一种低垩白高抗稻瘟病香型软米种质的创制方法

摘要

本发明提供一种低垩白高抗稻瘟病香型软米种质的创制方法，包括如下步骤：以高抗稻瘟病香型软米品系为母本，以优质长粒香型粳稻品系为父本，杂交获得F1种子；培育F1种子，获得自交一代群体F2种子；培育F2种子，在F2株系中筛选出Pigm、Wx‑mq和GL7基因纯合和/或杂合，且籽粒长、农艺性状佳的株系，收获所有株系的种子F3；培育F3种子，在F3株系中筛选出Pigm、Wx‑mq和GL7基因皆为纯合，且籽粒长、农艺性状佳的株系，所述株系继续自交多代并结合稻瘟病抗性鉴定，最终获得低垩白高抗稻瘟病的香型软米品系。本发明采用逐级分子筛选，实现外观品质优异基因高效转移，从而创制出低垩白高抗稻瘟病香型软米新品系。

权利要求

1.一种低垩白高抗稻瘟病香型软米种质的创制方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）以高抗稻瘟病香型软米品系南粳9108‑Pigm为母本，以优质长粒香型粳稻品系鄂香

2号为父本，杂交获得F1种子；

（2）培育F1种子，获得自交一代群体F2种子；

（3）培育F2种子，在F2株系中筛选出Pigm、Wx‑mq和GL7基因纯合和/或杂合，且籽粒长、农艺性状佳的株系，收获所有株系的种子F3；

（4）培育F3种子，在F3株系中筛选出Pigm、Wx‑mq和GL7基因皆为纯合，且籽粒长、农艺性状佳的株系，所述株系继续自交多代并结合稻瘟病抗性鉴定，最终获得低垩白高抗稻瘟病的香型软米品系；

所述的南粳9108‑Pigm通过以下方法创制：（a）以南粳9108为母本，以GY31‑Pigm为父本，杂交获得F1种子；

（b）培育F1种子，以南粳9108为轮回母本连续回交多代直到获得BC3F1，在每个回交世代的稻苗分蘖期，以GY31‑Pigm为对照，进行Pigm基因的分子标记比对检测，筛选出含有Pigm基因的株系作为父本与南粳9108杂交；

（c）在BC3F1代，收获含有Pigm基因的种子，获得BC3F2种子；

（d）培育BC3F2种子，筛选Pigm、Wx‑mq和badh2基因纯合且农艺性状与南粳9108相似的株系，收获所有株系的种子，所述株系继续自交多代并结合稻瘟病抗性鉴定，最终获得农艺性状与南粳9108相似、高抗稻瘟病的香型软米品系南粳9108‑Pigm。

2.根据权利要求1所述的创制方法，其特征在于：步骤（b）中，筛选出含有Pigm基因且农艺性状与南粳9108相似的株系与南粳9108杂交。

3.根据权利要求2所述的创制方法，其特征在于：步骤（d）中，筛选出Pigm、Wx‑mq、badh2基因纯合且农艺性状与南粳9108相似的株系，再自交2‑3代；结合稻瘟病抗性鉴定，获得高抗稻瘟病香型软米品系南粳9108‑Pigm。

4.根据权利要求1所述的创制方法，其特征在于：步骤（4）中，筛选出Pigm、Wx‑mq和GL7基因纯合、农艺性状佳、籽粒长的株系，再自交4‑6代；结合稻瘟病抗性鉴定，获得低垩白高抗稻瘟病香型软米品系。

5.根据权利要求1所述的创制方法，其特征在于：步骤（3）、步骤（4）、步骤（b）或步骤（c）中，水稻苗期，以所述Pigm、Wx‑mq、badh2和GL7作为检测标记设计引物，进行PCR扩增，对反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，筛选出与对照分子标记一致的株系。

6.根据权利要求5所述的创制方法，其特征在于：检测Pigm基因的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2 所示；其特征在于检测Wx‑mq基因的引物如SEQ ID NO.3 SEQ ID NO.6所~

示；检测badh2基因的引物如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示；检测GL7基因的引物如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。

7.根据权利要求1所述的创制方法，其特征在于：所述的低垩白高抗稻瘟病的香型软米品系具有以下特征：苗期矮壮，长势好，株高112厘米，茎杆粗壮，剑叶中长，穗层整齐， 一般亩产有效穗18‑20万，每穗总粒数146粒以上，结实率87%以上，千粒重25 29克，全生育期145~

155天。

~

说明书

一种低垩白高抗稻瘟病香型软米种质的创制方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物育种技术领域，具体涉及一种低垩白高抗稻瘟病香型软米种质的创制方法。

背景技术

[0002] 水稻(Oryza sativa L.)是我国最重要的粮食作物。近几十年来，我国水稻产量在高产育种、超高产育种、超级稻育种以及绿色超级稻育种计划下得到大幅度提高。然而随着
国民生活水平和品味的提高，对绿色优质高抗品种的需求越来越多。因此，培育优质高抗水
稻品种，对保障我国粮食安全和提升稻米品质及稻米的竞争力均具有重要意义。

[0003] 稻米品质主要包括碾磨品质、外观品质、蒸煮食用品质和营养品质四个方面，其中外观品质与食味品质尤为重要，直接决定了稻米的商品价值和消费者的消费行为。目前，中
国在水稻品种审定中涉及外观品质中的长宽比、垩白粒率和垩白度。相关研究表明，适当增
加稻米的长宽比，籽粒中淀粉颗粒更大更致密，有助于降低垩白度和垩白率，改善外观品
质。

[0004] 稻米胚乳淀粉的组成和结构直接影响稻米的外观、加工和食味品质，其中直链淀粉含量已成为稻米食味品质改良的主要目标。直链淀粉含量低的品种，具有米饭口感好、冷
不回生、有弹性且膨胀性的特性。因此，培育低直链淀粉含量的水稻品种逐渐成为水稻育种
的重要目标之一。水稻直链淀粉含量主要由Wx调控，不同复等位基因决定了不同的直链淀
粉含量，其中携带Wx‑mq等位基因的优良食味品种南粳9108具有较低的直链淀粉含量，表现
出软米特性。

[0005] 香味也是水稻重要的食味品质性状，由第八染色体隐性基因Badh2/fgr控制。具有独特香味特性的稻米倍受广大消费者的欢迎和育种工作者的重视。

[0006] 稻瘟病是由稻瘟病菌(Magnapothe oryzae)引起的危害水稻生产的最严重病害之一。培育与利用抗病品种是解决这一问题最为经济有效的方法。本课题组前期研究发现，将
水稻品种“谷梅4号”所携带的稻瘟病抗性基因Pigm导入粳稻GY31后，GY31‑Pigm的抗性水平
显著提高(Wu等，Plant Disease 2017(101)1283‑1291)。因此，借助分子标记辅助选择
(MAS，Molecular marker‑assisted selection)将Pigm导入优质稻中，培育绿色环保高抗
的优质品种显得尤为重要。

[0007] 南粳9108为粳型软米品种，其产量高、香味浓、口感好；鄂香2号，一个香味浓、适口性好的优质长粒粳稻。然而，南粳9108和鄂香2号的稻瘟病抗性水平均较差(表1)。为改造南
粳9108的稻瘟病抗性，申请人利用MAS将Pigm基因导入到南粳9108，育成产量高、香味浓、适
口性好且高抗稻瘟病的香型软米中介品系南粳9108‑Pigm。此外，南粳9108与鄂香2号在香
味基因上具有相同的变异位点(图1)，确保了两者杂交后代均为香型品系。南粳9108存在外
观品质较差、垩白率高的现象，而鄂香2号因携带长粒基因GL7表现为优良的外观品质(图
1)。在此基础上，发明人单位继续利用南粳9108‑Pigm与鄂香2号进行杂交并多代自交，选育
低垩白、香味浓、抗稻瘟病的长粒软米品种。

[0008] 表1穗瘟抗性水平鉴定

[0009]

发明内容

[0010] 本发明的目的是提供一种低垩白高抗稻瘟病香型软米种质的创制方法。

[0011] 为了实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：

[0012] 一种低垩白高抗稻瘟病香型软米种质的创制方法，包括如下步骤：

[0013] (1)以高抗稻瘟病香型软米品系为母本，以优质长粒香型粳稻品系为父本，杂交获得F1种子；

[0014] (2)培育F1种子，获得自交一代群体F2种子；

[0015] (3)培育F2种子，在F2株系中筛选出Pigm、Wx‑mq和GL7基因纯合和/或杂合，且籽粒长、农艺性状佳的株系，收获所有株系的种子F3；

[0016] (4)培育F3种子，在F3株系中筛选出Pigm、Wx‑mq和GL7基因皆为纯合，且籽粒长、农艺性状佳的株系，所述株系继续自交多代并结合稻瘟病抗性鉴定，最终获得低垩白高抗稻
瘟病的香型软米品系。

[0017] 作为本发明的优选，步骤(1)中所述母本为南粳9108‑Pigm，所述优质长粒香型粳稻品系为鄂香2号。

[0018] 所述的南粳9108‑Pigm通过以下方法创制：

[0019] (a)以南粳9108为母本，以GY31‑Pigm为父本，杂交获得F1种子；

[0020] (b)培育F1种子，以南粳9108为轮回母本连续回交多代直到获得BC3F1，在每个回交世代的稻苗分蘖期，以GY31‑Pigm为对照，进行Pigm基因的分子标记比对检测，筛选出含有
Pigm基因的株系作为父本与南粳9108杂交；

[0021] (c)在BC3F1代，收获含有Pigm基因的种子，获得BC3F2种子；

[0022] (d)培育BC3F2种子，筛选Pigm、Wx‑mq和badh2基因纯合且农艺性状与南粳9108相似的株系，收获所有株系的种子，所述株系继续自交多代并结合稻瘟病抗性鉴定，最终获得农
艺性状与南粳9108相似、高抗稻瘟病的香型软米品系南粳9108‑Pigm。

[0023] 作为本发明的优选，步骤(b)中，筛选出含有Pigm基因且农艺性状与南粳9108相似的株系与南粳9108杂交。

[0024] 作为本发明的优选，步骤(d)中，筛选出Pigm、Wx‑mq、badh2基因纯合且农艺性状与南粳9108相似的株系，再自交2‑3代；结合稻瘟病抗性鉴定，获得高抗稻瘟病香型软米品系
南粳9108‑Pigm。

[0025] 作为本发明的优选，步骤(2)中，在BC1F1、BC2F1、BC3F1的稻苗分蘖期，以GY31‑Pigm为对照，进行Pigm基因的分子标记比对检测，筛选出含有Pigm基因的株系。

[0026] 本发明的一些实施例中，步骤(2)中，分别提取BC1F1、BC2F1、BC3F1世代所有株系的全基因组DNA，采用Koide等报道的分子标记Z4794检测Pigm基因(Koide等，
Jpn.Agric.Res.Q.2009(43)255‑280)，经PCR扩增后，对反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检
测，筛选出含有Pigm基因的株系。

[0027] 本发明的一些实施例中，步骤(4)中，在BC3F2的稻苗分蘖期，以南粳9108和GY31‑Pigm为对照，进行Pigm、Wx‑mq和badh2基因的分子标记比对检测，筛选出Pigm、Wx‑mq和
badh2基因纯合的株系。

[0028] 本发明的一些实施例中，步骤(4)中，分别提取BC3F2世代所有株系的全基因组DNA，采用分子标记Z4794检测Pigm基因；利用陈涛等报道的四引物扩增受阻突变体系检测Wx‑mq
基因(陈涛等，中国水稻科学.2013(27)529–534)；以王军等报道的分子标记InDel‑E2(王军
等，分子植物育种.2008(6)1209‑1212)检测badh2基因，经PCR扩增后，对反应产物进行琼脂
糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，筛选出Pigm、Wx‑mq和badh2基因纯合的株系。

[0029] 本发明的一些实施例中，步骤(3)中，在F2的稻苗分蘖期，以所述高抗稻瘟病香型软米品系和鄂香2号为对照，进行Pigm、Wx‑mq和GL7基因的分子标记比对检测，筛选出含有
Pigm、Wx‑mq和GL7基因的株系。在所述株系中选择籽粒长形的株系继续自交，对每个世代的
株系逐级比对筛选，获得低垩白高抗稻瘟病香型软米品系。

[0030] 本发明的一些实施例中，步骤(3)中，分别提取所有株系的全基因组DNA，采用陈涛等报道的四引物扩增受阻突变体系检测Wx‑mq基因；以Koide等报道的分子标记Z4794检测
Pigm基因；以Wang等报道的分子标记(NGSP11F&210QCF，Wang等，Nat.Genet.2015,doi:
10.1038/ng.3346)检测GL7基因，经PCR扩增后，对反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，筛选
出含有Pigm、Wx‑mq和GL7基因的株系。

[0031] 本发明的一些实施例中，步骤(4)中，将筛选得到的F3代株系自交3‑5代，结合稻瘟病抗性鉴定，获得获得低垩白高抗稻瘟病的香型软米品系。

[0032] 本发明的一些实施例中，步骤(4)中，稻瘟病抗性的接种鉴定采用江苏省水稻品种中间试验的人工接种方法。在水稻孕穗破口期前5～7d，用注射器吸取稻瘟病生理小种的菌
5 –1
丝碎片与薄壁分生孢子混合液1mL，稻瘟病菌的分生孢子悬浮液，浓度约为2×10孢子mL 。
从侧面注入水稻孕穗的苞内直至溢出。选择气温25～28℃和相对湿度为90％的阴天或傍晚
(当天下午的15:00—18:00)，接种10穗.并作好相应标记。每穗不能重复接种不同的生理小
种。稻瘟病鉴定标准，0级：无病；1级：发病率低于1％；3级：发病率为1％～5％；5级：发病率
为6％～25％；7级：发病率为26～50％；9级：发病率为51～100％。

[0033] 在本发明的一些实施例中，检测Pigm基因的正向引物Z4794序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物Z4794序列如SEQ ID NO.2所示。

[0034] 在本发明的一些实施例中，检测Wx‑mq基因的四引物扩增受阻突变体系Wx‑mq‑O‑F序列如SEQ ID NO.3所示，Wx‑mq‑O‑R序列如SEQ ID NO.4所示，Wx‑mq‑I‑F序列如SEQ ID 
NO.5所示，Wx‑mq‑I‑R序列如SEQ ID NO.6所示。

[0035] 在本发明的一些实施例中，检测badh2基因的正向引物InDel‑E2‑F序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物InDel‑E2‑R序列如SEQ ID NO.8所示。

[0036] 在本发明的一些实施例中，检测GL7基因的正向引物NGSP11F序列如SEQ ID NO.9所示，反向引物210QCF序列如SEQ ID NO.10所示。

[0037] 本发明的一些实施例中，PCR反应体系为20μg/μL DNA模板2μL，2pmol/μl上游引物1μL，2pmol/μl下游引物1μL，10×PCR buffer 3μL，10mM dNTP 0.6μL，5U/uL Taq酶0.4μL，
ddH2O 17μL，共20μL

[0038] 本发明的一些实施例中，PCR的反应条件为：95℃变性5min；95℃变性30s、58℃退火30s、72℃延伸1min，循环35次；72℃延伸10min，4℃保存。

[0039] 前期研究发现南粳9108与鄂香2号的香味基因变异位点相同(图1)，确保两者杂交后代均为香型品系。此外，南粳9108外观品质较差、垩白率高，鄂香2号携带长粒基因GL7，外
观透明度好，而南粳9108不含有GL7(图1)。在此基础上，申请人继续利用南粳9108‑Pigm与
鄂香2号进行杂交并多代自交，选育低垩白、香味浓、抗稻瘟病的长粒软米品种,实现对软米
品系稻瘟病抗性差的亲本材料的改良，将长粒基因高效地转移至杂交后代中，并聚合香味
基因，从而创制出低垩白高抗稻瘟病的香型软米种质，该品系苗期矮壮，长势好，株高112厘
米，茎杆粗壮，剑叶中长，穗层整齐。一般亩产有效穗18‑20万，每穗总粒数146粒以上，结实
率87％以上，千粒重27克左右，全生育期151天左右。

[0040] 本发明的有益效果如下：本发明采用抗稻瘟病香型软米与长粒香型优质稻杂交，实现对食味品质优良而稻瘟病抗性差的亲本材料的改良，并聚合长粒基因以及香味基因，
从而创制出低垩白高抗稻瘟病香型软米种质(图12)。

附图说明

[0041] 图1南粳9108、南粳9108‑Pigm及鄂香2号中badh2、GL7基因的分子检测。

[0042] 其中，A：南粳9108、南粳9108‑Pigm及鄂香2号badh2基因的检测；B：南粳9108、南粳9108‑Pigm及鄂香2号GL7基因的检测.

[0043] 图2南粳9108/GY31‑Pigm衍生的BC1F1群体中部分单株Pigm基因的分子检测。

[0044] 其中，1：GY31‑Pigm；2‑16：南粳9108/GY31‑Pigm衍生的BC1F1群体中部分单株。

[0045] 图3南粳9108/GY31‑Pigm衍生的BC3F2群体中部分单株Pigm基因的分子检测。

[0046] 其中，1：GY31‑Pigm；2‑30：南粳9108/GY31‑Pigm衍生的BC3F2群体中部分单株。

[0047] 图4南粳9108/GY31‑Pigm衍生的BC3F2群体中部分单株Wx‑mq基因的分子检测。

[0048] 其中，1：南粳9108；2‑30：南粳9108/GY31‑Pigm衍生的BC3F2群体中部分单株。

[0049] 图5南粳9108/GY31‑Pigm衍生的BC3F2群体中部分单株badh2基因的分子检测。

[0050] 其中，1：南粳9108；2‑30：南粳9108/GY31‑Pigm衍生的BC3F2群体中部分单株。

[0051] 图6南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F2群体中部分单株Wx‑mq基因的分子检测。

[0052] 其中，1：南粳9108‑Pigm；2‑30：南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F2群体中部分单株。

[0053] 图7南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F2群体中部分单株Pigm基因的分子检测。

[0054] 其中，1：南粳9108‑Pigm；2‑30：南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F2群体中部分单株。

[0055] 图8南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F2群体中部分单株GL7基因的分子检测。

[0056] 其中，1：鄂香2号；2‑30：南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F2群体中部分单株。

[0057] 图9南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F3群体中部分单株Wx‑mq基因的分子检测。

[0058] 其中，1：南粳9108‑Pigm；2‑30：南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F3群体中部分单株。

[0059] 图10南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F3群体中部分单株Pigm基因的分子检测。

[0060] 其中，1：南粳9108‑Pigm；2‑30：南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F3群体中部分单株。

[0061] 图11南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F3群体中部分单株GL7基因的分子检测。

[0062] 其中，1：鄂香2号；2‑30：南粳9108‑Pigm/鄂香2号衍生的F2群体中部分单株。

[0063] 图12分子标记辅助选择获得低垩白高抗稻瘟病香型软米种质。

[0064] 其中，A：分子标记辅助选择获得低垩白高抗稻瘟病香型软米种质的育种程序；B、C：低垩白高抗稻瘟病香型软米种质MGJ147的种子外观鉴定。

具体实施方式

[0065] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自
常规生化试剂商店购买得到的。

[0066] 实施例1、亲本材料的选择

[0067] “南粳9108”系农业部于2015年认定的粳型超级稻品种，由江苏省农科院以武香粳14号与关东194杂交经多年选育而成，是难得的高产又好吃品种。因其稻瘟病抗性差，发明
人单位通过分子标记辅助选择的方法，经过多代回交及自交将Pigm基因成功导入到南粳
9108中，育成“南粳9108‑Pigm”。该品系表现出稻瘟病抗性好、产量高、品质优、香味浓、口感
佳。“鄂香2号”系2018年通过湖北省农作物品种审定委员会审定，谷粒长形，透明度好，主要
理化指标达到国标二级优质稻谷质量标准。

[0068] 实施例2、逐级分子筛选技术

[0069] 一、DNA提取(CTAB法)

[0070] (1)取单株水稻幼苗或单粒种子，置入2mL Ep管中，放入钢珠，液氮冷冻后，用震荡粉碎机将叶片或种子打成粉末状；

[0071] (2)立即倒出钢珠，并加入600μL提前65℃预热的CTAB提取液，摇匀，65℃温浴30min，每10min颠倒一次；

[0072] (3)加入600μL氯仿‑异戊醇(24：1)，小心混匀，静置片刻；

[0073] (4)12,000rpm离心3‑5min，转移上清至另一Ep管中；

[0074] (5)重复步骤3，4；

[0075] (6)加入2/3上清体积预冷的异丙醇，‑20℃静置30min，12,000rpm离心5min；

[0076] (7)弃上清，用70％乙醇洗涤沉淀两次，每次500‑700μL；

[0077] (8)12,000rpm离心5min，弃上清(勿将沉淀倒出)，在超净工作台上吹干；

[0078] (9)加入200μL双蒸水溶解DNA，用Thermo Nanodrop 2000检测DNA质量和浓度，4℃或‑20℃保存。

[0079] 二、PCR扩增及产物检测；

[0080] PCR反应体系(20μL)：DNA(20μg/μL)2μL，上游引物(2pmol/μl)1μL，下游引物(2pmol/μl)1μL，10×PCR buffer 3μL，dNTP(10mM)0.6μL，Taq酶(5U/uL)0.4μL，ddH2O 17μ
L，共20μL。

[0081] PCR反应程序：94.0℃变性5min；94.0℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，共循环35次；72℃延伸7min；10℃保存。PCR反应在MJ Research PTC‑225热循环仪中进行。

[0082] 扩增产物经过4％琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像系统记录电泳结果。

[0083] 三、具体的筛选方法如下：

[0084] (1)以南粳9108为母本，以GY31‑Pigm为父本，杂交，获得F1种子50粒；

[0085] (2)培育F1，以南粳9108为母本杂交，获得BC1F1种子50粒；

[0086] (3)培育BC1F1，在稻苗分蘖期，以GY31‑Pigm为对照，利用稻瘟病基因Pigm的检测标记对所有单株进行分子标记的比对，筛选出含有Pigm基因(图2)且农艺性状与南粳9108相
似的单株为父本与南粳9108杂交，获得BC2F1种子50粒；

[0087] (4)按照步骤(3)的方法，最后获得BC3F2种子2000粒；

[0088] (5)培育BC3F2，在稻苗分蘖期，以GY31‑Pigm和南粳9108为对照，利用稻瘟病基因Pigm、软米基因Wx‑mq、香味基因badh2的检测标记对BC3F2群体的单株进行分子标记的比对，
筛选Pigm、Wx‑mq和badh2基因纯合的单株50株(图3‑5)；以在成熟期，在以上所述的50株中
选择农艺性状与南粳9108相似的单株30株；

[0089] (6)将步骤(5)获得的20个株系(BC3F3代)种植为1000的群体，在成熟期选择农艺性状与南粳9108相似的株系20株；

[0090] (7)将步骤(6)获得的20个株系(BC3F4代)种植为500的群体，在成熟期选择农艺性状与南粳9108相似的株系10株；

[0091] (8)将步骤(7)获得的10个株系(BC3F5代)种植为500的群体，在成熟期选择农艺性状与南粳9108相似的株系5株；

[0092] (9)在步骤(8)获得的9个株系(BC3F6代)中选择稻瘟病抗性好且农艺性状与南粳9108相似的株系即为南粳9108‑Pigm；

[0093] (10)以携带Pigm基因的南粳9108‑Pigm为母本，以长粒优质稻鄂香2号为父本杂交，获得杂交F1种子100粒；

[0094] (11)培育F1，获得F2群体群体种子3000粒；

[0095] (12)培育F2，在稻苗分蘖期，以亲本南粳9108‑Pigm和鄂香2号为对照，利用稻瘟病基因Pigm、软米基因Wx‑mq、粒长基因GL7的检测标记对F2群体的单株进行分子标记的比对，
筛选出Pigm、Wx‑mq和GL7基因纯合和/或杂合的单株800株(图6‑8)；以在成熟期，在以上所
述的800株中选择籽粒长且农艺性状优良的单株200株。

[0096] (13)将步骤(12)获得的200个单株分家系(F3代)种植，按步骤(3)筛选出含有Pigm、Wx‑mq和GL7基因的纯合株系(图9‑11)；在成熟期，在以上所述的纯合株系中选择籽粒
长且农艺性状优良的株系100株(共计12个家系)。

[0097] (14)将步骤(13)获得的100个株系(F4代)种植为2000的群体，在成熟期选择籽粒长且农艺性状优良的株系20株。

[0098] (15)将步骤(14)获得的20个株系(F5代)种植为500的群体，在成熟期选择籽粒长且农艺性状优良的株系15株。

[0099] (16)将步骤(15)获得的15个株系(F6代)种植为200的群体，在成熟期选择籽粒长且农艺性状优良的株系4株。

[0100] 本发明稻瘟病基因和软米基因检测标记引物序列如表2所示：

[0101] 表2用于分子辅助选择的分子标记

[0102]

[0103] (17)在步骤(16)获得的4个株系(F7代)中选择稻瘟病抗性好且农艺性状优良的株系即为低垩白高抗稻瘟病香型软米种质MGJ147，该品系苗期矮壮，长势好，株高112厘米，茎
杆粗壮，剑叶中长，穗层整齐。一般亩产有效穗18‑20万，每穗总粒数146粒以上，结实率87％
以上，千粒重27克左右，全生育期151天左右。

[0104] 上述实施例仅例示性说明说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改
变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想
下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。