一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法

摘要

本发明提供了一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，属于人参提取物制备方法领域。该方法将人参干燥茎叶加工成粉末，加入石油醚、氢氧化钠、正己烷、乙酸乙酯、乙腈和水，用磁力搅拌法进行提取；提取结束后静置，取上层溶液，减压或常压浓缩，可得人参茎叶油脂不皂化物；分别取中间层溶液和下层溶液，浓缩，上大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，再用乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮和人参茎叶总皂苷。本发明的方法方便、高效、易于操作，且成本低廉，提高了人参茎叶的利用度，可满足医药、食品、化工领域的开发和利用，应用和开发价值极大。

权利要求

1.一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，其特征在于，其步骤和条件如下：

步骤一：将人参干燥茎叶加工成粉末，加入石油醚、氢氧化钠、正己烷、乙酸乙酯、乙腈和水，用磁力搅拌法进行提取；

步骤二：提取结束后静置，取上层溶液，减压或常压浓缩，可得人参茎叶油脂不皂化物；

步骤三：取中间层溶液，浓缩至原来体积的1/4‑1/10，上大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮；

步骤四：取下层溶液，浓缩至原来体积的1/4‑1/10，上大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总皂苷；

所述的步骤一中人参茎叶粉末的质量M1：石油醚的体积V1：氢氧化钠的质量M2：正己烷的体积V2：乙酸乙酯的体积V3：乙腈的体积V4：水的体积V5为1克：（10‑50）毫升：（0.2‑0.5）克：（10‑50）毫升：（10‑50）毫升：（20‑70）毫升：（10‑50）毫升；

所述的步骤一提取温度为100‑200℃，时间为0.5‑2小时，搅拌转速为100‑300 rpm。

2.根据权利要求1所述的一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，其特征在于，所述的步骤二的人参茎叶油脂不皂化物为3,7,11,15‑Tetramethyl‑2‑hexadecen‑1‑ol、γ‑Sitosterol、Stigmasta‑5,24(28)‑dien‑3‑ol, (3β,24Z)‑。

3.根据权利要求1所述的一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，其特征在于，所述的步骤三和四的大孔树脂型号为D101，D130，AB8或NKA。

4.根据权利要求1所述的一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，其特征在于，所述的步骤三和四的大孔树脂质量g：人参茎叶质量g为1：（0.5～2）。

5.根据权利要求1所述的一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，其特征在于，所述的步骤三和步骤四中乙醇溶液的体积比为40～60%。

6.根据权利要求1所述的一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，其特征在于，所述的步骤三中人参茎叶总黄酮为芦丁、人参黄酮苷、槲皮素和山奈酚。

7.根据权利要求1所述的一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，其特征在于，所述的步骤四中人参茎叶总皂苷为人参皂苷20R‑Rg3和20S‑Rg3。

说明书

一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的

方法

技术领域

[0001] 本发明属于人参提取物制备方法领域，具体涉及一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法。

背景技术

[0002] 人参茎叶是五加科植物人参（Panax ginseng C. A. Mey）的干燥茎叶。性味苦、甘、寒。具有补气益肺，祛暑生津等功能，主要用于气虚咳嗽，冒热烦躁，津伤口渴，头目不清
和四肢乏倦等。现代药理学表明，人参茎叶提取物具有抗疲劳、抗应激、增强免疫功能、调节
机体功能、抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、抗菌抗炎抗病毒、护心护肝、降血脂、抗动脉硬化、抗凝
血、利尿、抗内毒素、溶血等作用。此外，人参叶对中枢神经系统、呼吸系统也具有保护作用，
并且可以参与调节物质代谢、促进细胞增殖、改善睡眠质量等作用。主要化学成分包括叶绿
素、皂苷、油脂、黄酮、氨基酸、多糖、维生素及微量元素等。油脂和皂苷是人参茎叶中的重要
的一类化学成分，在碱性条件下，油脂可发生皂化，可以皂化的物质称为皂化物，皂化后可
以溶解于乙醇和水溶液中，而在石油醚等醚液中溶解度小。不能够被皂化的物质包括部分
固醇、高分子醇、碳氢化合物等称为不皂化物，不皂化物易溶解于石油醚等醚液中，而在乙
醇和水溶液中溶解度小。近年来的研究表明，油脂不皂化物具有相当强的生物活性，制备油
脂中不皂化物或者提炼油脂中不皂化物可以开发食品、保健食品及药品等。传统方法在从
植物原料中提取油脂、制备油脂中不皂化物时，往往先将油脂从原料中提取出来，将提取液
浓缩，获得油脂，在油脂中加入氢氧化钾和乙醇溶液进行加热皂化，皂化结束后，用石油醚
和乙醚等溶液萃取，获得石油醚和乙醚层的萃取物，再利用含碱乙醇和乙醇分别洗涤萃取物，
再将石油醚和乙醚挥干，进而获得油脂中不皂化物。该过程需经过油脂从原料中提取、浓
缩、油脂的制备、皂化、萃取、洗涤等6个步骤，步骤之间相对独立，操作繁琐，浪费人力物力。

[0003] 目前常采用的制备油脂不皂化物的方法大多为通用方法或者更加繁琐的方法。黄贤校等在中国专利（申请号201210181078.9）提出的从乳木果液态油中提取不皂化物的方
法，其步骤包括酯交换、分子蒸馏、结晶等步骤，可以得到高纯度的不皂化物组合物，该种组
合物含有高含量的三萜醇类和甾醇；安托万·皮奇里利等在中国专利（申请号
201080047939.3）提出一种可再生的原材料中提取不皂化物部分的方法，原材料选自油料
果实、油质种子等，其特征在于它包括以下步骤：脱水、加入醇和催化剂等提取、浓缩、皂化、
提取皂化物等步骤；J·勒格朗等在中国专利（申请号 201280006964.6）提出了植物油总不
皂化物的制备方法，其工艺包括首先获得植物油、利用碳酸钾乙醇溶液皂化、利用有机溶液
萃取、回收溶剂、利用载气气提不皂化物。张德玉等在中国专利（申请号 93118734.6）提出
了一种茄尼醇不皂化物的制备方法，其主要过程是将霉烟或碎杂烟末作为原料，加入溶剂
和催化剂进行皂化、之后进行过滤、混合、分离、超滤、浓缩等工艺过程、制得茄尼醇不皂化
物；袁传勋等在中国专利（申请号201310739702.7）提出了一种二级柱层析法提取植物油脱
臭馏出物中角鲨烯的方法，首先进行皂化，包括以下工艺步骤：利用常见方法对植物油进行
皂化处理，萃取分离得到皂化物之后，利用柱色谱等对不皂化物中角鲨烯进行分离。代志凯
等在中国专利（201410427299.9）提出了一种从提取天然维生素E后的角料中提取角鲨烯的
方法，即首先将角料进行皂化反应，然后萃取，将萃取物通过2级精馏塔纯化，再利用色谱分
离。所述的方法均是利用常见方法对植物油进行皂化，或者利用酯交换和加入催化剂等方
法进行处理进行皂化，或者进一步对皂化物进行纯化和分离，以分离得到纯品的不皂化物。
以上方法中，植物油的提取、皂化、提取不皂化物等过程相对独立，操作繁琐。

[0004] 朱义鑫等在中国专利（申请号：201711140841）提出了一种具有提高免疫力的橡胶树种子不皂化物的制备方法，以橡胶树种子的脂溶物为原料，加入过量的氢氧化钾和乙醇
溶液进行皂化反应，之后，减压浓缩回收乙醇，之后加入乙醚或乙酸乙酯或正己烷等进行萃
取，以制备橡胶树种子油脂不皂化物。杨卫美等在中国专利（申请号：201711140838.0）中也
采用了类似的皂化方法对具有预防和治疗动脉粥样硬化橡胶树种子中油脂不皂化物进行
了制备。陈婉等在中国专利（申请号：201711137736.3）以及徐爽在中国专利（申请号：
201711139152.X）中同样采用了类似的皂化方法对橡胶树种子中油脂不皂化物进行了制备。
其余报道中的油脂不皂化物的制备方法与上述制备方法大致相同。上述油脂不皂化物的制
备方法均为常见的制作方法，即在油脂中加入碱乙醇溶液进行皂化，再利用醚液进行萃取等。
未见有皂化和萃取除杂同步完成，另外，本专利除制备油脂不皂化物外，还制备茎叶总皂苷
和总黄酮。目前，尚未见到同时一步制备茎叶总皂苷、总黄酮以及油脂不皂化物的报道。

[0005] 在制备人参茎叶总皂苷方面，谢海峰等在中国专利（申请号：201610014885.X）中利用回流法对人参叶中皂苷进行提取制备，再利用柱色谱等对皂苷进行分离纯化处理，得
到人参皂苷Re和Rg1；周凯等在中国专利（申请号：201711470015.4）中利用回流阀提取人参
茎叶皂苷，经过离心除杂后，利用凝胶柱层析进行纯化分离，制备得到纯度较高的含有人参
皂苷Re、Rg1、Rd的人参茎叶总皂苷；冯涛在中国专利（申请号：201810415236.X）中提出了一
种低农药残留的人参茎叶总皂苷的制备方法。首先利用低碳醇对人参茎叶原料进行脱农残
处理，再利用乙醇回流提取皂苷，经过浓缩干燥制备得到人参茎叶总皂苷。上述报道即利用
回流法提取人参茎叶皂苷，或者经过柱层析等纯化方法进行纯化处理。鱼红闪等在中国专
利（申请号：201510276892.2）中提出了微生物酶转化人参茎叶皂苷制备人参稀有皂苷的方
法，即提取人参茎叶中总皂苷，添加微生物酶，利用微生物酶转化人参茎叶皂苷，将常见的
人参皂苷Rb3、Rc、Rb2、Rd等转化为人参皂苷C‑Mx、C‑Mc、C‑Y、C‑K。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，该方法方便、高效、易于操作，且成本低廉。

[0007] 本发明提供一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，其步骤和条件如下：

[0008] 步骤一：将人参干燥茎叶加工成粉末，加入石油醚、氢氧化钠、正己烷、乙酸乙酯、乙腈和水，用磁力搅拌法进行提取；

[0009] 步骤二：提取结束后静置，取上层溶液，减压或常压浓缩，可得人参茎叶油脂不皂化物；

[0010] 步骤三：取中间层溶液，浓缩至原来体积的1/4‑1/10，上大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清
透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮；

[0011] 步骤四：取下层溶液，浓缩至原来体积的1/4‑1/10，上大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透
明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总皂苷。

[0012] 优选的是，所述的步骤一中人参茎叶粉末的质量M（1 克）：石油醚的体积V（1 毫升）：氢氧化钠的质量M（2 克）：正己烷的体积V（2 毫升）：乙酸乙酯的体积V（3 毫升）：乙腈的体积V4
（毫升）：水的体积V（5 毫升）为1：（10‑50）：（0.2‑0.5）：（10‑50）：（10‑50）：（20‑70）：（10‑50）。

[0013] 优选的是，所述的步骤一提取温度为100‑200℃，时间为0.5‑2小时，搅拌转速为100‑300 rpm。

[0014] 优选的是，所述的步骤二的人参茎叶油脂不皂化物为3,7,11,15‑Tetramethyl‑2‑hexadecen‑1‑ol（叶绿醇）、γ‑Sitosterol（γ‑谷甾醇）、Stigmasta‑5,24(28)‑dien‑3‑ol, 
(3β,24Z)‑。

[0015] 优选的是，所述的步骤三和四的大孔树脂型号为D101，D130，AB8或NKA。

[0016] 优选的是，所述的步骤三和四的大孔树脂质量g：人参茎叶质量g为1：（0.5～2）。

[0017] 优选的是，所述的步骤三和步骤四中乙醇溶液的体积比为40～60%。

[0018] 优选的是，所述的步骤三中人参茎叶总黄酮为芦丁、人参黄酮苷、槲皮素和山奈酚。

[0019] 优选的是，所述的步骤四中人参茎叶总皂苷为人参皂苷20R‑Rg3和20S‑Rg3。

[0020] 本发明的原理

[0021] 本发明所述的一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法原理在于：油脂及其不皂化物溶解于石油醚，油脂皂化物易溶解于乙腈和水，黄酮易溶解于乙酸
乙酯，皂苷不溶解于乙酸乙酯，易溶解于乙腈和水。用石油醚，氢氧化钠，乙酸乙酯，正己烷，
乙腈，水混合溶液提取人参茎叶，在未搅拌下，该上述混合液可以分为上中下三层溶液，即
上层溶液主要为石油醚，中间层溶液主要为乙酸乙酯，下层溶液主要为乙腈和水，正己烷同
时溶解于上层和中间层两层溶液，乙腈主要溶解于中间层和下层溶液，氢氧化钠主要溶解
于下层溶液。在搅拌下，可暂时形成乳浊液，即各溶液交织混在一起。在乳浊液的作用下，油
脂被乳浊液中的石油醚部分提取出来，黄酮被乳浊液中的乙酸乙酯和乙腈提取出来，皂苷
被乳浊液中的乙腈和水溶液部分提取出来，同时，油脂在乳浊液中的氢氧化钠的作用下皂
化，皂苷在乳浊液中的氢氧化钠作用下水解生成人参皂苷20R‑Rg3、20S‑Rg3，搅拌提取结束
后静置，“石油醚‑氢氧化钠‑正己烷‑乙酸乙酯‑乙腈‑水溶液”的混合液重新分为上中下三
层，不皂化物溶解于上层石油醚液中，其余物质溶解于中间层和下层醇溶液中。取上层石油
醚液，减压浓缩至干，即可。利用气相色谱和质谱联用技术检测，该不皂化物中主要含有3,
7,11,15‑Tetramethyl‑2‑hexadecen‑1‑ol（叶绿醇）、γ‑Sitosterol（γ‑谷甾醇）、
Stigmasta‑5,24(28)‑dien‑3‑ol, (3β,24Z)‑。，以归一化法计算该三个物质占总不皂化物
的60%以上。分别取中间层和下层溶液，分别浓缩后，分别上大孔树脂柱，均先用水洗脱，洗
去氢氧化钠，油脂和叶绿素皂化物等杂质，再用乙醇溶液洗脱，分别收集乙醇洗脱液，浓缩，
分别得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮和总皂苷，总黄酮中主要含有芦丁、人参黄酮苷、槲皮
素、山奈酚。总皂苷中主要含有人参皂苷20R‑Rg3、20S‑Rg3。

[0022] 本发明的有益效果

[0023] 本发明提供的一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，该方法是以人参茎叶粉末为起始原料，用复合溶液（石油醚，氢氧化钠，正己烷，乙酸乙酯，乙
腈，水）提取，在提取油脂的同时完成了皂化和萃取处理，一步得到人参茎叶油脂不皂化物，
使油脂的提取、皂化和萃取同步完成。在提取人参皂苷的同时，完成了脱脂、碱水解和提取，使
皂苷的脱脂、碱水解和提取同步完成。该法方便快捷，并且可以同时获得油脂不皂化物和含有
人参皂苷20R‑Rg3、20S‑Rg3的人参茎叶总皂苷。实现了从“植物原料”到“不皂化物”和“含有
人参皂苷20R‑Rg3、20S‑Rg3的人参茎叶总皂苷”的快速制备，同时提取到了人参茎叶总黄酮，
提取液静置，分为三层，油脂不皂化物、黄酮和皂苷分别分布在三层溶液中，为后续的处理
提供了便利，简化了操作环节、节约了时间，在大批量生产和制备上具有优势。此方法方便、
高效、易于操作，且成本低廉，可满足医药和化工领域的开发和利用，应用、开发价值极大。

附图说明

[0024]  图1 为利用实施例1所制备的人参茎叶油脂不皂化物的气质联用离子流图。

[0025] 图2为利用实施例1所制备的人参茎叶总皂苷的液质联用离子流图。

[0026] 图3为利用实施例1所制备的人参茎叶总黄酮的液质联用离子流图。

具体实施方式

[0027] 本发明提供一种同时制备人参茎叶总皂苷、总黄酮和油脂不皂化物的方法，其步骤和条件如下：

[0028] 步骤一：将人参干燥茎叶加工成粉末，加入石油醚、氢氧化钠、正己烷、乙酸乙酯、乙腈和水，用磁力搅拌法进行提取；所述的提取温度优选为100‑200℃，时间优选为0.5‑2小
时，搅拌转速优选为100‑300 rpm；所述的人参茎叶粉末的质量M（1 克）：石油醚的体积V（1 毫
升）：氢氧化钠的质量M（2 克）：正己烷的体积V（2 毫升）：乙酸乙酯的体积V（3 毫升）：乙腈的体
积V（4 毫升）：水的体积V（5 毫升）优选为1：（10‑50）：（0.2‑0.5）：（10‑50）：（10‑50）：（20‑70）：
（10‑50）；

[0029] 步骤二：提取结束后静置，所述的静置时间优选为60‑300 min，取上层溶液，减压或常压浓缩，可得人参茎叶油脂不皂化物；所述的的人参茎叶油脂不皂化物为3,7,11,15‑
Tetramethyl‑2‑hexadecen‑1‑ol（叶绿醇）、γ‑Sitosterol（γ‑谷甾醇）、Stigmasta‑5,24
(28)‑dien‑3‑ol, (3β,24Z)‑；

[0030] 步骤三：取中间层溶液，浓缩至原来体积的1/4‑1/10，上大孔树脂柱，所述的大孔树脂型号优选为D101、D130、AB8或NKA，所述的大孔树脂质量g：人参茎叶质量g优选为1：
（0.5～2）；先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用乙醇溶液洗脱，所述
的乙醇溶液的体积比优选为40～60%；洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，
回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮；所述的人参茎叶总黄酮为芦丁、人参黄
酮苷、槲皮素和山奈酚；

[0031] 步骤四：取下层溶液，浓缩至原来体积的1/4‑1/10，上大孔树脂柱，所述的大孔树脂型号优选为D101、D130、AB8或NKA，所述的大孔树脂质量g：人参茎叶质量g优选为1：（0.5
～2）；先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用乙醇溶液洗脱，所述的乙
醇溶液的体积比优选为40～60%；洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收
乙醇，干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总皂苷，所述的人参茎叶总皂苷为人参皂苷20R‑Rg3
和20S‑Rg3。

[0032] 下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，实施例中涉及到的原料均为商购获得。

[0033] 实施例１

[0034] 将5g人参干燥茎叶加工成粉末，加入50 mL石油醚，1 g氢氧化钠，60 mL正己烷，60 o
mL乙酸乙酯，100 mL乙腈，80mL水，用磁力搅拌法进行提取，提取温度为：100  C，加热时间
为0.5小时，搅拌转速为100 rpm，加热结束后静置60 min，取上层溶液，减压或常压浓缩，得
人参茎叶油脂不皂化物。取中间层溶液，浓缩至原来体积的1/4，上2.5 g大孔树脂柱中，大
孔树脂型号为D101，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为
40%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，
得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮；取下层溶液，浓缩至原来体积的1/4，上2.5g大孔树脂柱，
大孔树脂型号为D101，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为
40%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，
得到干浸膏状的人参茎叶总皂苷。

[0035] 利用气相色谱和质谱联用法，对实施例1制备的人参茎叶油脂不皂化物进行分析。气相色谱和质谱联用仪为：美国ThermoScientific‑ITQ900型。

[0036] 质谱参数：EI源；放射电流：150µA；电子能量：70 eV；界面温度：280  °C；离子源温度：250 °C；检测电压：1000 V。

[0037] 色谱参数：色谱初始温度：60 °C；初始化时间：3.0 min；升温速率：9 °C /min；色谱终止温度：290 °C；终止温度停留时间：2 min。

[0038] 进样参数：进样器温度：280  °C；进样模式：恒流；进样体积：1 μL；色谱柱: TR‑5ms，30m*0.25mm*0.25μm；载气：He。

[0039] 图1 为利用实施例1所制备的人参茎叶油脂不皂化物的气质联用离子流图。图1表明，所有色谱峰在30分钟内基本完全洗脱，所得色谱峰得到完全分离，样品色谱图中包括8
个主要色谱峰，其中3个色谱峰的峰面积最大，表明其含量较高，分别为3,7,11,15‑
Tetramethyl‑2‑hexadecen‑1‑ol（叶绿醇）、γ‑Sitosterol（γ‑谷甾醇）、Stigmasta‑5,24
(28)‑dien‑3‑ol, (3β,24Z)‑，利用归一化法进行计算，该3个化合物的含量占总不皂化物
的60%以上。

[0040] 应用质谱法对人参茎叶油脂不皂化物总离子流图中色谱峰进行了定性鉴定，结果如下：色谱峰1：Phenol, 2,5‑bis(1,1‑dimethylethyl)‑ （匹配度99%）; 色谱峰2: 1,1,6,
6‑Tetramethylspiro[4.4]nonane （匹配度99%）; 色谱峰3：3,7,11,15‑Tetramethyl‑2‑
hexadecen‑1‑ol (匹配度91%);色谱峰4：γ‑Sitosterol（匹配度93%）; 色谱峰5：
Stigmasta‑5,24(28)‑dien‑3‑ol, (3β,24Z)‑ （匹配度95%）; 色谱峰6：Unknow; 色谱峰7：
Betulin （匹配度99%）。

[0041] 表1为人参茎叶油脂不皂化物的气相色谱和质谱联用峰面积数据。

[0042] 表1. 人参茎叶油不皂化物化学成分的气相色谱和质谱检测数据

[0043] 色谱峰 保留时间 (min) 分子式 分子量 化合物名称1 15.33 C14H22O 206 Phenol, 2,5‑bis(1,1‑dimethylethyl)‑
2 19.03 C13H24 180 1,1,6,6‑Tetramethylspiro[4.4]nonane
3 21.71 C20H40O 296 3,7,11,15‑Tetramethyl‑2‑hexadecen‑1‑ol
4 26.22 C29H50O 414 γ‑Sitosterol
5 26.57 C29H48O 412 Stigmasta‑5,24(28)‑dien‑3‑ol, (3β,24Z)‑
6 27.56 — — Unknown（未知）
7 28.26 C30H50O2 442 Betulin

[0044] 用液相色谱和质谱联用法检测实施例1所得到的人参茎叶皂苷。液相色谱和质谱联用仪为：美国ThermoScientific‑LCQ FLEET型。

[0045] 色谱条件：色谱柱为Waters (4.6mm× 250mm，5µm)，流动相A为乙腈，流动相B为0.2%醋酸水溶液。洗脱条件为 0～20 min：25％～50％A、75%～50%B；20～60min：50％～
90％A、50％～10% B；60～70min：90％～100％A、10％～0% B。流速：0.5 mL/min；进样量：10 
μL；检测波长：203 nm；柱温：30℃。

[0046] 质谱条件：喷雾电压：4.5kV，金属毛细管温度：250V，鞘气为N2，压力为6.8×102kV，2
辅助气体为He, 压力为：1.0×10kpa，负离子模式，扫描范围为：m/z：150～2000。

[0047] 图2为利用实施例1所制备的人参茎叶总皂苷的液质联用离子流图。图2表明，所有色谱峰在60分钟内基本完全洗脱，所得色谱峰得到完全分离。利用该法制备的人参茎叶总
皂苷中含有人参皂苷20R‑Rg3和20S‑Rg3。其中（1）Re+Rg1、（2）Rf、（3）Rg2、（4）Rb1、（5）
Acetylated‑Rb1、（6）Rc、（7）Rb2、（8）Rd、（9）Rb3、（10）Ro、（11）Rg6、（12）F4、（13）Rk3、（14）
Rh4、（15）20R‑Rg3、（16）20S‑Rg3。样品色谱图中包括16个主要色谱峰，应用质谱法对人参茎
叶皂苷总离子流图中色谱峰进行了定性鉴定，结果如表2所示。

[0048] 表2 人参茎叶皂苷类化学成分的液相色谱和质谱检测数据

[0049]

[0050] 表明用该法制备的人参茎叶总皂苷中主要包含人参皂苷Re+Rg1、Rf、Rg2、Rb1、Acetylated‑Rb1、Rc、Rb2、Rd、Rb3、Ro、Rg6、F4、Rk3、Rh4、20R‑Rg3、20S‑Rg3。

[0051] 用液相色谱和质谱联用法检测实施例1所得到的人参茎叶皂苷。液相色谱和质谱联用仪为：美国ThermoScientific‑LCQ FLEET型。

[0052] 色谱条件：色谱柱为Waters SunfireTM C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm); 色o
谱柱温为30  C；流动相组成及洗脱过程：流动相: (A)：0.05%醋酸水溶液；(B)：乙腈，0～20 
min: 13% B；20～60 min: 13～40% B；60～90 min: 40～100% B；流动相流速0.5 mL/min；
波长为250 nm；进样量10 μL。

[0053] 质谱条件：喷雾电压：4.5kV，金属毛细管温度：250V，鞘气为N2，压力为6.5×102kV，2
辅助气体为He，压力为：1.0×10kpa，负离子模式，扫描范围为：m/z：150～2000。

[0054] 对所得样品溶液进行了分析。图3为利用实施例1所制备的人参茎叶总黄酮的液质联用离子流图。结果表明，所有色谱峰在90分钟内基本完全洗脱，所得色谱峰得到完全分
离。样品色谱图中包括5个主要色谱峰，利用该法制备的人参茎叶总黄酮中含有（1）Rutin
（芦丁）、（2）Kaempferol‑3‑O‑galactoside‑O‑glucoside（山奈酚‑3‑O‑半乳糖‑O‑葡萄糖
苷）、（3）Kaempferol‑3‑O‑glucoside（紫云英苷）、（4）Quercetin（槲皮素）、（5）Kaempferol
（山奈酚）。应用质谱法对人参茎叶黄酮总离子流图中色谱峰进行了定性鉴定，结果如表3所
示。

[0055] 表3. 人参茎叶黄酮类化学成分的液相色谱和质谱检测数据

[0056] 色谱峰 化合物名称 保留时间 准分子离子峰质分子量(Da) 二级质谱数据( m/z)(min) 谱数据 ( m/z)
1 Rutin（芦丁） 5.43 609 [M‑H]‑ 610 447 [M‑glu‑H]‑, 301 [M‑glu‑rha‑H]‑
2 Kaempferol‑3‑O‑galactoside‑O‑glucoside 29.56 609 [M‑H]‑ 610 447 [M‑glu‑H]‑, 285 [M‑2Glc‑H]‑
（山奈酚‑3‑O‑半乳糖‑O‑葡萄糖苷）
3 Kaempferol‑3‑O‑glucoside（紫云英苷） 31.77 447 [M‑H]‑ 448 284 [M‑C6H10O5‑H]‑ ,  151[1,3A]–, 179 [1,2A‑H]–
4 Quercetin（槲皮素） 45.39 301 [M‑H]‑ 302 271 [M‑CH2O]–, 255 [M‑H2O‑CO‑H]–, 151[1,3A]–,
179 [1,2A‑H]–
5 Kaempferol（山奈酚） 49.19 284 [M‑H]‑ 286 255 ([M ‑H2O‑CO‑H]–),  151(1,3A–), 179([1,2A‑H]–)

[0057] 表明用该法制备的人参茎叶总黄酮中主要包含Rutin（芦丁）、Kaempferol‑3‑O‑galactoside‑O‑glucoside（山奈酚‑3‑O‑半乳糖‑O‑葡萄糖苷）、Kaempferol‑3‑O‑
glucoside（紫云英苷）、Quercetin（槲皮素）、Kaempferol（山奈酚）。

[0058] 实施例2

[0059] 将5g人参干燥茎叶加工成粉末，加入80 mL石油醚，1.5g氢氧化钠，100 mL正己烷， oC
100 mL乙酸乙酯，130 mL乙腈，140 mL水，用磁力搅拌法进行提取，提取温度为：150 ，加热
时间为1.0小时，搅拌转速为150 rpm，加热结束后静置90 min，取上层溶液，减压或常压浓
缩，得人参茎叶油脂不皂化物。取中间层溶液，浓缩至原来体积的1/5，上3.5 g大孔树脂柱
中，大孔树脂型号为D130，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体积
比为50%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干
燥，得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮；取下层溶液，浓缩至原来体积的1/5，上4.5 g大孔树
脂柱，大孔树脂型号为D101，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体
积比为50%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，
干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总皂苷。

[0060] 实施例3

[0061] 将5g人参干燥茎叶加工成粉末，加入110 mL石油醚，1.8 g氢氧化钠，160 mL正己 oC
烷，120 mL乙酸乙酯，190 mL乙腈，200mL水，用磁力搅拌法进行提取，提取温度为：180 ，加
热时间为1.8小时，搅拌转速为280 rpm，加热结束后静置120 min，取上层溶液，减压或常压
浓缩，得人参茎叶油脂不皂化物。取中间层溶液，浓缩至原来体积的1/6，上5.0 g大孔树脂
柱中，大孔树脂型号为AB8，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体积
比为60%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干
燥，得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮；取下层溶液，浓缩至原来体积的1/5，上6.0g大孔树脂
柱，大孔树脂型号为D130，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体积
比为60%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干
燥，得到干浸膏状的人参茎叶总皂苷。

[0062] 实施例4

[0063] 将5g人参干燥茎叶加工成粉末，加入250 mL石油醚， 2.5g氢氧化钠，200mL正己 oC
烷，190 mL乙酸乙酯，300mL乙腈，200mL水，用磁力搅拌法进行提取，提取温度为：200 ，加
热时间为2小时，搅拌转速为300 rpm，加热结束后静置180 min，取上层溶液，减压或常压浓
缩，得人参茎叶油脂不皂化物。取中间层溶液，浓缩至原来体积的1/8，上8.0g大孔树脂柱
中，大孔树脂型号为NKA，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比
为50%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干
燥，得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮；取下层溶液，浓缩至原来体积的1/5，上6.0 g大孔树
脂柱，大孔树脂型号为AB8，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体积
比为60%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干
燥，得到干浸膏状的人参茎叶总皂苷。

[0064] 实施例5

[0065] 将5g人参干燥茎叶加工成粉末，加入250 mL石油醚，2.5g氢氧化钠，250 mL正己烷， 250 mL乙酸乙酯，350 mL乙腈，250mL水，用磁力搅拌法进行提取，提取温度为：200摄氏
度，加热时间为2小时，搅拌转速为300 rpm，加热结束后静置240 min，取上层溶液，减压或
常压浓缩，得人参茎叶油脂不皂化物。取中间层溶液，浓缩至原来体积的1/10，上10g大孔树
脂柱中，大孔树脂型号为D101，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用
体积比为60%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙
醇，干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮；取下层溶液，浓缩至原来体积的1/10，上10g大
孔树脂柱，大孔树脂型号为NKA，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用
体积比为60%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙
醇，干燥，得到干浸膏状的人参茎叶总皂苷。

[0066] 实施例6

[0067] 将5g人参干燥茎叶加工成粉末，加入100 mL石油醚，2.0 g氢氧化钠，180 mL正己 oC
烷，150 mL乙酸乙酯，220 mL乙腈，250mL水，用磁力搅拌法进行提取，提取温度为：180 ，加
热时间为1.8小时，搅拌转速为250 rpm，加热结束后静置300 min，取上层溶液，减压或常压
浓缩，得人参茎叶油脂不皂化物。取中间层溶液，浓缩至原来体积的1/8，上8.0 g大孔树脂
柱中，大孔树脂型号为AB8，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体积
比为55%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干
燥，得到干浸膏状的人参茎叶总黄酮；取下层溶液，浓缩至原来体积的1/5，上5.5 g大孔树
脂柱，大孔树脂型号为NKA，先用水洗脱，洗脱至水洗脱液无色澄清透明，pH值为7，再用体积
比为55%的乙醇溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干
燥，得到干浸膏状的人参茎叶总皂苷。