二氢喹嗪酮羧酸类化合物及其应用

摘要

本发明属于医药化学领域，涉及具有抗乙型肝炎病毒(HBV)活性的二氢喹嗪酮羧酸类化合物及其制备方法，以及含有它们的抗HBV感染的药物组合物。

权利要求

1.式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中：

A代表氢或卤素；

B代表氢或C1-6烷基；

Z1和Z2可以相同，也可以不同，各自代表CH或N；

W代表以下基团：

式中：

R代表0-3个相同或不同的卤素、C1-3烷基、甲氧基、硝基、氰基、三氟甲基或三氟甲氧基；

R1代表甲基，乙基或环丙基；

X和Y可以相同，也可以不相同，各自代表O或CH2；

Z3和Z4可以相同，也可以不同，各自代表CH或N；

n代表0、1或2。

2.权利要求1的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自：

1)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-

6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

2)、9-((7-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

3)、9-((6-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

4)、9-((7-甲氧基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

5)、9-((6-甲氧基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

6)、9-((7-溴-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

7)、9-((6-溴-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

8)、9-((8-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

9)、9-((7-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

10)、9-((6-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

11)、9-((5-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

12)、9-((8-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

13)、9-((7-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

14)、9-((6-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

15)、9-((5-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

16)、9-((7-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

17)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-6-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

18)、9-((2，3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-6-基)乙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6-，7-二氢-2H-吡啶并[2，1-a]异喹啉-3-甲酸；

19)、9-((3,4-亚甲二氧基苯基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧基-6,7-二氢-2H-吡啶[2,1-a]异喹啉-3-甲酸；

20)、9-((3,4-亚甲二氧基苯基)乙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧-6,7-二氢-2H-吡啶[2,1-a]异喹啉-3-甲酸；

21)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

22)、9-((8-氟-2,3-二羟基苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶[2,1-A]异喹啉-3-甲酸；

23)、9-((8-氯-2-3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6-，7-二氢-2H-吡啶并[2，1-a]异喹啉-3-甲酸；

24)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-2-甲氧基-10-氧代-5,10-二氢-6H-吡啶并[2,1-f][1,6]萘啶-9-甲酸；

25)、9-((2，3-二氢[1,4]二噁烷并[2,3-b]吡啶-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6-，7-二氢-2H-吡啶并[2，1-a]异喹啉-3-甲酸；

26)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-叔丁基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

27)、(6S)-9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-

2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

28)、(6S)-9-(((R)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

29)、(6S)-9-((S)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸。

3.一种制备权利要求1-2中任一项所述的化合物或其药用盐的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

1)在非极性溶剂中，使式(Ⅱ)化合物与式(III)化合物发生Mitsunobu反应；或在偶极溶剂中加入缚酸剂，将式(Ⅱ/)化合物与式(III)化合物加入到上述溶剂中进行缩合反应,/用过量的式(Ⅱ)或式(Ⅱ)化合物来满足反应需要，在0℃～100℃，有或无压力条件下搅拌反应2～30小时，得到式(IV)化合物，其中：

A、B、Z1、Z2和W的定义同权利要求1,

2)然后将式(IV)化合物置于质子溶剂中加入无机碱，在室温到50℃，搅拌反应2～10小时，后用1N盐酸调pH 1-2，即得式(I)化合物，其中，所述的非极性溶剂选自四氢呋喃、二氧六环或氯仿；所述的偶极溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜或乙腈；所述的缚酸剂选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾；所述的质子溶剂选自水、醇或醇-水混合溶剂；所述的无机碱选自氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾。

4.权利要求1或2所述的化合物或其药用盐在制备治疗和/或预防乙型肝炎病毒(HBV)感染的药物中的应用。

5.以权利要求1或2所述的化合物或其药用盐为活性成分的药物组合物。

6.权利要求5所述的药物组合物在制备治疗和/或预防HBV感染的药物中的应用。

7.权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，该组合物能够制备成任何可药用的剂型。

8.权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，该组合物能够制备成以下剂型：片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、粉针剂、注射剂。

9.权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，式(I)所示化合物或其药用盐的重量比为0.1～99.9％。

10.权利要求1的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、B、Z1、Z2和W如权利要求1的定义。

说明书

二氢喹嗪酮羧酸类化合物及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药化学领域，涉及具有抗乙型肝炎病毒(HBV)活性的二氢喹嗪酮羧酸类化合物及其制备方法，以及含有它们的抗HBV感染的药物组合物。

背景技术

[0002] 慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球重大公共卫生问题。据估计，HBV的感染率约占全球人口的5％，每年死于HBV感染及其相关性肝脏疾病者约100万例。目前临床用抗HBV感染药物包括干扰素(免疫调节剂)核苷类药物(聚合酶抑制剂)。尽管这些药物可明显降低病毒载量(HBV DNA)并防止肝脏疾病的进展，但不能治愈HBV感染。因此，发现和开发具有全新作用机制的抗HBV药物是多年来该领域的研究热点。

[0003] 乙型肝炎病毒(HBV)是有包膜的，部分双链DNA病毒。HBV的感染过程包括黏着(识别与结合)、脱壳(释放)，入核(形成rcDNA,经修复为cccDNA),转录(以cccDNA为模板，转录到mRNA),翻译(mRNA制造病毒蛋白，即包膜蛋白HBsAg、核衣壳蛋白HBeAg、HBV DNA多聚酶等)、逆转录(负链DNA,其逆转录正链DNA,形成HBV DNA)，组装7部分。临床上，高表达HBsAg被认为是慢性乙肝感染的显著标志。HBsAg的消失，被定义为HBV的“功能性治愈”，随后血清中产生可检测到HBs的抗体被认为是HBV治疗的理想终点。当前疗法所用干扰素和核苷类药物仅能降低HBV DNA，而不能有效降低HBsAg水平。即使延长治疗时间，核苷类似物所显示的HBsAg清除率也与天然观察到的那些相当(在-1％-2％之间)(Lancet，2005,365，,13-9；N.Engl.J.Med.2004,351,1206-17.)。

[0004] 二氢喹嗪酮羧酸类化合物是近年报道的一类对HBV抗原(HBsAg)和HBV DNA同时具有活性的新型抗HBV化合物，多个跨国制药公司已开展对该类化合物的研究并公开若干专利(WO2017017042A1,WO201815446，WO2018047109,WO2017216685A1,WO2017140821A1)。

[0005] 2017年，瑞士罗氏有限公司(WO2017016960A1)公开了具有以下通式[A]的2-氧代-6，7-二氢苯并[a]喹嗪-3-羧酸类化合物及制备方法,并对通式中的各取代基进行了广泛的定义。通式[A]中的优秀代表物是(S)-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙基)-2-氧代-6，
7-二氢苯并[a]喹嗪-3-羧酸(RG7834)。据报道，RG7834具有明确的体内外抗HBsAg和HBeAg以及HBV DNA活性(J.Med.Chem.,2018,61,10619-10634)。然而，遗憾的是，可能由于存在毒性问题罗氏有限公司目前已终止了RG7834的I期临床试验(NCT02604355)。

[0006]

[0007] 为了克服上述现有技术所存在的缺陷，本发明人进行了广泛的研究，设计合成了一系列新型的二氢喹嗪酮羧酸类化合物，并测定了它们的体外抗HBV活性及细胞毒性。最终发现，与RG783相比，这类化合物具有更加优越的体外抗HBV(HBsAg,HBV DNA)活性，而细胞毒性更低。

发明内容

[0008] 本发明的目的是提供一类由式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体，

[0009]

[0010] 其中：

[0011] A代表氢或卤素；

[0012] B代表氢或C1-6烷基；

[0013] Z1和Z2可以相同，也可以不同，各自代表CH或N；

[0014] W代表以下基团：

[0015]

[0016] 式中：

[0017] R代表0-3个相同或不同的卤素、C1-3烷基、甲氧基、硝基、氰基、三氟甲基或三氟甲氧基；

[0018] R1代表甲基，乙基或环丙基；

[0019] X和Y可以相同，也可以不相同，各自代表O或CH2；

[0020] Z3和Z4可以相同，也可以不同，各自代表CH或N；

[0021] n代表0、1或2。

[0022] 优选的，本发明具体包括以下化合物：

[0023] 1)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0024] 2)、9-((7-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0025] 3)、9-((6-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0026] 4)、9-((7-甲氧基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0027] 5)、9-((6-甲氧基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0028] 6)、9-((7-溴-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0029] 7)、9-((6-溴-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0030] 8)、9-((8-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0031] 9)、9-((7-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0032] 10)、9-((6-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0033] 11)、9-((5-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0034] 12)、9-((8-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0035] 13)、9-((7-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0036] 14)、9-((6-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0037] 15)、9-((5-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0038] 16)、9-((7-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0039] 17)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-6-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0040] 18)、9-((2，3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-6-基)乙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6-，7-二氢-2H-吡啶并[2，1-a]异喹啉-3-甲酸；

[0041] 19)、9-((3,4-亚甲二氧基苯基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧基-6,7-二氢-2H-吡啶[2,1-a]异喹啉-3-甲酸；

[0042] 20)、9-((3,4-亚甲二氧基苯基)乙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧-6,7-二氢-2H-吡啶[2,1-a]异喹啉-3-甲酸；

[0043] 21)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0044] 22)、9-((8-氟-2,3-二羟基苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶[2,1-A]异喹啉-3-甲酸；

[0045] 23)、9-((8-氯-2-3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6-，7-二氢-2H-吡啶并[2，1-a]异喹啉-3-甲酸；

[0046] 24)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-2-甲氧基-10-氧代-5,10-二氢-6H-吡啶并[2,1-f][1,6]萘啶-9-甲酸；

[0047] 25)、9-((2，3-二氢[1,4]二噁烷并[2,3-b]吡啶-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6-，7-二氢-2H-吡啶并[2，1-a]异喹啉-3-甲酸；

[0048] 26)、9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-叔丁基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸；

[0049] 27)、(6S)-9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0050] 28)、(6S)-9-(((R)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0051] 29)、(6S)-9-((S)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0052] 本发明的另一个目的在于提供式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体的制备方法，其制备方法如反应路线1所示。

[0053] 反应路线1：

[0054]

[0055] 在反应路线1中，A、B、Z1、Z2和W如前述的定义。

[0056] 在本发明中用作起始物的式(Ⅱ)化合物和式(Ⅱ/)化合物为已知化合物,或国内有商品供应或按现有公开的方法可容易地制得(Org.Lett.2000,2(11),1557-1560)。另一个用作起始物的式(III)化合物也为已知化合物,参照现有公开的方法可容易地制得(WO2017140821，WO2018047109A1)。

[0057] 式(IV)化合物可这样制备：在非极性溶剂中，使式(Ⅱ)化合物与式(III)化合物发生Mitsunobu反应；或在偶极溶剂中加入缚酸剂，将式(Ⅱ/)化合物与式(III)化合物加入到上述溶剂中进行缩合反应。

[0058] 为了提高较贵的起始物式(IIII)化合物的反应效率，使用过量的反应物的式(Ⅱ)化合物和式(Ⅱ/)化合物，例如对相对起始物为等摩尔到10倍摩尔量，优选等摩尔量到3倍摩尔量。在0℃～100℃，有或无压力条件下搅拌反应2～30小时，来制备式(IV)化合物。用于本反应的非极性溶剂选自四氢呋喃、二氧六环或氯仿；所述的偶极溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜或乙腈；所述的缚酸剂选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾。

[0059] 式(IV)化合物可通过酯的水解反应来制备式(Ⅰ)化合物。通常将式(IV)化合物置于质子溶剂中加入无机碱，在室温到50℃，搅拌反应2～10小时来实现。所述的碱选自氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾；所述的质子溶剂选自水、醇或醇-水混合溶剂。

[0060] 本发明的另一个目的在于以式(I)所示化合物或其药用盐为活性成分的药物组合物。

[0061] 本发明的药物组合物中，式(I)所示化合物或其药用盐的重量比为0.1～99.9％，药物可接受的载体在组合物中的重量比为0.1～99.9％。

[0062] 本发明的药物组合物以适合药用的制剂形式存在。本发明的药物组合物可以制备成任何可药用的剂型。优选的，药用的制剂为片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、缓释片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、散剂。

[0063] 本发明的药物组合物，作为制剂形式，每剂中含有的本发明化合物的有效量为0.1～1000mg，所述每剂指的是，每一制剂单位，如片剂的每片，胶囊的每粒，也可指每次服用剂量，如每次服用100mg。

[0064] 本发明的药物组合物可以制备成任何可药用的剂型。

[0065] 优选的，本发明的药用剂型选自：片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、粉针剂、注射剂。

[0066] 在制备成粉剂、片剂、可分散粉剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和软膏形式的固体或半固体药物制剂时，可使用固体载体。可使用的固体载体优选为选自稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、膨胀剂等中的一种或多种物质，或可为包封物质。在粉状制剂中，在载体中含有5～70％的微粒化活性成分。适宜的固体载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低沸点蜡、可可脂等。由于它们易于给药，片剂，粉剂、扁囊剂和胶囊等代表最有利的口服固体制剂。

[0067] 本发明的液体制剂包括溶液、悬液和乳液。例如，非胃肠道给药的注射制剂可为水或水-丙二醇溶液形式，调节其等渗度，pH等使适于活体的生理条件。液体制剂还可制成在聚乙二醇、水溶液中的溶液形式。可通过将活性成分溶解在水中，再加入适量的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂，来制备口服水溶液。可将微粒化的活性成分分散在粘性物质如天然和合成胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它已知悬浮剂中制备适于口服的水悬液。

[0068] 为了易于给药及剂量均一，将上述药物制剂配制成剂量单位形式是特别有利的。制剂的剂量单位形式指适于作为单一剂量的物理分离单位，每个单位含有产生所期望的治疗效果的计算好的预定量的活性成分。这种剂量单位形式可为包装形式，如片剂、胶囊或装在小管或小瓶中的粉剂，或装在管或瓶中的软膏、凝胶或霜剂。

[0069] 虽然剂量单位形式中所含活性成分的量可以变化，但一般根据所选择活性成分的效力，调节在1～800mg范围内。

[0070] 本领域技术人员可按常规方法确定适于某种情况的优选剂量。一般，开始治疗的量低于活性成分的最佳剂量，然后逐渐增加给药剂量，直到达到最佳治疗效果。为治疗需要，总的日剂量可一次给药或分数次给药。

具体实施方式

[0071] 以下实施例用于进一步解释和说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。

[0072] 下述制备方法中，涉及的起始化合物和中间化合物都属于已知化合物，可以通过现有方法制备得到，或者在市场上购买到。

[0073] 实施例1. 9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0074]

[0075] a)2-bromomethyl-1,4-benzodioxane,K2CO3,KI,ACN,80℃；b)LiOH,CH3OH,H2O,rt.

[0076] 步骤a：室温下，向化合物A(45mg，0.16mmol，可参照专利WO2017017042A1方法合成)的乙腈溶液中加入2-溴甲基-1,4-苯并二噁烷(87mg，0.38mmol)，碳酸钾(35mg,0.25mmol)，80℃搅拌过夜，室温冷却，过滤，浓缩。向残余物中加入二氯甲烷稀释，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制备薄层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)得化合物B(53.6mg，收率84.2％)。

[0077] 步骤b：室温下，向化合物B(50mg,0.09mmol)的甲醇水溶液(5mL,MeOH:H2O＝3：2)中加入氢氧化锂(11.8mg,0.49mmol)，同温搅拌2h，1N盐酸水溶液调节pH至1-2，二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，制备薄层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)得目标物C(36mg，产率81.3％)；熔点，223-225℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.99(s,1H),8.50(s,1H),7.23(s,1H),7.10(s,1H),6.92-6.90(m,4H),6.83(s,1H),4.68(brs,1H),4.45-4.45(d,J＝11.60Hz),4.43-4.29(m,3H),3.95(s,3H),3.38-3.34(d,J＝16.26Hz,1H),3.09-
3.06(d,J＝16.26Hz,1H),1.83(brs,1H),0.96-0.95(d,J＝6.72Hz,3H),0.85-0.84(d,J＝
6.72Hz,3H)；13C NMR(400MHz,CDCl3)δ177.95,165.87,150.41,148.59,145.55,145.06,
141.63,141.60,124.73,120.89,120.68,118.85,116.37,113.51,112.90,112.54,107.78,
70.24,70.14,68.05,66.61,66.40,63.96,63.91(d,J＝7.80Hz),55.23,29.31,28.47,
28.46(d,J＝1.56Hz),18.76,18.57；MS-ESI(m/z):478(M+H)+。

[0078] 实施例2. 9-((7-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0079]

[0080] a)TsCl,Et3N,DCM；b)5-甲基水杨醛,K2CO3,DMF,50℃；c)mCPBA,DCM,reflux；d)K2CO3,MeOH；e)E,Ph3P,DIAD,THF；f)LiOH,MeOH,H2O.

[0081] 步骤a:室温下，向化合物A(2g,27mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中加入4-甲苯磺酰氯(5.1g,27mmol)，三乙胺(3.6g,35.1mmol)，同温搅拌5h，1N盐酸水溶液洗涤，饱和碳酸钠溶液洗涤，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得浅黄色油状物B(6.8g)，该粗品直接用于下一步反应。

[0082] 步骤b：室温下，向5-甲基水杨醛(1g,7.35mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，加入碳酸钾(1.21g,8.82mmol)，粗品化合物B(2.1g,9.55mmol),于50℃搅拌3.5h，室温冷却，过滤。滤液加水稀释，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得黄色油状物C(1.8g)，该粗品直接用于下一步反应。

[0083] 步骤c:室温下，向化合物C(1.8g，9.37mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中，加入间氯过氧苯甲酸(2.58g,10.31mmol)，回流5h，室温冷却。向反应液中加入饱和碳酸钠水溶液，10％硫代硫酸钠水溶液淬灭，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得无色油状物D(1.7g)，该粗品直接用于下一步反应。

[0084] 步骤d:室温下，向化合物D(2.0g，9.56mmol)的甲醇(30mL)溶液中加入碳酸钾(4.4g,31.61mmol)，同温搅拌18h，加水稀释，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得黄色油状物E(1.2g)，该粗品直接用于下一步反应。

[0085] 步骤e:室温氩气保护下，向化合物F(30mg，0.08mmol)的无水四氢呋喃(5mL)溶液中加入化合物E(28mg，0.16mmol)，三苯基膦(55mg，0.2mmol)，同温搅拌30min，加入偶氮二甲酸二异丙酯(43mg，0.2mmol)，同温搅拌5h，浓缩。残余物经制备薄层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)得白色固体化合物G(21mg，收率48％)。

[0086] 步骤f:室温下，化合物G(21mg，0.04mmol)得甲醇水溶液中，加入氢氧化锂(6mg，0.25mmol)，同温搅拌2h，反应液加1N盐酸溶液调节pH至1-2，二氯甲烷萃取，二氯甲烷层水洗，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，制备薄层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)得白色固体
1
目标化合物H(17mg，收率85％)；熔点，167-169℃；H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.05(d,J＝
29.51Hz,1H),8.52(s,1H),7.24(s,1H),7.12(s,1H),7.11(s,1H),6.88-6.70(m,3H),4.43-
4.37(m,3H),4.02-3.96(m,6H),3.73(d,J＝27.11Hz,1H),3.37(d,J＝4.82Hz,1H),3.10(d,J＝16.66Hz,1H),1.65(m,3H),0.98(s,3H),0.87(s,3H)；MS-ESI(m/z):492(M+H)+。

[0087] 实施例3. 9-((6-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0088]

[0089] 制备方法按照实施例2，以4-甲基水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，收率79％(两步反应)；熔点，207-209℃；1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.80(s,1H),7.57(s,1H),7.50(s,1H),7.17(s,1H),6.81-6.67(m,3H),4.61(s,1H),4.45-4.43(m,4H),4.17(s,1H),3.91(s,3H),3.32-3.14(m,2H),2.22(s,3H),1.64(s,1H),0.89(s,3H),0.72(s,3H)；MS-ESI(m/z):430(M+H)+。

[0090] 实施例4. 9-((7-甲氧基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0091]

[0092] 制备方法按照实施例2，以5-甲氧基水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料制得上述目标化合物，白色固体，收率46％(两步反应)；熔点，244-246℃；1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.80(s,1H),7.57(s,1H),7.50(s,1H),7.18(s,1H),6.84(d,J＝8.35Hz,1H),6.53(s,1H),6.46(d,J＝8.35Hz,1H),4.65(s,1H),4.46-4.33(m,4H),4.16-4.15(m,1H),3.92(s,3H),3.69(s,3H),3.34-3.14(m,2H),1.64(s,1H),0.89(s,3H),0.72(s,3H)；MS-ESI(m/z):508(M+H)+。

[0093] 实施例5. 9-((6-甲氧基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0094]

[0095] 制备方法按照实施例2，以4-甲氧基水杨醛代替5-甲基水杨醛制得上述目标化合物，白色固体，收率66％(两步反应)；熔点，105-107℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.11(s,1H),8.53(s,1H),7.41-7.249(m,3H),7.12(s,1H),6.87-6.80(m,1H),6.53-6.48(m,1H),
4.76-4.71(d,J＝26.29Hz,1H),4.39-4.30(d,J＝44.90Hz,2H),4.01-3.97(m,6H),3.78(s,
2H),3.39-3.28(m,3H),3.13(d,J＝14.24Hz,1H),1.84(brs,1H),0.99(s,3H),0.87(s,3H)；
MS-ESI(m/z):508(M+H)+。

[0096] 实施例6. 9-((7-溴-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0097]

[0098] 制备方法按照实施例2，以5-溴水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率61％(两步反应)；熔点，244-246℃；1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.80(s,1H),7.57(s,1H),7.50(s,1H),7.16(d,J＝13.55Hz,2H),7.03(s,1H),6.91(d,J＝8.62Hz,
1H),4.70(s,1H),4.46(d,J＝9.56Hz,2H),4.32(brs,2H),4.23-4.20(m,1H),3.91(s,3H),+
3.34-3.30(m,2H),1.62(s,1H),0.73(s,3H),0.72(s,3H)；MS-ESI(m/z):556(M+H) 。

[0099] 实施例7. 9-((6-溴-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0100]

[0101] 制备方法按照实施例2，以4-溴水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化1
合物，白色固体，收率72％(两步反应)；熔点，231-235℃；H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.01(s,
1H),8.48(s,1H),7.30(s,2H),7.22(s,1H),7.10(s,1H),6.88(s,1H),6.82(s,1H),6.15(s,
1H),4.46-4.28(m,4H),4.02(s,3H),3.90-3.87(m,1H),3.36-3.32(m,1H),3.10(d,J＝
16.17Hz,1H),1.87-1.84(m,1H),0.98(d,J＝6.49Hz,3H),0.86(d,J＝6.55Hz,3H)；MS-ESI+
(m/z):556(M+H) 。

[0102] 实施例8. 9-((7-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0103]

[0104] 制备方法按照实施例2，以5-氯水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率65％(两步反应)；熔点，221-223℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.01(s,1H),8.53(s,1H),7.31(s,1H),7.25(s,1H),7.13-6.85(m,4H),4.69(s,1H),4.46-4.31(m,
4H),3.97(s,4H),3.38(d,J＝14.03Hz,1H),3.10(d,J＝16.58Hz,1H),1.85(s,1H),0.99(d,J＝4.97Hz,3H),0.87(d,J＝5.18Hz,3H)；MS-ESI(m/z):512(M+H)+。

[0105] 实施例9. 9-((6-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0106]

[0107] 制备方法按照实施例2，以4-氯水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率72％(两步反应)；熔点，229-231℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.86(s,1H),8.38(s,1H),7.15(s,1H),7.09(s,1H),6.97-6.88(m,4H),4.51(s,1H),4.31-4.15(m,
4H),3.81(s,4H),3.22(d,J＝15.53Hz,1H),2.96(d,J＝16.03Hz,1H),1.68(s,1H),0.83(d,+
J＝5.25Hz,3H),0.71(d,J＝5.50Hz,3H)；MS-ESI(m/z):512(M+H) 。

[0108] 实施例10. 9-((8-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0109]

[0110] 制备方法按照实施例2，以6-氯水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率76％(两步反应)；熔点，230-232℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.09(s,1H),8.56(s,1H),7.25(s,1H),7.13(s,1H),6.96(s,2H),6.82(s,2H),4.73(s,1H),4.49-
4.32(m,4H),3.99-3.95(s,4H),3.38(d,J＝15.82Hz,1H),3.10(d,J＝16.51Hz,1H),1.83(s,1H),0.96(s,3H),0.83(s,3H)；MS-ESI(m/z):512(M+H)+。

[0111] 实施例11. 9-((5-氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0112]

[0113] 制备方法按照实施例2，以3-氯水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率87％(两步反应)；熔点，292-294℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.01(s,1H),8.52(s,1H),7.24(s,1H),7.12(s,1H),7.01(s,1H),6.99-6.84(m,3H),4.71(s,1H),
4.57-4.32(m,4H),4.02-3.96(m,4H),3.35(d,J＝15.66Hz,1H),3.10(d,J＝16.03Hz,1H),
1.75(s,1H),0.98-0.97(d,J＝5.55Hz,3H),0.86-0.85(d,J＝5.55Hz,3H)；MS-ESI(m/z):
512(M+H)+。

[0114] 实施例12. 9-((7-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0115]

[0116] 制备方法按照实施例2，以3-氯水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率58％(两步反应)；熔点，188-190℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.98(s,1H),8.52(s,1H),7.32(s,1H),7.26(s,1H),7.13(s,1H),6.90-6.64(m,3H),4.71(s,1H),
4.46-4.37(m,3H),4.04-3.94(m,5H),3.39(d,J＝13.14Hz,1H),3.12(d,J＝16.27Hz,1H),
1.87(s,1H),1.00(d,J＝5.88Hz,3H),0.89(d,J＝5.37Hz,3H)；MS-ESI(m/z):496(M+H)+。

[0117] 实施例13. 9-((7-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0118]

[0119] 制备方法按照实施例2，以5-硝基水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率43％(两步反应)；熔点，185-187℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.90(s,1H),8.49(s,1H),7.87(s,1H),7.30(s,1H),7.25(s,1H),7.11(s,1H),7.04(d,J＝8.32Hz,1H),6.86(d,J＝4.08Hz,1H),4.72(s,1H),4.61-4.30(m,4H),3.96(s,3H),3.92(s,
1H),3.40-3.36(dd,J＝10.96Hz,J＝11.35Hz,1H),3.10(d,J＝15.96Hz,1H),1.84(d,J＝
7.36Hz,1H),0.99(d,J＝6.53Hz,3H),0.88(d,J＝6.72Hz,3H)；MS-ESI(m/z):523(M+H)+。

[0120] 实施例14. 9-((6-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0121]

[0122] 制备方法按照实施例2，以4-氟水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率55％(两步反应)；熔点，222-224℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.01(s,1H),8.53(s,1H),7.25(s,1H),7.12(s,1H),6.86(d,2H),6.68(s,1H),6.62(s,1H),4.65(s,
1H),4.47-4.31(m,4H),3.97(s,4H),3.38(s,1H),3.12(s,1H),1.84(brs,1H),0.98(s,3H),
0.87-0.86(d,J＝4.60Hz,3H)；MS-ESI(m/z):496(M+H)+。

[0123] 实施例15. 9-((8-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0124]

[0125] 制备方法按照实施2，以6-氟水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合1
物，白色固体，收率49％(两步反应)；熔点，219-221℃；H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.02(s,
1H),8.53(s,1H),7.24(s,1H),7.12(s,1H),6.91-.89(d,J＝6.04Hz,1H),6.82-6.79(m,
1H),6.71-6.72(m,1H),4.72-4.71(m,1H),4.52-4.44(m,2H),4.40-4.32(m,2H),3.96(s,
1H),3.39(d,J＝15.38Hz,1H),3.10(d,J＝16.25Hz,1H),1.85-1.82(m,1H),0.98-0.97(m,+
3H),0.86-0.84(d,J＝5.71Hz,3H)；MS-ESI(m/z):496(M+H) 。

[0126] 实施例16. 9-((5-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0127]

[0128] 制备方法按照实施2，以3-氟水杨醛代替5-甲基水杨醛为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率54％(两步反应)；熔点，281-283℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.00(s,1H),8.52(s,1H),7.24(s,1H),7.12(s,1H),6.84(s,1H),6.74(s,1H),4.73(d,J＝4.63Hz,
1H),4.51(d,J＝11.63Hz,1H),4.41-4.33(m,3H),3.96(s,4H),3.39(d,J＝15.86Hz,1H),
3.11-3.08(d,J＝15.86Hz,1H),1.84(brs,1H),0.98(d,J＝6.55Hz,3H),0.86(d,J＝
6.67Hz,3H)；MS-ESI(m/z):496(M+H)+。

[0129] 实施例17. 9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-6-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0130]

[0131] 制备方法按照实施例1中步骤，以2-羟基甲基-1,4-苯二恶代替2-噁-7-aza-螺[4.4]壬烷为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率77％(两步反应)；熔点，262-264℃；1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.79(s,1H),7.55(s,1H),7.48(s,1H),7.20(s,1H),6.99(brs,1H),6.94(s,1H),6.90(d,J＝8.07Hz,2H),5.09-5.03(m,2H),4.26(s,4H),3.89(s,3H),
3.12(d,J＝16.52Hz,1H),2.05-2.02(m,1H),0.98(d,J＝6.40Hz,3H),0.73(d,J＝6.57Hz,
3H)；13C NMR(400MHz,DMSO)δ178.75,166.72,151.52,149.00,147.69,147.02,143.81,
129.75,127.24,121.83,119.02,117.66,117.44,113.75,113.29,109.84,70.11,64.56,+
64.52,56.49,31.75,29.53,29.36(d,J＝26.03Hz),19.49,19.40；MS-ESI(m/z):478(M+H) 。

[0132] 实施例18. 9-((2，3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-6-基)乙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6-，7-二氢-2H-吡啶并[2，1-a]异喹啉-3-甲酸

[0133]

[0134] 制备方法按照实施例1，以2-(2,3-二氢苯并[B][1,4]二氧杂环-6-基)乙醇代替(R)-2-(羟基甲基)-1,4-苯并二噁烷为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率64％(两步反应)；熔点，208-210℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.09(s,1H),8.51(s,1H),7.20(s,1H),7.08(s,1H),6.82-6.80(m,2H),6.77-6.75(m,1H),6.71(s,1H),4.25-4.21(m,6H),3.94(s,
4H),3.33(d,J＝11.52Hz,1H),3.10-3.02(m,3H),1.81-1.79(m,1H),0.93(d,J＝6.69Hz,
3H),0.82(d,J＝6.83Hz,3H)；MS-ESI(m/z):492(M+H)+。

[0135] 实施例19. 9-((3,4-亚甲二氧基苯基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧基-6,7-二氢-2H-吡啶[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0136]

[0137] 制备方法按照实施例1，以胡椒醇代替(R)-2-(羟基甲基)-1,4-苯并二噁烷为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率54％(两步反应)；熔点，210-212℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.00(s,1H),8.48(s,1H),7.23(s,1H),7.10(s,1H),6.98(s,1H),6.94(s,1H),6.86(s,1H),6.81(s,1H),5.18-5.12(m,2H),3.98(s,1H),3.88(s,1H),3.36-3.33(m,1H),3.06(d,J＝16.26Hz,1H),1.85(m,1H),0.96(d,J＝6.54Hz,3H),0.88(d,J＝6.54Hz,3H)；MS-ESI(m/z):464(M+H)+。

[0138] 实施例20. 9-((3,4-亚甲二氧基苯基)乙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧-6,7-二氢-2H-吡啶[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0139]

[0140] 制备方法按照实施例1，以(3,4-亚甲二氧基苯基)乙醇代替(R)-2-(羟基甲基)-1,4-苯并二噁烷为原料，制得上述目标化合物，白色固体，收率63％(两步反应)；熔点，125-
127℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ16.04(s,1H),8.47(s,1H),7.20-7.19(m,1H),7.08(s,1H),
6.90-6.81(m,H),6.66(s,1H),5.98(d,2H),5.34(s,1H),3.99(s,3H),3.85(s,1H),3.28(d,J＝16.53Hz,1H),2.98-2.97(m,1H),1.75(s,4H),0.96-091(m,3H),0.86-0.77(m,3H)；MS-ESI(m/z):478(M+H)+。

[0141] 实施例21. 9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0142]

[0143] 制备方法按照实施例1，以A(可参照专利WO2017140821合成)和市售可得的B为原料制备目标化合物C,制得上述目标化合物，白色固体，收率45％(两步反应)；熔点，238-240℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.10(s,1H),8.45(s,1H),7.67(s,1H),7.00(s,1H),6.3-6.89(m,2H),6.83(s,1H),5.15(s,2H),4.29(s,4H),3.96(s,4H),3.52(s,1H),3.35(s,1H),3.07(d,J＝13.42Hz,1H),2.04(s,1H),0.93(d,J＝4.88Hz,3H),0.86(d,J＝5.83Hz,3H)；MS-ESI(m/z):496(M+H)+。

[0144] 实施例22. 9-((8-氟-2,3-二羟基苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶[2,1-A]异喹啉-3-甲酸

[0145]

[0146] 制备方法按照实施例21和实施例2，以6-氟水杨醛为原料可制得目标化合物，制得上述目标化合物，白色固体，收率34％(两步反应)；熔点，102-104℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.12(s,1H),8.52(s,1H),7.70(s,1H),6.98(d,J＝8.05Hz,1H),6.86(m,1H),6.77(m,2H),4.75-4.74(m,1H),4.00(d,J＝6.63Hz,1H),3.96(s,3H),3.42(d,J＝13.97Hz,1H),
3.15(d,J＝15.55Hz,1H),1.80(s,1H),1.00(d,J＝3.53Hz,3H),0.89(d,J＝5.15Hz,3H)；
MS-ESI(m/z):514(M+H)+。

[0147] 实施例23. 9-((8-氯-2-3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6-，7-二氢-2H-吡啶并[2，1-a]异喹啉-3-甲酸

[0148]

[0149] 制备方法按照实施例21和实施例2，以6-氯水杨醛为原料可制得目标化合物，制得上述目标化合物，白色固体，收率53％(两步反应)；熔点，89-91℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.07(s,1H),8.48(s,1H),7.68(s,1H),7.00(s,2H),6.86-6.83(m,2H),4.75(d,J＝
16.5Hz,1H),4.51-4.37(m,4H),3.90(s,4H),3.37(d,J＝15.68Hz,1H),3.14(d,J＝
16.05Hz,1H),2.05-2.04(m,1H),0.98-0.96(m,3H),0.87-0.86(m,3H)；MS-ESI(m/z):530(M+H)+。

[0150] 实施例24. 9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-2-甲氧基-10-氧代-5,10-二氢-6H-吡啶并[2,1-f][1,6]萘啶-9-甲酸

[0151]

[0152] 制备方法按照实施例21，以化合物A(可参照专利方法WO2018047109A1制得)和化合物B(市售可得)为原料可制得目标化合物C，白色固体，收率57％(两步反应)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.07(s,1H),8.48(s,1H),7.68(s,1H),7.02-6.89(m,3H),4.75-4.74(d,1H),4.51-4.37(m,4H),3.90(s,4H),3.39-3.36(d,J＝15.68Hz,1H),3.12(d,J＝16.05Hz,
1H),2.05(d,J＝15.43Hz,1H),0.98-0.96(m,3H),0.87-0.86(m,3H)；MS-ESI(m/z):479(M+H)+。

[0153] 实施例25. 9-((2，3-二氢[1,4]二噁烷并[2,3-b]吡啶-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6-，7-二氢-2H-吡啶并[2，1-a]异喹啉-3-甲酸

[0154]

[0155] 制备方法按照实施例21，以化合物A(可参照专利方法CN201580003570.9制得)和化合物B(可参照文献方法Org.Lett.2000,2(11),1557-1560制得)为原料可制得目标化合物C，白色固体，收率39％(两步反应)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.07(s,1H),8.48(s,1H),7.68(s,1H),7.02(s,2H),6.76-6.69(m,2H),4.75-4.74(d,1H),4.51-4.37(m,4H),3.90(s,
4H),3.37(d,J＝15.68Hz,1H),3.14-3.11(d,J＝16.05Hz,1H),2.05-2.04(m,1H),0.98-
0.96(m,3H),0.87-0.86(m,3H)；MS-ESI(m/z):479(M+H)+。

[0156] 实施例26. 9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-叔丁基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0157]

[0158] 制备方法按照实施例21，以化合物A(可参照专利方法US2015210682制得)和市售可得的化合物B为原料可制得目标化合物C，白色固体，收率71％(两步反应)，1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.07(s,1H),8.48(s,1H),7.68(s,1H),7.02(s,2H),6.76-6.69(m,2H),4.75-4.74(d,1H),4.51-4.37(m,4H),3.90(s,4H),3.37(d,J＝15.68Hz,1H),3.12(d,J＝
16.05Hz,1H),2.05-2.04(m,1H),0.87(s,9H)；MS-ESI(m/z):492(M+H)+。

[0159] 实施例27.(6S)-9-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0160]

[0161] a)2-bromomethyl-1,4-benzodioxane,K2CO3,KI,ACN,80℃；b)LiOH,CH3OH,H2O,rt.

[0162] 制备方法参照实施例1，以S构型的化合物A(可参照文献方法制得J.Med.Chem.,1
2018,61,10619-10634)为原料可制得目标化合物C,H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.99(s,1H),
8.50(s,1H),7.23(s,1H),7.10(s,1H),6.92-6.90(m,4H),6.83(s,1H),4.68(brs,1H),
4.45-4.45(d,J＝11.60Hz),4.43-4.29(m,3H),3.95(s,3H),3.38-3.34(d,J＝16.26Hz,
1H),3.09-3.06(d,J＝16.26Hz,1H),1.83(brs,1H),0.96-0.95(d,J＝6.72Hz,3H),0.85-
0.84(d,J＝6.72Hz,3H)；MS-ESI(m/z):478(M+H)+。

[0163] 实施例28.(6S)-9-(((R)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0164]

[0165] a)(R)-2-bromomethyl-1,4-benzodioxane,K2CO3,KI,ACN,80℃；b)LiOH,CH3OH,H2O,

[0166] rt.

[0167] 制备方法参照实施例1，以S构型的化合物A(可参照文献方法制得J.Med.Chem.,2018,61,10619-10634)和R构型的2-溴甲基-苯并二氧六环为原料可制得目标化合物C,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.99(s,1H),8.50(s,1H),7.23(s,1H),7.10(s,1H),6.92-6.90(m,
4H),6.83(s,1H),4.68(brs,1H),4.45-4.45(d,J＝11.60Hz),4.43-4.29(m,3H),3.95(s,
3H),3.38-3.34(d,J＝16.26Hz,1H),3.09-3.06(d,J＝16.26Hz,1H),1.83(brs,1H),0.96-
0.95(d,J＝6.72Hz,3H),0.85-0.84(d,J＝6.72Hz,3H)；MS-ESI(m/z):478(M+H)+。

[0168] 实施例29.(6S)-9-(((S)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁烷-2-基)甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸

[0169]

[0170] a)(S)-2-bromomethyl-1,4-benzodioxane,K2CO3,KI,ACN,80℃；b)LiOH,CH3OH,H2O,rt.

[0171] 制备方法参照实施例1，以S构型的化合物A(可参照文献方法制得J.Med.Chem.,2018,61,10619-10634)和S构型的2-溴甲基-苯并二氧六环为原料可制得目标化合物C,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ15.99(s,1H),8.50(s,1H),7.23(s,1H),7.10(s,1H),6.92-6.90(m,
4H),6.83(s,1H),4.68(brs,1H),4.45-4.45(d,J＝11.60Hz),4.43-4.29(m,3H),3.95(s,
3H),3.38-3.34(d,J＝16.26Hz,1H),3.09-3.06(d,J＝16.26Hz,1H),1.83(brs,1H),0.96-
0.95(d,J＝6.72Hz,3H),0.85-0.84(d,J＝6.72Hz,3H)；MS-ESI(m/z):478(M+H)+。

[0172] 生物实施例1

[0173] 体外抗HBsAg活性试验

[0174] 从2-8℃冰箱中取出HBsAg检测试剂盒(北京科美生物技术有限公司)，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释；将微孔板从密封袋中取出，设空白对照两孔，校准品孔，并根据设计的样本数量在板架上放好微孔板条；从-80℃冰箱取出收集6d上清液，除空白对照空外，其余孔分别加入50μL校准品或待测上清；除空白对照孔外，其余每孔加入酶标记物50μL；用微量振荡器振荡混匀5s，用封板膜封闭反应板，置37℃温育1h；每孔应加入350μL的洗涤液，洗板5次，每次浸泡10s，最后在干净的吸水纸上拍干；每孔加入化学发光底物工作液(两种发光底物等体积混匀)100μL，用微量振荡器振荡混匀5s；室温避光静置反应5min，立刻在EnVision多功能酶标仪上(PerkinElmer)依序测量各孔的发光值；根据标准品数值绘制标准曲线，计算每孔HBsAg含量。

[0175] 计算HBsAg的抑制率。

[0176]

[0177] 用Reed-Muench法计算IC50，并与RG7834(消旋体)作对照，结果见表1。

[0178] 生物实施例2

[0179] 体外抗HBV-DNA活性及细胞毒性试验

[0180] 1.细胞培养

[0181] Hep2.2.15细胞传代/种板/稀释药物用培养液：含10％胎牛血清(Gbico)、380μg/ml G418(Gibco)、青霉素和链霉素双抗100U/ml(Gibco)的MEM(Gibco)培养液。

[0182] Hep2.2.15细胞汇合度达90％时，培养瓶内加入0.25％胰酶-EDTA(Gibco)，37℃消化5分钟，弃掉胰酶，残液37℃继续消化5分钟，1:3传代，3-4天传代一次。

[0183] 2.化合物抗HBV药效测定

[0184] Hep2.2.15细胞接种于24孔板中，1×105个/孔，37℃、5％CO2中培养；24h后，将孔板中培养基弃去，加入完全培养基稀释的不同浓度药物。设置对照组(培养液不含药)和实验药物组(培养液含有不同浓度药物)。加药第3d更换一次相同培养液，给药6d后观察细胞毒性，然后收取细胞和上清，上清进行2000rpm离心10min后取上清液，保存于-80℃待测。

[0185] 2.1细胞毒性检测

[0186] 给药6d后，在倒置显微镜下观察各孔细胞的生长状态，不同给药浓度的细胞与正常细胞作对比，分别观察各给药孔细胞CPE，以细胞状态改变或死亡比例分别标记为4+(细胞死亡比例75％-100％)、3+(细胞死亡比例50％-75％)、2+(细胞死亡比例25％-50％)、1+(细胞死亡比例0-25％)和0+(细胞状态与对照组无差异)。用Reed-Muench法计算半数有毒浓度(TC50)，并与RG7834(消旋体)作对照，结果见表1。

[0187] 2.2细胞内HBV core DNA含量测定

[0188] 细胞裂解液配制：10mM Tris-HCl/pH＝8.0，1mM EDTA，1％NP40；

[0189] 细胞HBV core DNA提取：每孔加入300uL细胞裂解液，室温裂解5-10min，12000rpm离心5min；取上清，经过蛋白酶K(Sigma)作用、苯酚:氯仿:异戊醇抽提、无水乙醇沉淀核酸，最后用用20μL的ddH2O溶解沉淀即得到HBV core DNA，-20℃保存备用。

[0190] qPCR法对细胞内HBV core DNA测定和计算：使用试剂盒TransStart Tip Green qPCR SuperMix(北京全式金有限公司)在ABI7500Fast型高通量实时荧光定量PCR(qPCR)仪检测HBV core DNA含量，每个DNA样品重复测定2次。

[0191] HBV  core  DNA qPCR引物：5’-GGCTTTCGGAAAATTCCTATG-3’(上游)；5’-AGCCCTACGAACCACTGAAC-3’(下游)。

[0192] 反应体系如下所示：

[0193] Real-time PCR反应体系

[0194] 成分 加入量HBV上游引物(10μM) 0.2μL
HBV下游引物(10μM) 0.2μL
2×SYBR Green Reaction Mix 10μL
Rox Dye 0.2μL
DNA 1μL
去离子水 8.4μL
共计 20μL

[0195] 反应条件：20uL体系，94℃，30s，1个循环；94℃5s，60℃30s，40个循环。

[0196] 每个DNA样品平行进行两个反应。

[0197] 反应结束后，每个样品HBV core DNA相对于对照组的含量用ΔΔCt法进行计算，计算公式如下：

[0198] 相对含量(％)＝2^(HBV Ct对照组-HBV Ct药物组)×100％(HBV Ct对照组代表病毒对照组HBV core DNA的Ct值；HBV Ct药物组代表不同浓度药物组HBV core DNA的Ct值)。然后进行抑制率计算，最后用Reed-Muench法计算半数抑制浓度(IC50)，并与RG7834(消旋体)作对照，结果见表1。

[0199] 表1.部分实施例化合物的体外活性及细胞毒性

[0200]

[0201] NT:未测

[0202] 由表1可见，本申请的式(Ⅰ)化合物中的实施例1、3、4、9-13、15-17、20-22、25化合物对HBeAg的活性(IC50：0.0002-0.0046μM)大于RG7834(消旋体)(IC50：0.0055μM)，实施例3、4、8、9、11、12化合物对HBV-DNA的体外活性(IC50：0.0057-0.0101μM)大于RG7834(消旋体)(IC50：0.0102μM)，细胞毒性(CC50：>100μM)均小于RG7834(消旋体)(CC50：>50μM)。

[0203] 上述表中仅列举本发明部分化合物的体外活性及细胞毒性，本发明其他化合物结构相似，也具有和上述化合物相同或者相近的体外活性而细胞毒性更小，在此不一一列举。

[0204] 组合物实施例

[0205] 实施例1 包衣片

[0206] 片芯处方：

[0207]

[0208] 取上述成分混合均匀，制粒后过筛整粒，干燥、压片制成100片片芯。

[0209] 包衣液处方：欧巴代(Opadry)5g，80％乙醇适量包衣。

[0210] 实施例2 胶囊

[0211] 处方：

[0212]

[0213] 制备方法：

[0214] 取处方量原辅料，分别过筛，加入5％聚乙烯吡咯烷酮醇液和吐温80制软材，用20目筛制粒，在室温15℃下晾干，加入十二烷基硫酸钠，混合均匀，按0.27g/S装入0号胃溶胶囊，取样化验，溶出限度为Q＝80％，含量应为标示量的90～110％。

[0215] 实施例3 颗粒剂

[0216] 取实施例17的化合物100g，加入适量糊精、甜菊素，干式制粒，整粒，分装，即得。

[0217] 实施例4 注射剂

[0218] 取实施例19的化合物150g加水溶解，另氯化钠、对羟基苯甲酸乙酯加热水溶解，混匀，调pH值5-7。注射用水稀释至1000ml,用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，即得。

[0219] 实施例5 冻干粉针

[0220] 取实施例21的化合物150g加水溶解，另加甘露醇500g加热水溶解，混匀，注射用水稀释至5000ml,用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，冻干即得冻干粉针。

[0221] 实施例6 滴丸

[0222] 取实施例21的化合物20g作为原料药备用；称取滴丸基质200g，加热至80℃融化，搅拌均匀；边搅拌边将原料加入辅料基质中，搅拌30min使之均匀，保持药液温度不低于60℃；将配制好的药液注入滴丸机中，滴成滴丸，即可。

[0223] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。