长链非编码RNA XLOC_025806及其在人脐静脉内皮细胞中的应用

摘要

本发明公开了一种长链非编码RNA XLOC_025806及其在人脐静脉内皮细胞中的应用。本发明检通过基因工程技术外源合成lncRNA XLOC_025806的超表达载体和沉默试剂lncRNA XLOC_025806 Silencer，检测超表达/沉默lncRNA XLOC_025806后人脐静脉内皮细胞的增殖、凋亡情况，结果证实了lncRNA XLOC_025806能够参与抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进内皮细胞体外小管的形成，进一步说明lncRNA XLOC_025806通过调控人脐静脉内皮细胞的功能参与血管新生过程。

权利要求

1.一种长链非编码RNA XLOC_025806，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种抑制权利要求1所述长链非编码RNA XLOC_025806功能的沉默试剂，其特征在于：所述的沉默试剂为lncRNA XLOC_025806 Silencer，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种含有权利要求1所述的长链非编码RNA XLOC_025806的cDNA序列的重组表达载体。

4.一种重组细胞，其特征在于：为将权利要求3所述的重组表达载体或权利要求2所述的沉默试剂转染至人脐静脉内皮细胞中。

5.权利要求1所述的长链非编码RNA XLOC_025806或权利要求2所述的抑制长链非编码RNA XLOC_025806功能的沉默试剂在人脐静脉内皮细胞中的应用，其特征在于：所述应用的环境为体外环境；

所述的长链非编码RNA XLOC_025806抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管；

所述的抑制长链非编码RNA XLOC_025806功能的沉默试剂促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，并抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管为通过增加外源性长链非编码RNA XLOC_025806的方式实现；

所述的促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，并抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管为通过转入外源性lncRNA XLOC_025806 Silencer的方式实现。

7.权利要求1所述的长链非编码RNA XLOC_025806在制备抑制人脐静脉内皮细胞的增殖，促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，和/或促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的药物中含有长链非编码RNA XLOC_025806的序列和/或含有重组表达载体；

所述的重组表达载体含有长链非编码RNA XLOC_025806的cDNA序列。

9.权利要求2所述的抑制长链非编码RNA XLOC_025806功能的沉默试剂在制备促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，和/或抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的药物中含有lncRNA XLOC_025806 Silencer的序列。

说明书

长链非编码RNA XLOC_025806及其在人脐静脉内皮细胞中的

应用

技术领域

[0001] 本发明属于细胞工程和基因工程技术领域，具体涉及一种长链非编码RNA XLOC_025806及其在人脐静脉内皮细胞中的应用。

背景技术

[0002] 血管新生(Angiogenesis)指的是新生的血管从已有的毛细血管或毛细血管后静脉发展而来，主要包括血管内皮细胞的增殖、出芽和迁移，它是一种十分复杂的生物过程，
这个过程取决于基因表达的微妙调节，也需要多种因子共同参与。

[0003] 人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs)是由一层扁平细胞所组成的专门上皮细胞，它可形成血管的内壁。内皮细胞具有多种生物学功能，
其中包括血管再生、动脉硬化、控制血管收缩和舒张等等。内皮细胞具有干细胞的潜能，理
论上可传50～60代，与血管新生具有十分重要的联系，即内皮细胞的自我增殖能力可直接
影响血管新生，因此它是研究血管形成的理想细胞。

[0004] 长链非编码RNA(Long non‑coding RNA，lncRNA)是一类长度超过200nt的非编码RNA。研究表明，lncRNA广泛参与生物过程，可以从表观修饰水平，转录水平和转录后水平参
与基因的表达调控，进而在细胞的增殖、分化、存活和转移过程产生重要作用。但目前国内
外尚无关于lncRNA XLOC_025806的表达变化对人脐静脉内皮细胞功能调节的相关报道。

发明内容

[0005] 本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种长链非编码RNA XLOC_025806。

[0006] 本发明的另一目的在于提供一种抑制lncRNA XLOC_025806功能的沉默试剂。

[0007] 本发明的再一目的在于提供所述的长链非编码RNA XLOC_025806或抑制lncRNA XLOC_025806功能的沉默试剂在人脐静脉内皮细胞中的应用。通过基因工程技术改变
lncRNA XLOC_025806在人脐静脉内皮细胞中的表达量，确定其在调控人脐静脉内皮细胞增
殖、凋亡及血管形成中的应用。

[0008] 本发明的目的通过下述技术方案实现：

[0009] 一种长链非编码RNA XLOC_025806(lncRNA XLOC_025806)，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

[0010] 一种抑制所述长链非编码RNA XLOC_025806功能的沉默试剂，为lncRNA XLOC_025806Silencer，其核苷酸序列如下所示(SEQ ID NO：2)：

[0011] GAGACGAATTATCAAATACCACTTGGATTGAACACTGATGAAGCAAGCATGGATTGACTTCAGCCACAGCAACCCAGACCATTTTCTTTCACCCACCAACCCTAGCCTTTACTGACC。

[0012] 一种含有所述长链非编码RNA XLOC_025806的重组表达载体。

[0013] 一种重组细胞，为将上述重组表达载体或上述抑制长链非编码RNA XLOC_025806功能的沉默试剂转染至人脐静脉内皮细胞中。

[0014] 所述的长链非编码RNA XLOC_025806或所述的抑制所述长链非编码RNA XLOC_025806功能的沉默试剂在人脐静脉内皮细胞中的应用，所述应用的环境为体外环境。

[0015] 所述的长链非编码RNA XLOC_025806抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管，lncRNA XLOC_025806通过调
控人脐静脉内皮细胞的功能参与血管新生过程。

[0016] 所述的抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管为通过增加外源性长链非编码RNA XLOC_025806的方式实
现。

[0017] 所述的增加外源性长链非编码RNA XLOC_025806通过如下方式实现：将长链非编码RNA XLOC_025806连接到pcDNA3.1(‑)载体上，构建长链非编码RNA XLOC_025806的超表
达载体，然后将其转染到人脐静脉内皮细胞中。

[0018] 所述的长链非编码RNA XLOC_025806的超表达载体优选为通过如下方法构建得到：以人脐静脉内皮细胞cDNA为模板，以lncRNA‑F和lncRNA‑R为引物进行PCR扩增，得到
lncRNA XLOC_025806；然后用KpnI和NheI酶进行双酶切，回收、连接到pcDNA3.1(‑)载体上，
得到长链非编码RNA XLOC_025806的超表达载体；其中，lncRNA‑F和lncRNA‑R的核苷酸序列
如下所示：

[0019] lncRNA‑F：CTAGCTAGCTAGCAATGCTAGATCTTTAACCCACTGA；

[0020] lncRNA‑R：CGGGGTACCCCGATGGATCCTTTAATCAATTGCCTGG。

[0021] 所述的抑制长链非编码RNA XLOC_025806功能的沉默试剂促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，并抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管。

[0022] 所述的促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，并抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管为通过转入外源性lncRNA XLOC_025806Silencer的方式实
现，即直接将lncRNA XLOC_025806Silencer转染到人脐静脉内皮细胞中。

[0023] 所述的长链非编码RNA XLOC_025806在抑制促进人脐静脉内皮细胞的增殖，促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，和/或促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管的药物中的应用。

[0024] 所述的药物中含有长链非编码RNA XLOC_025806的序列和/或含有重组表达载体。

[0025] 所述的重组表达载体含有长链非编码RNA XLOC_025806的序列，且能在人脐静脉内皮细胞中表达长链非编码RNA XLOC_025806；优选为通过如下方法构建得到：以人脐静脉
内皮细胞cDNA 为模板，以lncRNA‑F和lncRNA‑R为引物进行PCR扩增，得到lncRNA XLOC_
025806；然后用KpnI和NheI酶进行双酶切，回收、并连接到pcDNA3.1(‑)载体上，得到重组表
达载体；其中，lncRNA‑F和lncRNA‑R的核苷酸序列如下所示：

[0026] lncRNA‑F：CTAGCTAGCTAGCAATGCTAGATCTTTAACCCACTGA；

[0027] lncRNA‑R：CGGGGTACCCCGATGGATCCTTTAATCAATTGCCTGG。

[0028] 所述的抑制长链非编码RNA XLOC_025806功能的沉默试剂在制备促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，和/或抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管
的药物中的应用。

[0029] 所述的药物中含有lncRNA XLOC_025806Silencer的序列，且能在人脐静脉内皮细胞中抑制长链非编码RNA XLOC_025806的表达。

[0030] 本发明的验证结果如下：

[0031] 1、本发明通过EdU法检测人脐静脉内皮细胞的增殖情况，发现超表达lncRNA XLOC_025806后，与对照组(pcDNA3.1)相比，人脐静脉内皮细胞的增殖率显著降低(P<0.05)
(图1)。沉默lncRNA XLOC_025806后，与对照组(NC)相比，人脐静脉内皮细胞的增殖率极显
著升高(P<0.01)(图2)。

[0032] 2、本发明通过Annexin V‑FITC/PI技术检测人脐静脉内皮细胞的凋亡情况，发现超表达lncRNA XLOC_025806后，与对照组(pcDNA3.1)相比，人脐静脉内皮细胞的凋亡率极
显著升高(P<0.01)(图3)。沉默lncRNA XLOC_025806后，与对照组(NC)相比，人脐静脉内皮
细胞的增殖率显著降低(P<0.05)(图4)。

[0033] 3、本发明利用Matrigel基质胶为载体模拟体外小管形成，发现超表达lncRNA XLOC_025806后，与对照组(Blank)相比，人脐静脉内皮细胞的成管数极显著增加(P<0.01)
(图5)。沉默lncRNA XLOC_025806后，与空白对照组(Blank)相比，人脐静脉内皮细胞的成管
数极显著减少(P<0.01)(图6)。

[0034] 本发明以lncRNA XLOC_025806(SEQ ID NO：1)为研究对象，采用了分子细胞生物学方法研究其在人脐静脉内皮细胞中的应用，第一次证实了lncRNA XLOC_025806对人脐静
脉内皮细胞的作用。通过超表达和沉默lncRNA XLOC_025806证实lncRNA XLOC_025806能够
参与抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进内皮细胞体外
小管的形成，进一步说明lncRNA XLOC_025806通过调控人脐静脉内皮细胞的功能参与血管
新生过程。

[0035] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

[0036] 本发明检通过基因工程技术外源合成lncRNA XLOC_025806的超表达载体和沉默试剂，检测超表达/沉默lncRNA XLOC_025806后人脐静脉内皮细胞的增殖、凋亡情况，为
lncRNA调控人脐静脉内皮细胞的分子机制积累材料。同时，本发明的结果显示lncRNA 
XLOC_025806促进内皮细胞体外小管的形成，进一步说明lncRNA XLOC_025806可能通过调
控人脐静脉内皮细胞的功能参与血管新生过程。

附图说明

[0037] 图1是EdU法检测超表达lncRNA XLOC_025806后调控人脐静脉内皮细胞增殖情况的结果图。

[0038] 图2是EdU法检测沉默lncRNA XLOC_025806后调控人脐静脉内皮细胞增殖情况的结果图。

[0039] 图3是Annexin V‑FITC法检测超表达lncRNA XLOC_025806后调控人脐静脉内皮细胞凋亡情况的结果图。

[0040] 图4是Annexin V‑FITC法检测沉默lncRNA XLOC_025806后调控人脐静脉内皮细胞凋亡情况的结果图。

[0041] 图5是matrigel血管形成实验检测超表达lncRNA XLOC_025806后人脐静脉内皮细胞的成管情况结果图。

[0042] 图6是matrigel血管形成实验检测沉默lncRNA XLOC_025806后人脐静脉内皮细胞的体外成管情况结果图。

具体实施方式

[0043] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明，实
施例的参数、比例等可因地制宜做出选择而对结果并无实质性影响。实施例中除特殊说明
外，均为本领域常规试剂和方法步骤。

[0044] 本发明所涉及的碱基序列如SEQ ID NO：1所示的长链非编码RNA是通过构建小型猪心梗模型，经过RNA高通量测序并进行生物学信息分析，首次发现的lncRNA，人体基因组
中也含有此序列，全长序列为819bp，将其命名为lncRNA XLOC_025806，其序列如下所示：

[0045] lncRNA XLOC_025806(SEQ ID NO：1)：

[0046] UUUUUUUUCUUUUUUCUUUUUAGAGCUGCACCUGCAGCAUAUCAAGGUUCCCAGGCUAGGGGUCAAAUCGGAGCUGUAGCUGCUGGCCUAUGCCACAGCUUCAGCCACAGCAACCCAGGAUCUGAGCCACGCCUGUGACCUACA
CCACAGCUCACGGCAAUGCUAGAUCUUUAACCCACUGAGUGAGGCCAGGGAUCAAACCCACAUCCUCAUGGGUACU
AGUUGGAUUCGUUUCUGCUGUGCCACAGUGGAAACUCUUAUAAUAACUUUAAUUUUGUUGAUAAUUGUGCUUGCCU
UCCUAAAAUUUACAACUAUUUAGAGAUAAAUUUGAAGAGACGAAUUAUCAAAUACAUAUAUGGCUGUUAUUGGAAG
UCAAGUGAUGCUGAGUAGCCAAAAGCCAAAUGUCUACUACACAUAUGAAGUAUUUGGAGACCGUUGCCUUAUGUCC
CCUGAAACUGAUAAUUUUAAGUUUAAACAUACCAUUUUCUUUCACCCACCCCUAAUACCAAUGUCUCCUUUCAUGA
UGGCCCCUAGGCAGACUGAGCACAACAAGCUCUGAAGCAAGCAUGGAUUGAUGUCACUUGGAUUGAACACUGAAGA
CACUGAAAACCCUAGCCUUUACUGACCUUCAGAGAAAGUCAUUGCUUGAGUUCCUGCUGUGGCACAGUGGAUUAAG
AAUCUGACUGCAUCAGCUAGGGUUGCUCUGAAGGUGUAGGUUUGAUCCUCAGCCCAGGCAAUUGAUUAAAGGAUCC
AUUGUUGCCACAACUGCAGCAUAGGUCACAGCUGUGGCUCAGGUCAGUCCCUGGCUUGGGAACUUCC。

[0047] 实施例1细胞RNA抽提及反转录

[0048] 人脐静脉内皮细胞(购自ScienCell公司)的RNA提取参照Takara公司TRIzol操作说明书，具体操作步骤如下：

[0049] (1)人脐静脉内皮细胞培养至合适密度，弃培养基，PBS清洗细胞两次，再按每2
10cm的细胞培养板底面积直接加入1mL TRIzol；

[0050] (2)冰上静置10min以充分裂解组织/细胞，4℃12000rpm离心5min，弃沉淀吸上清于新1.5mL RNase‑free管中；

[0051] (3)加入200μL氯仿(每1mL TRIzol)剧烈震荡15～30s，冰上静置15min，4℃12000rpm离心15min；

[0052] (4)吸取上层水相置于新1.5mL RNase‑free EP管中；

[0053] (5)加入0.5mL异丙醇(每1mL TRIzol)，轻轻地上下颠倒混匀后在冰上静置10min，4℃12000rpm离心10min；

[0054] (6)弃上清后置于室温，沿管壁加入1mL 75％(v/v)乙醇‑DEPC(每1mL TRIzol)以洗涤RNA，4℃、12000rpm离心5min后弃上清；

[0055] (7)真空干燥5～10min，注意避免RNA沉淀干燥过度；

[0056] (8)加入DEPC水以溶解RNA沉淀。

[0057] cDNA第一链的合成参照Thermo公司的SuperScriptTM First‑Strand Synthesis System for RT‑PCR kit试剂盒进行。

[0058] 实施例2构建lncRNA XLOC_025806的超表达载体

[0059] (1)用DNAMAN软件分析发现lncRNA XLOC_025806的序列无KpnI和NheI两种限制性内切酶酶切位点，而pcDNA3.1(‑)载体(购自Invitrogen公司)存在KpnI和NheI酶切位点。

[0060] (2)Primer5.0软件设计lncRNA XLOC_025806引物，其上下游引物分别加上KpnI和NheI酶切位点序列。其中引物序列如下(5’‑3’)：

[0061] lncRNA‑F：CTAGCTAGCTAGCAATGCTAGATCTTTAACCCACTGA；

[0062] lncRNA‑R：CGGGGTACCCCGATGGATCCTTTAATCAATTGCCTGG。

[0063] (3)以人脐静脉内皮细胞cDNA(按实施例1的方法获得)为模板，PCR扩增得到的lncRNA XLOC_025806全长的cDNA经胶回收纯化、双酶切、回收、连接pcDNA3.1(‑)载体、转
化、筛选、测序鉴定正确后抽提无内毒素质粒(无内毒素质粒小量提取试剂盒购自Magen公
司)，命名为pcDNA3.1‑lncRNA XLOC_025806。

[0064] 实施例3人脐静脉内皮细胞的培养

[0065] (1)将从液氮罐中取出的装有人脐静脉内皮细胞(购自ScienCell公司)的冻存管，置于37℃水浴锅中使其迅速融化；

[0066] (2)细胞转移至离心管中，室温下1000rpm离心5min，倒掉上清液；

[0067] (3)加入预热的PBS清洗，离心后倒掉PBS；

[0068] (4)配置ECM完全培养基：93％(w/w)内皮细胞培养基ECM(购自ScienCell公司)+5％(w/w)FBS(胎牛血清)+1％(w/w)内皮细胞生长添加物ECGS(购自ScienCell公司)+1％
(w/w)双抗；

[0069] (5)加入ECM完全培养基重悬细胞，接种到培养瓶中；置于37℃，5％CO2培养箱中静置培养。

[0070] 所述的双抗为青霉素和链霉素。

[0071] 实施例4人脐静脉内皮细胞的接种和转染

[0072] (1)人脐静脉内皮细胞的密度达到90％左右时，倒掉培养基，用预热的PBS清洗细胞2次；

[0073] (2)加入0.25％胰蛋白酶消化5min，显微镜下观察至大部分细胞漂起，立即加入等量ECM完全培养基(配置方法同实施例2步骤(4))终止消化；

[0074] (3)用枪头将附壁细胞吹下并吹打均匀，将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm离心5min，倒掉上清液；

[0075] (4)加入PBS清洗2遍，1000rpm离心5min；

[0076] (5)用ECM完全培养基轻轻重悬细胞沉淀，均匀分到每个孔中，用ECM完全培养基补充体积，轻轻摇匀，放培养箱中培养；

[0077] (6)24h左右，观察细胞状态，待细胞汇合度达75～90％左右时准备转染；

[0078] (7)转染方法按Invitrogen公司的 3000试剂盒说明书进行；每组设置3个重复；

[0079] (8)转染后的细胞置于37℃，5％CO2培养箱中继续培养；

[0080] (9)转染24～48h后，观察细胞状态，生长良好即可收集细胞。

[0081] 实施例5人脐静脉内皮细胞增殖检测

[0082] 本发明中EdU法检测细胞增殖实验参照广州市锐博生物科技有限公司的Cell‑TM
Light  EdU Apollo 567In vitro Kit进行。具体步骤如下(以48孔板为例)：

[0083] (1)用内皮细胞培养基(ECM完全培养基，配置方法同实施例2步骤(4))按体积比1000:1的比例稀释EdU溶液，制备适量50μM EdU培养基；

[0084] (2)每孔加入200μL的50μM EdU培养基孵育2h，弃培养基；

[0085] (3)每孔200μL PBS，脱色摇床清洗细胞2次，每次5min；

[0086] (4)每孔加入100μL细胞固定液(含4％多聚甲醛的PBS)，室温孵育30min，弃废液；

[0087] (5)每孔加入100μL浓度为2mg/mL的甘氨酸，脱色摇床孵育5min后，弃甘氨酸溶液；

[0088] (6)每孔加入200μL PBS，脱色摇床清洗5min，弃PBS；

[0089] (7)每孔200μL渗透剂(0.5％(v/v)Triton X的PBS)，脱色摇床孵育10min，PBS清洗5min；

[0090] (8)每孔加入200μL的1×Apollo染色反应液，室温避光孵育30min后，弃染色反应液；

[0091] (9)每孔加入200μL渗透剂(0.5％(v/v)Triton X的PBS)，脱色摇床清洗2次，每次10min，弃渗透剂；

[0092] (10)用去离子水按体积比100:1的比例稀释试剂F，制备适量1×Hoechst3342反应液，避光保存；

[0093] (11)每孔加入200μL 1×Hoechst3342反应液(Hoechst)，室温避光孵育30min，弃染色反应液；

[0094] (12)每孔加入200μL PBS清洗2次；

[0095] (13)每孔加入200μL PBS保存待用；

[0096] (14)染色完成后，用荧光显微镜进行照片采集。

[0097] 实施例6人脐静脉内皮细胞凋亡检测

[0098] 本发明使用Annexin V‑FITC/PI技术检测细胞凋亡，参照广州科易达生物科技有限公司FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit with PI试剂盒说明书，具体操作步骤
如下：

[0099] (1)将细胞培养板放置在室温，用PBS轻轻润洗培养板内细胞，弃PBS；

[0100] (2)加入0.25％胰蛋白酶消化5min，显微镜下观察至大部分细胞漂起，立即加入等量终止液(即ECM完全培养基；配置方法同实施例2步骤(4))终止消化；

[0101] (3)1000rpm离心5min收集细胞，弃上清，用预冷PBS清洗细胞两次。调整每管细胞6
数为(0.2～1.0)×10个，加入500μL 1×Annexin V Buffer轻轻重悬细胞；

[0102] (4)加入5μL Annexin V‑FITC和5μL碘化丙啶染色液，轻轻混匀；

[0103] (5)室温避光孵育15min后，随即进行流式细胞仪检测分析。

[0104] 实施例7小管形成实验

[0105] (1)把Matrigel基质胶置于4℃冰箱过夜融化，48孔板与枪头置于4℃冰箱预冷过夜；

[0106] (2)每孔100μL Matrigel基质胶加至48孔板，确保胶完全覆盖孔底，避免加入过程产生气泡，在冰上进行操作；

[0107] (3)37℃孵育1h；

[0108] (4)消化人脐静脉内皮细胞，确保每孔有2万至3万个细胞；

[0109] (5)37℃孵育2～8h，随时可观察，10h内完成拍照，计算完整管腔数。

[0110] 结果分析

[0111] 1、复苏冻存的人脐静脉内皮细胞并进行传代培养。本发明通过基因工程技术外源合成lncRNA XLOC_025806超表达载体(pcDNA3.1‑lncRNA XLOC_025806)和沉默试剂lncRNA 
XLOC_025806Silencer，并将其转染至人脐静脉内皮细胞，24h后参照EdU试剂盒说明书，对
人脐静脉内皮细胞的增殖情况进行检测。检测结果发现：超表达lncRNA XLOC_025806后，与
对照组(pcDNA3.1(‑))相比，人脐静脉内皮细胞的增殖率显著降低(P<0.05)(图1)，沉默
lncRNA XLOC_025806后，与对照组(NC)相比，人脐静脉内皮细胞的增殖率极显著升高(P<
0.01)(图2)。

[0112] 所述的沉默试剂lncRNA XLOC_025806Silencer，由广州市锐博生物科技有限公司合成，其核苷酸序列如下所示(SEQ ID NO：2)(下同)：

[0113] GAGACGAATTATCAAATACCACTTGGATTGAACACTGATGAAGCAAGCATGGATTGACTTCAGCCACAGCAACCCAGACCATTTTCTTTCACCCACCAACCCTAGCCTTTACTGACC。

[0114] 2、复苏冻存的人脐静脉内皮细胞并进行传代培养。本发明通过基因工程技术外源合成lncRNA XLOC_025806超表达载体(pcDNA3.1‑lncRNA XLOC_025806)和沉默试剂
(lncRNA XLOC_025806Silencer)，并将其转染至人脐静脉内皮细胞，48h后参照FITC 
Annexin V Apoptosis Detection Kit with PI说明书，对人脐静脉内皮细胞的凋亡情况
进行检测。检测结果表明，超表达lncRNA XLOC_025806后，与对照组(pcDNA3.1(‑))相比，人
脐静脉内皮细胞的凋亡率极显著升高(P<0.01)(图3)，沉默lncRNA XLOC_025806后，与对照
组(NC)(由广州市锐博生物科技有限公司合成)相比，人脐静脉内皮细胞的增殖率显著降低
(P<0.05)(图4)。

[0115] 3、复苏冻存的人脐静脉内皮细胞并进行传代培养。本发明通过基因工程技术外源合成lncRNA XLOC_025806超表达载体(pcDNA3.1‑lncRNA XLOC_025806)和沉默试剂
(lncRNA XLOC_025806Silencer)，并将其转染至人脐静脉内皮细胞。利用Matrigel基质胶
为载体模拟体外小管形成，对人脐静脉内皮细胞的成管情况进行检测，发现超表达lncRNA 
XLOC_025806后，与空白对照组(Blank)相比，人脐静脉内皮细胞的成管数极显著增加(P<
0.01)(图5)。沉默lncRNA XLOC_025806后，与空白对照组(Blank)相比，人脐静脉内皮细胞
的成管数极显著减少(P<0.01)(图6)。

[0116] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，
均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。