一种基于SERS光谱技术的白血病融合基因检测方法

摘要

本发明构建一个特异性检测BCR‑ABL融合基因(b3a2)的生物传感器，能够实现超高灵敏度白血病融合基因定量检测。主要的技术思路是利用表面增强拉曼光谱（SERS）极高的检测灵敏度，通过组装二维SERS基底后利用融合基因DNA的互补配对将AgNPs与SERS基底上的银纳米球耦连起来形成纳米间隙，两个纳米球互相耦合导致纳米间隙中电磁场非常强，这样就可以构筑具有极强SERS效应的热点结构，进而使标记分子拉曼信号获得巨大增强，最终可以得到超高灵敏度的SERS光谱检测结果。该检测方法能够很好的解决目前临床上检测方法灵敏度低、特异性弱等问题，为准确诊断慢性髓系白血病提供一种简单、快速、有效的检测手段。

权利要求

1.一种基于SERS光谱技术的白血病融合基因检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）制备SERS基底

1‑1）合成表面带负电的AgNPs：利用还原剂柠檬酸钠还原硝酸银合成胶体银：将AgNO3溶液在剧烈搅拌下加热煮沸沸腾后加入柠檬酸钠；保持液体沸腾持续加热搅动60分钟，颜色变成黄绿色；

1‑2）制备表面羟基化的二氧化硅片：将二氧化硅片裁剪成4mm×4mm的大小，然后分别在丙酮、乙醇和超纯水中各超声10分钟；取出干燥后，将二氧化硅片浸泡在新鲜配制的食人鱼溶液中加热，冷却后，用超纯水清洗，放置晾干，即完成二氧化硅片的表面羟基化；

1‑3）完成硅烷偶联剂氨基基团的质子化：取硅烷偶联剂分散在乙醇中，然后将表面羟基化的二氧化硅片浸泡在该溶液，取出后用大量水清洗取出未修饰上的硅烷偶联剂，将上述二氧化硅片晾干后放入超纯水中浸泡，即可完成硅烷偶联剂氨基基团的质子化；

1‑4）组装基底：取步骤1‑1）中新合成表面带负电的银纳米粒子，将质子化后的二氧化硅片浸泡在里面，取出用超纯水清洗，即可得到SERS基底；

2）合成表面带正电的AgNPS

取AgNO3溶液90ml，放入到锥形瓶中搅拌；分别取盐酸羟胺和氢氧化钠混合后迅速加入到AgNO3溶液中，锥形瓶中溶液由无色变为灰色；

3）SERS检测传感器的组装

3‑1）将信号序列和捕获序列分别与表面带正电的AgNPs和SERS基底特异性结合，具体如下：分别取捕获序列和信号序列放入到TCEP溶液和Tris‑HCl缓冲液的混合溶液中来活化巯基；反应1小时后，用捕获序列溶液浸泡二氧化硅SERS基底，将信号序列溶液与一定量带正电AgNPs混合，同时在室温下静置过夜，再分别加入6‑巯基‑1‑己醇反应，然后用大量水分别清洗除去未特异性结合的序列，即完成巯基的修饰；

3‑2）完成SERS检测传感器的组装：将修饰有信号序列的带正电AgNPs溶液加入到二氧化硅SERS基底中，加入不同浓度的目标序列，反应后，清洗二氧化硅SERS基底，常温干燥后为接下来的SERS测量做准备；

捕获序列、信号序列和目标序列的碱基序列如下：捕获序列：

5’‑SH‑TTTTTCCCAACCCAACCCTCCTTGGAGTTCCAACGAGCGGCTTCACTCAGACCCTGAGGCTCAAAGTCAGATGCTACTGGCCGCTGAAGGGCTT‑3’；

（2）信号序列：5’‑ Cy5‑TTGAACTCTGCTTAAATC‑SH‑3’;（3）目标序列：

GATTTAAGCAGAGTTCAA融合点AAGCCCTTCAGCGGCCAGTAGCATCTGACTTTGAGCCTCAGGGTCTGAGTGAAGCCGCTCGTTGGAACTCCAAGGAGGGTTGGGTTGGGAAAAA。

2.根据权利要求1所述的一种基于SERS光谱技术的白血病融合基因检测方法，其特征在于：

1）制备SERS基底

1‑1）合成表面带负电的AgNPs：利用还原剂柠檬酸钠还原硝酸银合成胶体银：将体积为

100mL，浓度是1mM的AgNO3溶液在剧烈搅拌下加热煮沸沸腾后加入3mL的质量分数为1%柠檬酸钠；保持液体沸腾持续加热搅动60分钟，颜色变成黄绿色；

1‑2）制备表面羟基化的二氧化硅片：将二氧化硅片裁剪成4mm×4mm的大小，然后分别在丙酮、乙醇和超纯水中各超声10分钟；取出干燥后，将二氧化硅片浸泡在新鲜配制的食人鱼溶液中，并加热到150℃保持30分钟；冷却后，用超纯水清洗，放置晾干，即完成二氧化硅片的表面羟基化；

所述食人鱼溶液为浓硫酸和30%过氧化氢的7:3比例下的混合液；

1‑3）完成硅烷偶联剂氨基基团的质子化：取150μL硅烷偶联剂分散在150mL的乙醇中，然后将表面羟基化的二氧化硅片浸泡在该溶液中12h，取出后用大量水清洗取出未修饰上的硅烷偶联剂；将上述二氧化硅片晾干后放入超纯水中浸泡8h，即可完成硅烷偶联剂氨基基团的质子化；

1‑4）制备基底：取步骤1）新合成的银纳米粒子370μL，将质子化后的二氧化硅片浸泡在里面4h，取出用超纯水清洗，即可得到SERS基底；

2）合成表面带正电的AgNPS

‑3 ‑2

取浓度为1.1×10 mol/L的AgNO3溶液90ml，放入到锥形瓶中搅拌；分别取6×10 mol/L盐酸羟胺5ml，0.1mol/L氢氧化钠4.5ml，两者混合后迅速加入到90ml AgNO3溶液中，锥形瓶中溶液由无色变为灰色；

3）SERS检测传感器的组装

3‑1）分别取20μL 1 μM的捕获序列和20 μL 1μM 信号序列放入到20μL的5mM的TCEP溶液和50μL 1M  ,pH=7 .4的Tris‑HCl缓冲液的混合溶液中来活化巯基；反应1小时后，用捕获序列溶液浸泡二氧化硅SERS基底，将信号序列溶液与带正电AgNPs混合，同时在室温下静置过夜，再分别加入20μL 1 μM 6‑巯基‑1‑己醇反应3h，然后用大量水分别清洗除去未特异性结合的序列，即完成巯基的修饰；

3‑2）将修饰有信号序列的带正电AgNPs溶液加入到二氧化硅SERS基底中，加入不同浓度的目标序列，反应4h后，清洗二氧化硅SERS基底，常温干燥后为接下来的SERS测量做准备。

说明书

一种基于SERS光谱技术的白血病融合基因检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于生物医学白血病基因检测领域，具体涉及一种基于SER技术实现白血病融合基因（b3a2）超灵敏检测的方法。

背景技术

[0002] 近年来，全球白血病发病率逐年上升，其中在美国，白血病的发病率排在所有癌症发病率的第八位。在我国，白血病在男性发病率排名第八位，在青少年群体发病率和死亡率
排名第一。目前，医学上根据白血病细胞分化程度分为急性和慢性白血病。慢性髓系白血病
(CML)是慢性白血病的一种，它的病理形成机制是位于人体第9号和第22号染色体长臂之间
的Philadelphi染色体发生易位。具体的分子机制是位于正常人体的9号染色体长臂的ABL
基因和位于正常人体的22号染色体BCR基因在染色体易位后发生重组产生BCR‑ABL融合基
因。其中，ABL基因，也被称为ABL1基因，是一种原癌基因，在肿瘤细胞中会和多种基因产生
融合，其中和BCR基因融合是最常见的一种。它编码的酪氨酸激酶类蛋白分布在细胞核和细
胞质中，这类蛋白与细胞的分化、分裂和信息传递等紧密相关。ABL基因编码的蛋白具有特
殊的激酶活性，结合外界因素诱导细胞发生代谢紊乱进而发展成癌症。BCR基因编码丝氨
酸/苏氨酸激酶类似物。BCR基因和ABL基因融合后形成的融合基因所表达的产物有很强的
酪氨酸激酶活性，该融合基因能够使细胞的相关蛋白质酪氨酸磷酸化程度发生变化，同时
构成细胞骨架的微丝肌动蛋白性能也会发生变化，细胞内的信号传递也会受到干扰，同时
细胞凋亡受到抑制，细胞周期发生变化，细胞分裂变强，细胞的存活时间变长。数据显示，超
过90%的慢性髓系白血病的血细胞中都有BCR‑ABL融合基因的存在，因此，BCR‑ABL融合基因
可以作为临床上的对慢性髓系白血病的诊断标准。目前临床上检测BCR‑ABL融合基因的方
法包括染色体检测、荧光原位杂交 (FISH) 技术、实时定量RT‑PCR技术、巢式RT‑PCR和基因
芯片技术等，但是这些技术方法受限于灵敏度低、消耗时间长、需要较高的操作要求以及容
易出现假阳性结果等原因。

[0003] 表面增强拉曼散射(SERS)自问世以来，受到许多领域科学家的关注，主要是因为SERS光谱检测灵敏度高，特异性强，谱峰的半峰宽较窄且能够提供丰富的分子指纹信息，损
害低，耗时短、操作简便且携带方便。目前，SERS已经广泛应用于疾病诊断、毒品检测、食品
安全、材料表征等领域。我们小组最近也在SERS光谱疾病诊断方面做了许多研究工作。通常
认为，SERS对待测物的信号增强机制来源于物理增强和化学增强，且物理增强贡献绝大部
分。贵金属纳米材料因为具有表面等离激元共振效应而常常作为SERS信号增强基底，其中
银纳米材料的等离激元共振效应较强且在实际应用中较多。研究发现，SERS效应最强的位
置位于纳米颗粒之间的间隙，称为“热点”。合理的利用和构筑“热点”是当前SERS研究的前
沿问题，也是推进SERS在更多领域应用的基础。一般认为，纳米材料对SERS信号增强效果的
影响主要通过以下几个方面：颗粒的尺寸、形貌、分散性、均匀性以及与待测物的结合方式
等。因此，一种易制得的、重现性好、灵敏度高、稳定性强和经济的SERS基底一直是从事SERS
研究人员所追求的目标，同时也是阻碍推广到更多领域应用所面临的关键问题。

发明内容

[0004] 相较于上述临床上检测BCR‑ABL融合基因的方法，SERS刚好可以解决它们所面临的一些问题。本发明中，首先合成带负电的银纳米粒子(AgNPs)，同时用硅烷偶联剂修饰羟
基化的二氧化硅片，然后将硅片放入水中质子化，再将带负电的AgNPs组装在二氧化硅片
上。接着，再合成带正电的AgNPs，将与BCR‑ABL融合基因的互补序列两段分别组装在二氧化
硅片SERS基底上和带正电的AgNPs，组装在带正电的AgNPs的DNA片段修饰有Cy5拉曼标记分
子。当目标序列BCR‑ABL融合基因出现时，拉曼标记分子Cy5刚好位于两个银纳米球形成的
“热点”位置，设置不同浓度的BCR‑ABL融合基因(b3a2)标样，根据拉曼标记分子Cy5的SERS
光谱强度变化可以实现BCR‑ABL融合基因(b3a2)的高灵敏定量检测。

[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

[0006] 一种基于SERS技术实现白血病融合基因（b3a2）检测的方法，包括如下步骤：

[0007] 1）制备SERS基底

[0008] 1‑1）合成表面带负电的AgNPs：利用还原剂柠檬酸钠还原硝酸银合成胶体银：将体积为100mL，浓度是1mM的AgNO3溶液在剧烈搅拌下加热煮沸沸腾后加入3mL的质量分数为1%
柠檬酸钠。保持液体沸腾持续加热搅动60分钟，颜色变成黄绿色

[0009] 1‑2）制备表面羟基化的二氧化硅片：将二氧化硅片裁剪成4mm×4mm的大小，然后分别在丙酮、乙醇和超纯水中各超声10分钟。取出干燥后，将二氧化硅片浸泡在新鲜配制的
食人鱼溶液（浓硫酸和30%过氧化氢的7:3比例下的混合液）中，并加热到150℃保持30分钟。
冷却后，用超纯水清洗，放置晾干，即完成二氧化硅片的表面羟基化。

[0010] 1‑3）完成硅烷偶联剂氨基基团的质子化：取150μL硅烷偶联剂分散在150mL的乙醇中，然后将表面羟基化的二氧化硅片浸泡在该溶液中12h，取出后用大量水清洗取出未修饰
上的硅烷偶联剂。将上述二氧化硅片晾干后放入超纯水中浸泡8h，即可完成硅烷偶联剂氨
基基团的质子化。

[0011] 1‑4）制备基底：取步骤1）新合成的银纳米粒子370μL，将质子化后的二氧化硅片浸泡在里面4h，取出用超纯水清洗，即可得到SERS基底。

[0012] 2）合成表面带正电的AgNPS

[0013] 取浓度为1.1×10‑3mol/L的AgNO3溶液90ml，放入到锥形瓶中搅拌。分别取6×10‑2
mol/L盐酸羟胺5ml，0.1mol/L氢氧化钠4.5ml，两者混合后迅速加入到90mlAgNO3溶液中，锥
形瓶中溶液由无色变为灰色。

[0014] 3）SERS检测传感器的组装

[0015] 3‑1) 分别取20μL 1 μM的捕获序列和20 μL 1μM 信号序列放入到20μL的TCEP（5mM）和50μL Tris‑HCl缓冲液(1M,PH=7.4)的混合溶液中来活化巯基。反应1小时后，用捕
获序列溶液浸泡二氧化硅SERS基底，将信号序列溶液与一定量带正电AgNPs混合，同时在室
温下静置过夜，再分别加入20μL 1 μM 6‑巯基‑1‑己醇反应3h，然后用大量水分别清洗除去
未特异性结合的序列，即完成巯基的修饰。

[0016] 3‑2) 将修饰有信号序列的带正电AgNPs溶液加入到二氧化硅SERS基底中，加入不同浓度的目标序列，反应4h后，清洗二氧化硅SERS基底，常温干燥后为接下来的SERS测量做
准备。

[0017] 捕获序列、信号序列和目标序列的碱基序列如下：

[0018] （1）捕获序列：

[0019] 5’‑SH‑TTTTTCCCAACCCAACCCTCCTTGGAGTTCCAACGAGCGGCTTCACTCAGACCCTGAGGCTCAAAGTCAGATGCTACTGGCCGCTGAAGGGCTT‑3’；

[0020] （2）信号序列:

[0021] 5’‑ Cy5‑TTGAACTCTGCTTAAATC‑SH‑3’;

[0022] （3）目标序列：

[0023] GATTTAAGCAGAGTTCAA（融合点）AAGCCCTTCAGCGGCCAGTAGCATCTGACTTTGAGCCTCAGGGTCTGAGTGAAGCCGCTCGTTGGAACTCCAAGGAGGGTTGGGTTGGGAAAAA。

[0024] 本发明的有益效果在于：本发明利用二氧化硅作为基板，采用带负电的银纳米粒子（AgNPs）作为表面增强拉曼散射检测的基底，经过后续处理形成一个特异性检测BCR‑ABL
融合基因（b3a2）的生物传感器。利用硅烷偶联剂修饰二氧化硅片，并使其质子化，吸附合成
的带负电的银纳米粒子，最终通过银和氨基行成化学键牢固组装在二氧化硅片上构建二维
SERS基底。将信号链和捕获链分别修饰在带正电的AgNPs和SERS基底上，加入带有Cy5拉曼
标记分子的信号链后，三段链结合在一起形成一个SERS检测传感器，通过检测Cy5的拉曼光
谱信号实现对BCR‑ABL融合基因(b3a2)定量检测。同时，DNA的互补配可以将带正电的AgNPs
与SERS基底上的AgNPs耦合起来与Cy5拉曼标记分子形成类似三明治结构纳米间隙，构筑具
有极强SERS效应的“热点”结构，使等离激元共振的效果显著增强，进而使处于热点结构中
的标记分子拉曼信号获得巨大增强，最终得到高灵敏SERS光谱检测结果。

附图说明

[0025] 图1为SERS光谱检测BCR‑ABL融合基因的实验示意图。

[0026] 图2为带负电和带正电的AgNPs的紫外‑可见吸收光谱及扫描电镜图；其中，（A）为带负电与带正电的AgNPs的紫外‑可见吸收光谱，（B）为带负电的AgNPs的透射图，（C）为带正
电的AgNPs的TEM图谱。

[0027] 图3为组装有带负电AgNPs的二氧化硅片的扫描电镜图。

[0028] 图4为R6G溶液SERS光谱检测的结果；其中（A）为点滴法与浸泡法测R6G的SERS光‑1
谱，（B）为点滴法检测测R6GSERS光谱611 cm 峰值强度变化，（C）浸泡法检测测R6G SERS光
‑1
谱611 cm 峰值强度变化。

[0029] 图5为BCR‑ABL融合基因(b3a2)的SERS光谱定量检测结果；其中（A）为不同浓度的BCR‑ABL融合基因(b3a2) SERS谱图，（B）为Lg(CTarget)和谱峰强度之间的线性关系。

具体实施方式

[0030] 以下将结合具体实施例与附图对本发明做进一步说明。

[0031] 1.试剂

[0032] 硝酸银(AgNO3)、盐酸羟胺(HO‑NH2•HCl)、硫酸(H2SO4)、无水乙醇、盐酸(HCl)购于国药集团化学试剂有限公司，硅烷偶联剂（γ‑氨丙基三乙氧基硅烷）购于山东优索化工科
技有限公司，二水合柠檬酸三钠(Na3C6H5O7.2H2O)、氢氧化钠(NaOH)、30%过氧化氢(H202)购
于西陇科学股份有限公司，4‑氨基苯硫酚(4‑ATP)、三（2‑羧乙基）膦(TCEP)、三羟甲基氨基
甲烷(Tris)购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，6‑巯基‑1‑己醇(MCH)购于百灵威科技
有限公司，罗丹明6G(R6G)购买于Sigma公司，二氧化硅片购于江苏飞舟玻塑有限公司,本实
验用到的DNA序列购于上海生工生物工程股份有限公司。所有试剂都为分析级，未进一步纯
化。

[0033] 2.表面带负电AgNPs合成

[0034] 采用Lee和meisel(Lee P C, Meisel D. Adsorption and surface‑enhanced Raman of dyes on silver and gold sols[J]. The Journal of Physical Chemistry, 
1982, 86(17): 3391‑3395.)等制备胶体银的方法，利用还原剂柠檬酸钠还原硝酸银合成
胶体银。本发明体积为100mL，浓度是1mM的AgNO3溶液在剧烈搅拌下加热煮沸沸腾后加入
3mL的质量分数为1%柠檬酸钠。保持液体沸腾持续加热搅动60分钟，颜色变成黄绿色。

[0035] 3.SERS基底的制备

[0036] 1) 将二氧化硅片裁剪成4mm×4mm的大小，然后分别在丙酮、乙醇和超纯水中各超声10分钟。取出干燥后，将二氧化硅片浸泡在新鲜配制的食人鱼溶液（浓硫酸和30%过氧化
氢的7:3比例下的混合液）中，并加热到150℃保持30分钟。冷却后，用超纯水清洗，放置晾
干，即完成二氧化硅片的表面羟基化。

[0037] 2) 取150μL硅烷偶联剂（γ‑氨丙基三乙氧基硅烷）分散在150mL的无水乙醇中，然后将表面羟基化的二氧化硅片浸泡在该溶液中12h，取出后用大量水清洗取出未修饰上的
硅烷偶联剂。

[0038] 3) 将上述二氧化硅片晾干后放入超纯水中浸泡8h，完成硅烷偶联剂氨基基团的质子化。取步骤2新合成的表面带负电的银纳米粒子370μL，将质子化后的二氧化硅片浸泡
在里面4h，取出用超纯水清洗。

[0039] 4.表面带正电AgNPS合成

[0040] 取浓度为1.1×10‑3mol/L的AgNO3溶液90ml，放入到锥形瓶中搅拌。分别取6×10‑2
mol/L盐酸羟胺5ml，0.1mol/L氢氧化钠4.5ml，两者混合后迅速加入到90mlAgNO3溶液中，锥
形瓶中溶液由无色变为灰色。

[0041] 5.SERS检测传感器的组装

[0042] 1) 分别取20μL 1 μM的捕获序列和20 μL 1μM 信号序列放入到20μL的TCEP（5mM）和50μL Tris‑HCl缓冲液的混合溶液中来活化巯基。反应1小时后，用捕获序列溶液浸泡二
氧化硅SERS基底，将信号序列溶液与500μL带正电AgNPs混合，同时在室温下静置过夜。

[0043] 2) 分别加入20μL 1 μM6‑巯基‑1‑己醇反应3h，然后用大量水分别清洗除去未特异性结合的序列，即完成巯基的修饰。将修饰有信号序列的带正电AgNPs溶液加入到二氧化
‑6 ‑12
硅SERS基底中，加入不同浓度的目标序列（10 到10 七个浓度梯度的BCR‑ABL融合基因
(b3a2)的标样），反应4h后，清洗二氧化硅SERS基底，常温干燥后进行拉曼光谱检测。所用拉
曼光谱仪为Renishaw inVia Raman microscope (Renishaw plc, UK)，激光是波长为
785nm半导体激光器。

[0044] 捕获序列、信号序列和目标序列的碱基序列如下：

[0045] （1）捕获序列：

[0046] 5’‑SH‑TTTTTCCCAACCCAACCCTCCTTGGAGTTCCAACGAGCGGCTTCACTCAGACCCTGAGGCTCAAAGTCAGATGCTACTGGCCGCTGAAGGGCTT‑3’；

[0047] （2）信号序列:

[0048] 5’‑ Cy5‑TTGAACTCTGCTTAAATC‑SH‑3’;

[0049] （3）目标序列：

[0050] GATTTAAGCAGAGTTCAA（融合点）AAGCCCTTCAGCGGCCAGTAGCATCTGACTTTGAGCCTCAGGGTCTGAGTGAAGCCGCTCGTTGGAACTCCAAGGAGGGTTGGGTTGGGAAAAA。

[0051] 本发明通过紫外‑可见吸收光谱和扫描电镜来表征合成的带负电和带正电的AgNPs。图2（A）是带负电的AgNPs的紫外－可见吸收光谱，其等离激元共振峰的位置在
412nm，而带正电的AgNPs的离激元共振峰的位置在423nm。从TEM图中可以看到，带负电的
AgNPs平均粒径在77±5nm（图2B），带正电AgNPs平均粒径在27±10nm（图2C）。

[0052] 由于硅烷偶联剂修饰在二氧化硅片上后，有一个氨基暴露在外面，质子化处理后使得二氧化硅片表面带正电，与带负电的AgNPs相互吸引，最后与氨基成键，提高了组装的
效率。从图3中可以看出，带负电的AgNPs均匀的组装在二氧化硅片上，由于带负电的AgNPs
之间相互排斥，粒子间分散排列，保持着一定的间距，粒子聚集较少，同时整个二氧化硅片
上粒子组装的密度大。

[0053] 为了使本发明中的得到的实验数据更具可靠性和重复性，我们对使用两种方法测试得到的罗丹明(R6G) SERS光谱进行比较。使用制备好的二氧化硅SERS基底，分别采取浸
‑6
泡和点滴两种方法检测10 mol/L的R6G，最后R6G溶液SERS光谱检测的结果如图4所示。图4
（A）中，黑色曲线是点滴的方法得到的SERS光谱，红色曲线是浸泡的方法得到的R6G溶液
SERS光谱，每个光谱是取自十个随机点的平均值。图4（B）是点滴法中随机取十个点R6G溶液
‑1
SERS光谱对应的611cm 峰值强度变化，图4（C）是浸泡法中随机取十个点R6G溶液SERS光谱
‑1 ‑1
对应的611 cm 峰值强度变化情况，其中611cm 峰值可归属为C‑C‑C环的面内弯曲振动模
型。综合图4 中的三张数据图，虽然点滴法的谱峰强度更强，但是从相对标准偏差(RSD)上
分析，滴法受到“咖啡环”效应的影响较大，而浸泡法受到“咖啡环”效应的影响较小。所以本
研究后续数据采用的都是浸泡法。同时，RSD数据上也验证了本研究中SERS基底较好的均匀
性和重现性。

[0054] 本研究取了10‑6到10‑12七个浓度梯度的BCR‑ABL融合基因(b3a2)的标样，进行BCR‑‑1
ABL融合基因(b3a2)的SERS光谱定量检测，得到结果如图5所示。选取691cm 波数位置的
Cy5SERS光谱特征峰与目标链浓度进行线性拟合，得到拉曼信号强度I与目标链浓度的对数
Lg(C‑Target)之间的线性关系：

[0055] I=5.9832×10‑4Lg(C‑Target)+0.00822，经计算，这种检测方法的检测限(LOD)可达‑5 ‑6
到42.28fM，而据报道称实时荧光定量PCR检测方法的检测限为10 10  M，相比较下我们
~
的方法检测限提高了8个数量级。所以本方法可以实现BCR‑ABL融合基因(b3a2)超灵敏SERS
光谱检测。