一种缓解肠易激综合征慢性内脏痛敏的寡脱氧核糖核苷酸

摘要

本发明公开了一种缓解肠易激综合征慢性内脏痛敏的寡脱氧核糖核苷酸。该寡脱氧核糖核苷酸包含一段转录因子GATA1结合位点，其5’端添加FAM荧光基团，第二个碱基经过甲氧基修饰以增强其在体内的稳定性，3’端经过胆固醇修饰使其能够穿越细胞膜和血脑屏障，本发明具有能够有效的缓解由新生期结肠炎性刺激(NCI)诱导的成年大鼠慢性内脏痛敏反应，有望用于临床治疗肠易激综合征(IBS)慢性腹部疼痛。并且本发明的药物对于NCI大鼠的运动功能没有副作用；除此之外，本发明对于糖尿病神经病变导致的后肢机械痛敏和CFA导致的炎性疼痛也具有一定的改善作用的效果。

权利要求

1.寡脱氧核糖核苷酸，其中包含一段转录因子GATA1结合位点，3’端连有胆固醇基团，其序列结构如下：

其序列结构中5’端的A基团为FAM荧光基团，其序列结构中第二个碱基上的B基团为甲氧基。

2.权利要求1所述的寡脱氧核糖核苷酸在制备缓解肠易激综合征慢性内脏痛敏药物中的应用。

3.权利要求1所述的寡脱氧核糖核苷酸在制备缓解糖尿病神经病变导致的后肢机械痛敏和CFA导致的炎性疼痛的药物中的应用。

4.权利要求1所述的寡脱氧核糖核苷酸，其特征在于，其制剂为注射制剂，注射方式为鞘内注射。

5.根据权利要求4所述的寡脱氧核糖核苷酸，其特征在于，其给药剂量为20μM。

6.根据权利要求4所述的寡脱氧核糖核苷酸，其特征在于，其给药后药效持续时间为

0.5 8小时。

~

7.根据权利要求4所述的寡脱氧核糖核苷酸，其特征在于，能够降低T13‑L2背根神经节（DRG）神经元的静息膜电位（RP）值。

说明书

一种缓解肠易激综合征慢性内脏痛敏的寡脱氧核糖核苷酸

技术领域

[0001] 本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种缓解肠易激综合征慢性内脏痛敏的寡脱氧核糖核苷酸。

背景技术

[0002] 肠易激综合征(irritable bowel syndrome，IBS)是一组持续或间歇发作，以腹痛、腹胀、排便习惯和(或)大便性状改变为临床表现，而缺乏胃肠道结构和生化异常的肠道
功能紊乱性疾病。IBS患者中有75％报告持续或频繁腹痛，与一般慢性疼痛不同，IBS疼痛通
常与排便改变(腹泻，便秘或两者兼有)有关。在过去十年中开发的用于IBS的新药主要集中
在肠道水平，如饭前服用抗胆碱药物可以在饭后短时间减少腹痛。除此之外，中枢靶向药物
如抗抑郁药也被用来治疗IBS慢性腹部疼痛，它可以阻断来自大脑的疼痛信号，修改神经活
动，缓解具有脑活动基础的疼痛症状，并影响神经功能的恢复。

[0003] 目前IBS慢性腹部疼痛的具体发病机制仍然不清，临床上也没有有效的治疗手段。针对肠道水平的药物，它们的主要作用是解决IBS的肠道不适问题，对IBS慢性疼痛的作用
比较有限。中枢靶向药物，如抗抑郁药物、吗啡镇痛药物等都会带来一定的副作用，如吗啡
耐受等，因此需要针对IBS慢性内脏痛敏的发病机制，有效降低IBS慢性内脏痛敏相关神经
元的兴奋性，缓解IBS慢性内脏痛敏。

发明内容

[0004] 根 据 本 发 明 的 一 个 方 面 ，提 供 了 一 种 寡 脱 氧 核 糖 核 苷 酸(oligodeoxynucleotides,ODN)，其中包含一段转录因子GATA1结合位点，其中，3’端经过胆
固醇修饰使其能够穿越细胞膜和血脑屏障，其包含以下序列结构如下：

[0005]

[0006] 其中，其序列结构中5’端的A基团为FAM荧光基团。

[0007] 其中，其序列结构中第二个碱基上的B基团为甲氧基。

[0008] 以上，该缓解肠易激综合征慢性内脏痛敏的寡脱氧核糖核苷酸，包含一段转录因子GATA1结合位点，序列如附图1，由上海生工生物股份有限公司合成。其5’端添加FAM荧光
基团，第二个碱基经过甲氧基修饰以增强其在体内的稳定性，3’端经过胆固醇修饰使其能
够穿越细胞膜和血脑屏障。

[0009] 本发明的另一个方面，提供了上述寡脱氧核糖核苷酸在制备缓解肠易激综合征慢性内脏痛敏药物中的应用。

[0010] 本发明的另一个方面，提供了上述的寡脱氧核糖核苷酸在制备缓解糖尿病神经病变导致的后肢机械痛敏和CFA导致的炎性疼痛的药物中的应用。

[0011] 该缓解肠易激综合征慢性内脏痛敏的寡脱氧核糖核苷酸，或者在用于缓解糖尿病神经病变导致的后肢机械痛敏或CFA导致的炎性疼痛时，其制剂为注射制剂，注射方式为鞘
内注射。

[0012] 该注射制剂，鞘内注射的给药剂量为1μM～20μM。

[0013] 该制剂鞘内注射给药后止痛的药效持续时间为2～10小时

[0014] 该特定序列的寡脱氧核糖核苷酸，其作用机制为能够降低T13‑L2背根神经节(DRG)神经元的静息膜电位(RP)值。

[0015] 本申请的优点是能够有效的缓解NCI大鼠慢性内脏痛敏反应，有望用于临床治疗IBS慢性腹部疼痛；并且本申请的寡脱氧核糖核苷酸药物对于NCI大鼠的运动功能没有副作
用；除此之外，本发明对于糖尿病神经病变导致的后肢机械痛敏和CFA导致的炎性疼痛也具
有一定的改善作用。

附图说明

[0016] 图1为本发明一实施方式的一种缓解肠易激综合征慢性内脏痛敏的寡脱氧核糖核苷酸ODN结构图；

[0017] 图2为大鼠结直肠扩张行为学检测图示；

[0018] 图3ODN缓解NCI大鼠由于结直肠扩张引起的内脏痛敏反应的图示；

[0019] 图4不同给药剂量的ODN对于T13‑L2 DRG神经元的作用图示；

[0020] 图5ODN对于NCI大鼠的运动功能影响的图示；

[0021] 图6ODN对于糖尿病神经病变导致的后肢机械痛敏类型疼痛的作用效果图示；

[0022] 图7ODN对于CFA导致的炎性疼痛的作用效果图示。

具体实施方式

[0023] 下面结合附图对本发明作进一步详细的说明。

[0024] 试验一：大鼠内脏痛检测方法

[0025] 结肠扩张阈值(CRD)检测用于测量大鼠内脏疼痛行为，操作方法如下，在大鼠温和镇静(异氟醚吸入麻醉)的情况下，通过肛门将一个附在Tygon管上的柔性乳胶球囊(5cm)插
入到大鼠的结肠中，距离肛门处约7cm，并将Tygon管绑在尾部固定到位。将大鼠置于小的透
明质小隔间中，测量CRD阈值，记录的CRD阈值是通过血压计稳定地增加压力使大鼠腹部有
明显收缩反应时血压计的毫米汞柱数，为了尽可能减少结肠重复性扩张刺激可能造成的损
伤，测量之前使大鼠适应环境30分钟，见附图2。

[0026] 试验二：如图1所示本发明的寡脱氧核糖核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN药物的镇痛作用

[0027] 新生期结肠炎性刺激(neonatal colonic inflammation,NCI)大鼠模型：当新生幼崽出生10d时，给它们结肠注射0.2mL稀乙酸溶液(0.5％，用生理盐水稀释)，待大鼠成长
至6周龄成年后出现内脏痛敏反应，该模型能够较好的模拟临床上IBS慢性腹部疼痛病征。

[0028] 实验结果如图3所显示，给予鞘内注射此ODN后，能够明显缓解NCI大鼠由于结直肠扩张引起的内脏痛敏反应，作用能够持续至少8小时，而NC(随机核苷酸序列)处理没有作
用。

[0029] 如图3，给予NCI大鼠鞘内注射一次10μl 20μM的ODN或NC后，能够明显增加NCI大鼠的结直肠扩张阈值，即缓解NCI大鼠的内脏痛敏反应，作用持续至少8小时。而随机核苷酸序
列NC处理后NCI大鼠的结直肠扩张阈值没有变化(NC:n＝6,ODN:n＝7,***p<0.001vs 
Pre,###p<0.001and##p<0.01vs NC,two‑way ANOVA)

[0030] 试验三：此药物镇痛作用的机制

[0031] 取出NCI大鼠肠相关T13‑L2背根神经节(DRG)，经过消化和培养后，进行全细胞膜片钳记录。

[0032] 如图4所示，结果发现，给予1μM和10μM的ODN后，DRG神经元的静息膜电位(RP)明显下降，即呈现超极化状态，神经元的兴奋性降低进而抑制痛感受信息的传递，而0.1μM的ODN
没有明显的作用。

[0033] 图4中(A)0.1μM的ODN对于T13‑L2 DRG神经元没有明显的作用(n＝13)；(B、C)1μM和10μM的ODN能够明显的降低T13‑L2 DRG神经元的RP值(n＝6～8，***p<0.001vs Pre，
paired t‑test)。

[0034] 试验四：此药物对运动功能的影响

[0035] 为了验证此药物对大鼠运动功能的影响，我们对其进行Rota Rod实验验证。如图5所示，实验结果发现，在鞘内注射此ODN后，NCI大鼠的运动功能并没有受到影响。

[0036] 图5显示，给予NCI大鼠鞘内注射一次10μl 20μM的ODN后，其在Rota Rod上停留的时间并没有显著变化(n＝4)。

[0037] 试验五：此药物对于其它类型疼痛的作用效果

[0038] 为了进一步探究此药物的镇痛作用，我们首先使用糖尿病神经病变大鼠模型。给与其鞘内注射此ODN，如图6所示，结果发现，糖尿病大鼠的后肢机械痛敏反应明显被翻转。

[0039] 如图6所示，给予糖尿病大鼠鞘内注射一次10μl 20μM的ODN后，其后肢机械痛阈值明显升高，即其后肢机械痛敏反应被缓解，作用持续至少4小时。(n＝6，***p<0.001vs Pre,
one‑way ANOVA)

[0040] 除此之外，我们还发现，如图7所示，在完全弗氏佐剂(CFA)脚底注射导致的炎性疼痛大鼠模型中，给予其鞘内注射此ODN能够缓解CFA大鼠的后肢机械痛敏反应。

[0041] 图7显示，给予CFA大鼠鞘内注射一次10μl 20μM的ODN后，其后肢机械痛阈值明显升高，即其后肢机械痛敏反应被缓解，作用持续至少2小时。(n＝6，*p<0.05,**p<0.01vs 
Pre,one‑way ANOVA)

[0042] 以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范
围。