南美蟛蜞菊的萃取物用于抗皮肤发炎及促进角质细胞增生的用途

摘要

本发明涉及植物萃取物的新用途，特别是提供一种南美蟛蜞菊的萃取物用于抗皮肤发炎及促进角质细胞增生的用途。藉由萃取制程让南美蟛蜞菊的效性物质(例如酚酸类及二萜类)大量被萃取出，具有促进角质细胞快速更新与增生，及抗皮肤发炎的功效，帮助肌肤隔离外界脏污，使皮肤保护力提升。

权利要求

1.一种南美蟛蜞菊(Sphagneticola trilobata)的萃取物用于制备抗皮肤发炎及促进角质细胞增生的医药品或保养品的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述南美蟛蜞菊的萃取物是以水或醇类作为萃取溶剂对该南美蟛蜞菊进行萃取而制得。

3.根据权利要求2所述的用途，其该特征在于，所述萃取溶剂与该南美蟛蜞菊的液固比介于5～20：1～5。

4.根据权利要求2所述的用途，其该特征在于，所述萃取的温度介于50℃至100℃。

5.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述萃取的时间介于0.5至3小时。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗皮肤发炎包含降低紫外线B(ultraviolet radiation b,UVB)诱发的介白素-8(interleukin-8,IL-8)产生量。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述医药品包含一医药上可接受的载剂。

8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述医药品是呈一供局部投药的剂型。

9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述医药品是呈一供非经肠道投药的剂型。

10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述保养品是呈一供局部施用的形式。

11.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述保养品包含一使用于保养品制造技术的可接受的佐剂。

说明书

南美蟛蜞菊的萃取物用于抗皮肤发炎及促进角质细胞增生的

用途

技术领域

[0001] 本发明涉及植物萃取物的新用途，特别是有关于一种南美蟛蜞菊(Sphagneticola trilobata)的萃取物用于抗皮肤发炎及促进角质细胞增生的用途。

背景技术

[0002] 皮肤发炎反应(inflammatory response)是指一系列由损伤或感染引起的血管和细胞反应，适度皮肤发炎反应虽然可以保护皮肤免于外来物质的侵害，但是过度发炎却会造成该发炎部位持续出现红、肿、热、痛等不适症状，如过敏或肌肤泛红。现有的抗发炎药物例如非固醇类抗发炎药物(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)，虽然可用以治疗或减缓许多皮肤发炎反应，然而，这些人工化合物仍伴随程度不等的副作用，造成服用者的困扰。

[0003] 此外，皮肤组织是由表皮、真皮及皮下组织所构成。人类皮肤会随着年纪、生理因素或环境因素，而有老化或角质细胞更新变慢等现象。当皮肤角质细胞更新变慢时，角质层的屏障功能会下降，皮肤在受到紫外线，例如紫外线B(ultraviolet radiation b,UVB)照射后会导致角质层损害及产生皮肤发炎反应。因此，如何促进皮肤角质细胞的增生，也成为本领域的重要课题。

[0004] 目前常见用来促进皮肤角质细胞增生的方式大多为利用涂抹于皮肤表面的医药品或保养品。然而，习知的医药品及保养品大多由化学成分所制成，长期使用不但对人体健康有害无益，且这些产品往往价格昂贵，并非为一般使用者所能负担。

[0005] 为了解决上述问题，本领域的技术人员亟需研发出具有抗皮肤发炎及促进角质细胞增生的新颖医药品或保养品以造福有此需求的广大族群。

发明内容

[0006] 有鉴于此，本发明的目的为提供一种南美蟛蜞菊(Sphagneticola trilobata)的萃取物用于制备一抗皮肤发炎及促进角质细胞增生的医药品或保养品的用途。

[0007] 在本发明的一实施例中，南美蟛蜞菊的萃取物是以水或醇类作为萃取溶剂对南美蟛蜞菊进行萃取而制得。

[0008] 在本发明的一实施例中，萃取溶剂与南美蟛蜞菊的液固比介于5～20：1～5。

[0009] 在本发明的一实施例中，萃取的温度介于50℃至100℃。

[0010] 在本发明的一实施例中，萃取的时间介于0.5至3小时。

[0011] 在本发明的一实施例中，抗皮肤发炎包含降低紫外线B(ultravioletradiation b,UVB)诱发的介白素-8(interleukin-8,IL-8)产生量。

[0012] 在本发明的一实施例中，医药品包含一医药上可接受的载剂。

[0013] 在本发明的一实施例中，医药品是呈一供局部投药的剂型。

[0014] 在本发明的一实施例中，医药品是呈一供非经肠道投药的剂型。

[0015] 在本发明的一实施例中，保养品是呈一供局部施用的形式。

[0016] 在本发明的一实施例中，保养品包含一使用于保养品制造技术的可接受的佐剂。

[0017] 综上所述，本发明南美蟛蜞菊的萃取物的功效在于：藉由萃取制程让南美蟛蜞菊的效性物质(例如酚酸类及二萜类)大量被萃取出，具有促进角质细胞快速更新与增生，及抗皮肤发炎的功效，帮助肌肤隔离外界脏污，使皮肤保护力提升。

[0018] 以下将进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。

附图说明

[0019] 图1是本发明南美蟛蜞菊的萃取物在抗皮肤发炎上的功效的数据图；

[0020] 图2是本发明南美蟛蜞菊的萃取物在促进角质细胞增生上的功效的数据图；

[0021] 图3是本发明南美蟛蜞菊的萃取物在改善人体肌肤泛红上的功效的数据图，其中“*”表示与第0周比较，p<0.05；“#”表示与对照组比较，p<0.05；

[0022] 图4是本发明南美蟛蜞菊的萃取物在改善人体肌肤泛红上的功效的影像图。

具体实施方式

[0023] 定义

[0024] 本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。

[0025] 依据本发明，南美蟛蜞菊(Sphagneticola trilobata)，英文俗名为Yellow Dots，中文别名为维多利亚菊、穿地龙、地锦花或黄花蜜菜，是菊科(Compositae)南美蟛蜞菊属(Sphagneticola)的多年生草本植物。叶对生，厚纸质，粗糙具刚毛，卵形或广卵形，三浅裂，锯齿缘，有光泽。花由舌状花和管状花组成，单一顶生，花梗长，呈黄色。原产地为北美洲，产区主要分布于台湾平原及山野。南美蟛蜞菊因其可节节生根，且具覆盖良好的特性，故为公路护坡、安全岛分隔带的优良植物，亦可种植于庭院、花坛中做观赏用。此外，南美蟛蜞菊亦可作为小型蝶类及蜂类的蜜源植物。

[0026] 依据本发明，医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于非经肠地道(parenterally)或局部地(topically)投药的剂型，这包括，但不限于：注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterile aqueous  solution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterile powder)、外部制剂(external preparation)以及类似物。

[0027] 依据本发明，医药品可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，该医药上可接受的载剂可包含一或多种选自于下列的试剂：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)、脂质体(liposome)以及类似物。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

[0028] 依据本发明，该医药上可接受的载剂包含有一选自于由下列所构成的群组中的溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及它们的组合。

[0029] 依据本发明，该医药品可以一选自于由下列所构成的群组中的非经肠道途径(parenteral routes)来投药：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮内注射(intraepidermal injection)、皮内注射(intradermal injection)以及病灶内注射(intralesional injection)。

[0030] 依据本发明，医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于局部地施用于皮肤上的外部制剂(external  preparation)，这包括，但不限于：乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、软膏(ointment)、乳霜(cream)、贴片(patch)、擦剂(liniment)、粉末(powder)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆(serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)、滴剂(drop)、悬浮液(suspension)、油膏(salve)以及绷带(bandage)。

[0031] 依据本发明，该外部制剂是藉由将本发明的医药品与一为熟习此项技艺者所详知的基底(base)相混合而被制备。

[0032] 依据本发明，该基底可包含有一或多种选自于下列的添加剂(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氢化合物(hydrocarbons)[诸如石油胶(petroleum jelly)以及白凡士林(white petrolatum)]、蜡(wax)[诸如石蜡(paraffin)以及黄蜡(yellow wax)]、保存剂(preserving agents)、抗氧化剂(antioxidants)、界面活性剂(surfactants)、吸收增强剂(absorption enhancers)、安定剂(stabilizing agents)、胶凝剂(gelling agents)[诸如 微结晶纤维素
(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纤维素(carboxymethylcellulose)]、活性剂(active agents)、保湿剂(humectants)、气味吸收剂(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH调整剂(pH adjusting agents)、螯合剂(chelating agents)、乳化剂(emulsifiers)、闭塞剂(occlusive agents)、软化剂(emollients)、增稠剂(thickeners)、助溶剂(solubilizing agents)、渗透增强剂(penetration enhancers)、抗刺激剂(anti-irritants)、着色剂(colorants)以及推进剂(propellants)等。有关这些添加剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

[0033] 依据本发明，保养品可进一步包含有一被广泛地使用于保养品制造技术的可接受的佐剂(acceptable adjuvant)。例如，该可接受的佐剂可包含有一或多种选自于下列的试剂：溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂、抗氧化剂、遮蔽剂(screening agent)、螯合剂、界面活性剂、染色试剂(coloring agent)、增稠剂(thickening agent)、填料(filler)、香料以及气味吸收剂。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

[0034] 依据本发明，保养品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于护肤(skincare)或化妆(makeup)的形式，这包括，但不限于：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或复合型的乳剂、凝胶、软膏、乳霜、面膜(mask)、贴片、贴布(pack)、擦剂、粉末、气溶胶、喷雾、乳液、乳浆、糊剂、泡沫、分散液、滴剂、慕斯(mousse)、防晒油(sunblock)、化妆水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妆产品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身体清洁产品(body cleansing products)等。

[0035] 依据本发明，保养品亦可与一或多种选自于下列的已知活性的外用剂(external use agents)一起合并使用：美白剂(whitening agents)[诸如维生素A酸(tretinoin)、儿茶素(catechin)、曲酸、熊果苷以及维生素C]、保湿剂、抗发炎剂(anti-inflammatory agents)、杀菌剂(bactericides)、紫外线吸收剂(ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[诸如芦荟萃取物(aloe extract)]、皮肤营养剂(skin nutrients)、麻醉剂(anesthetics)、抗痘剂(anti-acne agents)、止痒剂(antipruritics)、止痛剂(analgesics)、抗皮肤炎剂(antidermatitis  agents)、抗过角化剂(antihyperkeratolytic agents)、抗干皮肤剂(anti-dry skin agents)、抗汗剂(antipsoriatic agents)、抗老化剂(antiaging agents)、抗皱剂(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出剂(antiseborrheic agents)、伤口治疗剂(wound-healing agents)、皮质类固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有关这些外用剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

[0036] 实施例1.南美蟛蜞菊的萃取物的制备

[0037] 首先，将整株的南美蟛蜞菊(来源为农民采收)清洗，供后续萃取之用。接着，取洗净后的整株南美蟛蜞菊并将之均质，然后将均质物以水或醇类作为萃取溶剂；本发明一实施例中，萃取溶剂为水以5～20：1～5的液固比于50～100℃进行萃取0.5～3小时。之后，冷却至室温并经由400目(mesh)的滤网过滤，然后于45～70℃对过滤产物进行减压浓缩，而得到南美蟛蜞菊的萃取物。

[0038] 实施例2.南美蟛蜞菊的萃取物在抗皮肤发炎上的效用评估

[0039] 由于已知介白素8(interleukin-8，IL-8)为一种细胞激素，具有促进发炎反应产生的功能当发炎反应产生时，因为发炎组织会释放出特定的细胞激素以吸引特定功能的细胞至特定的组织，例如IL-1、IL-6及IL-8，其中IL-8在中性白血球的趋化作用上扮演重要的角色。首先，将人类初代皮肤角质细胞(human primary epidermal keratinocyte,HPEKp)进行皮肤角质细胞增生的实验。该人类初级皮肤角质细胞购自CELLnTEC公司(瑞士)编号HPEK-50。将该细胞培养于无血清的角质细胞培养液(keratinocyte-SFM)(Gibco公司，美国，编号为#10724-011)。于24孔培养盘的每孔中加入500μL的培养基，使每孔具有5x104个细胞。在37℃下培养24小时后，移除培养基。

[0040] 之后，将人类初代皮肤角质细胞分成4组，其中包括1个对照组、1个UVB组以及2个实验组(亦即实验组1及实验组2)。使用紫外线照射室(Vilber)并以300mJ/cm2的剂量对UVB组、实验组1及实验组2照射UVB，俾以诱发发炎反应，并将0.03125mg/mL及0.0625mg/mL依据上面实施例1的南美蟛蜞菊的萃取物分别添加至实验组1及实验组2的细胞中，至于对照组的细胞则不做任何处理。各组细胞培养物在37℃下培养24小时后，吸取120μL的细胞培养上清液作为样品分析。

[0041] 之后，使用人类CXCL8/IL8的ELISA分析套组(购自R&D systems公司，美国)来检测各组的介白素-8(interleukin-8,IL-8)产生量。以PBS稀释捕获抗体(capture antibody)，将经稀释的捕获抗体以每孔100μL的量涂布至96孔微盘底部，并于4℃作用过夜。接着，以200μL的清洗缓冲液(含0.05％吐温20(Tween 20)配于PBS)清洗96孔微盘3次，然后以300μL的阻断缓冲液(Block buffer)(1％BSA配于PBS)进行阻断，继而于37℃下作用3小时。之后，添加100μL的样品及标准品(配于稀释液(0.1％BSA配于PBS))，接而于37℃下与捕捉抗体进行结合2小时。接着，以200μL的清洗缓冲液清洗96孔微盘3次，然后添加100μL的侦测抗体(detection antibody)，接而于37℃下侦测捕捉抗体2小时。之后，以200μL的清洗缓冲液清洗96孔微盘3次，然后添加100μL的链霉亲和素-HRP(Streptavidin-HRP)，接而于室温下作用20分钟。之后，以200μL的清洗缓冲液清洗96孔微盘3次，然后添加100μL的受质溶液(substrate solution)(R&D systems)，于室温下作用20分钟。接着，添加50μL的终止溶液(stop solution)以中止反应，最后以酵素免疫分析仪测量其450nm的吸光值。再以Excel软件进行统计分析。

[0042] 各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-试验(Student’s t-test)来决定。本实施例的结果显示于图1。

[0043] 图1是本发明南美蟛蜞菊的萃取物在抗皮肤发炎上的功效的数据图。由图1可见，与对照组相较之下，UVB组的IL-8产生量有显著的提升，这表示UVB会对人类初代皮肤角质细胞产生发炎反应。而与UVB组相较之下，实验组1的IL-8产生量降低70.17％，实验组2的IL-8产生量降低75.65％，并且会随着南美蟛蜞菊的萃取物的浓度提升而有明显的降低趋势。本实施例的结果显示，本发明南美蟛蜞菊的萃取物具有抗皮肤发炎的功效，可使皮肤保护力升高。

[0044] 实施例3.南美蟛蜞菊的萃取物在促进角质细胞增生上的效用评估

[0045] 首先，将人类初代皮肤角质细胞培养于无血清的角质细胞培养液(keratinocyte-SFM)(Gibco公司，美国，编号为#10724-011)中。于96孔培养盘的每孔中加入培养基，使每孔具有3,000个细胞，接而在37℃下培养2小时。

[0046] 之后，将人类初代皮肤角质细胞分成3组，其中包括1个对照组以及2个实验组(亦即实验组1及实验组2)。对各组添加10μL的100μM BrdU标定试剂(labeling reagent)(Roche；11647229001)，并将0.03125mg/mL及0.0625mg/mL依据上面实施例1的南美蟛蜞菊的萃取物分别添加至实验组1及实验组2的细胞中，接而培育24小时。之后，移除上清液并对每孔添加200μL的固定液(FixDenat)，然后于室温下作用30分钟。接着，移除FixDenat溶液并以1X PBS清洗1次，接而添加抗-BrdU-POD工作溶液(anti-BrdU-POD working solution)(抗-BrdU-POD与抗体稀释溶液以1:100的比例稀释)，然后于室温下作用90分钟。之后，移除抗体结合物(antibody conjugate)并以200～300μL的清洗溶液充分润洗3次。接着，移除清洗溶液并对每孔添加100μL的受质溶液(四甲基联苯胺(tetramethyl-benzidine,TMB))使反应呈色，然后于室温下静置5～30分钟。之后，对每孔添加25μL的1M H2SO4，并在振荡器(shaker)上以300rpm摇晃作用约1分钟。以酵素免疫分析仪(ELISA reader)(BioTek公司，美国)测量其450nm的吸光值，再以Excel软件进行统计分析。

[0047] 各组之间的统计学显著差异是藉由Excel软件来决定。本实施例的结果显示于图2。

[0048] 图2是本发明南美蟛蜞菊的萃取物在促进角质细胞增生上的功效的数据图。由图2可见，与对照组相较之下，与对照组比较，实验组1的相对细胞增生率提升6.4％，实验组2的相对细胞增生率提升24.9％，并且会随着南美蟛蜞菊的萃取物的浓度提升而有明显的提升趋势。本实施例的结果显示，本发明南美蟛蜞菊的萃取物具有促进角质细胞增生的功效，藉此使角质细胞快速更新，帮助肌肤隔离外界脏污。

[0049] 实施例4.南美蟛蜞菊的萃取物的人体功效测试

[0050] 在本实施例中，藉由使用含有2％依据实施例1的南美蟛蜞菊的萃取物的精华液(下称“南美蟛蜞菊精华液”)来检测其是否具有改善人体肌肤泛红的功效。

[0051] 首先，募集8位受试者，并将每位受试者的右脸使用作为对照组，及将左脸使用作为实验组，其中每日早晚清洁脸部后，将安慰剂涂抹于对照组肌肤，及将南美蟛蜞菊精华液涂抹于实验组肌肤，以指腹稍加按摩促进吸收，并于使用前(第0周)与使用后第4周进行肌肤泛红的检测。以VISIA全脸肤质检测仪拍摄，运用多重光谱影像技术分析全脸肌肤泛红数值。肌肤红色区(深色)是侦测脸部发炎、敏感的状态，数值越低表示发炎敏感程度越低。本实施例的结果显示于图3及图4。

[0052] 图3是本发明南美蟛蜞菊的萃取物在改善人体肌肤泛红上的功效的数据图。图4是本发明南美蟛蜞菊的萃取物在改善人体肌肤泛红上的功效的影像图。由图3可见，与第0周相较之下，实验组的泛红面积(％)在使用后第4周有显著的降低(降低17.5％)，而与对照组相较之下，实验组的泛红面积(％)有显著的降低。由图4可见，与第0周相较之下，实验组的泛红面积在使用后第4周有显著的降低，且受试者改善比率为87.5％。本实施例的结果显示，本发明南美蟛蜞菊的萃取物具有改善人体肌肤泛红的功效。

[0053] 综上所述，本发明南美蟛蜞菊的萃取物可藉由萃取制程让南美蟛蜞菊的效性物质大量被萃取出，具有促进角质细胞快速更新与增生，及抗皮肤发炎(例如改善肌肤泛红)的功效，帮助肌肤隔离外界脏污，使皮肤保护力提升。

[0054] 以上所述仅为举例性，而非为限制性者。任何未脱离本发明的精神与范畴，而对其进行的等效修改或变更，均应包含于后附的申请专利范围中。