一种野生杜衡组织培养繁殖方法转让专利
申请号 : CN201910946938.5
文献号 : CN110786239B
文献日 : 2022-01-21
发明人 : 黄婧 , 陈庆生 , 张子鸣 , 张敏 , 周鹏 , 蒋泽平
申请人 : 江苏省林业科学研究院
摘要 :
权利要求 :
1.一种野生杜衡组织培养繁殖方法,其特征在于:步骤如下:(1)选材及消毒处理:选取生长健壮、无病虫害的野生杜衡植株,然后进行消毒处理;
(2)无菌苗培养:在超净工作台上和无菌条件下,将步骤(1)中消毒处理后的外植体剪去接触消毒液的伤口部位,留1 2 cm带芽茎段接种在含有诱导培养基的培养瓶中,其置于~
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白色荧光灯为光源的环境下,控制光量40 μmol·m ·s ,设定光照时间12 h·d ,温度(25±1)℃,培养25天,长成4 6 cm的无菌苗;所述诱导培养基为:WPM + 0.05 mg/L NAA+ ~
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30 g·L 蔗糖+ 6.3 g·L 卡拉胶,pH值为5.8;
(3)增殖和生根培养:将步骤(2)中长成的组培苗,剪切成长度为1.5 2.0 cm带有1 2个~ ~
腋芽的茎段,转接到增殖培养基中进行增殖培养;增殖培养基为:WPM + 0.1 mg/L NAA + ‑1 ‑1
1.00 mg/L 6‑BA + 30 g·L 蔗糖+ 6.3 g·L 卡拉胶,pH值为5.8,在该培养基中同时可获得健壮的生根苗。
2.根据权利要求1所述的野生杜衡组织培养繁殖方法,其特征在于: 所述步骤(1)中取材后,移至日光温室盆栽养护1 2个月,选取带芽的根状茎,置于流水中冲洗40min,再用中~
性肥皂水洗刷根状茎的表面,然后用无菌水冲洗干净后,将所选取的外植体剪切成2 4 cm~
长的带芽茎段,经70%的酒精消毒10 s,再用0.1%的升汞消毒30分钟,最后用无菌水冲洗5次,所述带芽的根状茎为带有腋芽的短节间且下端集生肉质根,茎段有1 2叶。
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3.根据权利要求1所述的野生杜衡组织培养繁殖方法,其特征在于: WPM基本培养基由常量元素、微量元素、铁盐和有机成分组成。
4.根据权利要求3所述的野生杜衡组织培养繁殖方法,其特征在于: 所述WPM基本培养基中,
所述的常量元素为: NH4NO3 400 mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556 mg/L、CaCl2·2H2O 96 mg/L、MgSO4·7H2O 370 mg/L、KH2PO4 170 mg/L、K2SO4 990 mg/L。
5.根据权利要求3所述的野生杜衡组织培养繁殖方法,其特征在于: 所述的微量元素为: MnSO4·H2O 22.3 mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L、H3BO3 6.2 mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25 mg/L、CuSO4·5H2O 0.025 mg/L、CoCl2·6 H2O0.025 mg/L。
6.根据权利要求3所述的野生杜衡组织培养繁殖方法,其特征在于: 所述的铁盐为: Na2·EDTA 37.3 mg/L、FeSO4·7H2O 27.8 mg/L。
7.根据权利要求3所述的野生杜衡组织培养繁殖方法,其特征在于: 所述的有机成分为:肌醇100 mg/L、甘氨酸2 mg/L、盐酸硫胺素1 mg/L、盐酸吡哆醇0.5 mg/L、烟酸0.5 mg/L。
说明书 :
一种野生杜衡组织培养繁殖方法
技术领域
背景技术
的中草药,有祛风散寒,消痰行水,活血止痛,解毒等功效;也是国家二级保护动物中华虎凤
蝶的幼虫赖以生存的唯一食物。近年来,由于山林过度开发,采药人和“蝶商”们的过度采
伐,野生杜衡越来越少,野生虎凤蝶数量也越来越少。保护杜衡野生种质资源迫在眉睫。采
用组培技术繁殖杜衡,能够在短时间内获得大量种苗,并且保持母株的优良性状,后代遗传
整齐,符合中药材生产管理规范;同时也能为虎凤蝶提供寄主植物和幼虫食物,既有经济应
用价值也有环保生态价值。
学院学报(自然科学版) 2000, 13(3):310‑312.,外源激素对杜衡叶柄愈伤组织诱导与分
化的影响. 植物资源与环境学报 2010, 19(1):38‑42.)和带腋芽茎段或顶芽(杜衡的组织
培养. 植物生理学报 2004, 40(4):454.)作为外植体进行组培试验,但是叶柄愈伤组织诱
导后分化不定芽的系数,经愈伤组织诱导产生的不定芽,变异较多,继代培养代数的增加一
般会提高植株变异率,其繁殖系数较低,未见其大规模繁育的报道。
发明内容
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表面,然后用无菌水冲洗干净后,将所选取的外植体剪切成2 4 cm长的带芽茎段,经70%的
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酒精消毒10 s,再用0.1%的升汞消毒30分钟,最后用无菌水冲洗5次。
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置于白色荧光灯为光源的环境下,控制光量40 μmol·m ·s ,设定光照时间12 h·d ,温
度(25±1)℃,培养25天,长成4 6 cm的无菌苗;
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增殖培养基的培养瓶中进行增殖培养,培养40天既为一个继代周期,增殖系数为4 4.5倍;
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在该培养基中同时可获得健壮的生根苗,生根率100%。
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培养室内进行,其培养条件为:控制光量40 μmol·m ·s ,设定光照时间12 h·d ,温度
(25±1)℃。
g·L 卡拉胶,pH值为5.8。
g·L 蔗糖+ 6.3 g·L 卡拉胶,pH值为5.8。
技术意义。
了一种可参照的技术和方法。本发明具有以下优点:
以及快速高效的繁殖。
规的组织培养方法相比,增殖倍数提高了约1‑2倍,本发明利用杜衡球状茎为外植体,相比
根、叶、花、种子等其他器官的组织培养,使得茎尖组织具有更强的分化能力,繁殖效率高;
同时,通过特定的培育条件结合特定的诱导培养基和增殖培养基的培养,特别是在特定诱
导培养基和诱导条件结合下针对根状茎的诱导,诱导效果好,相比愈伤组织诱导的不定芽,
后代植株变异少,进一步提高繁殖率,有利于杜衡良种的繁育。
药材生产管理规范。
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生根率达到100%,在杜衡苗木生产及科研中均具有重要的应用价值。
具体实施方式
酸镁(MgSO4·7H2O)370 mg/L、磷酸二氢钾(KH2PO4)170 mg/L、硫酸钾(K2SO4)990 mg/L;
铜(CuSO4·5H2O)0.025 mg/L、硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.025 mg/L、氯化钴(CoCl2.6 H2O)0.025
mg/L;
卡拉胶,pH值为5.8。
蔗糖+ 6.3 g·L 卡拉胶,pH值为5.8。
为120‑125 ℃,压力为1.1 KG/CM。
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状茎的表面,然后将所选取的外植体剪切成2 4 cm长的带芽茎段,经70%的酒精消毒10 s,
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再用0.1%的升汞消毒30分钟,最后用无菌水冲洗5次;
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置于白色荧光灯灯为光源的环境下,控制光量40 μmol·m ·s ,设定光照时间12 h·d ,
温度(25±1)℃,培养18天,长成4 6 cm的无菌苗;经过诱导培养基的培养,外植体的诱导率
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明显高于传统的愈伤组织诱导的不定芽,其诱导效果提高30%以上。
2个腋芽的茎段,转接到增殖培养基中进行增殖培养,在该培养基中同时可获得健壮的生
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根苗,可以省去专门的壮苗培养和生根培养阶段,一个周期40天的繁殖倍数为4.2倍,生根
率达到100%,并对存活的植株后期生长进行进一步观察,后代植珠保持母株优良性状,无明
显变异情况。