3.75(s,3H),3.72–3.70(m,4H),3.01–
13
2.99(m,4H),2.79(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,158.7,155.2,152.6,
146.5,145.8,145.7,128.7,122.9,116.8,114.8,113.3,112.2,111.7,104.5,66.7,56.4,
+
50.3,26.2;ESI‑MS m/z:474.9[M+H]。
所得混合物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3
(50mL)洗涤混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯
化,二氯甲烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2c。
基‑噻吩‑3‑羧酸甲酰胺(2c)黄色固体;170mg,35%收率;mp:234‑235℃.H NMR(400MHz,
DMSO)δ12.56(s,1H),8.34(d,J=4.4Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(s,1H),7.39–7.35(m,2H),
6.83(d,J=4.8Hz,1H),6.63(d,J=2.4Hz,1H),6.50(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),3.74(s,3H),
13
3.17–3.14(m,4H),2.79(d,J=4.4Hz,3H),2.49–2.48(m,4H),2.25(s,3H);C NMR(100MHz,
DMSO)δ166.3,159.7,155.2,154.1,152.6,150.2,146.8,127.2,122.8,120.2,116.7,
+
114.5,107.3,103.4,100.7,55.9,55.1,49.2,46.2,26.2;ESI‑MS m/z:487.9[M+H]。
回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合物。
有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲醇
=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2d。
甲酰胺(2d)黄色固体;171mg,38%收率;mp:177‑178℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ12.69(s,
1H),9.26(s,1H),8.40(s,1H),8.28(s,1H),7.45(d,J=6.0Hz,1H),7.07(s,2H),7.01(d,J
13
=6.0Hz,1H),3.75(s,6H),3.64(s,3H),2.81(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ
166.3,158.1,155.0,153.0,152.7,146.4,136.3,133.5,123.0,116.6,114.9,104.8,99.3,
+
60.6,56.2,26.2;ESI‑MS m/z:449.9[M+H]。
流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合物。有
机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲醇=
20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2e。
酰胺(2e)黄色固体;178mg,40%收率;mp:229‑230℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ12.65(s,1H),
9.18(s,1H),8.38(d,J=4.4Hz,1H),8.21(s,1H),7.50(d,J=8.8Hz,2H),7.43(d,J=
6.0Hz,1H),6.99(d,J=6.0Hz,1H),6.92(d,J=8.8Hz,2H),3.78–3.72(m,4H),3.09–3.03
13
(m,4H),2.80(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.3,158.5,155.1,152.7,147.5,
146.5,132.3,122.9,116.7,116.1,115.9,114.7,104.0,66.6,49.6,26.2;ESI‑MS m/z:
+
444.9[M+H]。
反应12小时,然后冷却至室温。将沉淀过滤掉,用水洗涤,得到目标化合物1c。
过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合物。有机层经硫
酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲醇=20:1淋洗,
浓缩后得到目标化合物2f。
426mg,34%收率;H NMR(400MHz,DMSO)δ14.30(s,1H),9.27(s,1H),8.53(d,J=4.4Hz,
13
1H),7.53(d,J=6.0Hz,1H),7.27(d,J=6.0Hz,1H),2.83(d,J=4.4Hz,3H);C NMR
(100MHz,DMSO)δ166.1,156.7,155.8,153.7,145.3,123.0,118.4,116.3,114.7,26.3;ESI‑
+
MS m/z:313.9[M+H]。
甲酰胺(2f)红色固体;141mg,31%收率;mp>300℃;H NMR(400MHz,DMSO)δ13.89(s,1H),
10.34–10.03(m,1H),9.10(s,1H),8.31(s,1H),7.51–7.37(m,3H),7.18–6.89(m,3H),3.76
13
(s,4H),3.12(s,4H),2.80(s,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ174.9,165.3,158.5,147.6,
138.5,126.5,124.8,124.1,123.1,118.9,118.7,117.3,115.8,66.6,49.2,26.2;ESI‑MS
+
m/z:455.9[M+H]。
度,反应12小时,然后冷却至室温。将沉淀过滤掉,用水洗涤,得到目标化合物1b。
搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合物。有机层
经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲醇=20:1
淋洗,浓缩后得到目标化合物2g。
固体;511mg,38%收率;H NMR(400MHz,DMSO)δ13.27(s,1H),8.55(br,2H),7.50(d,J=
13
6.0Hz,1H),7.15(d,J=6.0Hz,1H),2.82(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ169.7,
166.2,161.5,156.3,153.2,146.0,137.6,131.4,129.5,126.3,123.6,122.8,120.9,
+
117.4,115.2,66.6,46.4,42.2,26.2;ESI‑MS m/z:336.9[M+H]。
3‑甲酸甲酰胺(2g)棕色固体;222mg,46%yeild;mp:222‑223℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ
12.92(s,1H),9.64(s,1H),8.49(s,1H),8.40(s,1H),7.43(s,1H),7.03(br,3H),3.75(s,
13
6H),3.66(s,3H),2.80(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,156.4,156.3,
153.1,147.4,145.9,131.0,126.3,123.6,122.9,122.5,117.5,117.3,115.2,60.6,56.3,
+
26.2;ESI‑MS m/z:483.9[M+H]。
热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合
物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲
醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2h。
甲酸甲酰胺(2h)黄色固体;126mg,28%收率;mp:276‑277℃;H NMR(400MHz,DMSO)δ13.00
(s,1H),9.97(s,1H),8.55(s,1H),8.43(d,J=4.4Hz,1H),8.31(d,J=4.4Hz,1H),7.87–
7.75(m,4H),7.45(d,J=6.0Hz,1H),7.06(d,J=6.0Hz,1H),2.80(dd,J=8.0,4.4Hz,6H);
13
C NMR(100MHz,DMSO)δ166.7,166.2,160.8,156.3,153.2,145.8,142.0,129.3,128.0,
+
127.8,125.2,122.9,120.8,117.4,115.4,26.7,26.2;ESI‑MS m/z:450.9[M+H]。
流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合物。有
机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲醇=
20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2i。
甲酸甲酰胺(2i)黄色固体;153mg,32%yeild;mp:259‑261℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ12.92
(s,1H),9.65(s,1H),8.48(s,1H),8.41(d,J=4.4Hz,1H),7.44(d,J=6.0Hz,1H),7.26(s,
1H),7.21–7.17(m,2H),7.00(d,J=5.2Hz,1H),6.71(d,J=8.4Hz,1H),3.77–3.67(m,4H),
13
3.14–3.04(m,4H),2.80(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,161.3,156.3,
153.2,151.7,146.0,139.9,129.3,126.3,123.6,122.9,117.3,115.2,113.7,111.1,
+
109.6,66.6,48.9,26.2;ESI‑MS m/z:478.9[M+H]。
至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合
物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲
醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2j。
噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2j)黄色固体;139mg,29%收率;mp:250‑251℃.H NMR(400MHz,DMSO)
δ12.89(s,1H),9.57(s,1H),8.50–8.08(m,3H),7.73(s,1H),7.42(s,1H),7.02–6.86(m,
13
2H),3.88–3.58(m,4H),3.42(s,4H),2.79(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,
157.3,156.4,153.2,147.6,146.0,129.1,126.8,126.4,124.7,123.7,122.8,117.3,
+
115.1,107.2,66.4,46.1,26.2;ESI‑MS m/z:479.9[M+H]。
加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混
合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:
甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2k。
基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2k)黄色固体;168mg,33%收率;mp:280‑281℃.H NMR(400MHz,
DMSO)δ12.78(s,1H),9.00(s,1H),8.35(s,2H),7.35(s,1H),7.19(s,1H),6.66(s,1H),6.53
13
(d,J=8.4Hz,1H),3.77(s,4H),3.72(s,3H),3.15(s,4H),2.77(d,J=4.4Hz,3H);C NMR
(100MHz,DMSO)δ165.1,155.4,155.2,152.0,145.4,145.3,134.2,125.5,122.8,121.6,
+
118.3,116.2,115.8,113.7,106.1,99.5,65.5,54.8,48.5,25.1;ESI‑MS m/z:508.9[M+H] .
加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混
合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:
甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2l。
基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2l)黄色固体;201mg,36%收率;mp:260‑261℃.H NMR(400MHz,
DMSO)δ12.86(s,1H),9.54(s,1H),8.41(s,2H),7.50–7.35(m,3H),6.96–6.92(m,3H),2.79
(d,J=4.4Hz,3H),2.70–2.60(m,7H),1.90–1.87(m,3H),1.62–1.57(m,7H)1.46–1.43(m,
13
2H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,156.2,153.2,148.9,148.0,146.1,127.9,126.4,
123.7,122.7,117.3,116.5,116.2,115.1,50.0,49.1,48.5,27.2,26.2,25.4,24.0;ESI‑MS
+
m/z:559.9[M+H] .
混合物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)
洗涤混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二
氯甲烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2m。
氨基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2m)黄色固体;202mg,36%收率;mp:276‑278℃;H NMR(400MHz,
DMSO)δ12.85(s,1H),9.52(s,1H),8.47–8.29(m,2H),7.54–7.24(m,3H),7.00–6.92(m,3H),
3.70(d,J=11.6Hz,2H),3.63–3.56(m,4H),2.79(d,J=4.4Hz,3H),2.67(t,J=11.6Hz,
13
2H),2.50(s,4H),2.31–2.28(m,1H),1.87(d,J=11.6Hz,2H),1.54–1.44(m,2H);C NMR
(100MHz,DMSO)δ166.2,156.3,153.2,150.2,148.2,146.2,129.8,126.4,122.8,122.6,
+
117.4,116.4,115.7,115.0,66.4,61.9,49.7,48.8,27.5,26.2;ESI‑MS m/z:561.9[M+H]。
加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混
合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:
甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2n。
噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2n)黄色固体;191mg,39%收率;mp:216‑218℃.H NMR(400MHz,DMSO)
δ12.85(s,1H),9.55(s,1H),8.41–8.37(m,2H),7.42(s,3H),6.94–6.92(m,3H),3.12(s,
13
4H),2.79(d,J=4.4Hz,3H),2.50–2.43(m,4H),2.25(s,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,
156.3,156.2,153.2,146.1,144.7,130.8,126.4,124.7,123.7,122.8,117.3,116.0,
+
115.0,55.0,49.0,46.1,26.2;ESI‑MS m/z:491.9[M+H]。
所得混合物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3
(50mL)洗涤混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯
化,二氯甲烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2o。
基氨基)‑噻吩‑3‑羧酸甲酰胺(2o)黄色固体;167mg,32%收率;mp:182‑183℃.H NMR
(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),9.54(s,1H),8.47–8.31(m,2H),7.42(br,3H),6.96–6.92(m,
3H),4.46(s,1H),3.58–3.53(m,2H),3.12(s,4H),2.79(d,J=4.4Hz,3H),2.61(s,4H),
13
2.49–2.41(m,2H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,156.3,153.2,148.4,146.1,130.8,
126.4,123.7,122.8,122.5,121.5,117.3,116.1,115.0,60.6,58.9,53.6,49.1,26.2;ESI‑
+
MS m/z:521.9[M+H]。
至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合
物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲
醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2p。
吩‑3‑甲酸甲酰胺(2p)黄色固体;167mg,34%收率;mp:220‑221℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ
12.93(s,1H),9.75(s,1H),8.47(s,1H),8.40(d,J=4.4Hz,1H),7.59(s,2H),7.43(d,J=
6.0Hz,1H),7.27(d,J=8.4Hz,2H),6.96(s,1H),3.61–3.56(m,4H),3.46(s,2H),2.80(d,J
13
=4.4Hz,3H),2.37(s,4H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,161.3,156.3,153.2,145.9,
144.8,138.1,133.2,129.6,126.3,123.6,122.9,117.2,115.2,66.6,62.5,53.5,26.2;
+
ESI‑MS m/z:492.9[M+H]。
热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合
物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲
醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2q。
噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2q)黄色固体;172mg,34%收率;mp:250‑251℃.H NMR(400MHz,DMSO)
δ12.92(s,1H),9.69(s,1H),8.46(s,1H),8.40(d,J=4.4Hz,1H),7.55(d,J=6.4Hz,2H),
7.44(d,J=6.0Hz,1H),7.20(d,J=8.4Hz,2H),6.98(s,1H),3.61–3.56(m,4H),2.81(d,J=
13
4.4Hz,3H),2.75–2.69(m,2H),2.56–2.53(m,2H),2.45(s,4H);C NMR(100MHz,DMSO)δ
165.2,160.3,155.2,152.2,144.9,136.1,135.0,128.0,125.3,122.6,121.8,119.9,
+
116.2,114.1,65.6,59.6,52.7,31.3,25.2;ESI‑MS m/z:506.9[M+H]。
合物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗
涤混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯
甲烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2r。
基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2r)黄色固体;162mg,31%收率;mp:187‑189℃.H NMR(400MHz,
DMSO)δ12.88(s,1H),9.62(s,1H),8.47–8.30(m,2H),7.63–7.36(m,3H),6.96–6.93(m,3H),
4.10–4.08(m,2H),3.67–3.51(m,4H),2.79(d,J=4.4Hz,3H),2.70(s,2H),2.50–2.46(m,
13
4H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,156.3,155.5,153.2,146.8,146.1,132.1,126.4,
123.7,122.8,117.3,116.2,115.1,114.8,66.6,65.9,57.5,54.1,26.2;ESI‑MS m/z:522.9
+
[M+H]。
得混合物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3
(50mL)洗涤混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯
化,二氯甲烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2s。
基氨基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2s)白色固体;276mg,53%收率;mp:260‑261℃.H NMR
(400MHz,DMSO)δ12.92(s,1H),9.73(s,1H),8.47(s,1H),8.39(d,J=4.4Hz,1H),7.57(d,J
=6.4Hz,2H),7.43(d,J=6.0Hz,1H),7.20(d,J=8.4Hz,2H),6.99(d,J=4.0Hz,1H),3.71
13
(s,2H),3.60–3.45(m,8H),2.80(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ169.7,166.2,
161.5,156.3,153.2,146.0,137.6,131.4,129.5,126.3,123.6,122.8,120.9,117.4,
+
115.2,66.6,46.4,42.2,26.2;ESI‑MS m/z:520.9[M+H]。
加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混
合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:
甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2t。
吩‑3‑甲酸甲酰胺(2t)黄色固体;278mg,50%收率;mp:220‑221℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ
12.95(s,1H),9.85(s,1H),8.50(s,1H),8.40(d,J=4.8Hz,1H),7.67(d,J=7.2Hz,2H),
7.44–7.39(m,3H),6.98(d,J=4.8Hz,1H),4.43(s,2H),3.61–3.57(m,4H),3.15–3.10(m,
13
4H),2.80(d,J=4.4Hz,3H). C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,161.2,156.3,153.2,145.9,
139.4,131.5,126.2,124.5,123.5,122.8,122.5,117.4,115.3,66.4,54.3,46.1,26.2;
+
ESI‑MS m/z:556.9[M+H]。
将所得混合物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3
(50mL)洗涤混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯
化,二氯甲烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2u。
基胺基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2u)白色固体;283mg,53%收率;mp:259‑260℃;H NMR
(400MHz,DMSO)δ12.91(s,1H),9.70(s,1H),8.46(s,1H),8.39(s,1H),7.55(s,2H),7.43(d,
J=6.0Hz,1H),7.22(d,J=8.4Hz,2H),7.00(s,1H),3.55–3.48(m,4H),3.47–3.39(m,4H),
13
2.83–2.79(m,5H),2.63(t,J=7.7Hz,2H). C NMR(100MHz,DMSO)δ170.7,166.27,161.3,
156.3,153.2,146.0,137.1,135.6,135.4,128.9,126.3,123.6,122.8,117.4,115.2,66.6,
+
45.9,34.39,30.7,26.2;ESI‑MS m/z:534.9[M+H]。
物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤
混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲
烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2v。
基‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2v)黄色固体;250mg,48%收率;mp:241‑242℃;H NMR(400MHz,
DMSO)δ12.91(s,1H),9.69(s,1H),8.46(s,1H),8.41–8.39(m,1H),7.54(s,2H),7.43(d,J=
6.0Hz,1H),7.19(d,J=8.0Hz,2H),6.98(s,1H),2.80(d,J=4.4Hz,3H),2.76–2.69(m,6H),
2.63–2.58(m,6H);13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,161.4,156.3,153.2,146.0,137.1,
136.1,129.2,129.1,126.3,123.6,122.8,117.2,115.2,65.4,54.9,32.2,27.6,26.2;ESI‑
+
MS m/z:522.9[M+H]。
合物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗
涤混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯
甲烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物2v。
啶‑4‑基氨基)‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(2w)黄色固体;271mg,49%收率;mp:250‑251℃;H NMR
(400MHz,DMSO)δ12.91(s,1H),9.70(s,1H),8.46(s,1H),8.40(d,J=4.4Hz,1H),7.55(d,J
=6.0Hz,2H),7.43(d,J=6.0Hz,1H),7.22(d,J=8.4Hz,2H),6.99(s,1H),3.09(s,4H),
13
2.99(s,3H),2.80(d,J=4.4Hz,3H),2.73(s,3H),2.50(s,2H);C NMR(100MHz,DMSO)δ
166.2,161.3,156.3,153.2,146.0,137.2,135.7,129.4,129.1,126.3,123.6,122.8,
+
117.3,115.2,57.9,50.8,50.7,32.8,26.2;ESI‑MS m/z:554.9[M+H]。
2mmol),然后滴加三乙胺(222mg,2.2mmol)。搅拌4小时后,将反应浓缩,用正己烷/乙酸乙酯
=2/1硅胶柱纯化,得到化合物3。
搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤混合物。有机层
经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲烷:甲醇=20:1
淋洗,浓缩后得到目标化合物4a。
301mg,42%收率;mp:167‑168℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ10.44(s,1H),8.72(s,1H),7.51
13
(d,J=8.0Hz,2H),6.95(d,J=8.0Hz,2H),3.74(s,4H),3.08(s,4H);C NMR(100MHz,DMSO)
δ161.0,158.5,148.3,130.6,127.6,124.9,122.4,115.8,110.6,66.5,49.2;ESI‑MS m/z:
+
336.9[M+H]。
甲酸甲酰胺(4a)黄色固体;148mg,31%收率;mp:230‑231℃.H NMR(400MHz,DMSO)δ12.86
(s,1H),9.58(s,1H),8.44–8.33(m,2H),7.43–7.35(m,3H)7.02–6.94(m,3H),3.79–3.72(m,
13
4H),3.13–3.00(m,4H),2.80(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ166.2,156.3,
153.2,146.1,126.9,126.8,126.4,123.8,123.7,122.8,117.3,115.8,115.2,115.0,66.6,
+
49.4,26.2;ESI‑MS m/z:478.9[M+H]。
物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤
混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲
烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物4b。
噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(4b)黄色固体;172mg,34%收率;mp:244‑245℃.H NMR(400MHz,DMSO)
δ12.74(s,1H),9.54(s,1H),8.38(s,1H),8.23(s,1H),7.36(s,2H),7.08(s,1H),6.96(d,J
=8.4Hz,2H),3.75(s,4H),3.10(s,4H),2.76(d,J=4.4Hz,3H),2.61(s,2H),1.18(s,3H);
13
C NMR(100MHz,DMSO)δ166.3,156.3,153.0,148.7,146.0,144.0,137.1,126.9,126.4,
+
123.8,118.4,115.7,115.5,114.3,66.6,49.2,26.2,22.7,16.1;ESI‑MS m/z:506.9[M+H]。
合物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗
涤混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯
甲烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物4c。
基]‑噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(4c)黄色固体;160mg,30%yeild;mp:295‑296℃.H NMR(400MHz,
DMSO)δ12.79(s,1H),9.57(s,1H),8.38(s,1H),8.26(s,1H),7.32(s,2H),7.13(s,1H),6.95
13
(d,J=6.0Hz,2H),3.75(s,4H),3.09(s,4H),2.76(d,J=4.4Hz,3H),1.23(s,9H);C NMR
(100MHz,DMSO)δ165.3,155.2,152.1,147.4,145.7,142.9,129.4,125.4,125.1,122.7,
+
115.5,114.3,114.2,112.9,65.6,47.9,33.2,31.4,25.1;ESI‑MS m/z:534.9[M+H]。
物加热至回流并搅拌过夜,然后冷却至室温。添加EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3(50mL)洗涤
混合物。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到粗化合物。然后用硅胶柱纯化,二氯甲
烷:甲醇=20:1淋洗,浓缩后得到目标化合物4d。
噻吩‑3‑甲酸甲酰胺(4d)黄色固体;210mg,38%收率;mp:299‑300℃.H NMR(400MHz,DMSO)
δ12.90(s,1H),9.70(s,1H),8.44(s,2H),7.84(s,1H),7.43–7.28(m,6H),6.96(d,J=
13
6.0Hz,2H),3.75(s,4H),3.07(s,4H),2.82(d,J=4.4Hz,3H);C NMR(100MHz,DMSO)δ
166.1,156.5,153.1,148.9,145.4,141.1,134.1,131.1,129.6,129.1,127.6,126.4,
+
126.0,125.0,123.7,119.0,115.9,115.5,66.6,49.2,26.2;ESI‑MS m/z:554.9[M+H]。
溶液2μL和1mM ATP溶液2μL,室温孵育30min,加入终止液孵育40min,终止反应并除去ATP
后,加入激酶检测试剂孵育60min,把ADP转化成ATP,在酶标仪(多功能酶标仪spectramax
Paradigm,旧金山,加利福尼亚,美国)上读取冷发光值,并计算出化合物物在10μM时的抑制
率,结果请参阅表1,结果表明本发明噻吩衍生物对Src/FAK激酶具有较好的抑制作用。
整密度为50000个/mL,将细胞悬液分为加药组和对照组。之后,将加药组和对照组的细胞悬
液按照100μL/孔加入96孔板中,37℃和5%CO2培养12h贴壁后,加药组以含有10%FBS的
‑9 ‑5
DMEM培养液配制10 ‑10 M的化合物(实施例1~27制得的噻吩类衍生物)溶液,并替换旧培
养液,对照组以含有10%FBS的DMEM培养液替换旧培养液。接着,把96孔板置于37℃和5%
CO2培养中培养48h。下一步,把旧培养液吸弃,以不含FBS的DMEM基础培养液配制0.5mg/ml
的MTT溶液并以100μL/孔加入到96孔板中,37℃和5%CO2继续培养4h后,倾弃含MTT的培养
液,每孔加入150μL DMSO溶液,25℃、500rpm震荡5分钟后测570nm、650nm处的吸光度值A,其
中抑制率按照以下公式进行计算
述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些
修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。