用于调节妇科菌群平衡的益生菌组合物

摘要

本发明公开了一种用于调节妇科菌群平衡的复合菌剂，其包括：卷曲乳杆菌，干酪乳杆菌LC‑N235以及其他可接受的药物赋形剂。所述卷曲乳杆菌优选卷曲乳杆菌CGMCC 12743。所述干酪乳杆菌LC‑N235保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC 18057。所述复合菌剂可以做成口服液，也可以做成发酵食品，优选为发酵乳，发酵豆奶等。

权利要求

1.一种用于调节妇科菌群平衡的益生菌组合物，其包括：卷曲乳杆菌，干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235以及其他可接受的药物赋形剂；

所述卷曲乳杆菌，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CGMCC 1.2743；

所述干酪乳杆菌LC-N235，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC M 2012157。

2.权利要求1所述的益生菌组合物，其做成口服液。

3.权利要求1所述的益生菌组合物，其做成发酵食品。

4.权利要求3所述的益生菌组合物，所述发酵食品为发酵乳，发酵豆奶。

说明书

用于调节妇科菌群平衡的益生菌组合物

技术领域

[0001] 本发明涉及一种用于调节妇科菌群平衡的益生菌组合物，属于微生物技术领域。

背景技术

[0002] 正常人胃肠道生活着大量的细菌, 新生儿出生2h后即开始有不同细菌进入体内, 以后逐步建立正常菌群, 成年人体内约有500 多种细菌, 分属50 多个种, 细菌总数超过100 万亿。肠道细菌群是由需氧菌、厌氧菌及兼性厌氧菌构成的一个极其复杂的生态系统, 正常情况下它们在宿主体内繁殖而不会致病, 并对机体健康起着积极作用, 包括辅助消化、吸收、营养、免疫和拮抗致病菌。益生菌是指那些具有对人体有益生理活性的细菌, 如双岐杆菌、乳酸杆菌、酵母菌等。临床所用的益生菌制剂包括固态( 胶囊、片剂) 或液态( 口服液、发酵乳) 多种剂型, 依所用菌种的不同可分为单菌制剂和多联活菌制剂。

[0003] 据统计，细菌性阴道炎易发于生育期妇女，临床发现的各种阴道炎常为混合性感染，病后均有白带增多、外阴疹痒、阴道灼痛等症状，给妇女的身心健康和工作学习带来了严重的影响。细菌性阴道炎患者阴道内乳杆菌明显减少甚至消失。临床常用的抗生素治疗虽可暂时控制, 但顽固复发率很高。

[0004] 阴道给药虽然直接，效果好，但是不够方便，很多女性存在抵触心理。现有技术已证实口服进入的乳酸菌会有一部分进入阴道，但是效率低。本发明旨在提供一种用于调节妇科菌群平衡的益生菌组合物，具体为通过引入新的来源于食品的安全益生菌，可以通过肠道定向增加进入阴道的乳酸杆菌，协同性加强治疗细菌性阴道炎的效果，有助于恢复阴道菌群平衡。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供一种用于调节妇科菌群平衡的益生菌组合物，具体为通过引入新的来源于食品的安全益生菌，可以通过起码定向增加进入阴道的乳酸杆菌，协同性加强治疗细菌性阴道炎的效果，有助于恢复阴道菌群平衡。

[0006] 健康妇女的阴道菌群主要由乳杆菌构成，包括卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌和格氏乳杆菌等。正常情况下乳杆菌对阴道可以起到保护作用，而以乳杆菌占优势的阴道微生态的紊乱可以导致阴道炎。临床证实，选用卷曲乳杆菌效果最好。

[0007] 细菌性阴道病( BV) 是育龄妇女最常见的生殖器感染性疾病，其特征是栖居在阴道内的菌群平衡失调，乳酸杆菌特别是产过氧化氢( H2O2 ) 的菌株减少，而其他菌群如阴道加德纳菌、动弯杆菌、拟杆菌、消化链球菌、人型支原体等的大量繁殖而引起的一种无阴道黏膜炎症表现的综合证。BV 治愈时间长且易复发，与许多严重的妇产科并发症有直接关系，能导致BV 患者的早产率增加，婴儿体质量低下，组织性绒毛炎，羊水感染，字宫内膜炎等危险因素。此外BV 还与输卵管炎、盆腔炎、不孕症、宫外孕、泌尿系感染、术后感染及妇科肿瘤等疾病有关。已经证实BV 能增加人类免疫缺陷病毒感染的危险因素。由于BV 的发病率高易复发，许多研究表明采用微生物及免疫治疗，通过生态制剂调整疗法是治疗此类疾病的必然选择。益生菌是一种活的微生物，因此用口服或阴道内植入乳酸杆菌来恢复其自然对外来菌侵袭的抵抗力，促进阴道本身的自净作用，对治愈和预防BV的复发都有良好的作用。

[0008] 阴道给药虽然直接，效果好，但是不够方便，很多女性存在使用抵触心理。现有技术已证实口服进入的乳酸菌会有一部分进入阴道，但是效率低。

[0009] 中国专利2012101725644公开过一株干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235，所述菌株已于2012年5月10日，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC M 2012157。该菌株的已知功能为高产乳酸。本发明所用干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235来自南京工业大学研究人员赠送。

[0010] 本发明所用卷曲乳杆菌、普通干酪乳杆菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。本发明团队在研究和实践过程中，发现联合口服卷曲乳杆菌CGMCC 1.2743和干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235可以有效增强对细菌性阴道炎的治疗效果，显著恢复阴道微生态平衡。卷曲乳杆菌和干酪乳杆菌均为安全的益生菌，作为口服试剂很有前景。目前尚不清楚该干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235如何增强卷曲乳杆菌CGMCC 1.2743的口服效果，推测是通过对肠道一系列生理生化的影响来起到协同作用的。

[0011] 本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

[0012] 一种用于调节妇科菌群平衡的益生菌组合物，其包括：

[0013] 卷曲乳杆菌，干酪乳杆菌LC-N235以及其他可接受的药物赋形剂。

[0014] 所述卷曲乳杆菌（Lactobacillus crispatus），该菌株购买和保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC 1.2743。

[0015] 所述干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-N235已于2012年5月10日，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC M 2012157。

[0016] 所述益生菌组合物可以做成口服液，也可以做成发酵食品，优选为发酵乳，发酵豆奶等。

[0017] 本发明的优点：

[0018] 本发明益生菌组合物成分确切，安全，可以直接做成口服液，也可以做成发酵食品，食用方便，女性没有抵触心理，可以长期作为保健服用，作为阴道微生态平衡用具有非常重要的意义和广阔的前景。

具体实施方式

[0019] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

[0020] 本发明的具体实施例如以下说明。

[0021] 实施例1

[0022] 小鼠造模方法：取35 只体重20-22g的雌性小鼠分为7组，各组小鼠之间无统计学差异。7组分别为空白对照组（正常小鼠）、阳性对照组（左氧氟沙星组）、阴性对照组、卷曲乳杆菌CGMCC 1.2743处理组、干酪乳杆菌LC-N235处理组、卷曲+干酪乳杆菌LC-N235处理组、卷曲+普通干酪乳杆菌处理组。每组小鼠5 只。其中，正常小鼠组作为空白对照，阳性对照组、阴性对照组、处理组均使用细菌性阴道炎造模成功小鼠。

[0023] 细菌性阴道炎造模方法：每天给予小鼠阴道注射由大肠杆菌、金葡菌、铜绿假单胞菌按1∶1∶1配制成的混合菌悬液0.3 mL（三种菌的浓度均为0.5*107cfu/ml），连续处理7天后可见小鼠阴道口有明显红肿和脓状物流出，建模成功。

[0024] 所述普通干酪乳杆菌，该菌株购买和保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC 18727。

[0025] 建模成功后，空白对照组和阴性对照组不给药；阳性对照组给予左氧氟沙星的混悬液进行灌胃，根据药品用药指导转换成小鼠用药量，内含有左氧氟沙星溶液0.01g/kg。处8
理组活化乳杆菌，并配置好三种不同活菌悬液，浓度均为 0.5*10cfu/ml，不同组别给与相应细菌灌胃处理。卷曲乳杆菌CGMCC 1.2743处理组: 每只小鼠500μL/d卷曲乳杆菌；干酪乳杆菌LC-N235处理组：每只小鼠500μL/d 干酪乳杆菌LC-N235；卷曲+LC-N235处理组：每只小鼠250μL/d卷曲乳杆菌+250μL/d干酪乳杆菌LC-N235；卷曲+普通干酪乳杆菌处理组：每只小鼠250μL/d卷曲乳杆菌+250μL/d普通干酪乳杆菌杆菌；所有组别均连续处理7天，第8天收集小鼠血清炎性因子及阴道分泌物数据。

[0026] 炎症因子检测：处理7天后，第8天对小鼠眼眶静脉取血，收集血液于EP 管中，室温静置2 h 离心，取上层血清，按照检测试剂盒所述的Elisa 法检验小鼠血清中的降钙素原(PCT) 、C反应蛋白(CRP) 、白介素6(IL－6) 、白介素10(IL－10)。试验结果如表1所示。

[0027] 统计学处理：使用SPSS16.0,进行统计学分析，计量资料的结果表示为均值±标准差,采用组间t检验。

[0028] 表1 不同组别小鼠治疗后的炎症因子检测

[0029]

[0030] 注：t检验,l：P<0.05 (与空白组比较)；2：P<0.05 (和阳性对照组比较)；3：P<0.05 (和阴性对照组比较)

[0031] 经过相应处理后,将对阳性对照组、阴性对照组、处理组的小鼠血清炎症因子检测进行分析。结果显示：卷曲+干酪乳杆菌LC-N235处理组小鼠的降钙素原(PCT) 、C反应蛋白(CRP) 、白介素6(IL－6) 、白介素10(IL－10)含量最少,相对于阴性对照组具有显著性差异（<0.05)，而其他处理组相对于阴性对照组不具有显著性差异；单独乳杆菌治疗组与阴性对照组相比,没有明显差异(P>0.05)；说明卷曲+干酪乳杆菌LC-N235治疗具有协同消除体内炎症因子的作用，作用接近于抗生素治疗。

[0032] 实施例2

[0033] 处理7天后，第8天检测实施例1的各组治疗后的阴道菌群：

[0034] 小鼠阴道菌群检测:无菌条件取阴道冲洗液100ul,使用生理盐水混均,再依次进行10倍系列稀释,从原液开始选择103、104、105、106稀释度,分别滴种在MRS、EMB 、SP、LB培养基上。经37℃需氧培养(乳杆菌经厌氧培养)48小时后,计数菌落,计算出每毫升阴道分泌物中乳杆菌、大肠杆菌、金葡菌和铜绿假单胞菌的活菌数(cfu/ml),取对数后进行统计处理。结果如表2所示。

[0035] 表2不同组别小鼠治疗后的阴道菌群检测

[0036]

[0037] 注：t检验,l：P<0.05 (与空白组比较)；2：P<0.05 (和阳性对照组比较)；3：P<0.05 (和阴性对照组比较)

[0038] 经过相应处理后,将对阳性对照组、阴性对照组、处理组的小鼠阴道菌群[0039] 变化进行分析。结果显示：正常小鼠中也是多种细菌共存的一种状态，乳杆菌相对占优势。实验中，卷曲+干酪乳杆菌LC-N235处理组的小鼠阴道内乳杆菌定植数量最多，而大肠杆菌、金葡菌的定植数量最少,相对于空白组、阳性对照组和阴性对照组均具有显著性差异（<0.05)，考虑和乳杆菌的短时间补充后，肠道爬行定植有关；卷曲+干酪乳杆菌LC-N235处理组大肠杆菌、金葡菌的数量相对于阴性对照组有统计学差异（<0.05)，可以说明乳杆菌治疗具有去除大肠杆菌、金葡菌在小鼠阴道内定植的作用；阳性对照组所有细菌量最少，考虑抗生素杀菌抑菌作用有关；各组之间铜绿假单胞菌无显著差异(P>0.05)。

[0040] 综上所述，本发明团队在研究和实践过程中，发现联合口服卷曲乳杆菌和干酪乳杆菌LC-N235可以有效增强对细菌性阴道炎的治疗效果，显著恢复阴道微生态平衡。卷曲乳杆菌和干酪乳杆菌LC-N235均为安全的益生菌，作为口服试剂很有前景。而使用其他普通干酪乳杆菌如实施例列出的干酪乳杆菌CGMCC 18727则没有这种效果。目前尚不清楚该干酪乳杆菌LC-N235如何增强卷曲乳杆菌的口服效果，推测是通过对肠道一系列生理生化的影响来起到协同作用的。

[0041] 在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

[0042] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。